甘肃地区育龄夫妇基因扩展性携带者筛查研究

目的:探讨甘肃地区育龄夫妇单基因遗传病携带情况,为对高危家庭进行遗传咨询与产前诊断提供依据。方法:回顾性分析2021年1月—2023年12月在甘肃省妇幼保健院就诊的887对育龄夫妇,采用目标区域捕获二代测序技术进行100种单基因隐性遗传病扩展性携带者筛查(expanded carrier screening,ECS)。有3个家系的母亲于妊娠18~21周抽取羊水15 mL进行产前基因诊断。结果:在887对育龄夫妇中检出31对高风险夫妇,其中25对常染色体隐性遗传病高风险夫妇,6对X连锁隐性遗传病高风险夫妇。在1774人(887对夫妻)中,678人为常染色体隐性遗传病携带者。高风险夫妇中GJB2基因携带率最高,其次为PAH基因与CFTR基因。有3对高风险夫妇妊娠期进行了产前诊断,1对夫妇因胎儿为囊性纤维化患儿选择了终止妊娠;另两对夫妇分别因胎儿为携带者和野生型表型选择继续妊娠,2例生后新生儿表型均正常。结论:育龄夫妇进行ECS有助于实施精准的产前诊断及生育指导,对降低出生缺陷有重要意义。

中国人群33104例单基因病携带者筛查的多中心研究

目的 通过大规模多中心的多种遗传病携带者筛查,调查中国人群单基因病的流行病学特征以及突变谱,为制定适合中国人群的遗传病预防策略提供依据。方法 本研究在中国的12个临床中心共招募33 104例受检者(16 610例女性),基于高通量测序和多种PCR对223个基因的携带者状态进行检测。结果 197个常染色体基因的合并携带者频率为55.58%,26个X连锁基因的合并携带者频率为1.84%。在16 669例家系中,共检出874对(5.24%)高危夫妇。其中常染色体基因高危夫妇584对(3.50%),X连锁基因高危夫妇306对(1.84%),16对夫妇同时为常染色体基因和X连锁基因高危夫妇。最常检出的常染色体高危基因包括GJB2(常染色体隐性耳聋1A,393对),HBA1/HBA2(α-地中海贫血,36对)和PAH(苯丙酮尿症,14对),SMN1(脊髓性肌萎缩症,14对)。最常检出的X连锁高危基因包括G6PD(G6PD缺乏症,236对),DMD(进行性假肥大性肌营养不良,23对)和FMR1(脆性X综合征,17对)。除外G6PD后的高危夫妇率为3.91%(651/16 669),进一步除外GJB2 c.109G>A位点后,高危夫妇率为1.72%(287/16 669)。理论上严重的单基因病出生缺陷的发病率约为4.35‰(72.5/16 669)。对导致高危夫妇最多的22个基因进行筛查可检出95%以上的高危夫妇,对导致高危夫妇最多的54个基因进行筛查可检出99%以上的高危夫妇。结论 本研究揭示了我国人群中223种单基因病的携带者频率,为中国人群的携带者筛查策略制定和panel设计提供依据。在携带者筛查实践中,针对某些特殊基因或变异位点的遗传咨询可能会面临困难。这些特殊基因或变异需要在检测前告知受检夫妇,并在可能的情况下提供不筛查这些基因或变异的选择。

604例育龄期夫妇单基因遗传病携带者筛查的结果分析

目的了解安徽省育龄期人群单基因遗传病致病基因携带情况以及常见变异,探索建立安徽省携带者筛查临床应用网络与转诊模式,探讨在临床实施扩展性携带者筛查(ECS)的应用价值。方法收集备孕或早孕期(≤13+6周)表型正常无遗传病家族史的604例育龄人群样本。采用基于高通量测序结合特殊PCR分析技术,检测与220种疾病相关的致病变异,对阳性携带者的配偶进行相关基因检测。结果截至2023年5月16日,收集到受检样本604例,检测出目标疾病携带者340例;检出致病变异检测阳性率为56.29%;共检出致病变异499个,每名受检者携带0~5个变异;携带1种单基因隐性遗传病致病变异216例,占35.76%,最为常见。携带2种单基因隐性遗传病致病变异95例,占15.73%。截至目前已发报告夫妻302对,筛查中共发现高风险夫妇7对,高风险率为2.32%。遗传模式为常染色体隐性的共5对(夫妻双方均携带同一致病基因),遗传模式为X-连锁的共2对(女方携带X-连锁致病基因)。结论本研究获得了604例接受ECS检测的受检者目标疾病的总体携带和临床应用情况以及常见单基因遗传病致病基因的携带率,可以为安徽省携带者筛查临床应用网络与转诊模式的建立提供科学指导。

