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Transfection of the glial cell line-derived neurotrophic factor gene promotes neuronal differentiation 被引量:7
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作者 Jie Du Xiaoqing Gao +3 位作者 Li Deng Nengbin Chang Huailin Xiong Yu Zheng 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2014年第1期33-40,共8页
Glial cell line-derived neurotrophic factor recombinant adenovirus vector-transfected bone marrow mesenchymal stem cells were induced to differentiate into neuron-like cells using inductive medium containing retinoic ... Glial cell line-derived neurotrophic factor recombinant adenovirus vector-transfected bone marrow mesenchymal stem cells were induced to differentiate into neuron-like cells using inductive medium containing retinoic acid and epidermal growth factor. Cell viability, micro- tubule-associated protein 2-positive cell ratio, and the expression levels of glial cell line-derived neurotrophic factor, nerve growth factor and growth-associated protein-43 protein in the su- pernatant were significantly higher in glial cell line-derived neurotrophic factor/bone marrow mesenchymal stem cells compared with empty virus plasmid-transfected bone marrow mes- enchymal stem cells. Furthermore, microtubule-associated protein 2, glial cell line-derived neurotrophic factor, nerve growth factor and growth-associated protein743 mRNA levels in cell pellets were statistically higher in glial cell line-derived neurotrophic factor/bone marrow mesen- chymal stem cells compared with empty virus plasmid-transfected bone marrow mesenchymal stem cells. These results suggest that glial cell line-derived neurotrophic factor/bone marrow mesenchymal stem cells have a higher rate of induction into neuron-like cells, and this enhanced differentiation into neuron-like cells may be associated with up-regulated expression of glial cell line-derived neurotrophic factor, nerve growth factor and growth-associated protein-43. 展开更多
关键词 nerve regeneration bone marrow mesenchymal stem cells cell differentiation neu-ron-like cells glial cell line-derived neurotrophic factor recombinant adenovirus vector TRANSFECTION retinoic acid epidermal growth factor nerve growth factor growth-associated protein-43 neuralregeneration
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LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用
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作者 王春燕 王萍 +2 位作者 宋龙飞 刘永全 满君 《基础医学与临床》 2024年第1期43-50,共8页
目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组... 目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。 展开更多
关键词 特发性肺间质纤维化 FEZ家族锌指1-反义RNA 1(FEZF1-AS1) 上皮细胞-间充质转化(EMT) zeste基因增强子同源物2(EZH2) 人非小细胞肺癌细胞系A549
