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米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶基因ProROL在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达
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作者 郭勇亮 喻晓蔚 徐岩 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第2期22-27,共6页
米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶在食品和油脂加工等方面具有广泛的应用前景。本研究通过PCR技术获得了米根霉脂肪酶前肽基因序列与成熟肽基因序列(ProROL),并将该基因克隆到表达载体pPIC9K上。线性化表达质粒后电转化感受态毕赤酵母菌株... 米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶在食品和油脂加工等方面具有广泛的应用前景。本研究通过PCR技术获得了米根霉脂肪酶前肽基因序列与成熟肽基因序列(ProROL),并将该基因克隆到表达载体pPIC9K上。线性化表达质粒后电转化感受态毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)GS115,通过筛选得到了阳性重组菌。摇瓶及7 L罐发酵结果显示,以p-NPP为底物,上清胞外酶活分别为10.6 U/mL和126.8 U/mL。酶学性质研究发现,该酶的最适温度为40℃左右,在低于40℃条件下,保温30 min后,能够保存60%以上的酶活力;其最适pH为8.5左右,在pH 6.0-10.0范围内保持1 h后,均能保留60%以上的酶活力。本研究构建的基因重组菌株将为该酶的工业化生产与应用提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 米根霉脂肪酶 毕赤酵母 高效表达
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Construction of the yeast whole-cell Rhizopus oryzae lipase biocatalyst with high activity 被引量:1
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作者 Mei-ling CHEN Qin GUO +4 位作者 Rui-zhi WANG Juan XU Chen-wei ZHOU Hui RUAN Guo-qing HE 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2011年第7期545-551,共7页
Surface display is effectively utilized to construct a whole-cell biocatalyst.Codon optimization has been proven to be effective in maximizing production of heterologous proteins in yeast.Here,the cDNA sequence of Rhi... Surface display is effectively utilized to construct a whole-cell biocatalyst.Codon optimization has been proven to be effective in maximizing production of heterologous proteins in yeast.Here,the cDNA sequence of Rhizopus oryzae lipase (ROL) was optimized and synthesized according to the codon bias of Saccharomyces cerevisiae,and based on the Saccharomyces cerevisiae cell surface display system with α-agglutinin as an anchor,recombinant yeast displaying fully codon-optimized ROL with high activity was successfully constructed.Compared with the wild-type ROL-displaying yeast,the activity of the codon-optimized