地贫基因携带合并妊娠患者基因型及表型参数差异分析

目的分析地贫基因携带合并妊娠患者的基因型及表型参数差异。方法选取2020年1月~2024年1月在惠州市第三人民医院建档的地贫基因携带合并妊娠患者474例作为研究对象,采用聚合酶链式反应(PCR)+膜杂交法检测所有患者的α、β地贫基因,对比分析不同基因型患者的血红蛋白(Hb)检测结果。结果474例研究对象中,α地贫基因缺失型307例,占64.77%,其中,--^(SEA)基因缺失杂合、-α^(3.7)基因缺失杂合、-α^(4.2)基因缺失杂合占比较高,分别为35.02%、19.62%、8.23%;α地贫基因突变型32例,占6.75%,主要为α2:CS型、α2:QS型和α2:WS型基因突变杂合;β地贫基因突变型135例,占28.48%,且多为CD41-42(-TTCT)杂合突变、IVS-Ⅱ-654(C→T)杂合突变、-28(A→G)杂合突变,分别占9.07%、7.81%、3.59%。将α地贫基因缺失型和突变型患者根据临床表型不同分为静止型组、标准型组和HbH病组,三组HbA_(2)水平比较,静止型组>标准型组>HbH病组,差异有统计学意义(P<0.05);将不同表型β地贫患者分为β^(0)地贫组、β^(+)地贫组、β^(E)地贫组,三组HbA2水平比较,β^(E)地贫组>β^(+)地贫组>β^(0)地贫组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地贫基因携带合并妊娠患者基因型不同,其HbA_(2)水平也存在一定的差异性,HbA_(2)水平异常提示临床医生应做好产前基因筛查,从而有效降低重型贫血新生儿的出生率。

綦江地区地中海贫血基因携带合并妊娠患者的基因型分析

研究綦江地区地中海贫血基因携带合并妊娠患者的基因型以及表现型。方法 选择我院2020年1月至2024年6月,在我院产科建档的110例妊娠的患者,做血常规及地中海贫血基因检测,统计分析各组数据,总结得出綦江地区孕妇地中海贫血基因的携带情况及分布特点。结果 合并α地贫的β突变共2例:α3.7+βCD27-28共1例,α3.7+βCD41-42共1例,α地贫共58例,α3.7共24例,α4.2共6例,αCS共4例,αQS共2例,αSEA共19例,αWS共3例,β突变共:50例,β28共4例,βCD17共17例,βCD27-28共1例,βCD41-42共14例,βE共5例,βIVS-Ⅱ-654共9例。不同基因型、表现型的地中海贫血基因携带合并妊娠患者的RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC水平存在明显差异。结论 綦江地区地中海贫血基因携带合并妊娠患者的基因型以及表现型和地域有关,在早期筛查中需要实施针对性检查,提升产前诊断准确率,预防出现重度地贫新生儿。

慢性无症状HBV携带者阴虚体质与人类白细胞抗原-DRB1、DQA1基因多态性的联系

目的探讨慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carrier,ASC)阴虚体质与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1、HLA-DQA1基因多态性的内在联系。方法将105例ASC患者进行中医体质分型及分组:阴虚质组47例和非阴虚质组58例。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术测定HLA-DRB1、HLA-DQA1等位基因型。结果阴虚质组HLA-DRB1*09、HLA-DQA1*0301的基因频率明显低于非阴虚质组(分别为12.1%vs27.8%,19.1%vs39.7%),差异有统计学意义(P<0.01);HLA-DRB1*11、HLA-DQA1*0501的基因频率明显高于非阴虚质组(分别为12.1%vs4.3%,28.7%vs9.5%),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 HLA-DRB1*09和HLA-DQA1*0301可能是ASC非阴虚体质患者的分子基础;HLA-DRB1*11和HLA-DQA1*0501可能是ASC阴虚体质患者的分子基础。

HBV携带产妇的婴儿乙肝基因疫苗免疫后母乳喂养安全性的研究

用国产转基因细胞 (CHO)及重组酵母 (YRV)生产的乙肝基因疫苗免疫HBV携带产妇的新生儿 83例。以自愿为原则 ,婴儿分为母乳喂养和非母乳喂养两组 ,定期采血检测HBV感染状况 ,追踪 2 4个月。结果 36例母乳喂养及 47例非母乳喂养婴儿HBV感染率分别为 8 33% (3/ 36 )、6 38% (3/47)、P >0 0 5。其中母亲单独HBsAg阳性者 ,两种喂养方式的婴儿均未发现HBV感染。母亲HBsAg及HBeAg阳性者 ,母乳与非母乳喂养婴儿HBV感染率分别为 17 6 5 %、14 2 9% ,P>0 0 5。婴儿乙肝基因疫苗初免后 3个月、9个月、12个月、2 4个月采血检测抗 HBs,母乳喂养组抗体几何平均滴度 (GMT)

