3例弱D表型献血者的RhD抗原表位和分子机制研究

目的研究3例RhD抗原表型为弱D型54的献血者的RhD抗原表位和分子机制。方法采用常规试剂对3例弱D型54样本进行Rh分型,并采用D-screen分析样本的RhD抗原表位。对RHD基因全部外显子测序并分析RHD基因杂合性。使用Robetta服务器进行模型构建。结果 2例样本仅检出365C>T突变,1例样本检出365C>T杂合突变和1 227G>A杂合突变。经D-screen中全部抗体检测的2例样本表现出与部分D表型中DVII相同的D抗原表位分布,另1例未经D-screen全部抗体检测的样本与DVII的D抗原表位分布类似。同源建模分析显示弱D型54的胞内S122L突变也可能影响D抗原胞外区的蛋白结构。结论首次在中国人中报道了弱D型54,并首次分析了该表型的D抗原表位组成。弱D型54具有部分D表型的特征,可能引起同种免疫。

广州地区RhD变异型个体D抗原表位血型血清学特征及基因型分析

目的探讨广州地区RhD变异型个体D抗原表位特征及基因突变遗传分子机制。方法收集2019年1月~8月广州地区献血者及医院送检本中心做疑难RhD鉴定的RhD变异型标本59(人)份,用2种单克隆抗-D试剂及D-screen抗原表位检测试剂盒进一步分析D抗原表位的血清学特征,并做RhCE表型分型;采用QuickGene DNA提取试剂盒提取标本的基因组DNA,采用PCR-RFLP方法做RHD基因合子型分析;利用多重连接依赖探针扩增(MLPA)基因分型法做RHD基因型检测,并对仍存疑标本做RHD外显子(exon1~exon10)Sanger测序,使用DNAStar/SeqMan软件做综合分析。结果本组广州地区RhD变异型个体中,检出自献血者的占27.12%(16/59)[占同期广州中献血者比例0.007%(16/232 793)],医院送检的患者疑难标本占72.88%(43/59)。RHD基因型检测:40.68%(24/59)为RHD*weak partial 15、25.42%(15/59)为RHD*DⅥ.3以及33.90%(20/59)较少见的RhD变异型类型[其中合并2种不同等位基因的RhD变异型又占76.92%(10/13)];血清学D-screen:RHD*DⅥ.3型细胞与抗-D(克隆号P3*212 23B10)呈阳性反应,其他均为阴性的相对固定格局;RhD变异型CE表型分布比例为Ccee38.98%(23/59)、ccEe35.59%(21/59)和CcEe25.42%(15/59)。结论弱D15和部分DⅥ.3为广州地区汉族人群最常见RhD变异型类型,其中DⅥ可以通过D-screen等血清学方法得到初步鉴定,其他RhD变异型均需要分子生物学方法才能得到鉴定;>95%RhD变异型均为C+或E+表型。

弱D136型血型抗原表位分析及分子基础研究——附1例报道

目的鉴定1例Rh血型D变异型个体的血型抗原表位,并分析其分子生物学特征。方法采用盐水试管法及间接抗球蛋白试验(微柱凝胶)鉴定RhD血型,应用抗球蛋白微柱凝胶卡进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测RhCE表型;应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)对标本RHD基因合子型进行分析;对RHD基因的10个外显子进行PCR扩增及直接测序分析。结果该个体直接抗球蛋白试验结果阴性,血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,为D变异型,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.4、epD6.1、epD2.1、和epD5.4表位特异性单克隆抗体呈弱凝集反应(w+至2+),与其余表位抗体反应阴性;RhCE表型为Ccee;RHD基因合子型检测结果为D+/D-,RHD基因外显子直接测序发现第1外显子携带c.41C>T(p.Pro14Leu)错义突变,其基因型为RHD^(*)01W.136/01N.01。结论此D变异型个体为中国人群首次报道的弱D136型,其血清学表现为弱部分D表型。

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960G>A(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。