ROL yeast whole-cell biocatalyst (25 U/g dried cells) was 12.8-fold higher in a hydrolysis reaction using p-nitrophenyl palmitate (pNPP) as the substrate.To our knowledge,this was the first attempt to combine the techniques of yeast surface display and codon optimization for whole-cell biocatalyst construction.Consequently,the yeast whole-cell ROL biocatalyst was constructed with high activity.The optimum pH and temperature for the yeast whole-cell ROL biocatalyst were pH 7.0 and 40 °C.Furthermore,this whole-cell biocatalyst was applied to the hydrolysis of tributyrin and the resulted conversion of butyric acid reached 96.91% after 144 h. 展开更多
关键词 rhizopus oryzae lipase (ROL) Yeast surface display Codon optimization Whole-cell biocatalyst
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共表达伴侣蛋白对重组毕赤酵母产米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶发酵过程的影响 被引量:1
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作者 卢鑫 喻晓蔚 +2 位作者 沙冲 范文来 徐岩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期407-413,共7页
【目的】通过共表达伴侣蛋白Ero1p和PDI获得米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达。【方法】利用毕赤酵母基因重组菌高密度发酵的方法,在7 L发酵罐水平上分析共表达伴侣蛋白菌株(BH128)与非共表达伴侣蛋白菌株(H238)对... 【目的】通过共表达伴侣蛋白Ero1p和PDI获得米根霉(Rhizopus oryzae)脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达。【方法】利用毕赤酵母基因重组菌高密度发酵的方法,在7 L发酵罐水平上分析共表达伴侣蛋白菌株(BH128)与非共表达伴侣蛋白菌株(H238)对脂肪酶表达的差异。【结果】在相同条件下,BH128发酵产酶能力高于H238,最高酶活可达到2 338.7 U/mL,最大比生长速率达到0.02 h 1,最大产物比形成速率达到944.5 U/(gDCW.h),最大底物比消耗速率也能达到0.15 gmethanol/(gDCW.h),分别是H238的1.7、0.5、4.1和1.3倍,且发酵周期缩短了20 h。【结论】毕赤酵母基因重组菌BH128通过共表达伴侣蛋白Ero1p和PDI,提高了米根霉脂肪酶的产量,而且缩短了发酵周期,为工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 米根霉脂肪酶 高效表达 毕赤酵母 高密度发酵 共表达伴侣蛋白
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米根霉全细胞脂肪酶在化学-酶法环氧化反应体系中的稳定性
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作者 许丽莉 赵晴晴 +2 位作者 李青云 唐爱星 刘幽燕 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第3期449-458,共10页