腺病毒携带的人内皮抑素基因(Ad/hEnd)抑制人舌鳞状细胞癌生长的研究

背景与目的:舌癌是口腔常见的恶性肿瘤,目前常规采用以手术为主结合放疗化疗的综合治疗,总体的5年生存率只有50％左右,抗肿瘤血管生成治疗已 成为舌癌治疗的研究方向之一。本实验以5型E1缺陷型腺病毒携带的人内皮抑素基因(Ad/hEnd)感染舌癌细胞(Tca8113)和人脐静脉内皮细胞株(ECV),并对荷瘤裸鼠舌癌的抑瘤效果进行观察,研究其在舌癌细胞中的表达及对舌癌抑制作用。方法:(1)免疫组化法检测内皮抑素蛋白在Tca8113细胞和ECV细胞中的表达及分布。ELISA法检测上清中内皮抑素含量,Western blot检测内皮抑素基因在Tca8113和ECV细胞的表达特征。(2)流式细胞仪检测Ad/hEnd感染ECV后的细胞周期及凋亡,WST-1法检测Ad/hEnd对ECV细胞增殖的抑制。(3)Ad/hEnd对荷瘤裸鼠的舌癌的生长抑制分析。结果:(1)实验结果显示感染Ad/hEnd后Tca8113细胞和ECV细胞胞浆内可有效合成内皮抑素蛋白,细胞培养液上清中的内皮抑素蛋白表达浓度呈时间剂量依赖关系,最高达到597 ng/ml,可持续到第7天,并且表达产物有抑制人体静脉内皮细胞ECV生长特性,呈剂量依赖关系。(2)Ad/hEnd可延长感染后的ECV细胞的S期及G_2期,并出现细胞凋亡现象。(3)应用Ad/hEnd后第3天肿瘤体积增长受到抑制,第6天开始肿瘤抑制明显增强,第3周抑瘤率达45.8％。结论:本实?

慢病毒携带的双自杀基因对淋巴瘤细胞杀伤作用的实验研究

背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMVΔ8.2、包膜基因质粒pCMV.VSVG、目的基因质粒pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk分两组(pHR'CS.Cdglytk为实验组、pHR'CS.GFP为对照组),经脂质体导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P<0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细?

单基因病扩展性携带者筛查研究进展

携带者筛查是识别生育单基因病患儿风险夫妇和指导再生育的有效手段之一。基因检测技术最初作为单一疾病和基于先证者的筛查,其发展使多种疾病同时检测成为可能,形成扩展性携带者筛查。虽然目前越来越多的实验室开展扩展性携带者筛查,但仍面临缺乏公众需求、卫生系统优先次序较低、接受筛查的潜在压力、检测前后咨询、技术局限性等方面挑战。本文总结了国内外单基因病扩展性携带者筛查的发展历史和研究进展。

携带Fas基因重组腺病毒治疗瘢痕疙瘩的体外研究

目的 应用成功制备的携带人 Fas基因的两种重组腺病毒 ,感染瘢痕疙瘩 (keroid,K)成纤维细胞 (fi-broblasts,FB) ,使其稳定高效地表达以替换原有无功能的 Fas蛋白 ,并恢复正常的重建后 Fas信号传导通道。 方法 腺病毒感染 KFB后 ,检测及比较两种腺病毒转染前后 ,KFB内 Fas蛋白的表达变化、蛋白功能以及细胞增殖 -凋亡状况。 结果 腺病毒感染后的 KFB均能稳定提高 Fas蛋白的表达 ,并且在 Fas单克隆抗体的诱导下可以发生明显的细胞凋亡。 结论 1构建的两种重组腺病毒 Ad- Fas在体外实验中能有效地提高 KFB蛋白的表达 ,并可以重建原来阻断的死亡信号传导通道 ;2细菌内重组腺病毒体外治疗效果更佳 ;3再次估证了 Fas基因突变与 K之间的联系 ,为 K基因治疗展示了一条新途径。

