基于PD-1介导NF-κB通路探讨莪术-三棱抗肝癌的机制

目的:基于程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)介导NF-κB通路探究莪术-三棱对肝癌细胞的影响及作用机制。方法:在体检测各组药物对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤率、脏器指数的影响;对白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的影响。运用免疫组化观察瘤组织NF-κBp65、Bcl-2以及Bax蛋白阳性表达。MTT法检测莪术醇、三棱内酯B二者单用及联用对HepG2肝癌细胞的抑制率;蛋白质免疫印迹法检测联合应用对PD-1、NF-κB、Bcl-2、κB抑制因子激酶α/β(inhibitor ofκB kinaseα/β,IKK-α/β)以及核因子κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB,IκB-α)的影响。结果:体内实验表明,与模型组相比,联合用药能够显著降低瘤质量,能够抑制TNF-α、IL-1和IL-6的表达(其中联合用药高剂量组TNF-α、IL-1和IL-6下降显著),能够抑制瘤组织中NF-κBp65、Bcl-2蛋白的阳性细胞表达率,高表达Bax蛋白。体外实验显示,与模型组相比,联合用药组能显著抑制PD-1、Bcl-2及IKK-α/β蛋白表达,促进NF-κB及IκB-α蛋白表达。结论:联合用药能够显著抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长,抑制分泌炎症因子,降低或升高NF-κB通路相关蛋白表达,拮抗肝癌细胞增殖。莪术醇以及三棱内脂B联合应用能够提高HepG2细胞增殖抑制率,这一作用可能与PD-1介导的NF-κB通路调控具有相关性。

三棱-莪术药对在结直肠癌中应用及作用机制研究

结直肠癌是胃肠道常见的恶性肿瘤,是导致癌症相关死亡的第二大原因。结直肠癌发病隐秘,多数患者在出现症状时已发生转移,常规治疗手段对于延长结直肠癌转移患者生存率没有显著效果。探究治疗结直肠癌治疗的新靶点以及研究新的靶点药物有望成为突破治疗进展、延长患者生存率和改善患者预后的关键。中药是我国的宝贵资源,80%以上新药物的发现都来源于中药天然产物。中医药治疗是癌症治疗的重要方式之一,能够减少肿瘤的转移和复发,改善术后不良症状。大量研究表明,三棱-莪术在结直肠癌的治疗中具有一定的潜力。该文从中医药学对结直肠癌的认识、三棱-莪术药对抗结直肠癌的作用机制及药理作用的研究进行归纳总结,为三棱-莪术药对在结直肠癌治疗中的应用提供参考依据。

基于网络药理和分子对接探讨莪术-三棱药对治疗卵巢癌的作用机制

目的探索莪术-三棱药对治疗卵巢癌的有效活性成分与分子生物学机制。方法通过HERB及PubChem数据库检索并筛选出莪术及三棱的有效活性成分和相应的作用靶点;运用Therapeutic Targets、OMIM及GeneCard等数据库检索卵巢癌的疾病靶点。运用Cytoscape 3.9.0软件绘制药物-成分-靶点网络图,采用STRING数据库及Cytoscape 3.9.0构建PPI网络图,进而使用Cytoscape中MCODE插件筛选出排名前10的核心靶点;使用R 4.2.2对作用靶点进行GO及KEGG通路富集分析;最后使用Auto Dock Vina等软件进行分子对接,验证核心成分与核心靶点的相互作用。结果筛选出了72种活性成分、760个作用靶点,莪术-三棱药对与卵巢癌共同靶基因有617个。核心成分为多梗白菜菊素、天人菊内酯、大花旋覆花素、山奈酚,PPI网络揭示了其主要的靶点,包括MAPK1、MAPK3、JAK1、JAK3、STAT3、MAP2K1、IL6、TYK2、KRAS以及SRC。KEGG富集分析显示共涉及186条通路,根据P<0.05提取与卵巢癌关联紧密的30条通路,主要包括cAMP信号通路、癌症中的蛋白聚糖通路、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点之间展现出良好的结合亲和性。结论三棱及莪术药对在卵巢癌的综合治疗方面具有多成分、多靶点及多通路的特征,为该药对在临床中的应用提供了信息支撑。

