1例罕见RhD--血型分析及临床输血策略探讨

Rh血型系统是当前除ABO血型系统外具有较强的免疫原性,且最复杂、最具有多态性的血型系统[1]。Rh基因座有两个基因,即RHD和RHCE。Rh血型表型的多态性由RHD和RHCE基因突变所致,这两种基因在染色体上相对排列,因此易出现顺势基因重排,产生新的Rh抗原[2]。变异型的Rh基因表达变异的Rh抗原,随着DNA测序技术的发展,已发现上百种RHD和40多种RHCE基因的变异型,例如弱D、缺陷D或极弱D,以及Rh抗原缺失表型(Rhnull、Rhmod)等[3-4]。RhD--血型为Rh血型系统中十分罕见的变异型,其红细胞上D抗原正常或过量表达,但C、c、E、e抗原表达均缺失。本文报道了1例RhD--血型、血清中有不规则抗体产生且有输血需求的病例。

RhD--缺失型患者的血型血清学特征及临床意义分析

目的探讨RhD--缺失型患者的血型血清学特征,分析抗-Rh17抗体产生及其临床意义。方法采用直接/间接凝集和吸收放散试验检测患者红细胞Rh抗原及血清中抗体,结合生育史和输血史进行分析。结果患者为B型RhD阳性,缺失C/c、E/e抗原,抗体鉴定强阳性,特异性为抗-Rh17抗体。结论RhD--缺失型个体妊娠或输血极易产生抗-Rh17高频抗体,输血前进行RhCcEe抗原鉴定,为患者制定合适的输血方案,对保障临床输血安全,提高救治率有重要意义。

2021—2022年广州地区献血人群ABO血型筛查结果分析

目的 了解广州地区无偿献血者ABO、RhD血型的分布情况,为保证临床用血安全和更好为献血者服务提供依据。方法 对2021年1月—2022年12月的无偿献血者进行常规ABO、RhD血型检测,统计分析ABO血型构成比,对ABO正反不一致血型、RhD初筛阴性的标本进行血型血清学确证,分析ABO亚型检出情况及漏检原因。结果 2021年1月—2022年12月共筛查献血者标本749 123份,剔除重复献血者后的标本513 291份,其中ABO血型分布为:O型208 126份(40.55%)、A型138 859份(27.05%)、B型130 987份(25.52%)、AB型35 319份(6.88%)。ABO血型初筛正反不一致506份,其中弱/无红细胞反应58份、额外的红细胞反应16份、弱/无血清反应215份、额外的血清反应217份;经血型血清学或分子生物学确认ABO亚型44份,其中A亚型13份、B亚型26份、AB亚型5份;B(A)3份;类孟买血型14份。重复献血者漏检率最高的血型是A_3/B_3类亚型(68.42%)。在513 291份标本中共检出意外抗体阳性128份;RhD血型初筛阴性共2 277份,其中RhD阴性确认2 188份[2 188/513 291(0.43%)],RhD变异型89份[89/513 291(0.02%)],合并检出意外抗体30份[30/2 188(1.37%)]。结论 广州地区献血人群ABO分布O>A>B>AB,RhD阴性人群占比为0.43%,略高于全国汉族人群0.3%~0.4%;ABO血型亚型以B亚型为主;A_3/B_3类亚型的检出率及在常规血型检验中漏检率最高。

RhD阴性孕产妇与HDFN发生的相关性及影响因素分析

目的 通过对RhD阴性孕产妇腹中胎儿和分娩的新生儿发生胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)的相关指标对比分析,为预防和治疗HDFN提供参考和指导。方法 收集我院2018年1月—2022年12月分娩的RhD阴性孕产妇737名,比较新生儿是否发生RhD血型不合、ABO血型不合导致的HDFN及其影响因素,发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN的相关影响因素。分析发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN患儿的实验室指标差异;分析IgG抗-D效价≤16和≥32的孕产妇分娩的新生儿发生RhD-HDFN的实验室指标差异。结果 737名RhD阴性孕产妇中,发生RhD-HDFN的母婴ABO血型相同或相容者比率88.89%(40/45)显著高于母婴ABO血型不相容者11.11%(5/45)。母体二次妊娠及以上发生RhD-HDFN比率93.33%(42/45)显著高于ABO-HDFN 60.66%(37/61)者。母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血红蛋白(hemoglobin,Hb)最低值低于母体IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=5.61,P<0.05),母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血清总胆红素(total bilirubin,TBil)峰值高于IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=4.471,P<0.05)。结论 RhD阴性孕产妇中,母婴ABO血型相同或相容及孕产次≥2者,相应新生儿更易发生RhD-HDFN,母体IgG抗-D效价≥32者发生新生儿溶血的严重程度显著高于抗-D效价≤16者。