LD-PCR检测FⅧ基因XbaⅠ位点多态性及其在血友病A携带者诊断中的应用

目的建立高特异性的针对凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子22中XbaⅠ多态性位点的连锁分析法,以用于血友病A家系携带者的诊断。方法采用长距离PCR(LD-PCR)方法,特异性地扩增FⅧ基因内含子22中的XbaⅠ位点所在区域,用限制性内切酶XbaⅠ酶切,对5个血友病A家系作家系连锁分析,并对其中可提供多态性信息的家系作携带者诊断。结果家系1中确诊女性携带者1名及1名正常女性成员;家系2中确诊1名女性携带者;而家系3、家系4和家系5该位点无法提供多态性信息。结论基于LD-PCR的FⅧ基因XbaⅠ位点连锁分析方法具有较高的准确性和可靠性,这对临床上诊断血友病A携带者具有积极的意义。

乙肝病毒携带者病毒基因型与肝组织病理变化的关系

目的探讨乙肝病毒(HBV)携带者病毒基因型与肝组织病理变化的关系。方法采用PCR-微板核酸分子杂交-ELISA法检测139例血清HBV DNA阳性的慢性HBV携带者的乙肝病毒基因型,并进行肝组织病理检查,研究病毒基因型与肝组织病理变化的关系。结果139例HBV携带者中感染B基因型42例(30.2),C基因型97例(69.8)。B基因型感染者中肝组织病理正常者5例,符合慢性肝炎轻度34例,中度3例;而C基因型组中肝组织病理正常者仅2例,符合慢性肝炎轻度47例、中度39例、重度5例,肝硬化2例;两组的构成比差异有显著性(P<0.005)。结论对于临床诊断乙肝病毒携带者,感染C基因型者较B基因型者肝组织损伤重。

献血人群HCV携带者NS5b区基因多态性的初步探讨

目的 探讨献血人群中丙型肝炎病毒(HCV)携带者NS5b区基因多态性。方法 对广西、安徽、西安、江苏、上海五个地区184例抗-HCV阳性献血员的血清用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行了HCVRNA检测,并对HCVRNA阳性血清用限制性片段长度多态性方法(RFLP)分析。结果 共检出42例HCVRNA阳性血清,其中广西8例,安徽4例,西安2例,江苏9例,上海19例。对这42份血清进行RFLP分析。结果显示:HCV 1b型37例(37/42,88.1％),HCV2a型5例(5/42,11.9％)。其中1b型中广西7例,安徽4例,江苏9例,上海17例;2a型中广西1例,上海2例,西安2例。进一步的实验表明,42例PCR产物全部都具有Hae Ⅲ酶切点,且5例2a型表现出3种基因变异。结论 我国献血人群中HCV感染者大多数属1b型,且HCV携带者的HCV基因在亚型下存在多种有规律的变异。

隆安县乙肝病毒无症状携带者HBV前S基因缺失突变的研究

目的了解肝癌高发区隆安县乙型肝炎病毒(HBV)前S基因缺失突变株的流行情况。方法HBV表面抗原(HBsAg)无症状携带者从我们隆安县研究队列中选择,用套式聚合酶链反应对研究对象血清HBV前S基因扩增和序列分析。结果在66例标本中9例出现前S基因缺失突变,占13.6%(9/66)。9例缺失突变均为框内突变,其中7例突变发生在或涉及前S2区的5'末端。男6例、女3例出现前S基因缺失突变,但男女间突变率(12.0%,6/50与18.8%,3/16)差异无统计学意义(χ2=0.709,P>0.10);前S基因缺失突变率在基因型B、基因型C和重组基因型之间差异无统计学意义(χ2=0.002,P>0.95)。结论肝癌高发区隆安县居民HBV无症状携带者前S基因缺失突变率较高,这种突变与肝癌的关系值得进一步探讨。

SMN_1基因实时荧光定量分析在脊髓性肌萎缩携带者检测中的应用

目的脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy,SMA)是以脊髓前角运动神经元退化变性为特征的一种常见的常染色体隐性遗传病。SMA的发病率为1/10000,携带者频率为1/50,因此,对于运动神经元存活基因(survival motor neuron,SMN1)缺失携带者的检测在遗传咨询中尤为重要。然而SMA位点的重复使得携带者的检测比较困难。该研究的目的是探讨SMN1基因定量分析在SMA携带者检测中的作用。方法应用TaqMan技术的实时荧光定量PCR方法对109例不同临床表型的SMA患者父母和40例正常对照者的SMN1基因拷贝数进行检测。结果①SMA肯定携带者的SMN1基因的平均拷贝数为0.777±0.035,变异系数(CV)值4.5%;正常人(1例,用于验证检测方法的重复性)SMN1基因的平均拷贝数为2.064±0.120,CV值5.8%;②SMA患者父母SMN1基因平均拷贝数为0.798±0.108,CV值13.5%;正常人(38/40,为人群SMN1拷贝数)SMN1基因平均拷贝数为2.106±0.18,CV值8.5%。结论SMA患者父母和正常对照者的SMN1拷贝数的分布不同,前者为1个拷贝的SMN1基因;后者以2个拷贝的SMN1基因为主。因此,SMN1基因定量检测可用于区分大部分正常人和SMA携带者。