为了提高米根霉(Rhizopus oryzae CGMCC 3.5040)全细胞脂肪酶在化学-酶法环氧化反应体系中的稳定性,以α-蒎烯为模式底物,考察柠檬酸三钠用量、戊二醛交联细胞、过氧化氢(H_(2)O_(2))用量和回用方式对催化剂稳定性的影响。结果表明:过... 为了提高米根霉(Rhizopus oryzae CGMCC 3.5040)全细胞脂肪酶在化学-酶法环氧化反应体系中的稳定性,以α-蒎烯为模式底物,考察柠檬酸三钠用量、戊二醛交联细胞、过氧化氢(H_(2)O_(2))用量和回用方式对催化剂稳定性的影响。结果表明:过氧有机酸会影响酶稳定性,添加3.5 mmol柠檬酸三钠会与质量分数为30%H_(2)O_(2)水溶液形成高渗液,防止细胞涨破,同时能中和过量过氧酸,提高反应选择性与细胞的回用稳定性;经过戊二醛交联后,全细胞催化剂的热稳定性、储存稳定性和回用稳定性都显著提高;蒎烯环氧化的最适H_(2)O_(2)用量为5 mmol;可采用直接分离有机相,再加入新鲜有机相的方式进行回用。优化回用方式后,该全细胞催化剂第7次使用时,催化反应仍然有77.3%的转化率。 展开更多
关键词 米根霉 全细胞脂肪酶 化学-酶法环氧化 过氧有机酸 稳定性
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根霉脂肪酶催化水解(R,S)-环氧丙醇丁酸酯的反应特性 被引量:1
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作者 贾师英 许建和 +2 位作者 陈怡昭 李青山 俞俊棠 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期276-279,共4页
对根霉(Rhizopussp.Bc0-09)脂肪酶的粗酶拆分(R,S)-环氧丙醇丁酸酯的水解反应进行了初步研究,结果表明:30°C下pH5.3时反应初速度最大;pH5.5~6.0时酶的立体选择性最高,对映体比率(... 对根霉(Rhizopussp.Bc0-09)脂肪酶的粗酶拆分(R,S)-环氧丙醇丁酸酯的水解反应进行了初步研究,结果表明:30°C下pH5.3时反应初速度最大;pH5.5~6.0时酶的立体选择性最高,对映体比率(E值)为57。42°C下pH5.5时反应初速度最大;酶的立体选择性随温度升高而下降。酶促水解反应中未观察到产物和底物抑制现象。根霉发酵液中脂肪酶的反应特性与硫酸铵沉淀法所得粗酶相吻合。 展开更多
关键词 环氧丙醇丁酸酯 脂肪酶 根霉 催化 水解
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制备生物柴油用脂肪酶产生菌的诱变和筛选 被引量:6
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作者 李迅 李治林 +2 位作者 杨杨 王飞 蒋剑春 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 2007年第6期85-89,共5页
以提高全细胞生物催化制备生物柴油的效率为目的,采用紫外诱变的方法对产脂肪酶的米根霉菌株进行诱变和筛选。筛选得到的诱变株命名为LY6,脂肪酶水解酶活(4.33 U/mL)是原始菌株的4.33倍,合成酶活(0.28 U/mL)是原始菌株的1.12倍,脂肪酶... 以提高全细胞生物催化制备生物柴油的效率为目的,采用紫外诱变的方法对产脂肪酶的米根霉菌株进行诱变和筛选。筛选得到的诱变株命名为LY6,脂肪酶水解酶活(4.33 U/mL)是原始菌株的4.33倍,合成酶活(0.28 U/mL)是原始菌株的1.12倍,脂肪酶水解酶最适反应pH值为7.0。将筛选得到的菌株制备成固定化全细胞生物催化剂催化大豆油转酯化制备生物柴油,在醇油比为3∶1(物质的量之比,下同)时,脂肪酸甲酯得率比原始菌株提高了41.0%,达到87.3%;在醇油比为4∶1时,最终生物柴油的甲酯得率比原始菌株提高了16.8%,达到96.1%,故经筛选得到的菌株能作为全细胞生物催化制备生物柴油的优良菌株。 展开更多
关键词 米根霉 紫外诱变 脂肪酶 生物柴油
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米根霉产脂肪酶的条件及酶学性质 被引量:6
7
作者 李治林 李迅 +2 位作者 王丽丽 王飞 蒋剑春 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期103-107,共5页
对用于全细胞生物催化剂的米根霉菌株产酶条件的优化及脂肪酶的酶学性质进行了研究。结果表明,在250mL三角瓶液体培养中,米根霉适宜的产酶条件为:氮源为2%胰蛋白胨与0.1%NaNO3复合,碳源为0.3%的大豆油,培养基初始pH=5.5,培... 对用于全细胞生物催化剂的米根霉菌株产酶条件的优化及脂肪酶的酶学性质进行了研究。结果表明,在250mL三角瓶液体培养中,米根霉适宜的产酶条件为:氮源为2%胰蛋白胨与0.1%NaNO3复合,碳源为0.3%的大豆油,培养基初始pH=5.5,培养温度28℃,培养时间约58h。酶学性质研究表明,所产脂肪酶的最适pH:7.5,最适温度为35℃,该酶在pH为7~9、温度低于40℃的范围内表现稳定,Mg2+对酶活力有一定促进作用。 展开更多
关键词 脂肪酶 米根霉 产酶条件 酶学性质
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rProROL脂肪酶催化大豆油水解反应的半经验动力学模型 被引量:2