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人接头蛋白LNK对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响
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作者 王杰 谷婷 +3 位作者 宋吉欣 吴吟秋 戴春 戴华 《实用临床医药杂志》 CAS 2023年第10期31-35,共5页
目的探讨人接头蛋白LNK(hLNK)对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法构建稳定过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK及对照细胞株H1299-pCDH。采用Western blot验证上述稳转细胞株中hLNK的表达水平;采用平板克隆实验分析hLNK过表达... 目的探讨人接头蛋白LNK(hLNK)对非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展的影响。方法构建稳定过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK及对照细胞株H1299-pCDH。采用Western blot验证上述稳转细胞株中hLNK的表达水平;采用平板克隆实验分析hLNK过表达对H1299细胞增殖的影响;采用划痕实验分析hLNK过表达对H1299细胞侵袭能力的影响;对细胞中上皮间质转化(EMT)的典型标志蛋白进行分析。结果成功构建过表达hLNK的人NSCLC细胞株H1299-hLNK。与对照细胞H1299-pCDH比较,hLNK过表达抑制了H1299细胞的增殖和迁移能力,且细胞EMT水平被抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hLNK主要通过下调NSCLC细胞H1299的EMT水平抑制癌细胞的增殖、迁移。 展开更多
关键词 接头蛋白LNK 非小细胞肺癌 H1299细胞系 增殖 迁移 上皮间质转化
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ADSCs-CM对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制
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作者 肖欢欢 尹侃 +2 位作者 肖雨 张峥 侯琳 《精准医学杂志》 2023年第3期219-222,227,共5页
目的 探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为Ctrl组、PD组、CM组,Ctrl组置于基础培养基中培养,PD组于MPP+(1.0 mmol/L)+基础培养基中培... 目的 探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为Ctrl组、PD组、CM组,Ctrl组置于基础培养基中培养,PD组于MPP+(1.0 mmol/L)+基础培养基中培养,CM组于MPP+(1.0 mmol/L)+ADSCs-CM培养,均培养24 h。分别使用活性氧(ROS)试剂盒、三磷酸腺苷(ATP)试剂盒、线粒体复合物Ⅰ(CⅠ)活性试剂盒检测各组SH-SY5Y细胞中ROS含量、ATP总量和线粒体CⅠ活性;使用单丹磺酰尸胺(MDC)荧光法观察各组SH-SY5Y细胞自噬率;采用Western blot方法检测各组SH-SY5Y细胞线粒体自噬相关蛋白P62、LC3的表达水平。结果 PD组与Ctrl组、CM组比较,SH-SY5Y细胞的ROS含量、ATP总量、线粒体CⅠ的活性、细胞自噬率、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达量比较差异均有显著性(tLSD=3.23~12.61,P<0.05)。结论 ADSCs-CM可改善MPP+诱导的SH-SY5Y细胞中线粒体的功能障碍,其作用机制可能是通过影响自噬相关蛋白P62、LC3的表达实现的。 展开更多
关键词 帕金森病 培养基 条件性 间质干细胞 细胞系 肿瘤 氧化性应激 线粒体自噬 神经保护 1-甲基-4-苯基吡啶
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胶质细胞源性神经营养因子修饰的三种细胞在脊髓损伤中的研究
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作者 刘书画 李艺 +1 位作者 彭观发 叶军明 《赣南医学院学报》 2023年第5期520-524,544,共6页
近年来脊髓损伤的发病人数逐年增加,该损伤预后较差,给患者家庭及社会带来沉重负担。目前脊髓损伤修复的最大难题是轴突的再生和髓鞘形成。相关研究证实,胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)... 近年来脊髓损伤的发病人数逐年增加,该损伤预后较差,给患者家庭及社会带来沉重负担。目前脊髓损伤修复的最大难题是轴突的再生和髓鞘形成。相关研究证实,胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)基因修饰的骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和雪旺细胞移植到损伤脊髓中,能够显著改善神经元再生困难、局部生长因子匮乏、损伤轴突脱髓鞘化和胶质疤痕形成等,促进脊髓损伤修复。本文就骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和雪旺细胞进行胶质细胞源性神经营养因子修饰后在脊髓损伤中的有关作用进行综述。 展开更多
关键词 脊髓损伤 胶质细胞源性神经营养因子 骨髓间充质干细胞 脂肪间充质干细胞 雪旺细胞
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Hedgehog信号通路介导白藜芦醇对人胆囊癌GBC-SD细胞株凋亡和侵袭的影响