重庆地区RhD变异型无偿献血者的基因多态性及其表型研究

目的对重庆地区22例RhD变异型无偿献血者标本进行Rh血型血清学检测和三代基因测序,了解重庆地区RhD变异型的表型分布及其基因分型。方法选择2023年1—8月本中心参与无偿献血的人群作为研究对象。使用传统血清学方法对其进行RhD表型鉴定,确定为RhD变异型后使用D-screen试剂盒对其进行RhD不同抗原表位的检测。此外,提取其基因组DNA,使用叠瓦式引物设计进行多段扩增、拼接获得RHD基因全长序列进行三代测序检测,并用SnapGene软件对序列结果进行分析。结果在22例RhD变异型中,8例为DVI 3型(36.36%),其存在RHD-CE(3-6)-D杂交等位基因;6例部分弱D15型(27.27%),主要发生的突变为c.845G>A;6例亚洲型Del(27.27%),主要发生的突变为c.1227G>A,还有1例弱D17型发生的突变为c.340C>T和1例推测为部分D(c.491A>T,p.Asp164Val,错义突变)。结论重庆地区无偿献血人群中最常见的RhD变异型为DVI 3型,使用SMRT三代测序技术可以获得RhD变异型单倍体全长。

毛细管离心技术在RhD抗原混合外观患者D抗原鉴定中的应用

目的探讨毛细管离心技术在RhD抗原呈混合外观患者D抗原鉴定中的应用可行性。方法对11例RhD抗原呈混合视野的患者红细胞进行清洗,制备压积红细胞。之后用毛细管离心法分离血细胞,分别向近端患者自身红细胞和远端红细胞加入抗D试剂鉴定RhD抗原。根据献血者代码追踪输入红细胞的RhD抗原。结果经毛细管离心,1例患者RhD抗原阴性,8例患者RhD抗原阳性,其余两例患者RhD抗原仍为混合视野。结论毛细管离心技术可有效分离患者新生红细胞,准确鉴定患者RhD抗原,为临床输血提供安全保障。

1例RHD-CE(3-7)-D基因重组与RHCE变异型患者的血清学与分子生物学分析

目的 研究分析1例Rh血型弱D、弱cE患者的血清学与分子生物学特征,为该类患者的临床安全输血提供实验依据。方法 采用微柱凝胶卡法对患者红细胞进行ABO、RhDCcEe抗原的鉴定,同时采用试管法进行血型复核,抗人球蛋白卡法筛查不规则抗体;采用PCR-SSP法对RhDCcEe(RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe)基因型进行检测;三代全长测序技术对RHD/RHCE基因序列进行测序分析。结果 微柱凝胶卡法鉴定ABO、RhD、RhCcEe血型抗原的结果为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(1+)、RhC(4+)、Rhc(1+)、RhE(1+)、Rhe(4+)、对照孔(-);试管法ABO、RhD、RhCcEe抗原鉴定该患者表型为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(w+)、RhC(4+)、Rhc(w+)、RhE(w+)、Rhe(4+),对照管(-);抗人球蛋白卡法筛查患者不规则抗体阴性;PCR-SSP法血型基因分型RhDCcEe结果:RhD(+)、RhC(+)、Rhc(+)、RhE(+)、Rhe(+);RHD/RHCE基因结果:RHD单倍体1为外显子1-10全缺失,而单倍体2为外显子RHD-CE基因重组融合,且确认其重组类型为RHD-CE(3-7)-D,起点在外显子2(g.20238-20312之间),终点在外显子8(g49184-50480之间),同时RHCE基因第6外显子存在新碱基点突变RHCE*cE(827C>A)。结论RHD-CE(3-7)-D基因重组融合与RHCE*cE(827C>A)新等位基因突变可能引起D、cE血型抗原弱表达,为临床安全输血提供了重要的实验数据支持。