8
作者 覃小丽 李道明 +1 位作者 王永华 钟金锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期67-72,共6页
以大豆油水解反应为模型,考察了缓冲液p H(5.0~7.0)及其添加量(5%~30%)、酶添加量(10~50U/g)和反应温度(30~50℃)对r ProROL脂肪酶(recombinant Rhizopus oryzae lipase with prosequence,r ProROL)催化大豆油水解的影响,并基于反应条... 以大豆油水解反应为模型,考察了缓冲液p H(5.0~7.0)及其添加量(5%~30%)、酶添加量(10~50U/g)和反应温度(30~50℃)对r ProROL脂肪酶(recombinant Rhizopus oryzae lipase with prosequence,r ProROL)催化大豆油水解的影响,并基于反应条件假设该酶促反应遵循一级反应,建立了酶催化大豆油甘油三酯(triglyceride,TAG)水解反应的半经验动力学模型(Hr=Hr_i×(1-e^(-kt))+Hre),并通过规划求解得到了不同反应条件下的方程系数。结果显示,通过对比TAG水解率的实验实测值与由动力学方程计算的预测值,两者的相关系数高达0.999 1,验证了该反应符合一级反应;不同反应条件对方程系数(k、Hri、Hre)的影响程度各不同,反映了该酶催化大豆油水解过程中反应速率常数(k)及TAG水解程度的变化规律,为该酶催化大豆油水解过程优化控制提供了直接的数据支持。 展开更多
关键词 rProROL脂肪酶 水解反应 反应速率常数 动力学模型
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葡聚糖修饰米根霉脂肪酶条件优化及其稳定性研究 被引量:1
9
作者 迟涛 张国芳 +5 位作者 徐学博 李春 武玉婷 刘丽波 王辰旭 刘宁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第13期107-113,共7页
采用经高碘酸钠活化的葡聚糖修饰米根霉脂肪酶,以获得具有较高酸解催化活性的脂肪酶。研究反应时间、反应p H值、还原剂浓度及葡聚糖质量分数对化学修饰效果的影响,并利用Box-Behnken设计法及响应面优化法对米根霉脂肪酶的化学修饰条件... 采用经高碘酸钠活化的葡聚糖修饰米根霉脂肪酶,以获得具有较高酸解催化活性的脂肪酶。研究反应时间、反应p H值、还原剂浓度及葡聚糖质量分数对化学修饰效果的影响,并利用Box-Behnken设计法及响应面优化法对米根霉脂肪酶的化学修饰条件进行优化,当反应p H值为7.63、反应时间为15.53 h、还原剂浓度为0.20 mol/L、葡聚糖质量分数为0.3%时,脂肪酶酸解率可达到最高值37.28%。在40℃最适温度条件下,修饰酶的活性是原酶的2.2倍,且经化学修饰后脂肪酶的稳定性有显著提高。 展开更多
关键词 米根霉脂肪酶 化学修饰 葡聚糖 响应面法 酸解活性
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重组米根霉脂肪酶的酶学性质及其催化水解鳀鱼油富集DHA的研究 被引量:6
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作者 朱东奇 李道明 +2 位作者 王卫飞 杨博 王永华 《粮油食品科技》 2016年第6期21-25,共5页
米根霉脂肪酶(Rhizopus oryzae lipase)是一种具有广泛用途的工业化脂肪酶,对重组米根霉脂肪酶(r ProROL)的酶学性质进行考察,发现其水解甘油三酯时具有明显的sn-1,3位置专一性;催化二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)酯化时其活... 米根霉脂肪酶(Rhizopus oryzae lipase)是一种具有广泛用途的工业化脂肪酶,对重组米根霉脂肪酶(r ProROL)的酶学性质进行考察,发现其水解甘油三酯时具有明显的sn-1,3位置专一性;催化二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)酯化时其活力分别为催化油酸酯化活力的37.42%和8%。鳀鱼油是天然EPA/DHA主要来源之一,在鳀鱼油中DHA含量为12.1%。13C核磁共振波谱分析表明,鳀鱼油中DHA主要分布在甘油酯的sn-2位,利用重组米根霉脂肪酶(r ProROL)催化鳀鱼油部分水解富集其中的DHA时,得到的1,2-甘油二酯中DHA的含量可以达到19.7%,甘油单酯中DHA的含量可以达到25.2%,DHA的回收率为65.6%。表明r ProROL脂肪酶具有水解鳀鱼油富集DHA的应用潜能。 展开更多
关键词 重组米根霉脂肪酶 水解 鳀鱼油 DHA
