Rho GDP解离抑制蛋白β在布鲁杆菌感染中的作用

目的 探讨Rho GDP解离抑制蛋白（Rho GDI）β在布鲁杆菌感染中的作用。方法 构建pEGFP-Rho GDIβ真核表达质粒，转染到THP-1细胞中（实验组），筛选稳定表达pEGFP—Rho GDIβ的THP-1细胞，加强THP-1细胞中Rho GDIβ的表达后，计算被感染的细胞所占的比例和每个细胞所吞噬的布鲁杆菌数，并和对照组、pEGFP对照组比较，观察转染pEGFP—Rho GDIβ后THP-1细胞吞噬布鲁杆菌的能力。结果 在最初3．5h，随着侵袭时间的延长，吞噬了细菌的细胞所占比例逐渐增多，至4h时，95％以上的细胞都吞噬了细菌，3组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。在侵袭初期2—5h，加强了Rho GDIβ表达的THP-1细胞中含有的细菌个数略低于正常THP-1细胞内的布鲁杆菌，但差异无统计学意义（P〉0．05），这种趋势一直持续到感染后36h；在48h时，稳定表达pEGFP—Rho GDIβ质粒的THP-1细胞内的布鲁杆菌数（5．5±0．5）明显低于pEGFP对照组（7．5±1．5，P〈0．05）和对照组（8．0±1．5，P〈0．05）。结论 在感染早期，Rho GDIβ起着非常重要的作用，但布鲁杆菌的内化是-个复杂的过程，除Rho GDIβ参与此过程外，其他调节因素的作用不容忽视。

人肺腺癌细胞系中小G蛋白Rho-GDP解离抑制因子α的克隆及序列分析

目的 :研究人肺腺癌细胞系中小G蛋白Rho解离抑制因子α基因结构的改变。方法 :应用RT PCR扩增Rho解离抑制因子αcDNA ,并进行测序。结果 :在人肺腺癌细胞系AGZY 83α 中 ,除Rho解离抑制因子基因α存在外 ,还存在缺失型的Rho解离抑制因子αcDNA ,即在第 5个外显子有 78bp的缺失。结论 :在人肺腺癌细胞系AGZY 83α

两种水稻GDP解离抑制蛋白基因的分离及特征分析

以Rho家族成员OsRacD为诱饵 ,采用酵母双杂交体系 ,分离到两种与OsRacD互作的水稻RhoGDP解离抑制蛋白的基因 ,分别命名为OsRhoGDI1和OsRhoGDI2 .酵母体内结合和GSTpulldown分析结果显示 ,OsRhoGDI1和OsRhoGDI2与野生型和组成型激活的OsRacD都能结合 ,且不依赖GDI的N端部分序列 ;GDI和Rho的结合具有一定的特异性 .两种GDI在水稻根、地上组织和幼穗等多种组织和器官都有表达 ,但在表达特征上存在明显差异 .研究证实 ,在水稻中存在着调控RhoGTPases的GDP解离抑制蛋白基因家族 。

Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的探讨Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对正常足月妊娠妇女(对照组)30例、晚发型重度子痫前期30例及早发型重度子痫前期30例的Rho-GDI mRNA及蛋白进行测定。结果 Rho-GDI主要表达于蜕膜细胞的胞浆、胞核和少许间质。荧光实时定量PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证结果显示Rho-GDI mRNA及蛋白在正常妊娠组蜕膜组织中表达最高;早发型子痫前期组中次之;晚发型子痫前期中最低。正常组与早发组和晚发组比较,差异均有显著性(P<0.05),但早发组与晚发组间比较的差异无显著性(P>0.05)。结论 Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中表达下调,Rho-GDI可能通过调控滋养细胞浸润和血管平滑肌舒缩状态等环节参与了子痫前期的发生发展。

紫花苜蓿GDP解离抑制蛋白基因cDNA的克隆、分析及烟草转化

采用RT-PCR方法,克隆得到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)GDP解离抑制蛋白基因cDNA核心区域序列,命名为MsGDI1。序列分析结果表明,该cDNA核心区域全长1575 bp,包含一个1332 bp的最大开放阅读框,编码444个氨基酸。半定量RT-PCR分析结果表明,在盐胁迫和铝胁迫条件下,MsGDI1基因的表达随着胁迫时间的增加而上升,该基因可能与紫花苜蓿抗盐耐铝机理有关。借助于新构建的该基因超表达载体,用农杆菌介导方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。转基因烟草植株PCR检测的结果表明,MsGDI1基因已经成功插入到烟草基因组中,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

