延胡索总生物碱对慢性癫痫大鼠皮层NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡的影响

目的:研究延胡索总生物碱(TAC)对戊四氮(PTZ)所诱导的慢性癫痫大鼠的治疗作用,探讨其对大脑皮层核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/caspase-1/消皮素D(GSDMD)介导的细胞焦亡的影响及可能机制。方法:清洁级雄性SD大鼠30只,随机抽取6只大鼠作为正常组,其余大鼠采用PTZ(35 mg/kg)腹腔连续注射28 d复制慢性癫痫模型。将造模成功的18只大鼠随机分为模型组、低剂量TAC组和高剂量TAC组,每组6只。低、高剂量TAC组大鼠分别灌胃给予7和14 mg/kg的TAC,连续给药14 d,正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水。观察记录大鼠全面强直阵挛发作(GTCS)和极小阵挛发作(MCS)的潜伏期;采用HE染色观察颞叶皮层的病理学变化;TUNEL法检测神经细胞凋亡;免疫组化和Western blot法检测皮层组织核因子κB(NF-κB)、NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白表达;免疫组化检测脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)和IL-1β蛋白表达;RT-qPCR检测各组NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著缩短(P<0.01);模型组大鼠皮层神经细胞凋亡数量显著增加,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著增加,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD N端片段(GSDMD-N)的mRNA及蛋白表达也显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,各剂量TAC组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著延长,皮层神经细胞凋亡数量显著减少,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著减少,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD的mRNA及蛋白表达也均显著减少(P<0.01)。结论:TAC可能通过NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路,减少炎症因子分泌,抑制神经细胞焦亡,从而对PTZ诱导的慢性癫痫大鼠起到治疗作用。

延胡索总生物碱对慢性脑缺血大鼠海马沉默信息调节因子1/肿瘤抑制基因P53蛋白信号通路的调控作用及其机制研究

目的研究延胡索总生物碱(TAC)对慢性脑缺血(CCH)大鼠海马CA1区沉默信息调节因子1(Sirt1)/肿瘤抑制基因P53蛋白(P53)信号通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法将大鼠按照随机数字表法完全随机分为假手术组、模型组、TAC高剂量组(14 mg/kg)、TAC低剂量组(7 mg/kg),每组6只。运用改良版双侧颈总动脉永久性阻断(BCCAO)法建立CCH大鼠模型,假手术组仅对双侧颈总动脉做分离处理。造模完成1周后,每组分别灌胃给予对应药物或等体积等渗盐水,每日1次,治疗持续14 d。采用苏木素-伊红染色法观察大鼠海马区病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿三磷酸缺口末端标记测定(TUNEL)法检测其神经元凋亡情况;免疫印迹染色和免疫组织化学法分别测定Sirt1、P53、P53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(BAX)在大鼠海马区的表达情况并进行各组间比较。结果(1)4组凋亡细胞数量和凋亡率差异有统计学意义(F值分别为71.417、76.835,均P<0.01)。4组间Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值差异均有统计学意义(F值分别为1178.390、42.465、867.413、110.656和131.801,均P<0.01)。4组间Sirt1、P53、PUMA、BAX、Bcl-2蛋白相对表达水平差异均有统计学意义(F值分别为9.497、11.863、58.552、186.855和12.466,均P<0.01)。(2)模型组大鼠海马区脑组织神经元较假手术组排列紊乱,胞核固缩增多,胶质细胞和炎细胞明显增多。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元凋亡细胞数量及凋亡率明显上升[分别为(10.8±1.5)个比(2.0±0.9)个和(35.5±4.5)%比(6.2±2.6)%;均P<0.05];Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显降低(84.6±6.6比244.6±4.9,138.5±6.7比210.9±10.0;均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值明显升高(156.8±11.6比93.5±11.6,151.3±3.3比38.0±4.0,87.0±5.0比38.4±5.5;均P<0.05);Sirt1、Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低(0.51±0.07比0.74±0.07,0.36±0.03比0.53±0.05;均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白相对表达水平明显升高(0.37±0.06比0.21±0.02,0.62±0.06比0.23±0.02,1.08±0.06比0.45±0.03;均P<0.05)。(3)TAC高、低剂量组大鼠海马区组织结构较模型组相对紧密均匀,神经元排列整齐,细胞结构也相对清晰完整。与模型组比较,TAC高、低剂量组神经元凋亡细胞数量[高、低剂量组分别为(3.8±0.7)、(6.2±1.2)个]及凋亡率[高、低剂量组分别为(12.4±2.8)%、(20.2±3.9)%]均明显下降(均P<0.05);Sirt1、Bcl-2蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组Sirt1分别为150.0±4.8、131.3±1.3,Bcl-2分别为207.1±7.4、169.5±3.9)明显升高(均P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白阳性表达区域平均积分光密度值(高、低剂量组P53分别为105.9±8.8、115.5±9.0,PUMA分别为56.8±5.1、74.4±3.9,BAX分别为40.5±5.6、48.4±5.0)明显降低(均P<0.05);Bcl-2蛋白相对表达水平明显升高(高、低剂量组分别为0.53±0.05、0.47±0.02,P<0.05),P53、PUMA、BAX蛋白相对表达水平明显降低(高、低剂量组P53分别为0.21±0.02、0.24±0.04,PUMA分别为0.36±0.02、0.28±0.04,BAX分别为0.52±0.02、0.54±0.03;均P<0.05),TAC高剂量组Sirt1蛋白相对表达水平明显升高(0.71±0.05,P<0.05),TAC低剂量组Sirt1蛋白相对表达水平(0.52±0.08)差异无统计学意义(P>0.05)。结论TAC可以减轻CCH大鼠海马CA1区神经元损伤,降低海马区神经元细胞的凋亡率,其机制可能与TAC激活Sirt1/P53通路、抑制P53蛋白活性,从而调控其下游凋亡相关蛋白的表达水平有关。