三棱、莪术抗大鼠免疫性肝纤维化研究

目的:研究三棱、莪术抗肝纤维化的作用。方法:以腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,以ALT,GGT,TP,Alb,A/G比值,ⅣC,LN,HA及肝脏组织病理变化为指标,观察三棱、莪术对大鼠免疫性肝纤维化的影响。结果:三棱、莪术能提高肝纤维化大鼠TP,Alb含量及A/G比值,降低ALT,GGT,ⅣC,LN,HA的作用,并能改善肝脏组织病理学变化。结论:三棱、莪术有保护肝细胞、减轻肝细胞变性坏死,恢复肝细胞结构和功能;减少纤维组织增生、阻止纤维化发展,促进纤维组织降解的作用。

三棱不同炮制品总黄酮镇痛作用研究

目的 研究三棱不同炮制品总黄酮镇痛作用。方法 采用小鼠扭体法、热板法对三棱中相对含量较高的总黄酮进行镇痛作用研究 ,同时比较不同炮制品的作用强弱。结果 三棱经醋制后 ,镇痛作用较生品有所增强。结论 三棱总黄酮具显著镇痛作用。

中药复方金三莪对肝纤维化大鼠的治疗作用及其机制研究

目的 观察中药复方金三莪抗大鼠肝纤维化的疗效及其机制。方法 将 5 0只 Wistar大鼠随机分为 4组 :A组为正常组 (n=8) ,B组为肝纤维化模型组 (n=14 ) ,C组为金三莪治疗低剂量组 (n=14 ) ,D组为金三莪治疗高剂量组 (n=14 )。B,C,D组大鼠 sc CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型 ,C,D组大鼠于造模第 4周开始 ig金三莪 ,剂量分别为 0 .6 ,1.2 g/10 0 g,每日 1次 ;A,B组 ig生理盐水 1ml/kg,第 8周处死全部大鼠。免疫组化技术检测转化生长因子 - β1 (TGF- β1 ) ,Smad3及 Sm ad7在肝内的表达及定位 ;常规生化方法检测肝功能 ;放射免疫方法检测透明质酸 (HA )含量 ;Van Gieson染色和 HE染色观察肝组织病理形态学改变。结果 肝纤维化模型大鼠经金三莪治疗后肝组织内 TGF- β1 及 Smad3表达降低 ,而 Sm ad7的表达增加 ,与模型组大鼠比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ,TGF- β1 及Sm ad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达。与模型组比较 ,金三莪治疗后大鼠血清丙氨酸氨基转移酶 (AL T) ,天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) ,HA含量显著减低 (P<0 .0 5 ) ;肝小叶结构趋于正常 ,纤维间隔明显变薄 (P<0 .0 1)。结论 中药复方金三莪能有效减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度 。

三棱黄酮抗HeLa宫颈癌:降低分裂期细胞比率诱导细胞凋亡

目的:研究三棱的总黄酮(Rhizoma sparganii flavonoids,RSF)对HeLa宫颈癌细胞的毒理作用及其作用机制。方法:分别检测用含有质量浓度11.7～750μg/mL RSF的DMEM培养基培养时,组间HeLa细胞的增殖活性差异,通过免疫荧光技术、流式细胞术和核型分析方法分析RSF诱导HeLa细胞毒理的机制。结果:RSF含量高于188μg/mL的DMEM培养基可呈剂量性抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)、增加细胞凋亡小体的比率(P<0.01);与1%甲醇对照组相比,RSF-375(RSF含量为375μg/mL)与RSF-750(RSF含量为750μg/mL)药物组HeLa细胞的分裂(M)期细胞比率显著下降(P<0.01),细胞间的接触生长状态消失,体积增大;在本次实验中,RSF-375与RSF-750药物组HeLa细胞微管(a-tublin)细胞骨架形态的特异性免疫结果与对照组相比,细胞形态呈显著不规则状改变,微丝突触增多,表现为较高的迁移运动趋势。结论:RSF是三棱抗HeLa宫颈癌的有效成分,在本实验中,RSF可以通过干扰细胞有丝分裂相关的机制显著抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.01)。

利用GC-MS技术分析三棱挥发油化学成分(英文)