Rh系统抗-D与抗-E抗体共同致新生儿溶血病的研究分析

目的:研究1例Rh系统2种不规则抗体(抗-D、抗-E)同时存在导致新生儿溶血病。方法:通过临床资料提供,对产妇进行血型分析,不规则抗体筛查及抗体特异性鉴定,抗体效价分析;对新生儿进行直接抗人球蛋白试验、游离试验、放散试验及抗体特异性分析。结果:产妇不规则抗体阳性,抗体为Rh系统抗-D与抗-E,IgG抗-D效价为512,IgG抗-E效价为2;新生儿直接抗人球蛋白试验阳性、放散试验检出抗-D和抗-E抗体,游离试验检出抗-D抗体。结论:经新生儿三项实验诊断新生儿溶血病成立,积极给予对症治疗,患儿康复出院。

RhD抗原表达强度对输血相容性检测低值阳性质控品制备的影响

目的通过血清学结果比较RhD抗原表达强度差异,确定低值阳性质控品弱凝集强度的基准红细胞。方法以1500倍稀释抗-D分型试剂,使用微柱凝胶法对RhD(+)红细胞进行检测,挑选RhD抗原表达强度弱和强的标本分别为低值阳性质控品弱凝集强度的基准红细胞并进行验证。结果使用稀释后抗-D分型试剂对10份RhD(+)红细胞进行检测,其中8份凝集强度为1+、2份为±。以凝集强度呈1+的红细胞为基准,确定其凝集强度呈1+时抗-D分型试剂倍比稀释的最大稀释倍数,作为低值阳性质控品制备标准,则其与RhD抗原表达强度低的红细胞反应凝集强度极弱呈±,难以保障其控制界限性质稳定。以凝集强度呈±的红细胞为基准,重新确定其凝集强度呈1+时抗-D分型试剂倍比稀释的最大稀释倍数,作为低值阳性质控品制备标准,结果符合质控品设置要求。结论以RhD抗原表达强度低的红细胞为基准,设置低值阳性质控品弱凝集强度,可避免质控品因靶值较低而造成失控。

RhD抗原鉴定技术在临床输血中的应用效能及安全性研究

目的:研究不同RhD抗原鉴定技术在临床输血中应用效能及安全性。方法:选取2021年7月—2023年2月济南市章丘区人民医院需要输血的患者1126例作为研究对象,进行血清学试验及RhD抗原鉴定。对微柱凝胶抗球蛋白法(MGCT)、凝聚胺法(MPT)、盐水法的效能进行比较,使用受试者工作特征曲线分析三种检测方法的效能。结果:谱细胞检测RhD抗原(Rh+)1115例,无RhD抗原(Rh−)11例。MGCT的Kappa值为0.816,与谱细胞检测一致性最高。MGCT曲线下面积>MPT、盐水法,MPT曲线下面积>盐水法。结论:三种RhD抗原鉴定技术中,MGCT在RhD抗原鉴定中表现最佳,有利于保证临床输血安全。

RhD双群患者的血清学及分子生物学分析--附1例报道

目的对1名配血困难的RhD双群(double population,DP)患者进行血清学及分子生物学分析,解决其RhD血型鉴定及临床用血问题。方法用毛细管离心法分离患者红细胞,对近心端、远心端红细胞分别进行ABO和Rh血型鉴定,以及直接抗人球蛋白试验;对患者血浆进行不规则抗体筛选及鉴定以及交叉配血试验;采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测RHD基因合子型,采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)进行RHD和RHCE基因型检测。结果血型鉴定的结果显示该患者血型为B型,RhD及RhCE的c和E血型抗原均为DP,直抗阳性,抗体筛查及鉴定结果显示血浆中含有抗-D;PCR-RFLP结果显示该患者RHD基因盒子型为D-/D-纯合子,即为RHD编码基因缺失型所致的RhD阴性;PCR-SSP的结果也显示该患者RHD编码基因外显子均缺失,RHD基因型为RHD*01N.01/01N.01,RHCE基因型为Ccee。结论本例患者在急救情况下输注了RhD阳性血液,之后被误判为RhD阳性血型,实则为RhD阴性血型。本中心在血型鉴定为DP时,利用分子生物学方法对患者进行了Rh血型准确鉴定,为该患者的精准临床用血提供了依据。