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作者 秦洪莉 莫立军 +1 位作者 张瞳 高明 《药物流行病学杂志》 CAS 2023年第11期1250-1258,共9页
目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染... 目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染流式分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3 (Caspase 3)mRNA表达水平,Transwell侵袭实验检测GBC-SD细胞侵袭能力,Western blotting检测EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平和Hedgehog信号通路成员神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)、Gli2、音猬因子(Shh)的表达。再将GBC-SD细胞随机分为空质粒组、Gli1过表达质粒组、Gli1过表达质粒+RSV组,通过Western blotting检测Gli1蛋白过表达情况,Annexin V-FITC/PI双染流式和Transwell侵袭实验分别检测上述各组的凋亡水平和侵袭能力。结果 与空白组相比,RSV各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase 3 mRNA表达显著升高(P <0.05或P <0.01),细胞侵袭能力显著降低(P <0.01);RSV中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P <0.01)。与空白组相比,RSV高剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin、Vimentin、Gli1、Gli2和Shh蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。与转染空质粒+RSV组相比,Gli1过表达质粒+RSV组细胞的凋亡率降低,侵袭能力增加(P<0.001)。结论 RSV促进GBC-SD细胞凋亡、抑制GBC-SD细胞侵袭及EMT,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号相关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胆囊癌 GBC-SD细胞株 Hedgehog信号通路 上皮间充质转化 凋亡 侵袭
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体外培养版纳微型猪近交系骨髓基质干细胞的生物学特性 被引量:6
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作者 李胜富 卢晓风 +5 位作者 孙明菡 万琳 步宏 曾养志 周宏治 李幼平 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2002年第5期354-358,共5页
目的 分离培养成年版纳微型猪近交系骨髓基质干细胞并探讨其体外生物学特性。方法 成年版纳微型猪骨髓基质干细胞通过密度梯度离心法分离获得 ,用含 15 %小牛血清的 DMEM在 37℃ ,5 % CO2 条件下培养 ;通过克隆生长特性、特异抗原表... 目的 分离培养成年版纳微型猪近交系骨髓基质干细胞并探讨其体外生物学特性。方法 成年版纳微型猪骨髓基质干细胞通过密度梯度离心法分离获得 ,用含 15 %小牛血清的 DMEM在 37℃ ,5 % CO2 条件下培养 ;通过克隆生长特性、特异抗原表达和成骨分化能力鉴定其干细胞特性。结果 版纳微型猪近交系骨髓分离获得的基质干细胞具有多种形状 ,但主要为梭形。其具有很强的增殖能力 ,在体外培养条件下可以观察到明显的克隆样生长 ;表达 SH2、SH3、SH4、SB10和 SB2 1等骨髓基质干细胞的特异标记 ;经成骨添加剂诱导培养之后能分化为成骨细胞 ,碱性磷酸酶活性增强并具有细胞外基质矿化能力。 展开更多
关键词 体外培养 骨髓基质干细胞 成骨细胞 版纳微型猪近交系 组织工程 生物学特性
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恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究 被引量:6
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作者 张德礼 黄高升 +5 位作者 李六金 何旭玉 夏耕田 高步先 白晓鸿 刘尚高 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第12期1057-1071,T002,共16页
:HeLa细胞KB株、X株、NM20/X株、H株的染色体众数依次为60±3(超二倍体)、62±3(超二倍体)、68±3(超二倍体和亚四倍体)和78±2(亚四倍体),所占比率分别为72%~76%,69%,52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对... :HeLa细胞KB株、X株、NM20/X株、H株的染色体众数依次为60±3(超二倍体)、62±3(超二倍体)、68±3(超二倍体和亚四倍体)和78±2(亚四倍体),所占比率分别为72%~76%,69%,52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾(染色体众数38所占比率80%)和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌/致瘤率分别为0%(0/22)和0%(0/10),X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%(1/5)的前提下,HeLa细胞KB株、X株、NM20/X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%(10/10),100%(25/25)和100%(5/5),H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%(5/10)。