本文采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取三棱挥发油化学成分,测得三棱挥发油的得率为3.19%。利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用方法从三棱挥发油中分离并确认出32种化学成分,用峰面积归一化法通过G1710BA化学站数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的百分含量,其中主要成分为3,5,6,7,8,8a-六氢-4,8a-二甲基-6-(11-methylethyenyl)-2(1H)萘酮(12.95%),2,4,6,7,8,8a-六氢-5(1H)-黄酮(10.72%),十氢-4a-甲基-1-萘(5.78%),3H-3a,7-甲撑甙菊环烃(5.69%)。

三棱黄酮体外诱导A549及MCF-7细胞S/G_2周期停滞的研究

为了研究三棱黄酮(Rhizoma Sparganii flavonoids,RSF)对雌激素受体阳性(estrogen receptor positive,ER+)恶性肿瘤细胞株A549与MCF-7的细胞毒作用和机制,本次试验制备含188、375、750μg/mL RSF的DMEM培养基(RSFD-188、RSFD-375、RSFD-750),与贴壁后的A549及MCF-7细胞共培养3 d,含1%甲醇的DMEM培养基为对照,使用MTT法、免疫荧光技术、流式细胞术比较组间细胞的增殖活性、形态(anti-a-tublin)、凋亡率以及细胞周期的差异。试验结果显示,RSF可呈剂量性抑制A549与MCF-7细胞的增殖活性、增加凋亡小体比率、诱导细胞骨架形态异常改变;与RSFD-375、RSFD-750共培养的A549与MCF-7细胞表现为明显的S/G2细胞周期停滞。所得实验结果表明,RSF对A549及MCF-7细胞具有明确的细胞毒理作用,其抑制细胞增殖活性的机制与诱导细胞的S/G2细胞周期停滞相关。

活血、破血药对动脉粥样硬化大鼠PCNA蛋白、VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表达的影响

目的探讨活血药(当归、川芎)、破血药(三棱、莪术)对动脉粥样硬化(AS)的大鼠主动脉增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及血管内皮生长因子(VEGFmRNA)、血管内皮生长因子受体(VEGFR-AS)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为5组(空白组、模型组、他汀组、活血组、破血组),先采用高脂喂饲AS大鼠,造模成功后,灌胃给药,连续4周。实验结束后,用免疫组化染色法检测主动脉内膜PCNA蛋白表达;用原位杂交法检测主动脉内膜VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA的基因表达。结果破血组PCNA阳性细胞数低于活血组(P<0.05);模型组VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA平均灰度值均高于空白组、他汀组、活血组和破血组(P<0.05);活血组、破血组组间比较无差异。结论当归、川芎与三棱、莪术均能抑制PCNA、VEGFmRNA及VEGFR-2mRNA的表达,从而起到抑制细胞增殖的作用。在抑制PCNA表达方面,破血药三棱、莪术优于活血药当归、川芎。

破血化瘀药三棱、莪术对肺纤维化大鼠模型肺形态学及羟脯氨酸的影响

目的观察破血化瘀药三棱、莪术对肺纤维化大鼠模型的肺形态学及羟脯氨酸(HYP)的影响,探讨其作用机制。方法大鼠气管内注入博来霉素(5 mg/kg)造模。随机分为空白对照组、生理盐水组、三棱莪术高剂量组(l g/mL)、低剂量组(0.5 g/mL)及泼尼松组(15 mg/kg),造模次日起每天给药,于第7 d处死大鼠,观察肺间质纤维化病理变化及肺组织HYP的含量。结果生理盐水组HE染色肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,Mas-son染色肺间质内成纤维细胞增多,形成肺实变;其余给药组肺组织炎性细胞浸润较前者为轻,成纤维细胞明显较少。与生理盐水组比较,三棱莪术高剂量组及泼尼松组肺组织HYP含量显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论三棱、莪术能有效抑制博来霉素引起的肺纤维化形成。

