藁本的品种问题与鉴定研究概况

藁本药用历史悠久,但传统用药存在多种混淆品和地方习用品。近年来,市场上的藁本逐渐由野生品转变为栽培品,并出现多种混淆品。通过本草考证及产地、市场调研,分析藁本品种混乱的原因,探讨通过有效监管改变藁本质量现状的路径。通过总结当前藁本品种鉴定技术的研究进展发现,当前其处于栽培品替代野生品的过渡时期,亟须建立快捷、合理、实用的藁本品种辨识方法,满足市场监管的现实需求。

川芎、当归和藁本中挥发油成分比较研究

目的:建立川芎、当归和藁本挥发油的HPLC特征图谱,对特征峰进行比较研究。方法:采用HPLC法,建立川芎、当归和藁本的特征图谱,并采用液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)方法对特征峰进行定性分析。结果:在选定的条件下,得到川芎、当归和藁本的特征图谱,HPLC-MS鉴定出7个特征峰,分别为:洋川芎内酯A、丁苯酞、阿魏酸松柏酯、E-藁本内酯、Z-藁本内酯、新蛇床内酯、E-丁烯基酞内酯。结论:该方法可简便准确地鉴别川芎、当归和藁本,为药材及其中成药的质量控制提供参考。

制大黄-川芎“药对”抑制造影剂肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制研究

目的研究制大黄-川芎"药对"抑制造影剂肾病(CIN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制。方法将32只雄性SD大鼠分为正常组(A组)、模型组(B组)、药对组(C组)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(D组)。C组于造模前7天每日灌胃"药对"水煎液,D组造模前3天每日腹腔注射NAC(150μg/g)。B、C、D 3组按照文献方法制备CIN模型。造模后24 h处死大鼠,测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);HE染色观察肾脏病理改变,Western印迹检测肾组织p-p38 MAPK、Bcl-2及Bax表达。结果与A组比较,B、C、D组大鼠血清肌酐、尿素氮均明显升高(P<0.05,P<0.01),出现肾间质水肿、肾小管上皮细胞胞浆空泡样变,p-p38 MAPK、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。与B组比较,C、D组血清肌酐、尿素氮明显降低(P<0.05),肾脏病理改变显著减轻,p-p38 MAPK、Bax蛋白表达下降,而Bcl-2表达增加(P<0.01)。结论 p38 MAPK通路活化参与了CIN大鼠急性肾损伤过程,且制大黄-川芎"药对"能通过抑制该通路活化保护CIN大鼠肾功能。

基于ITS2序列的藁本与常见混伪品的分子鉴定

本文对药材藁本及其常见混伪品的rDNA ITS2进行了PCR扩增、测序，并运用MEGA软件对该区进行序列分析，比较了ITS2碱基序列的差异及其规律，同时为药材藁本及混伪品的指纹图谱鉴别提供分子标记。结果显示辽藁本的种内差异较小，而与其主要混伪品间存在较大的变异，差异性范围为5．7％～35．3％。根据ITS2序列特征构建的系统树，药材藁本的样品紧密的聚在一起，和其混伪品可以明确区分，支持率为100％。此外，ITS2的二级结构可作为鉴定药材藁本及混伪品种的一个方法，具有一定的系统学及分类学意义。本研究表明rDNA ITS2序列分析可作为药材藁本与混伪品的一种有效的分子鉴定方法，具有重要的应用价值。

超临界CO_2萃取藁本中有效部位的研究

目的:研究超临界CO2流体萃取藁本中有效部位的工艺。方法:以阿魏酸含量为指标,采用均匀设计法研究萃取压力、萃取温度、解析温度、提取时间对超临界CO2流体萃取藁本中有效部位的影响。结果:提取藁本中有效部位的最佳SFE-CO2萃取条件为:夹带剂为50%药材量的乙醇(m l/g)、萃取压力为40Mpa、萃取温度为50℃、解析压力为6Mpa、解析温度为50℃,提取时间为3.5h。结论:优选得到的工艺具有较高的提取率,该工艺合理、可行。

藁本药材的市场调查及正品与习用品对比研究

本文通过对藁本药材的市场流通情况进行调查,同时对相关文献加以整理,对正品藁本及习用品在本草考证、功能主治、化学成分及药理药效等方面作对比研究,并对研究结果进行讨论。

辽藁本药材RP-HPLC指纹图谱研究

目的建立辽藁本的高效液相色谱指纹图谱,研究不同产地辽藁本的质量,建立评价辽藁本质量优劣的指纹图谱分析方法。方法利用RP-HPLC方法,梯度洗脱,测定了16批辽藁本样品。色谱柱：Dikma C18柱（200mm×4.6mm,5μm）;流动相：A相为乙腈,B相为磷酸水溶液,在0-15min,B相从90%线形改变至80%,15-60min,B相从80%线形改变至15%;流速：0.8mL.min^-1;检测波长：274nm;柱温：25℃;进样量：10μL。结果建立了RP-HPLC指纹图谱共有模式。结论辽藁本药材的高效液相色谱指纹图谱重复性好,专属性强,可用于辽藁本药材的质量控制。