其中,只有HeLa细胞KB株10~11代(染色体结构畸变率高达20%,出现18%双着丝点和2%断片)以超高数量接种的1组4只裸鼠(0.17ml 12.75×107/鼠)才均形成MRT,特别是从染色体众数不同的3株HeLa细胞中筛选出致瘤性强的X株,连传20代后皮下接种裸鼠形成低分化肿瘤,定名为NM20/X株0代,其染色体众数因经裸鼠体内传代选育而明显增大(染色体众数为68±3,所占比率为52%),实体瘤手术切除后体外连传11代,再皮下接种裸鼠均形成MRT(5/5),但要求完形活细胞接种量要大(5~12×107/鼠),肿瘤产生? 展开更多
关键词 恶性横纹肌样瘤 HELA细胞 高变异率
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转录因子Snail调控上皮-间质转型及对肿瘤转移的逆转作用 被引量:11
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作者 张阿丽 王全胜 +5 位作者 钟亚华 陈刚 奚玲 谢从华 周云峰 马丁 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1301-1305,共5页
背景与目的:研究表明转录因子Snail调控上皮-间质转型(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)与肿瘤转移有一定的相关性。本研究通过观察Snail促进EMT以及反义Snail对肿瘤细胞EMT的逆转,明确Snail在肿瘤转移中的作用。方法:分别以Snai... 背景与目的:研究表明转录因子Snail调控上皮-间质转型(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)与肿瘤转移有一定的相关性。本研究通过观察Snail促进EMT以及反义Snail对肿瘤细胞EMT的逆转,明确Snail在肿瘤转移中的作用。方法:分别以SnailcDNA转染MDCK细胞,反义Snail转染MDA-MB231细胞。Westernblot法检测上皮性标记基因上皮钙粘附素(E-cadherin)、β-连环素(β-catenin)、角蛋白18(Cytokeratin18)与间质性标记基因纤粘蛋白(Fibronectin)及转移相关基因基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、RhoA蛋白的改变;细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验反映细胞转移潜能的变化。结果:转染SnailcDNA的MDCK细胞,上皮标记基因E-cadherin、β-catenin、Cytokeratin18蛋白表达下调,而间质及转移相关基因Fibronectin、MMP-2、RhoA蛋白表达增强(P<0.05);细胞体外运动力与侵袭力增加(P<0.05);反义Snail转染MDA-MB231细胞后,其实验结果与经SnailcDNA处理后的MDCK细胞相反。结论:Snail能促进正常上皮细胞发生EMT,拮抗肿瘤细胞Snail的表达可逆转EMT表型、降低肿瘤转移潜能。 展开更多
关键词 上皮间质转型(EMT) pIRES2一EGFP—Snail 转移潜能 人乳腺癌细胞株MDA—MB231
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实时定量PCR检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平 被引量:6
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作者 杨朝鲜 马芳 +3 位作者 袁琼兰 周玲 高小青 邓莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期961-964,共4页
目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和... 目的了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组。采用实时定量PCR技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平。结果空质粒转染组和未转染组无GDNFmRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3~12天的GDNFmRNA相对表达量为0.00751±0.00067。结论腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNFmRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 大鼠 骨髓间充质干细胞 基因转染 实时定量PCR
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骨髓间充质干细胞促进肺癌转移的机制 被引量:5
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作者 郑天亮 赵松 +2 位作者 郭海周 崔广晖 林大维 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第19期2783-2788,共6页