延胡索总碱贴片的初步稳定性研究

目的研究延胡索总碱贴片中延胡索总碱在不同条件下的稳定性。方法以延胡索总碱贴片中的延胡索甲素、延胡索乙素以及延胡索丑素的含量,24 h体外累积释放量及黏附力为指标,进行了强光照射、高温、高湿的影响因素试验、加速试验及长期留样试验。结果制剂对光照、高温、高湿稳定,加速试验、长期留样试验稳定性较好,延胡索总碱贴片中的延胡索甲素、延胡索乙素和延胡索丑素的含量、24 h体外累计释放量及延胡索总碱贴片黏附力无显著性变化。结论延胡索总碱贴片质量可控,稳定性良好。

超滤膜纯化夏天无总碱的研究

目的探讨应用超滤膜分离技术纯化夏天无总碱工艺。方法采用不同截留分子的膜组件、操作参数进行正交设计,以与原阿片碱相关的各种指标考察不同膜组件及操作参数对膜分离效果的影响。结果截留相对分子质量为6×103～1.0×104的PS膜具有较好的膜分离效果,选择压力0.08MPa、料液温度40℃、进料体积流量2.8L/min的操作参数工作效率更高。结论利用膜分离工艺制备的夏天无注射液澄清、色泽好,显示出更强的药效作用。

夏天无总生物碱对东莨菪碱及D-半乳糖所致大鼠学习记忆障碍的影响

目的 研究夏天无总生物碱对东莨菪碱及 D-半乳糖致学习记忆障碍大鼠行为学的影响。方法 大鼠连续ig夏天无总生物碱 15 d后 ,对东莨菪碱造成记忆获得障碍大鼠进行“Y”型电迷宫和 Morris水迷宫行为学检测 ;D-半乳糖 sc 6周、夏天无总生物碱给药 5周后进行“Y”型电迷宫行为学检测。结果 在“Y”型电迷宫行为学检测中 ,夏天无总生物碱用药组〔0 .5～ 4mg/ ( kg· d)〕大鼠学习记忆成绩较模型组均有显著的提高 ( P<0 .0 5 ) ;Morris水迷宫行为学检测中 ,夏天无总生物碱用药组〔0 .2 5～ 1.0 mg/ ( kg· d)〕大鼠对撤去平台的记忆成绩较模型组大鼠有显著的提高 ( P<0 .0 5 )。结论 夏天无总生物碱对东莨菪碱及 D-半乳糖造成的两种学习记忆获得障碍大鼠的学习记忆能力均有明显的改善作用。

元胡产地醋制法的化学评价

对产地醋制法和传统醋制法的元胡炮制品进行了定性定量分析,其结果证明,两种方法的元胡炮制品主要化学成分相同,而元胡总生物碱及延胡索乙素含量则产地醋制法高于传统醋制法。