基于UPLC特征图谱的辽藁本水提药渣利用价值研究

目的建立辽藁本药材UPLC特征图谱,比较分析辽藁本药材与水提后不同温度下干燥药渣的特征图谱差异性,为其水提药渣保存和二次利用提供参考依据。方法UPLC特征图谱采用YMC Triart-C18(2.1 mm×100 mm,1.9 m)色谱柱,以乙腈-0.1%乙酸为流动相,梯度洗脱,流速为0.35 mL/min,柱温为30℃,检测波长为254 nm。此外,采用不同温度对药渣进行干燥,测定其特征图谱并与原药材进行比较。结果建立了辽藁本药材UPLC特征图谱,共确定了5个共有特征峰,并指认了阿魏酸和藁本内酯两个色谱峰,药渣中藁本内酯存在大量残留,且不同干燥温度存在一定影响。结论该方法稳定可靠,可直观评价辽藁本水提药渣与原药材间的变化,同时优选了药渣干燥条件,为药渣后期的保存和二次利用提供了依据。

蒙药藁本水蒸气蒸馏法和超临界CO_(2)萃取法提取部位化学成分比较研究

目的:考察蒙药藁本水蒸气蒸馏法(SD法)与超临界CO_(2)萃取法(SFE-CO_(2)法)提取部位化学成分的差异,为进一步研究蒙药藁本化学成分及其药理活性提供依据。方法:采用SD法与SFE-CO_(2)法分别提取蒙药藁本挥发油;通过稀释、过滤制备供试液;气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)进行定性分析;色谱峰面积归一法计算各组分的相对含量。结果:共鉴定出30个成分;其中,SD法提取部位鉴定出19个成分,峰面积占总峰面积的62.33%,主要成分是(E)-3-丁烯基-4,5-二氢-1(3H)-异苯并呋喃酮,相对含量是SFE-CO_(2)部位的两倍多;SFE-CO_(2)法提取部位鉴定出17个成分,峰面积占总峰面积的53.97%,主要成分是8,11-十八碳二烯酸甲酯,SD部位未检测到;共有成分有6个,共有成分在SD部位与SFE-CO_(2)部位中的相对含量不同;两种提取部位的化学成分种类及相对含量也有差异。结论:SD部位的主要成分为藁本内酯(3-丁烯基-4,5-二氢-1(3H)-异苯并呋喃酮),与文献报道一致,且SD部位检测出的化学成分总相对含量高于SFE-CO_(2)部位。研究不同提取部位化学成分的区别,为进一步研究蒙药藁本化学成分及更好开发利用藁本提供实验依据。

川芎(芎藭)的本草源流考

目的:通过本草文献,梳清芎藭的本草源流。方法:考证历代本草著作,并结合现代资料进行分析。结果:古代芎藭有东西两大产地,西部芎藭从唐代开始由于栽培分化出川芎、西芎,芎藭的原植物最早为藁本Ligusticum sinense,西芎实为L.sinense的栽培品,川芎L.chuanxiong很可能为L.sinense在长期栽培下形成的园艺品种。结论:西芎古代作为芎藭使用,近代则归属于中药藁本,因此,需要通过现代研究搞清L.chuanxiong与L.sinense关系,确立L.sinense的中药归属。

制大黄-川芎药对对CIN大鼠肾组织Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:在前期发现制大黄-川芎药对能抑制对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡的基础上,进一步从核因子E2相关因子/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路探讨该药对的作用机制。方法:将32只雄性SD大鼠分为正常组(A组)、模型组(B组)、药对组(C组)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(D组)。C组于造模前7 d每日灌胃制大黄-川芎水煎液,D组造模前3 d每日腹腔注射NAC(150μg/g)。B、C、D三组按照文献方法制备CIN模型。造模后24 h处死动物,并腹主动脉采取血测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);代谢笼收集24 h尿液,并测定尿液中急性肾损伤(AKI)标志物N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、γ-谷氨酰转肽酶(U-γ-GT);分别提取肾组织中核蛋白和总蛋白,采用Western blotting方法检测肾组织中Nrf2和HO-1蛋白表达。结果:与A组比较,B组大鼠Scr、BUN、尿NAG、U-γ-GT均明显升高(P<0.01),肾组织中Nrf2、HO-1蛋白表达明显上调(P<0.01);与B组比较,C、D组Scr、BUN明显降低(P<0.05),尿NAG、U-γ-GT显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:Nrf2/HO-1通路活化参与了CIN大鼠急性肾损伤过程,且制大黄-川芎药对可通过抑制该通路活化保护CIN大鼠肾功能。