背景:从目前研究来看,间充质干细胞对肿瘤细胞的增殖、转移具备促进或抑制作用存在较大的争议。目的:探讨骨髓间充质干细胞促进肺癌转移的机制。方法:釆用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁结合消化控制法纯化细... 背景:从目前研究来看,间充质干细胞对肿瘤细胞的增殖、转移具备促进或抑制作用存在较大的争议。目的:探讨骨髓间充质干细胞促进肺癌转移的机制。方法:釆用全骨髓直接贴壁法获得原代大鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁结合消化控制法纯化细胞。培养肺癌细胞株,采用划痕实验、细胞侵袭实验及迁移实验观察骨髓间充质干细胞对肺癌细胞迁移、侵袭、转移能力的影响,建立大鼠肺癌原位肿瘤模型,左侧肺接种骨髓间充质干细胞,移植后14 d观察肺组织病理改变。结果与结论:1划痕后肺癌细胞迁移速率较大,随着时间的不断延长,划痕处愈合;2加入骨髓间充质干细胞后肺癌细胞迁移数增多;3加入骨髓间充质干细胞后肺癌细胞穿透Matrigel的能力增强;4肺癌组织周围存在明显的纤维结缔组织,且与周围组织边界清楚,肿瘤细胞核大;转移病灶组织出现明显的浸润,坏死比较明显,肿瘤细胞核大;5结果提示,骨髓间充质干细胞能提高肺癌细胞株的侵袭、迁移以及转移能力。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 肺肿瘤 细胞系 肿瘤 肿瘤转移 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 肺癌转移 骨髓间充质干细胞 细胞划痕实验 侵袭实验 迁移实验 国家自然科学基金
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绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白共转染骨髓间充质干细胞、乳鼠心肌细胞、Eahy926细胞表达特征的共聚焦分析 被引量:7
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作者 张颖 辛毅 +3 位作者 汪劲松 许秀芳 罗毅 黄益民 《新乡医学院学报》 CAS 2011年第2期147-151,共5页
目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病... 目的利用携带绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)报告基因的慢病毒载体共转染,观察2种报告基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)、乳鼠心肌细胞(Myo)和内皮细胞株(Eahy926)中的整合表达特征。方法应用人类1型免疫缺陷病毒改造而构建慢病毒载体,将GFP、RFP以同时或先后方式共转染hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞,激光共聚焦显微镜观察2种报告基因在不同细胞中的共表达特点。结果 3种细胞均能被GFP、RFP共转染,其中hMSC和乳鼠Myo均有竞争加随机转染方式,Eahy926只有随机转染方式;3种细胞转染GFP、RFP的效率有所不同,共表达2种报告基因的细胞表现为以核为中心的表达区域重叠。结论 hMSC、乳鼠Myo和Eahy926细胞均可共转染2种报告基因,但整合方式有所不同,这将对利用多个报告基因同时示踪细胞多种生命特征提供有力帮助。 展开更多
关键词 慢病毒载体 人骨髓间充质干细胞 心肌细胞 内皮细胞株 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白
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过表达胶质细胞神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤 被引量:5
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作者 黄成 刘元兵 +3 位作者 戴永平 王亮亮 崔益华 杨建东 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第7期1037-1045,共9页
背景:胶质细胞神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)在诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外定向分化及促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复过程中起到重要作用。目的:观察过表达G... 背景:胶质细胞神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)在诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外定向分化及促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复过程中起到重要作用。目的:观察过表达GDNF基因的BMSCs分化情况及其促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复的潜在分子机制。方法:①以重组目的基因腺病毒转染BMSCs并分为Ad-GDNF-GFP转染组、Ad-GFP转染组、未转染组,免疫荧光鉴定各组细胞神经元特异性烯醇化酶及微管相关蛋白2的表达,Western blot检测各组细胞GDNF、Wnt3a、Wnt7a蛋白表达。②以改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型,将造模成功的45只SD大鼠随机分为3组,分别以过表达GDNF基因BMSCs(GDNF-BMSCs)、BMSCs、PBS移植至脊髓损伤局部。移植后4周采用BBB评分法评估大鼠运动功能恢复情况,苏木精-伊红染色观察脊髓形态变化,免疫组化检测损伤局部神经元特异性烯醇化酶、突触素Ⅰ及胶质纤维酸性蛋白表达,Western blot检测损伤局部Bcl-2、肿瘤坏死因子α蛋白表达。