夏天无总碱对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及认知功能的影响

目的:研究夏天无总碱对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡及认知功能的影响。方法:50只大鼠分为对照组,模型组和0. 3、0. 6和1. 2 mg/kg夏天无总碱组,每组10只。模型组和夏天无总碱组构建血管性痴呆大鼠模型,0. 3、0. 6和1. 2夏天无总碱组分别灌服0. 3、0. 6和1. 2 mg/kg的夏天无总碱30 d。Morris水迷宫实验检测大鼠认知能力,用相应试剂盒分别检测大鼠海马区去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TUNEL法检测海马神经元凋亡情况,Western blot检测活化型Caspase-3(c-Caspase-3)蛋白表达水平。结果:模型组大鼠认知能力降低,NE、DA、5-HT、AchE含量下降,神经元凋亡率升高,c-Caspase-3蛋白水平升高,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P均<0. 05)。夏天无总碱组大鼠认知能力改善,NE、DA、5-HT、AchE含量升高,神经元细胞凋亡率降低,cCaspase-3蛋白水平降低,SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量下降(P均<0. 05)。结论:夏天无总碱能够改善血管性痴呆大鼠认知能力,其作用机制可能与抑制氧化应激、减少海马神经元细胞凋亡、调节神经递质释放有关。

Box-Behnken响应面法优化延胡索配方颗粒的提取工艺

目的优选延胡索配方颗粒中延胡索总生物碱提取的工艺条件。方法采用单因素实验结合Box-Behnken响应面法,以延胡索总生物碱提取率为评价指标进行实验,考察提取时间、水料比和提取次数3个因素对提取工艺的影响。结果根据回归方程确定的最佳提取工艺条件为:提取时间100min;水料比12.5∶1(mL·g-1);提取次数3次。结论采用该工艺条件,延胡索总生物碱的提取率为1.94%,与理论值预测值接近,具有一定的实用价值。

元胡总碱对实验性大鼠胃黏膜损伤的保护作用

目的研究元胡总碱(TARC)对实验性大鼠胃黏膜损伤的保护作用。方法利用胃黏膜下注射冰乙酸方法制备大鼠急性胃黏膜损伤模型。第2天,按照分组分别ig给予西咪替丁400 mg·kg-1,TARC 20,40和80 mg·kg-1,连续ig 15 d,末次给药后2 d,测定大鼠胃液分泌量及胃液总酸度;HE染色观察胃组织病理变化,计算胃黏膜损伤指数和损伤抑制率;免疫组织化学法测定胃黏膜表皮生长因子(EGF)和EGF受体(EGFR)的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤面积和损伤指数显著增加(P<0.01),提示大鼠胃黏膜损伤模型制备成功。与模型组比较,西咪替丁组和TARC 80 mg·kg-1组分别降低胃黏膜损伤面积的39.9%和23.7%,胃黏膜损伤指数分别降低52.3%和30.5%(P<0.01),TARC 80 mg·kg-1组与西咪替丁组比较无统计学差异。与模型组比较,西咪替丁组及TARC 40和80 mg·kg-1组大鼠胃黏膜EGF蛋白表达分别增加81.8%,24.2%和57.6%,EGFR蛋白表达分别增加45.9,16.2%和29.7%。病理学观察发现,模型组胃黏膜脱落坏死,大量炎性细胞浸润;西咪替丁组、TARC 40和80 mg·kg-1组胃组织病变明显改善。结论 TARC具有保护大鼠急性胃黏膜损伤的作用,其机制可能与上调胃黏膜组织中EGF和EGFR的表达有关。

基于GSE-1细胞相关活性评价体系的延胡索总生物碱萃取纯化工艺研究

目的通过体外抗溃疡活性来评价延胡索总生物碱有机溶剂萃取的纯化工艺。方法采用酸性染料比色法,以延胡索总生物碱纯度为指标,考察大孔吸附树脂结合有机溶剂萃取纯化的总生物碱纯度,并采用MTT法测定GSE-1细胞相关活性评价,对总生物碱纯度和药效进行相关性分析。结果最佳纯化工艺为1 mol/L的HCl溶解树脂纯化物,1倍药液体积的三氯甲烷除杂,药液加氨水碱化,以1倍药液体积的有机溶剂,按照三氯甲烷-乙酸乙酯-正丁醇的顺序分段综合萃取,合并有机溶剂层。结论所建立的纯化工艺稳定可行,总生物碱纯度>90%,体外抗GSE-1溃疡量效关系明确。