Duchenne型肌营养不良症基因携带者骨骼肌的超微结构研究

本文对9例DMD基因携带者和2例DMD患者姐妹的肌肉活检标本进行超微结构观察,其中大部分病例都有结构上的变化,但病变程度和累及范围都较DMD患者轻,故可视为亚临床肌病。提出肌活检的超微结构研究有利于确定基因携带者,并可发现血清CPK水平正常的基因携带者。本文还结合国外近年来的进展,对DMD的发病机制进行讨论,认为肌营养不良蛋白对维持三联体正常结构和机能有密切关系。

抗HBe阳性乙型肝炎和无症状携带者的HBVC基因启动子和前C基因变异

目的 研究抗HBe阳性乙型肝炎病人和抗HBe阳性无症状携带者 (AsC)的乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 34例抗HBe阳性和 5 5例抗HBe阴性乙型肝炎病人及 2 8例抗HBe阳性AsC的血清HBVCP和前C基因序列。结果 (1 )抗HBe阳性肝炎组的前C终止变异 (nt1 896G→A)的发生率显著高于抗HBe阴性肝炎组 (6 1 8%和 1 4 5 %) ;而CP双变异 (nt1 76 2A→T和 1 76 4G→A)则在两组中无明显差异 (5 0 0 %和4 5 5 %) ;(2 )同抗HBe阳性AsC组比较 ,抗HBe阳性肝炎组的HBVDNA定量呈高水平 ,前C终止变异的发生率也显著增高 (6 1 8%和 2 8 6 %) ;(3)同抗HBe阳性慢性乙型肝炎 (CHB)组比较 ,抗HBe阳性重型乙型肝炎 (CSH)病人的前C终止变异发生率和CP双变异发生率无明显差异 (70 0 %和5 8 3%,5 0 0 %和 5 0 0 %) ,HBVDNA定量也无明显差异 ,而CPnt 1 75 2A→G变异发生率则显著增高 (80 0 %和 2 9 2 %)。结论 前C终止变异、nt1 84 6突变和病毒复制可能与抗HBe阳性乙型肝炎发病有关 ;而Cpnt1 75 2突变则可能与抗HBe阳性CSH发病有关。

胆固醇结石患者固醇携带蛋白2基因单核苷酸多态性的检测

目的 :检测胆固醇结石患者和非胆石患者固醇携带蛋白 2 (SCP2 )基因单核苷酸多态性 (SNP) ,并探讨SNP与胆固醇结石的关系。 方法 :应用聚合酶链式反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)银染技术并结合DNA直接测序 ,检测了 5 8例散发胆固醇结石病人和 5 0例非胆石病人SCP2 基因的部分启动子区、全部编码区及部分 3,未翻译区序列。 结果 :SCP2 基因第 14外显子检出变异DNA单链泳动条带。 5 8例散发胆固醇结石病人中共有 31例检测出变异DNA单链泳动带 ,突变率为5 3 4 5 % ;而 5 0例非胆石病人仅有 7例检测到变异泳动带 ,突变率为 14 0 0 % ;两组突变率差异有显著性 (χ2 =2 0 12 3,P <0 0 0 1)。部分病例PCR产物直接测序发现G2 84→A碱基颠换 ,为同义突变。 结论 :SCP2 基因 +2 84位点突变不影响SCP2 蛋白的结构和功能 ,但G2 84→A的基因型频率在胆固醇结石患者较非胆固醇结石病人为高 。

应用红细胞平均体积筛查无偿献血者携带地贫基因的价值

目的探讨应用红细胞平均体积(MCV)筛查无偿献血者的必要性。方法采用红细胞平均体积(MCV)筛查无偿献血人群中的可疑地中海贫血基因携带者,并对可疑者进行地中海贫血基因诊断检查。结果 MCV<80 fl的筛查出185例,占4 529名被调查人员的4.08%。对185例MCV<80 fl的样品进行地贫基因诊断分析,地贫基因诊断阳性者总例数123例,占MCV<80 fl的185例献血者的比例为66.5%,占抽样4 529人的比例为2.72%。结论为提高血液质量,有必要应用MCV筛查无偿献血者。