中药三棱炮制工艺优化的考察

目的优化中药三棱炮制工艺,考察影响三棱炮制的因素。方法参照《中国药典》重点考核醋制工艺,对其进行多因素考察,设计正交实验,在此基础上参考文献中其它炮制工艺,进行横向比较。考察标准以三棱的有效部位总黄酮为标准,采用紫外分光光度法(UV)进行含量测定,并对数据作统计学处理(方差分析),找出最佳优化方案。结果醋炙三棱总黄酮含量为最高,比生品含量增加29.79(左右,麸炒三棱含量为最低,比生品含量减少52.25(左右。其它炮制方法中醋烤三棱总黄酮含量比生品含量增加13.10(,醋煮三棱总黄酮含量比生品含量增加3.73(,醋蒸三棱总黄酮含量比生品增加8.63(,清蒸三棱总黄酮含量比生品含量增加3.05(;醋炙的最佳工艺为20(的用醋量浸润10min在150℃下炒制15min。结论炮制方法直接影响三棱总黄酮含量,该研究为优选三棱最佳炮制工艺提供参考。

综合主成分分析用于中药三棱质量评价

目的:对不同产地三棱药材的质量进行综合评价,建立三棱药材质量评价方法。方法:采用主成分分析、相似度分析法及聚类分析,对产自安徽黄山、安徽巢湖、浙江金华、浙江东阳、湖北石首、湖南岳阳、江西新余、江苏南京、河南郑州、河南新乡的三棱药材HPLC特征图谱进行分析。结果:10个产地三棱相似度在0.834～0.992之间,聚类分析表明,产自江西新余、江苏南京、安徽黄山、安徽巢湖的三棱样品首先聚为一类,为野生,生长环境相似;产自浙江东阳和湖南石首的样品聚为一类,为栽培品种,产区相邻,气候生态比较接近。综合主成分分析,得出4个主因子,其累计方差贡献率达89.29%,第一主因子的方差贡献率为40.1%,并评价出产自湖南岳阳三棱药材的质量较其他产区采集购买的三棱药材为优。结论:综合主成分分析可用于中药三棱多指标的质量评价。

活血、破血药对动脉粥样硬化大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达及细胞凋亡率的影响

目的:探讨活血药(当归、川芎)、破血药(三棱、莪术)对动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉内膜B细胞白血病-淋巴瘤-2(Bcell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞白血病-淋巴瘤-2相关蛋白基因(Bcl-2-associated X proteingene,Bax)表达及细胞凋亡率的影响。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、活血药(当归、川芎)组、破血药(三棱、莪术)组、他汀组,每组12只。先采用高脂喂饲复制AS大鼠模型,造模成功后,灌胃给药,连续4周。实验结束时检测Bcl-2、Bax蛋白表达及细胞凋亡率。结果:他汀组、破血药组Bcl-2表达明显高于模型组(P<0.01);他汀组与破血药组组间比较,差异无显著性意义(P>0.05);破血药组Bcl-2表达高于活血药组(P<0.05)。空白组、他汀组、活血药组、破血药组Bax表达明显低于模型组(P<0.01,P<0.05),空白组、他汀组、破血药组组间比较,差异无显著性意义(P>0.05),破血药组Bax表达低于活血药组(P<0.05)。空白组、他汀组、破血药组凋亡率明显低于模型组(P<0.01);破血药组凋亡率低于活血药组(P<0.05)。结论:破血药三棱、莪术通过上调Bcl-2的表达,下调Bax的表达,起到抑制细胞凋亡的作用,此作用优于活血药当归、川芎。

眼络通颗粒剂的质量控制项目研究

目的:研究眼络通颗粒剂的质量控制方法。方法:采用硅胶 G 薄层色谱法对颗粒剂中2种主要成分川芎和三棱进行定性鉴别;用 RP-HPLC 法对葛根素进行含量测定,采用 Kromasil 100-5 C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(30∶70)作流动相,检测波长为250nm。结果:葛根素进样量在0.06～0.65μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,日内、日间精密度 RSD 分别为0.85%和0.48%(n=5),高、中、低3个浓度平均加样回收率(n=3)分别为101.2%,101.1%,101.4%,RSD 分别为1.1%,0.94%,0.41%。结论:本法操作简便,重复性好,结果准确可靠。