六经头痛片HPLC指纹图谱建立及多指标成分定量测定研究

目的建立六经头痛片(LTT)HPLC指纹图谱,并采用波长切换技术同时定量测定3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元,为评价LTT质量提供依据。方法采用HPLC法,以Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水为流动相,分别建立LTT高极性和低极性部分指纹图谱,并采用波长切换技术同时测定LTT中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元5种指标性成分量。结果分别建立了11批LTT高、低极性部分指纹图谱,其相似度均大于0.90;低极性指纹谱确定了16个共有峰,对其中12个共有峰进行了归属,11、12、13号峰来源于白芷,1、2、3、7号峰来源于葛根,8号峰来源于女贞子,5、6号峰来源于川芎,15号峰来源于藁本,4号峰为川芎和藁本的共有峰,对其中7个共有峰经对照品指认,分别为葛根素(1号峰)、3′-甲氧基葛根素(2号峰)、大豆苷(3号峰)、阿魏酸(4号峰)、大豆苷元(7号峰)、欧前胡素(11号峰)和异欧前胡素(13号峰);高极性指纹图谱确定了10个共有峰,其中2~9号峰来源于葛根,1、10号峰来源于女贞子,对其中5个共有峰经对照品指认,分别为3′-羟基葛根素(2号峰)、葛根素(3号峰)、3′-甲氧基葛根素(4号峰)、大豆苷(7号峰)和特女贞苷(10号峰)。多成分定量测定中,3′-羟基葛根素在71.60~716.00 ng(r=0.999 1)、葛根素在407.78~4 077.80 ng(r=0.999 4)、大豆苷在90.72~907.20 ng(r=0.999 9)、特女贞苷在95.80~958.00 ng(r=0.999 1)、大豆苷元在21.98~219.80 ng(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率和相应的RSD分别为101.1%、1.38%,97.8%、0.72%,99.1%、0.75%,97.8%、2.75%,98.7%、0.70%;10批样品中3′-羟基葛根素量为3.08~3.84 mg/m L、葛根素17.71~21.24 mg/m L、大豆苷3.51~4.71 mg/m L、特女贞苷1.40~5.69 mg/m L、大豆苷元0.66~0.86 mg/m L。结论该法稳定可靠、重复性好,通过HPLC指纹图谱结合多指标定量测定方法较全面地反映了LTT内在质量,为其质量控制提供了可靠的科学依据。

基于谱效关系的藁本类药材抗炎活性成分研究

研究藁本类药材UPLC指纹图谱与体内抗炎活性的相关性,探究藁本类药材抗炎活性的有效成分群。建立18批藁本类药材的UPLC指纹图谱,测定其中8种化学成分的含量,采用角叉菜胶致小鼠足趾肿胀抗炎模型,测定足肿胀率、IL-1β、IL-6和PGE2,运用典型相关分析法进行谱效关系研究。化学成分聚类分析结果显示藁本和辽藁本的化学成分较为接近。藁本、辽藁本及新疆藁本甲醇提取物均可以显著降低足趾肿胀率,显著下调小鼠肿胀组织中IL-1β、IL-6和PGE2的表达,但新疆藁本的炎症抑制效果弱于藁本和辽藁本。研究结果表明化学成分与药效指标间存在显著的相关关系,UPLC方法中化合物1、3(绿原酸)、4(隐绿原酸)、5、6(阿魏酸)、7(异绿原酸B)、9、11、13、15、16、17、18(阿魏酸松柏酯)、19、20(正丁基苯酞)、21、22、23均与抗炎活性显著相关,其中化合物5、11、13、15、17、21、23与抗炎活性呈负相关。该研究筛选出藁本类药材中抗炎活性的有效成分群,对药材藁本的质量评价体系的完善具有重要意义。

经典名方中藁本的本草考证

通过查阅古代本草、方书、医籍等资料,结合近现代文献,笔者对经典名方中藁本药材的名称、基原、产地、品质评价、采收加工及炮制方法等进行考证,为经典名方开发中藁本药材的选择与使用提供依据。经考证可知,历代皆以藁本为正名,但其别名甚多。历代所用藁本的主流基原植物为藁本Ligusticum sinense和辽藁本L.jeholense,此外,尚有细叶藁本、滇芹、鞘山芎(新疆藁本)、水藁本等在不同地区习用。近代以来关于其学名考订的历史较为复杂,许多外国学者曾给出过不同的学名,然多与我国古代所用藁本情况不符,系因外国学者未能采集我国所用藁本药材对应的原植物进行准确鉴定所致。新中国成立后经过系统的原植物调查整理,明确藁本正品基原为伞形科植物藁本或辽藁本。藁本分布于黄河中上游及以南地区,现于四川、湖北、湖南、江西等地有少量生产。辽藁本分布于黄河中下游及以北地区,现于辽宁、河北等地有较多栽培;古代藁本的采收期多集中于正月、二月,以根粗大、干燥、气香、质重者为佳,现则多于春季出苗前及秋季叶枯后采集根及根茎,以个大、干燥、色黄、质坚、气香、根须少、残基短者为佳;历代炮制方法以生品为主流,尚有炒制、研末等。基于考证结果,建议经典名方开发所用藁本采用藁本L.sinense或辽藁本L.jeholense的根及根茎,原方未注明炮制要求的可以生品入药。