针对RhD血型抗原的单链寡核苷酸适配体修饰红细胞毒性的初步研究

目的 探讨RhD血型抗原的单链寡核苷酸(ssDNA)适配体对红细胞毒性的影响。方法 通过基因合成得到的2条全长82 bp ssDNA的RhD血型抗原适配体;收集5份EDTA抗凝全血,分别制备成4×10^(7)/mL的悬浮红细胞,均分为10管,各5管(100μL/管)标记为实验组:加入2条单特异性ssDNA全长序列(100 pmol/μL)各5μL;对照组:加入等量生理盐水。2组在37℃孵育洗涤60 min后,在LISS液中重悬,于4℃贮存。根据贮存时间不同将实验组和对照组进一步分为1 h、1 d、3 d、10 d、17 d共5个组(每组重复5个血液标本);以FITC标记的Annexin V作为探针标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的磷脂酰丝氨酸(PS),以Fluo-4标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的Ca^(2+)。分别通过流式细胞仪检测不同保存时间LISS悬液中红细胞PS的外翻情况以及红细胞中Ca^(2+)的变化。结果 光学显微镜镜检:孵育后的实验组未发生凝集,对照组发生凝集。流式细胞仪检测:2组间相同贮存时间悬浮红细胞的Annexin V-FITC染色细胞数相近(P>0.05);实验组Annexin V细胞凋亡率(%):贮存10 d时为6.06±1.38,明显高于贮存1 h(P<0.05),贮存17 d时为7.77±1.23,明显高于贮存1 h、1 d、3 d(P<0.05)。2组间在相同贮存时间悬浮红细胞Fluo-4 AM细胞凋亡率相近(P>0.05);实验组Fluo-4 AM细胞凋亡率(%)贮存3 d、10 d、17 d分别为20.84±4.16、22.35±3.37、27.06±2.81(P<0.05)。结论 未发现ssDNA适配体对红细胞存在细胞毒性影响;RhD ssDNA适配体或有望成为检测及制备通用血的材料。

手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的应用

目的总结分析手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的应用价值。方法选择2018年1月至12月来我院体检的1200例体检者为研究对象,应用手工微柱凝胶免疫检验法及常规试管法鉴定ABO、RhD血型抗原,统计分析两种检验法的血型抗原检验结果。结果手工微柱凝胶免疫检验法与常规试管法鉴别ABO、RhD血型抗原的结果完全一致,1200例体检者ABO阳性率96.58%、RhD阳性率0.25%,检测结果无统计学差异性(P>0.05)。结论手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的应用价值肯定,值得推广使用。

人红细胞RhD血型抗原的甲氧基聚乙二醇修饰研究

目的:探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)遮蔽修饰的红细胞RhD血型抗原的有效性和稳定性以及被修饰红细胞结构和功能的变化。方法:用mPEG-SPA修饰RhD血型阳性人红细胞,观测修饰和未修饰红细胞的抗-D凝集反应性、mPEG结合产物稳定性、电镜下细胞形态、变形指数、渗透脆性、自身溶血率、2,3-二磷酸甘油酸含量、膜Na+,K+-ATP酶、乙酰胆碱酯酶活性和胆固醇含量。结果:0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、2.5mmol/L和5.0 mmol/L的mPEG-SPA修饰红细胞与抗D的凝集反应情况依次为50%凝集、可见凝集、无凝集、无凝集、无凝集,在4℃保存14 d和在37℃保存2 d的修饰红细胞与抗-D均无凝集反应,而未修饰红细胞则全凝集。电镜下修饰和未修饰红细胞均为双凹圆盘状形态,细胞大小均一。修饰和未修饰红细胞的各观测指标分别为:2,3-二磷酸甘油酸含量(71.00±12.88)mmol/L和(65.13±13.98)mmol/L,红细胞沉降率(2.75±2.05)mm/h和(8.00±3.82)mm/h,细胞变形指数(0.98±0.18)和(0.98±0.29),自身溶血率(2.27±0.28)%和(1.32±0.32)%,渗透脆性(0.44±0.06)%和(0.44±0.03)%,膜胆固醇含量(0.10±0.03)g/L和(0.10±0.06)g/L,Na+,K+-ATP酶活性(4.83±1.27)U/mg和(5.41±1.32)U/mg,乙酰胆碱酯酶活性(27.88±5.09)U/mg和(29.68±4.16)U/mg。修饰红细胞的沉降速率低于未修饰红细胞,自身溶血率高于未修饰红细胞(P<0.05),但是修饰红细胞沉降速率和自身溶血率都在参考值范围。结论:2.0 mmol/L的mPEG-SPA能够有效并且稳定地遮蔽红细胞RhD血型抗原。修饰红细胞具有未修饰红细胞的双凹圆盘状形态、细胞膜结构、变形性和运送氧气能力。