结果与结论:①Ad-GDNF-GFP转染组BMSCs可向神经元样细胞形态转变并表达神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2;Wnt3a、Wnt7a蛋白表达量显著高于Ad-GFP转染组、未转染组;②移植后4周,GDNF-BMSCs移植组大鼠BBB评分明显提高、脊髓空洞面积显著缩小。GDNF-BMSCs移植组脊髓损伤局部胶质纤维酸性蛋白、肿瘤坏死因子α表达量显著低于BMSCs移植组及PBS移植组,而神经元特异性烯醇化酶、突触素Ⅰ及Bcl-2表达量显著高于BMSCs移植组、PBS移植组;③结果表明,Wnt信号通路参与过表达GDNF基因BMSCs向成熟神经元分化过程,移植后通过降低脊髓损伤局部炎症反应、减少细胞凋亡及胶质瘢痕形成、促进轴突再生,提高BMSCs移植治疗脊髓损伤的疗效。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 骨髓间充质干细胞 细胞分化 WNT信号通路 脊髓损伤
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RNA干扰抑制Snail表达对A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭的影响 被引量:6
14
作者 卓文磊 张云嵩 +2 位作者 王彦 敖绪军 陈正堂 《现代肿瘤医学》 CAS 2008年第6期889-893,共5页
目的:研究用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制转录因子Snail表达后,对人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化表型和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Snail的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)的RNA干扰载体(Snail siR... 目的:研究用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制转录因子Snail表达后,对人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化表型和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Snail的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)的RNA干扰载体(Snail siRNA vector)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNA干扰载体(control siRNA vector),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Snail表达受抑制的A549-siSnail细胞和Snail表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfection)、A549-siSnail、A549-siControl三组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测Snail、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden chamber模型检测细胞侵袭能力。结果:A549-nontransfection组:Snail和α-SMA表达强阳性,E-钙粘素表达弱阳性;A549-siSnail组:和A549-nontransfection组相比,Snail和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E-钙粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden chamber穿膜细胞数显著减少(P<0.01);A549-siControl组:Snail、α-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden chamber穿膜细胞数皆和A549-nontransfection组无显著差异(P>0.05)。结论:通过RNA干扰阻滞Snail表达能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力。Snail可能在肺腺癌上皮-间充质转分化及侵袭过程中扮演重要角色,抑制Snail表达可能成肺腺癌治疗的可行策略。 展开更多
关键词 SNAIL RNA干扰 上皮-间充质转分化 A549细胞 侵袭
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人横纹肌样脑膜瘤细胞株的分离和鉴定 被引量:1
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作者 胡德志 王晓梅 +1 位作者 毛颖 周良辅 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期321-324,共4页
目的人横纹肌样脑膜瘤(rhabdoid meningioma,RM)是一种少见的难治性中枢神经系统肿瘤。为建立其体外研究模型,本实验拟从1例确诊的横纹肌样脑膜瘤中分离和鉴定横纹肌样脑膜瘤细胞株。方法利用贴壁培养和肿瘤球培养结合的方法,分离细胞... 目的人横纹肌样脑膜瘤(rhabdoid meningioma,RM)是一种少见的难治性中枢神经系统肿瘤。为建立其体外研究模型,本实验拟从1例确诊的横纹肌样脑膜瘤中分离和鉴定横纹肌样脑膜瘤细胞株。方法利用贴壁培养和肿瘤球培养结合的方法,分离细胞株。利用流式细胞术分析表面抗原标志。用XTT法检测细胞生长活性。用体内移植方法评估其致瘤能力。结果分离培养得到一细胞株,其表面标志为CD44+CD59+CD105+CD11a-CD31-Cd34-,与间质前体细胞具有相似性。其在体外具有长期传代能力,目前已经传了50余代。体内移植试验表明1×105以上细胞具有较一致的颅内致瘤能力,获得的移植瘤与原发人肿瘤具有相似的组织学特征。结论我们首次分离了1例具有间质细胞特征并具有致瘤性的横纹肌样脑膜瘤细胞株,为恶性脑膜瘤的研究提供了一个体外模型。 展开更多