RhoGDI2基因抑制膀胱癌转移涉及基因和信号通路的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法探讨Rho GTP酶GDP解离抑制因子2(rho GDP dissociation inhibitor 2,Rho GDI2)基因抑制膀胱癌转移涉及的基因和信号通路。方法从GEO datasets数据库搜索膀胱癌转移相关的全基因组表达谱芯片数据,使用GEO2R在线工具分析膀胱癌组织中Rho GDI2基因高表达组与低表达组之间的差异表达基因,再筛选出多组表达谱芯片数据中一致性上调或下调的基因,最后使用DAVID在线工具进行差异表达基因信号通路富集。结果得到Rho GDI2基因在膀胱癌组织中高表达组和低表达组一致性高的差异表达基因,其中A2M、CORO1A、ENC1、FGD3为上调基因中一致性高的差异表达基因。通过基因信号通路富集分析得到膀胱癌组织中Rho GDI2基因调控的主要信号通路为Vav-Rho A-ROCK-MLC和Ras-Raf-MEK。结论 Rho GDI2基因可能通过Vav-Rho A-ROCK-MLC和Ras-Raf-MEK信号通路调节肌丝蛋白、细胞骨架以及细胞的增殖、分化等,进而抑制膀胱癌转移。

RhoGDI蛋白在肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨RhoGDI(Rhoguanine nucleotide dissociation inhibitor)蛋白在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用Western blotting检测苏州大学两所附属医院于2007-2008年收治的39例肺癌及5例肺炎性假瘤患者组织标本中RhoGDI蛋白的表达,并分析RhoGDI蛋白表达与患者临床病理指标的相互关系。结果:小细胞肺癌组织中RhoGDI蛋白的表达水平显著高于非小细胞肺癌和炎性假瘤[(0.903±0.228)vs(0.522±0.152),(0.485±0.095);均P<0.05)]。非小细胞肺癌组织中,低分化癌RhoGDI蛋白的表达水平显著高于中、高分化癌和炎性假瘤[(0.649±0.123)vs(0.458±0.138),(0.485±0.095);均P<0.05]。RhoGDI的表达在鳞癌与腺癌中没有显著差别。非小细胞肺癌Ⅰ～Ⅲ期的RhoGDI蛋白表达水平有逐渐增高趋势,但无显著性差别(F=0.6,P>0.05)。RhoGDI蛋白的表达与原发肿瘤大小(t=1.15,P>0.05)和淋巴结转移无明显相关(t=1.648,P>0.05)。非小细胞肺癌组织RhoGDI的表达水平与血清乳酸脱氢酶水平呈正相关(r=0.46,P<0.01)。结论:肺癌组织中RhoGDI蛋白表达的明显升高与肺癌的病理类型和分化程度有关。

Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体。方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物。质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带。再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序。最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度。结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致。病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108vp/mL。结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体。

Rho GDI与肿瘤

RhoGDP解离抑制剂(RhoGDPdissociationinhibitor,RhoGDIs)是Rho鸟苷三磷酸酶(RhoGTPases)活化的中心调节因子。Rho GDI家族主要有Rho GDIα,Rho GDIβ和Rho GDIγ。Rho GDI通过与P21激酶1,原肌球蛋白相关激酶B受体T1,神经介素U,肉瘤病毒原癌基因,细胞分裂周期蛋白42,X连锁凋亡蛋白,磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白等多种蛋白及Rho GTPases的相互作用,在多种肿瘤的发生、发展与转移过程中起着重要作用。

RhoGDI2调控TGF-β1对气道上皮-间质转化的研究

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho guanosine diphosphate dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)在气道上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)中的作用,以及可能的作用机制,有助于揭示气道重塑的分子生物学机制并提供新的治疗靶点。方法:构建RhoGDI2过表达气道上皮细胞(16HBE)模型。Western Blot检测RhoGDI2蛋白的表达。构建成功后,Western Blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达;同时收集细胞培养上清液,双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中TGF-β1的表达水平。在RhoGDI2过表达16HBE细胞模型中加入TGF-β1抑制剂,进一步明确TGF-β1在RhoGDI2调控EMT过程中的作用。结果:(1)Western Blot检测16HBE过表达组RhoGDI2表达水平较对照组明显升高(P<0.01)。(2)过表达组16HBE中N-cadherin、Snail表达较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01),而E-cadherin表达明显下降(P<0.01);RhoGDI2过表达组细胞中、上清液中TGF-β1的表达水平亦较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01)。(3)过表达组中加入TGF-β1抑制剂后,TGF-β1、N-cadherin、Snail表示水平下降,E-cadherin表达水平升高(P<0.05)。结论:RhoGDI2可通过调控TGF-β1的表达促进人气道EMT过程。