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一种预测rProROL酶促大豆油水解过程水解率的新模型
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作者 覃小丽 李道明 +1 位作者 王永华 钟金锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期61-65,共5页
基于重组脂肪酶(recombinant Rhizopus oryzae lipase with prosequence,rProROL)催化大豆油(甘油三酯,triglyceride,以TAG表示)水解反应过程中反应因素(反应温度、缓冲液p H、缓冲液添加量、反应时间和酶添加量)对TAG水解率的影响,分... 基于重组脂肪酶(recombinant Rhizopus oryzae lipase with prosequence,rProROL)催化大豆油(甘油三酯,triglyceride,以TAG表示)水解反应过程中反应因素(反应温度、缓冲液p H、缓冲液添加量、反应时间和酶添加量)对TAG水解率的影响,分析了缓冲液p H、缓冲液添加量、反应时间和酶添加量与TAG水解率变化均呈良好的数学关系,据此提出可预测TAG水解率经验模型的表达式。通过对比TAG水解率的实验值与由该数学模型计算的预测值,两者的相关系数为0.914 6,说明了该模型能较好地反映rProROL酶促大豆油水解过程TAG水解率的变化规律。这将为rProROL酶促大豆油水解制备脂肪酸的过程优化控制提供参考。 展开更多
关键词 rProROL脂肪酶(rProROL) 水解反应 预测模型 水解率
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米根霉脂肪酶的制备及其在餐厨废弃油脂转化中的应用 被引量:2
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作者 姜苏峻 林蒋海 +3 位作者 吕晓静 肖文娟 龚映雪 刘泽寰 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期111-116,共6页
利用脂肪酶把餐厨废弃油脂转化成为生物柴油能够达到绿色化、资源化处理餐厨垃圾的目的。从米根霉CICC3005 c DNA文库扩增得到脂肪酶基因(proROL),并克隆到毕赤酵母组成型表达载体p GAPZαA中,电转入毕赤酵母X-33中构建重组毕赤酵母,SDS... 利用脂肪酶把餐厨废弃油脂转化成为生物柴油能够达到绿色化、资源化处理餐厨垃圾的目的。从米根霉CICC3005 c DNA文库扩增得到脂肪酶基因(proROL),并克隆到毕赤酵母组成型表达载体p GAPZαA中,电转入毕赤酵母X-33中构建重组毕赤酵母,SDS-PAGE电泳发酵液上清,结果显示重组酶的相对分子质量约为35 000。以橄榄油为底物测得脂肪酶活性为(426.6±0.8)U/m L。利用重组的米根霉脂肪酶对餐厨废弃油脂进行转酯化反应,以乙醇为酰基受体制备脂肪酸乙酯,在水含量为5%,醇油摩尔比为4∶1,酶添加量为10%的条件下得到脂肪酸乙酯的最高得率为49%。 展开更多
关键词 餐厨废弃物 生物柴油 米根霉 脂肪酶 毕赤酵母
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米根霉脂肪酶在毕赤酵母中表达条件的优化及其高密度发酵 被引量:1
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作者 何晓云 李迅 +2 位作者 时号 李治林 王飞 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期117-122,共6页
从pH、甲醇浓度、诱导时间、诱导温度和培养基氮源等方面对表达重组脂肪酶的毕赤酵母的摇瓶诱导培养条件进行了优化,研究了毕赤酵母在10 L发酵罐中表达脂肪酶的高密度发酵。结果表明:摇瓶诱导培养时,pH适宜范围为5.5~6.0,甲醇适宜质量... 从pH、甲醇浓度、诱导时间、诱导温度和培养基氮源等方面对表达重组脂肪酶的毕赤酵母的摇瓶诱导培养条件进行了优化,研究了毕赤酵母在10 L发酵罐中表达脂肪酶的高密度发酵。结果表明:摇瓶诱导培养时,pH适宜范围为5.5~6.0,甲醇适宜质量分数为1%,诱导最佳时间为96 h,诱导适宜温度为28~30℃,可以用2%玉米浆粉替代传统的酵母浸提物和蛋白胨作为氮源。在10 L发酵罐高密度发酵中,以恒溶氧反馈调控补加甘油和梯度补加甲醇诱导的分批补料方式,每升发酵液中菌体干质量达到120.1 g,总蛋白质量达到2.5 g。经甲醇诱导54 h后,最高酶活达564μmol/(min.mL),约为摇瓶培养最高酶活的2倍。 展开更多
关键词 米根霉脂肪酶 毕赤酵母 优化条件 高密度发酵