夏天无总碱提取物对痴呆大鼠脑内5-HT和DA含量的影响

目的 观察夏天无总碱提取物对痴呆大鼠脑内 5羟色胺 (5 HT)和多巴胺 (DA)递质含量的影响。方法 采用D 半乳糖腹腔连续注射 6周 ,制备大鼠痴呆模型。Y电迷宫法测试对大鼠的学习、记忆能力 ,采用荧光分光光度计测定大鼠脑内 5 HT ,DA的含量。结果 夏天无总碱提取物用量为 0 .5mg/kg ,1.0mg/kg时可显著改善模型大鼠的学习记忆能力 (P <0 .0 1) ,显著增加痴呆大鼠脑内 5 HT含量 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,夏天无总碱提取物用量为 0 .5mg/kg ,1.0mg/kg ,0 .2 5mg/kg时均可显著增加痴呆大鼠脑内DA含量 (P <0 .0 1;P <0 .0 5 )。 结论 夏天无总碱提取物提高痴呆大鼠学习记忆功能的作用 ,可能与增加脑内神经递质 5 HT和DA有关。

夏天无总碱对大鼠实验性脑血栓形成的影响

使用大鼠实验性脑血栓模型 ,观察夏天无总碱对血栓形成的影响。研究表明夏天无总碱大、中剂量 (1,0 5mg·kg 1·d 1)给药 7d可抑制血栓形成 ,减轻脑栓塞引起的伊文思蓝蓝染和脑水肿。夏天无总碱的上述药理学作用可能就是活血化淤、益气行血治疗中风。

夏天无总碱的精制工艺研究

目的研究以阳离子交换树脂精制夏天无中总生物碱的方法及其工艺条件。方法采用紫外分光光度法测定夏天无总碱含量,高效液相色谱法测定原阿片碱,延胡索乙素含量。采用732型阳离子交换树脂精制夏天无中总生物碱,考察工艺和参数条件。结果阳离子树脂对夏天无总碱的最大吸附量为31.33 mg/g。上样浓度:1 g/ml。上样流速:1 ml/min,洗脱方法:先用蒸馏水除杂,经氨水碱化后,再用3 BV 80%乙醇洗脱,洗脱率为89.5%,得到的总生物碱含量为62.4%。再经酸碱沉淀纯化后的夏天无总生物碱的含量大于70%。结论阳离子交换树脂对夏天无总生物碱的吸附能力较好,可用于夏天无总生物碱的提取精制。

HPLC法测定夏天无中原阿片碱 延胡索乙素和巴马亭

目的建立测定夏天无药材中的原阿片碱,延胡索乙素和巴马亭的HPLC方法。方法采用反相高效液相色谱法测定夏天无药材中原阿片碱、延胡索乙素、巴马亭的含量。应用Diamonsil C18色谱柱,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸(21∶79,三乙胺调节pH4.5),检测波长282nm。结果3种生物碱的线性范围分别为1.896～75.84、1.97～78.8、1.346～67.32μg·mL-1;平均回收率分别为101.29%、100.77%、100.54%,RSD均<1.5%。结论反相高效液相色谱法专属性强,操作简单,结果准确,重复性好,可用于夏天无药材中的多种生物碱的的同时测定。

夏天无总生物碱-树脂复合物的制备

目的为生物碱类中药与强酸性阳离子交换树脂制备的药物-树脂复合物作为缓控释药物载体的研究提供依据。方法采用静态交换法,以强酸性阳离子交换树脂为药物载体,以夏天无总生物碱为模型药物,以原阿片碱和延胡索乙素为指标性成分,通过对树脂类型、溶解总碱溶液的离子强度、树脂粒径、起始总碱溶液浓度、反应温度的研究,考察不同条件下原阿片碱和延胡索乙素进行离子交换反应的速率和反应平衡问题;采用差示扫描热分析法(DSC)考察总生物碱与阳离子交换树脂之间结合的作用机制。结果静态制备夏天无总生物碱-树脂复合物的优化条件为用0.1mol·L-1HCl溶解总生物碱,总生物碱溶液起始质量浓度为8g·L-1,在50℃条件下使用粒径70μm的H+型离子交换树脂制备药物-树脂复合物。结论夏天无总生物碱与阳离子交换树脂间通过离子键结合,原阿片碱和延胡索乙素与离子交换树脂间的反应为离子交换反应。