关键词 横纹肌样脑膜瘤 细胞株 间质细胞
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GDNF基因修饰的BMSCs对大鼠缺氧复氧神经细胞凋亡的实验研究 被引量:3
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作者 高小青 周玲 +1 位作者 杜杰 杨朝鲜 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1634-1636,F0003,共4页
目的研究腺病毒介导的外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达及其对缺氧复氧神经细胞凋亡的影响。方法将GDNF基因重组腺病毒感染大鼠BMSCs,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测外源性G... 目的研究腺病毒介导的外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达及其对缺氧复氧神经细胞凋亡的影响。方法将GDNF基因重组腺病毒感染大鼠BMSCs,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测外源性GDNF基因在BMSCs中的表达水平;将GDNF基因修饰的BMSCs与缺氧复氧神经元共培养,观察神经细胞的凋亡情况。结果 GDNF基因感染组在感染后3~12 d能稳定表达GDNF蛋白,空质粒载体感染组和未感染组基本上无GDNF蛋白的表达;与BMSCs共培养组相比,BMSCs/GDNF分泌的GDNF能显著降低缺氧复氧神经细胞的凋亡率(复氧12 h至5 d,P〈0.05)。结论腺病毒介导的基因感染技术能够有效地将GDNF基因转至BMSCs中,表达和分泌有生物学活性的GDNF蛋白,这为进一步研究GDNF基因修饰的BMSCs应用于中枢神经系统疾病的治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 大鼠 骨髓间充质干细胞 神经细胞 缺氧复氧
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骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血大鼠时间窗的研究 被引量:3
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作者 刘世民 吴晓牧 +5 位作者 曹文峰 张洪连 肖丽华 许自强 周鑫华 张昆南 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2011年第9期841-846,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗脑缺血模型大鼠的时间窗及最佳移植时间点。方法雄性SD大鼠56只,随机分为移植组32只和对照组24只,在建立大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型后分为1、7、14、21 d 4个时间点。对大鼠进行改良神经... 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗脑缺血模型大鼠的时间窗及最佳移植时间点。方法雄性SD大鼠56只,随机分为移植组32只和对照组24只,在建立大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型后分为1、7、14、21 d 4个时间点。对大鼠进行改良神经功能缺损评分、HE染色、Bielshowsky Iuxol Fast Blue染色、直接免疫荧光染色和免疫组织化学染色。结果移植组1、7 d在移植14 d后,14、21 d在移植21 d后改良神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.05)。移植组1、7 d胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数、突触素累计吸光度值、胼胝体面积明显高于对照组(P<0.05)。移植组1、7、14、21 d Ki-67阳性细胞数明显高于对照组(P<0.05)。移植组7 d神经元特异性烯醇酶累计吸光度值明显高于对照组(P<0.05)。移植组1、7 d Nogo A阳性细胞数明显低于对照组(P<0.05)。结论 MSCs移植治疗大鼠脑缺血模型的时间窗可延长至制模后的21 d,最佳移植时间点为制模后7 d。MSCs移植治疗脑梗死的作用机制可能与其促进内源性修复相关。 展开更多
关键词 脑缺血 间质干细胞移植 胶质细胞源性神经营养因子 再灌注 时间因素 免疫组织化学
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CEACAM6介导上皮间质转化增强胰腺癌细胞侵袭能力和耐药性的研究 被引量:3
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作者 陈建敏 安勇 +4 位作者 吕楠 薛晓峰 张烨 卫积书 苗毅 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1675-1679,共5页