活骨颗粒质量标准的研究

目的 :建立活骨颗粒中麻黄、肉桂、三棱TLC鉴别及测定盐酸麻黄碱含量的方法。方法 :采用薄层色谱和薄层扫描法。结果 :线性范围 0 5～ 3 0 μg ,回收率 97 83%。RSD为 3 32 %。 结论 :该法准确 ,重复性好 。

金华产三棱中总黄酮的含量测定

目的:测定金华产三棱药材中总黄酮的含量,为制定合理的质量标准提供依据。方法:采用60%的乙醇提取三棱中的总黄酮,以芦丁为对照品,亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量,并且比较了不同产地三棱中的总黄酮含量。结果:平均加样回收率为99.55%,RSD%为1.08%。金华产三棱总黄酮的含量最高为0.81%。结论:该方法简便、准确,可用于三棱中总黄酮的含量测定。

活血祛瘀药对三棱-莪术治疗胃癌的网络药理学作用机制研究

[目的]探讨活血祛瘀药对“三棱-莪术”治疗胃癌(gastric cancer,GC)的有效活性成分及作用机制。[方法]通过中药系统药理学数据库与分析平台(Tradrtional Chinese Medicine systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)选取三棱-莪术药对中含有的111个化合物,筛选其活性成分及潜在靶点;通过人类孟德尔遗传数据库、Gene Cards数据库挖掘GC疾病靶点;结合化合物及疾病靶点,构建化合物-靶点网络图,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集及京都基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。[结果]“三棱-莪术”药对中含有60个活性成分,对应GC 67个靶点;主要调控GC细胞的生长增殖周期,包括对细胞核、细胞质、DNA转录、RNA聚合酶Ⅱ启动子等的作用,及对类固醇激素受体活性、丝氨酸型内肽酶活性的调控;发挥作用的重要靶点为半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3,CASP3)、c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、热休克蛋白90AA1(heat shock protein90AA1,HSP90AA1)、前列素内环氧化物合成酶2(prostaglandin endoperoxide synthase 2,PTGS2);主要作用的信号通路有肿瘤信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinases-protein kinase B/Akt,PI3K-PKB/Akt)信号通路、p53信号通路、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路、钙信号通路、鞘脂类信号通路等。[结论]中医活血祛瘀之代表“三棱-莪术”药对治疗胃癌作用机制确切,主要通过对细胞周期、靶点蛋白及信号通路的调控发挥其治疗作用。

三棱和莪术对肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的观察三棱和莪术对肺纤维化大鼠肺形态学及肺组织细胞凋亡的影响。方法大鼠气管内注入博来霉素(5 mg/kg)造模,随机分为空白组、模型组、三棱和莪术高剂量组(l g/mL)、低剂量组(0.5 g/mL)及泼尼松组(15 mg/kg),分别于用药后第28天处死大鼠,观察肺纤维化病理变化,血浆单核细胞趋化活化因子MCP-1的含量及肺组织细胞凋亡的变化。结果生理盐水组大鼠HE染色肺泡壁显著增厚,肺纤维化形成;给药组肺组织纤维化较生理盐水组均减轻(P<0.01)。与模型组比较,三棱和莪术高剂量组、低剂量组、泼尼松组大鼠血浆MCP-1含量明显降低(P<0.05)。与生理盐水组比较,三棱和莪术高、低剂量组肺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),泼尼松组肺组织细胞凋亡率亦显著降低(P<0.01)。结论三棱和莪术能减少肺组织细胞过度凋亡,从而延缓肺纤维化进程。

眼络通冲剂质量控制标准实验室研究

[目的]研究眼络通冲剂的定性和定量质控指标。[方法]采用硅胶G薄层色谱法对冲剂中两种主要成分川芎和三棱进行定性鉴别;用RP-HPLC法对葛根素进行含量测定,采用Kromasil100-5C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(30:70)作流动相,检测波长为250nm。[结果]葛根素进样量在0.06～0.65μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999,日内、日间精密度RSD分别为0.85%和0.48%(n=5)。得高、中、低3个浓度平均加样回收率(n=3)分别为101.2%、101.1%、101.4%,RSD分别为1.1%、0.94%、0.41%。[结论]硅胶G薄层色谱定性法和RP-HPLC定量法结果准确可靠,重现性好,可作为该制剂质控标准。