RhD变异型DⅥ Ⅲ型分子生物学研究

目的探讨RhD变异型DⅥⅢ型的分子生物学机制。方法选取2020年11月至2022年5月北京市红十字血液中心血型室接收的RhD血型弱阳性患者血样。使用3个厂家的单克隆抗-D(1个IgM、2个IgM/IgG抗-D)检测患者RhD血型,其中IgM抗-D采用盐水试管法(saline tube method,S)、IgG抗-D采用间接抗人球蛋白试验(indirect anti-human globulin test,IAT);采用直接抗人球蛋白分型卡和Rh分型卡检测患者直抗(direct anti-human globulin test,DAT)和RhCcEe抗原。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测RHD基因缺失情况、RHD基因10个外显子全序列及其相邻侧翼内含子测序分析样本RHD基因型。结果共纳入RhD血型弱阳性患者血样8份,盐水试管法均只与一个厂家的抗-D试剂(IgM/IgG抗-D)呈弱阳性反应,IgM抗-D和另一家IgM/IgG抗-D阴性;IAT与2个厂家的抗-D试剂(IgM/IgG抗-D)均4+;DAT均阴性;RhCcEe表型分别为Ccee(6/8)、ccee(1/8)、CcEe(1/8)。实时荧光定量PCR结果均为RHD基因外显子E3~E6缺失,RHD基因外显子全序列测序均为RHD^(*)06.03.01。结论通过分子生物学方法对RHD基因的检测能准确鉴定为DⅥⅢ型,为受血者和供血者在临床输血中提供不同的保障策略。

广西地区RhD阴性无偿献血者血型分布调查

目的:了解广西地区RhD阴性献血者中ABO血型和RhC、c、E、e抗原分布情况,以便建立RhD阴性献血者档案和指导RhD阴性献血者血液的保存利用。方法:对RhD初筛阴性的标本,用IgG抗-D试剂做试管法间接抗球蛋白试验进行确认,C、c、E、e 4种Rh系统抗原检测采用盐水试管法,并采用正反定型对ABO血型进行鉴定。结果:分析广西地区10家血站共5480例RhD阴性献血者资料,5480例RhD阴性献血者中ABO血型分布情况为O型2393例,占43.67%;A型1412例,占25.77%;B型1345例,占24.54%;AB型330例,占6.02%。10家血站共有5家血站对RhD阴性献血者进行了C、c、E、e 4种Rh系统抗原检测,占比50.00%。5480例RhD阴性献血者中3776例进行了C、c、E、e 4种Rh系统抗原检测,占比68.91%。3776例RhD阴性献血者C、c、E、e抗原分型分布情况为ccdee 1794例,占47.51%;ccdEe 103例,占2.73%;ccdEE 7例,占0.19%;CcdEe 69例,占1.83%;Ccdee 1458例,占38.61%;CCdee 338例,占8.95%;CCdEe 5例,占0.13%;CcdEE 1例,占0.03%;CCdEE 1例,占0.03%。结论:对献血者RhD阴性血型进行确认时,应同时进行C、c、E、e 4种Rh系统抗原检测,并建立稀有血型档案库,对有效利用RhD阴性血液、提高输血的安全性具有重要意义。

输血相容性检测实验室RhD血型检测策略专家共识

RhD抗原是Rh血型系统最具免疫原性的抗原,可导致溶血性输血反应(HTRs)和胎儿与新生儿溶血病(HDFN)。我国RhD阴性红细胞属于稀缺资源,RhD阴性患者及时输注红细胞面临资源挑战。对于初筛(盐水法)为RhD阴性的不同人群,使用何种检测策略、如何出具检测报告、何时需要鉴定“亚洲型”DEL(RHD*01EL.01,c.1227G>A)是临床输血工作者较为困惑的问题。本共识由国内200余位输血相容性检测技术专家进行深入探讨后完成,旨在进一步规范、细化RhD血型检测策略,为实现不同RhD血型患者精准输血,不断提高RhD-HTRs及RhD-HDFN的防治水平提供技术支撑,为今后制定RhD血型检测策略行业标准奠定基础。

1例Del表型献血者RHD基因分析

目的:分析云南1例Del表型献血者的RHD基因型。方法:鉴定标本Rh血清学表型,对RHD基因进行PCR-SSP分型检测及10个外显子测序分析,扩增第9外显子进行克隆测序并分析序列,检测RHD基因合子型。结果:本研究病例标本Rh表型为CcD^(el)ee;RHD基因第9外显子包含第8内含子和第9内含子缺失共1003 bp,缺失发生在两个7 bp的短串联重复序列之间;其余外显子序列无变异;Rh杂交盒检测表明存在1条RHD阴性等位基因。结论:本研究病例标本为RHD基因第9外显子缺失导致的Del型。