目的:研究CEACAM6对胰腺癌细胞株SW1990侵袭能力和耐药性的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用。方法:筛选及鉴定过表达CEACAM6的稳定转染SW1990-CEACAM6细胞株,通过定量PCR和Western blot方法检测SW1990细胞株中EMT相关表型标... 目的:研究CEACAM6对胰腺癌细胞株SW1990侵袭能力和耐药性的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用。方法:筛选及鉴定过表达CEACAM6的稳定转染SW1990-CEACAM6细胞株,通过定量PCR和Western blot方法检测SW1990细胞株中EMT相关表型标志物的改变。通过Transwell实验检测过表达CEACAM6对SW1990细胞株侵袭的影响,MTT法检测耐药指数(RI)。结果:定量PCR及Western blot验证过表达CEACAM6细胞株SW1990-CEACAM6成功建立,其倾向于向间质细胞转化:波形蛋白(Vimentin)表达明显上调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下降。功能实验证实过表达CEACAM6具有促进SW1990胰腺癌细胞株侵袭作用,同时细胞株耐药性增强。结论:CEACAM6能够促进SW1990胰腺癌细胞株上皮间质转化,从而促进胰腺癌细胞的恶性转化。 展开更多
关键词 SW1990胰腺癌细胞株 CEACAM6 上皮间质转化 侵袭 耐药
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人成骨细胞系hFOB1.19生物学特性的研究 被引量:2
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作者 陈文明 陈子兴 +6 位作者 岑建农 何军 焦雪丽 吴亚芳 张俊 邱桥成 戴兰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期339-344,共6页
本研究以成骨细胞系hFOB1.19(hFOBs)为对象,探讨成骨细胞在造血调控中的作用。采用RT-PCR检测hFOB多能干细胞的标志(Oct-4,Rex-1,hTERT)的表达及体外向脂肪细胞诱导分化程度,以测定其多向分化的能力。用流式细胞术(FCM)检测hFOB的细胞表... 本研究以成骨细胞系hFOB1.19(hFOBs)为对象,探讨成骨细胞在造血调控中的作用。采用RT-PCR检测hFOB多能干细胞的标志(Oct-4,Rex-1,hTERT)的表达及体外向脂肪细胞诱导分化程度,以测定其多向分化的能力。用流式细胞术(FCM)检测hFOB的细胞表型,RT-PCR检测细胞因子(SCF,IL-6,IL-11,SDF-1α,GM-CSF及G-CSF)的表达,并和骨髓来源的间充质干细胞(BM-MSC)进行比较。结果表明:hFOBs可表达Oct-4、Rex-1多能干细胞的标志,但不表达hTERT;体外诱导分化实验证实hFOB具有多向分化潜能。FCM发现hFOBs和BM-MSC具有相同的细胞表型,均表达CD44、CD73(SH3)、CD105(SH2)及CD90(Thy-1),但不表达CD34、CD45、HLA-DR等造血细胞标记。RT-PCR检测还发现:hFOBs和BM-MSC均表达SCF,IL-6,IL-11,SDF-1α等细胞因子mRNA,但hFOBs还能表达GM-CSF和G-CSF。结论:人成骨细胞系hFOB1.19可能是处于较早阶段的成骨祖细胞,表达多种造血相关的细胞因子,是研究成骨细胞调控造血的较好的模式系统。 展开更多
关键词 成骨细胞 hFOB1.19细胞系 骨髓间充质干细胞 造血细胞因子 基因表达
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amiRNA-Snai1逆转人胃癌细胞株SGC7901/DDP对顺铂的耐药性及其机制研究 被引量:7
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作者 许春红 郭慧敏 +3 位作者 王军 李建琦 陈敏 邹晓平 《胃肠病学》 2012年第3期146-150,共5页
背景:多药耐药是恶性肿瘤化疗失败的主要原因。研究显示锌指转录因子Snai1介导肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT)可促成肿瘤对化疗耐药。目的:探讨人工合成microRNA-Snai1(amiRNA-Snai1)逆转人胃癌细胞株SGC7901/DDP对顺铂(DDP)耐药性的作... 背景:多药耐药是恶性肿瘤化疗失败的主要原因。研究显示锌指转录因子Snai1介导肿瘤细胞发生上皮间质转化(EMT)可促成肿瘤对化疗耐药。目的:探讨人工合成microRNA-Snai1(amiRNA-Snai1)逆转人胃癌细胞株SGC7901/DDP对顺铂(DDP)耐药性的作用及其可能机制。方法:构建稳定转染amiRNA-Snai1质粒或阴性对照质粒的SGC7901/DDP细胞株(SGC7901/DDP-amiRNA组和SGC7901/DDP-Mock组),以蛋白质印迹法、免疫荧光法检测各组细胞中的Snai1、耐药基因ERCC1、Snai1下游靶基因E-cadherin蛋白表达,以CCK-8法检测各组细胞经不同浓度DDP(0.01、0.1、1.0、10.0 mg/L)作用后的存活率,计算DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果:DDP耐药SGC7901/DDP细胞中的Snai1蛋白相对表达量显著高于DDP敏感亲本SGC7901细胞(P<0.05)。SGC7901/DDP-amiRNA组细胞Snai1、ERCC1蛋白相对表达量显著低于SGC7901/DDP-Mock组细胞(P<0.05),荧光强度明显减弱;E-cadherin蛋白相对表达量显著高于SGC7901/DDP-Mock组细胞(P<0.05),荧光强度明显增强。DDP对SGC7901/DDP-amiRNA组细胞的IC50值显著低于SGC7901/DDP-Mock组细胞(P<0.05)。结论:以amiRNA-Snai1沉默Snai1基因表达可能通过下调ERCC1表达、上调E-cadherin表达而逆转人胃癌细胞株SGC7901/DDP对DDP的耐药性。 展开更多
关键词 胃肿瘤 细胞系 肿瘤 抗药性 上皮间质转化 Snai1 RNA干扰 钙黏着糖蛋白类
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