延胡索总生物碱类有效部位的研究进展

延胡索为罂粟科植物Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥根茎,主要有效部位为生物碱类,本文对延胡索总生物碱在提取、纯化、含量测定、药理学现代研究方面进行综述,以期为延胡索总生物碱类有效部位的继续研究提供一定的参考。

延胡索总生物碱提取工艺的实验研究

目的:筛选延胡索总生物碱的最佳提取工艺。方法:按正交试验表提取,利用生物碱易溶于酸水难溶于碱水的特点对提取物纯化,采用紫外分光光度法测定总生物碱含量,以延胡索总生物碱含量及干膏率为检测指标,确定最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为:8倍量60%乙醇,提取3次,2h/次。结论:该工艺提取率高,稳定性好,为延胡索总生物碱的进一步药理作用研究提供参考。

夏天无总生物碱渗透泵控释片中总生物碱的纯化工艺研究

目的:优选夏天无总生物碱渗透泵控释片中总生物碱的纯化工艺。方法:选用5种大孔吸附树脂,以总生物碱提取率为指标,采用静态吸附试验对大孔树脂进行筛选。对筛选得到的树脂,用动态吸附解吸试验选择优化最佳工艺条件。结果:HPD722对总生物碱的吸附性能与解吸效果最好;最佳纯化工艺为最大上样量为7BV;上样流速为3BV.h-1;0.2%氨水液6BV洗脱杂质;95%乙醇洗脱总生物碱,洗脱体积为5BV,洗脱速度为1BV.h-1。结论:该工艺简单可行,纯化效果好,能满足制剂要求。

延胡索总生物碱的急性毒性及其镇痛作用研究

[目的]对延胡索总生物碱的小鼠急性毒性及镇痛作用进行评价。[方法]采用ICR小鼠单次给药毒性试验,观察延胡索总生物碱对小鼠的急性毒性反应和致死性,以Bliss法测定延胡索总生物碱对小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)。采用醋酸扭体法考察延胡索总生物碱对外周的镇痛作用,ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分成8组,分别为空白对照组、阳性对照组、延胡索乙素组、更高剂量组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、更低剂量组,各组小鼠灌胃给药后1h,经腹腔注射0.6%冰醋酸0.2mL·20g-1,记录15min内小鼠的扭体次数,计算扭体次数抑制率;采用热板致痛试验考察延胡索总生物碱对中枢的镇痛作用,将筛选出的合格KM雌性小鼠80只随机分成8组,分组同上,各组于给药前重复测量痛阈3次,取平均值作为该小鼠给药前痛阈值,给药后30、90、180min各测定1次痛阈值。[结果]延胡索总生物碱灌胃给药对小鼠的LD50值为473.36mg·kg-1,95%置信区间为422.34~532.58mg·kg-1。与空白对照组比较,延胡索总生物碱各剂量组对小鼠扭体均具有显著的抑制作用,差异均具有统计学意义(P<0.01);除更低剂量组外,延胡索总生物碱各剂量组镇痛作用均优于延胡索乙素(P<0.01,P<0.05);除更低剂量组外,延胡索总生物碱各剂量组均能明显延长热板所致小鼠的痛阈值(P<0.01,P<0.05),各组痛阈值随浓度的增加呈上升趋势,且给药剂量达到120mg·kg-1后,痛阈值基本不再随浓度变化而变化。[结论]延胡索总生物碱具有明显的镇痛作用,在一定剂量范围内可安全使用。

夏天无总生物碱提取物中大孔树脂有机残留物的测定

目的:建立夏天无总生物碱提取物中7种大孔树脂有机残留物的检测方法。方法:采用毛细管柱气相色谱法进行定量分析,以DM-17及DB-5毛细管柱,程序升温,FID检测器,测定苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯和正己烷、正庚烷7个成分的残留量。结果:经方法学考察,7种成分的线性关系良好,r=0.9988～0.9999,精密度RSD均<4.5%,回收率88%～95%,检出限均能满足测定要求。结论:所建立的方法准确可行,简便、快速,可成功地用于多种提取物中大孔树脂有机残留量的测定,结果满意。