RHD*845A/1227A变异型个体的分子机制

目的:研究1例罕见的RhD变异型个体的基因突变机制。方法:采用常规血清学方法对样本进行Rh分型,间接抗人球蛋白试验确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析样本的RhD抗原表位。利用序列特异性引物聚合酶链反应法检测RHD基因以及RhD杂合型分析,Sanger测序方法分析RHD基因编码区序列。应用逆转录聚合酶链反应检测样本RHD mRNA,对RHD cDNA进行TA克隆和序列分析。结果:血清学检测该样本RhD抗原为弱阳性,Rh分型为CcDEe,抗体筛查结果为阴性。经D-screen试剂检测样本表现出部分D的抗原表位分布。经RHD基因编码序列分析发现,RHD基因第6外显子第845位和第9外显子第1227位碱基均显示G/A杂合。TA克隆得到3种剪接异构体。结论:该研究对象为RHD基因845G>A和1227G>A突变个体,该杂合突变导致样本红细胞RhD抗原减弱。

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,Rh表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。

3例新生儿溶血病D抗原遮蔽现象的实验室诊断与换血治疗

目的分析3例RhD新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn,HDN),因D抗原遮蔽导致新生儿D抗原假阴性的现象。方法采用血型血清学方法检测产妇及新生儿标本血型、抗体效价,进行抗体筛查及抗体鉴定。对患儿标本进行DAT、游离抗体与放散抗体实验,并送基因检测。结果3例新生儿DAT、游离抗体、放散抗体阳性,产妇与新生儿抗体筛查与鉴定结果为抗-D抗体,效价均大于512。患儿血型检测为RhD阴性,患儿红细胞56℃热放散后为D弱阳性,基因结果3例RhD抗原均是阳性,换血治疗后效果均较好。结论产妇抗-D抗体效价过高易形成D抗原遮蔽现象,使新生儿RhD抗原假阴性,进一步加重HDN,需尽早给予新生儿治疗,准确检测新生儿血型。

新乡地区Rh阴性无偿献血者Rh表型分布及RhD变异型基因型分析

目的分析新乡地区Rh阴性无偿献血者Rh表型分布及RhD变异型基因型。方法选择2018年1月至2019年12月于新乡市中心血站无偿献血的110667名无偿献血者为研究对象。采用试管法ABO正反定型试验检测ABO血型,采用试管法Rh抗原分型试验检测Rh表型并初筛RhD阴性受试者,采用间接抗人球蛋白试验对初筛RhD阴性受试者进行RhD阴性确认,并检出RhD变异型受试者。采用聚合酶链式反应法扩增RhD变异型受试者RHD基因外显子E1~E10,将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察相应的外显子区域有无特异性条带出现。采用Sanger测序法对RhD变异型受试者的RHD基因外显子E1~E10的特异性扩增产物进行基因测序,应用SeqMan软件分析基因序列,根据单核苷酸多态性位点确定RhD变异型。结果110667名受试者中,初筛RhD阴性269例(0.24%)。269例初筛RhD阴性受试者中,Rh阴性256例(95.17%),RhD变异型13例(4.83%)。256例RhD阴性受试者中,ABO血型为A型78例(30.47%)、B型92例(35.94%)、O型64例(25.00%)、AB型22例(8.59%),Rh表型分布以ccdee(60.55%)和Ccdee(29.30%)居多。11例RhD变异型受试者的RHD基因外显子E1~E10为特异性条带,2例RhD变异型受试者的RHD基因外显子E1~E5、E8、E10为特异性条带。13例RhD变异型受试者中,7例弱D型、4例DEL型和2例部分D型。13例RhD变异型受试者RHD基因RhCE表型分别为CCee(2/13)、Ccee(6/13)和ccEe(5/13)。7例RhD变异型受试者等位基因RHD*15的E6外显子发生845G>A杂合突变。4例RhD变异型受试者的E9外显子发生1227 G>A杂合突变,其中1例受试者同时发生ZVS7+152 C>A突变。2例RhD变异型受试者的RHD基因E6~E9外显子发生突变,被RHCE基因所取代,表现为RHD-CE(6-9)-RHD。结论新乡地区RhD阴性无偿献血者中Rh表型分布以ccdee和Ccdee居多,RhD变异型以弱D型为主,其RHD等位基因为RHD*15。