应用聚凝胺筛选-D-表型红细胞的研究

目的 -D-表型是Rh血型系统中较为特殊的血型表型,该表型仅表达RhD蛋白而不表达RhCE蛋白,其发生频率小于十万分之一。由于目前尚缺乏简单有效的筛选方法,该表型及其基因在中国地区的频率目前还未见报道,本研究拟应用该表型D抗原表达量与正常表型D抗原表达量的差异,开发一种新型筛选试剂对该稀有血型进行初步筛选。方法利用流式细胞术对-D-表型及表型基因携带者D抗原表达量进行检测;再利用抗原表达差异,通过调整筛选体系内聚凝胺浓度,使得RhD抗原表达量较高的红细胞与筛选试剂发生凝集,达到对-D-表型及其基因携带者的初步筛选目的。结果从流式细胞术免疫荧光值定量结果(MFI)分析,-D-表型细胞RhD抗原表达量(284 360±16 698,n=3)为正常RhD阳性细胞抗原表达量(98 642±35 908,n=9)的约3倍(P<0.01),RHD--杂合子RhD抗原表达量(181 109±39 455,n=4)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约2倍(P<0.01);15μL 3%新鲜红细胞悬液与筛选用体系35μL(1μL IgG抗-D,29μL凝聚胺聚凝胺,及5μL低离子强度溶液)的反应体系筛选出的阳性细胞经流式检测RhD抗原表达量(144 538±227 445,n=7)为正常RhD阳性细胞抗原表达量的约1.5倍。结论聚凝胺初筛体系可用于-D-表型高通量筛选,为该表型的人群频率等研究提供可靠的的技术手段。