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产胞内脂肪酶米根霉TZ-F2菌体形态控制的研究 被引量:1
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作者 邱婵娟 黄建丽 +2 位作者 陈扬法 裴银波 付永前 《安徽农业科学》 CAS 2012年第23期11802-11804,共3页
[目的]研究产胞内脂肪酶米根霉TZ-F2菌体形态的控制。[方法]分别考察了碳源、氮源、初始pH以及培养转速对胞内脂肪酶、菌体干重以及菌体形态的影响。[结果]得到了最优的培养条件:地沟油40 g/L,胰蛋白胨20 g/L,初始pH 4.5,转速150 r/min... [目的]研究产胞内脂肪酶米根霉TZ-F2菌体形态的控制。[方法]分别考察了碳源、氮源、初始pH以及培养转速对胞内脂肪酶、菌体干重以及菌体形态的影响。[结果]得到了最优的培养条件:地沟油40 g/L,胰蛋白胨20 g/L,初始pH 4.5,转速150 r/min。在此条件下,菌体形态基本能保持在球状,单位胞内脂肪酶活达109.45 U/g,干重达31.67 g/L。[结论]该研究为利用米根霉全细胞催化合成生物柴油提供了理论基础。 展开更多
关键词 米根霉 生物柴油 菌体形态 脂肪酶
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少根根霉及其产物的研究进展
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作者 朱洪霞 刘欢 +4 位作者 张亚鹏 刘鑫 范天一 王芳 邓利 《生物加工过程》 CAS 2021年第5期498-504,共7页
少根根霉(Rhizopus arrhizus)是一种在自然界中较为常见、无横隔的丝状真菌,也是发酵生产中的一种常用微生物。少根根霉具有较强的产有机酸和产酶能力,在不同的工艺条件下,其主要发酵产物不同。少根根霉除产物可广泛应用于食品、药品及... 少根根霉(Rhizopus arrhizus)是一种在自然界中较为常见、无横隔的丝状真菌,也是发酵生产中的一种常用微生物。少根根霉具有较强的产有机酸和产酶能力,在不同的工艺条件下,其主要发酵产物不同。少根根霉除产物可广泛应用于食品、药品及化工等多个领域外,其菌丝体还可作为介质用于吸附废水中的有害离子,以及作为酶的固定化载体等。本文介绍了在不同的发酵工艺条件下少根根霉发酵生产富马酸以及脂肪酶的研究进展,简要介绍了少根根霉产淀粉酶、纤溶酶以及乙醇的相关研究内容,并对少根根霉发酵过程中的相关问题提出了意见和建议,最后简述了少根根霉菌丝体在环境保护方面的应用价值并对少根根霉发酵生产的进一步研究进行了展望。 展开更多
关键词 少根根霉 富马酸 脂肪酶 米根霉 菌丝体
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茶渣纤维素水凝胶固定化酶的研究
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作者 晋豆 罗艺献 +2 位作者 顾苏宜 黄建忠 祁峰 《纤维素科学与技术》 CAS 2022年第3期11-20,共10页
采用不同目数的茶渣制备茶渣纤维素微纤丝水凝胶(TW-CNFs/hydrogels),将其作为微载体固定米根霉脂肪酶(ROL)和米曲霉α-淀粉酶(AOA)。通过扫描电镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FT-IR)、对脂肪酶和淀粉酶及载体进行形态学分析等表征,结果表明... 采用不同目数的茶渣制备茶渣纤维素微纤丝水凝胶(TW-CNFs/hydrogels),将其作为微载体固定米根霉脂肪酶(ROL)和米曲霉α-淀粉酶(AOA)。通过扫描电镜(SEM)、傅里叶红外光谱(FT-IR)、对脂肪酶和淀粉酶及载体进行形态学分析等表征,结果表明:茶渣纤维素微纤丝表面存在大量蜂窝状的空隙,当茶渣纤维素微纤丝水凝胶被制成后,在空间分布上还带有明显的不规则和聚集堆叠的特性,酶分散和固定在各个空隙和堆叠的空间内;载体中茶渣的浓度越高,制备的茶渣纤维素微纤丝水凝胶固定化酶的酶活性越高;当pH为10时,已固定脂肪酶活性达到最高值,而游离脂肪酶的酶活降低85%左右;当pH为10时,固定淀粉酶的酶活比游离淀粉酶的高50%以上。相比游离酶,茶渣纤维素微纤丝水凝胶上固定的酶最适pH都向碱性偏移,说明固定化酶更具有耐碱性,pH稳定性和极端环境耐受性有显著性提高。 展开更多
关键词 固定化酶 茶渣纤维素微纤丝 水凝胶 米根霉脂肪酶 米曲霉α-淀粉酶
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米根霉脂肪酶的改造及其在废弃油脂转化中的应用
17
作者 罗思曼 胡博洋 +3 位作者 胡国帅 赵丽君 柳庆月 杨江科 《生物化工》 2022年第3期9-12,35,共5页
利用液态脂肪酶将废弃油脂转换为清洁能源生物柴油,对环境保护以及工业生产具有实际意义与价值。通过分子改造米根霉脂肪酶(ROL),将61位上的丝氨酸突变成苏氨酸(S61T),将150位点上的谷氨酸胺突变为亮氨酸(G150L),提高其在毕赤酵母X-33... 利用液态脂肪酶将废弃油脂转换为清洁能源生物柴油,对环境保护以及工业生产具有实际意义与价值。通过分子改造米根霉脂肪酶(ROL),将61位上的丝氨酸突变成苏氨酸(S61T),将150位点上的谷氨酸胺突变为亮氨酸(G150L),提高其在毕赤酵母X-33中的表达,并利用高效的液态脂肪酶将废弃油脂转化为生物柴油。改造后的米根霉表达菌株在摇瓶条件下发酵酶活最高达到1430 U/mL,酶活提高了5.1倍。 展开更多
关键词 米根霉 脂肪酶 分子改造 生物柴油
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米根霉脂肪酶基因pro-ROL和m-ROL在毕赤酵母中的密码子优化、表达和酶学性质的比较分析(英文) 被引量:7
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作者 杨江科 严翔翔 +1 位作者 黄日波 张搏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1780-1788,共9页
米根霉Rhizopus oryzae脂肪酶不仅在众多工业领域中具有良好的应用价值,其典型的分子内伴侣结构(Intramolecular chaperon)也是研究蛋白质翻译后加工和成熟的理想材料。以R.oryzae HU3005为材料,克隆了其脂肪酶前体基因(pro-ROL)和成熟... 米根霉Rhizopus oryzae脂肪酶不仅在众多工业领域中具有良好的应用价值,其典型的分子内伴侣结构(Intramolecular chaperon)也是研究蛋白质翻译后加工和成熟的理想材料。以R.oryzae HU3005为材料,克隆了其脂肪酶前体基因(pro-ROL)和成熟脂肪酶基因(m-ROL),并实现了其在巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的分泌表达。酶学性质比较分析表明:m-ROL对中等链长底物(C10和C12)具有更高的水解活性,而pro-ROL更倾向于短链底物(C4),且在pH 8.0时活性最高。再者,pro-ROL具有比m-ROL更好的温度稳定性。推测m-ROL和pro-ROL脂肪酶酶学性质的差异可能是由前序列对脂肪酶的折叠和修饰的影响而导致。为提高m-ROL的表达水平,采用重叠延伸PCR技术将基因中8个低频密码子替换为高频密码子。在摇瓶条件下,发酵72 h后,经密码子优化后的m-ROL酶活和蛋白质含量分别达到132.7 U/mL和50.4 U/mL,而初始m-ROL和pro-ROL酶活和蛋白质含量分别仅为28.7 U/mL和14.4 mg/L、29.6 U/mL和14.1 mg/L。 展开更多
关键词 米根霉脂肪酶 m—ROL pro—ROL 重叠延伸PCR 毕赤酵母
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复合脂肪酶协同催化制备生物柴油的研究 被引量:2
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作者 李迅 邓若冰 +2 位作者 段成元 王亮亮 王飞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期471-478,共8页
【目的】探讨复合酶协同催化体系在含水量较高的体系中催化油脂制备生物柴油的工艺条件。【方法】通过基因工程手段在毕赤酵母中分别高效分泌表达南极假丝酵母脂肪酶(CALB)和米根霉脂肪酶(ROL),构建CALB和ROL复合酶协同催化体系制备生... 【目的】探讨复合酶协同催化体系在含水量较高的体系中催化油脂制备生物柴油的工艺条件。【方法】通过基因工程手段在毕赤酵母中分别高效分泌表达南极假丝酵母脂肪酶(CALB)和米根霉脂肪酶(ROL),构建CALB和ROL复合酶协同催化体系制备生物柴油,利用单因素实验优化工艺条件,以甲酯化得率作为复合酶协同催化体系效能的评价标准。【结果】优化工艺条件为:CALB?ROL最佳复合酶配比为7?3,每克大豆油中加入16 U的复合脂肪酶,甲醇与大豆油摩尔比为4?1,并按0 h时2?1醇油摩尔比,12 h和24 h时以1?1醇油摩尔比分批加入甲醇,含水量为30%-60%之间,40°C反应29-34 h,甲酯得率达到93%。【结论】该复合酶协同催化体系对环境友好,与常规酶法制备生物柴油工艺相比对酶的使用量和催化时间减少幅度都在50%以上,本复合酶协同催化体系能有效降低生物柴油制备成本,具有较好的工业化应用前景。 展开更多
关键词 生物柴油 协同催化 南极假丝酵母 米根霉 脂肪酶
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