RhoGDIs在调节RhoGTP酶中的作用

Rho特异鸟苷酸解离抑制因子（Rho- specific guanine nucleotide dissociation inhibitors, RhoGDIs）可以和RhoGTP酶结合形成复合物，来调节RhoGTP酶的活化状态，从而影响细胞的黏附、迁移、增殖等过程。RhoGDIs并不是简单的抑制RhoGTP酶，而是动态地调节RhoGTP酶的稳定、活化和循环。在本综述里，笔者将主要介绍RhoGDIs调节RhoGTP酶的活性、质膜穿梭以及竞争性作用的最新研究进展。

沉默Rho GDIα抑制矽肺上皮间质转化及其作用机制

目的探讨沉默Rho GDP解离抑制因子α(Rho GDP dissociation inhibitorα,Rho GDIα)对矽肺上皮间质转化的作用及机制。方法转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,分为空载体慢病毒组(LEV)、沉默Rho GDIα慢病毒感染组(Lv-Rho GDIα-inhibition)、TGF-β1诱导LEV组(LEV+TGF-β1)、TGF-β1诱导Lv-Rho GDIα-inhibition组(Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1)。采用Western blot法、免疫细胞化学染色检测Rho GDIα、RhoA、Rho激酶(Rho kinase,ROCK)、E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和I型胶原(collagen-I)蛋白表达,采用Western blot法及CCK-8检测细胞增殖能力。结果Western blot法及免疫细胞化学染色结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降;LEV+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达上升,E-cad蛋白表达下调,α-SMA和collagen-I蛋白表达上升。与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降。CCK-8及cyclin D1蛋白检测结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组细胞增殖受到抑制,LEV+TGF-β1组细胞增殖增强,与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组细胞增殖受到抑制。结论沉默Rho GDIα可通过调控RhoA/ROCK信号通路抑制上皮间质转化发挥抗矽肺纤维化作用。

GDP解离抑制因子2对猪胚胎发育的影响

[目的]观察GDP解离抑制因子2(GDI2)对猪胚胎发育过程的影响.[方法]采用改良的退火对照引物(ACPs)差异表达技术检测人工授精及核移植猪胚胎中的差异表达基因,利用实时定量PCR法确认基因的表达情况.[结果]通过改良的ACP技术获得了若干个差异表达基因,采用实时定量PCR技术进行了进一步确认,结果显示GDI2基因在核移植猪胚胎中的表达水平明显低于人工授精猪胚胎(P<0.01).[结论]GDI2可能参与猪胚胎的发育过程.

RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究

目的:阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1(Rho GDI1)和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法:采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞Rho GDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L^(-1) TNF-α处理组和Rho GDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测Rho GDI1、Rho A、ROCK表达及活化。结果:TNF-α处理和Rho GDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后Rho GDI1表达显著下降,TNF-α处理和Rho GDI1干扰均可显著提高Rho A表达以及ROCK活化。结论:TNF-α可能通过抑制Rho GDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。

水稻Rho GDP解离抑制因子OsRhoGDI1基因的特征分析

水稻Rho GDP解离抑制因子1(Rho GDP dissociation inhibitor 1,RhoGDI1)是本课题组前期通过酵母双杂交筛选从幼穗中分离的一个与小G蛋白Rho/Rop家族成员OsRac5相互作用蛋白的编码基因,对该基因特征及其功能的研究报道较少。本研究在对OsRhoGDI1开展生物信息学分析的基础上,利用表达谱芯片挖掘和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-qPCR)对OsRhoGDI1基因的表达模式进行分析,发现该基因在水稻多种组织中广泛表达,尤其在幼穗发育过程中高表达,且该基因的表达受脱落酸(abscisic acid,ABA)、油菜素内酯(brassinolide,BL)、水杨酸(salicylic acid,SA)、吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)、赤霉素(gibberellin,GA)及盐胁迫的调控。亚细胞定位鉴定显示,OsRhoGDI1分布在细胞膜、细胞质以及细胞核中。双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术检测发现OsRhoGDI1与OsRac5在细胞膜、细胞质和细胞核均能发生互作,OsRhoGDI1还可与OsRacl在细胞膜上相互作用。本研究表明,OsRhoGDI1与水稻穗发育等过程密切相关,并且OsRhoGDI1可能通过与不同Rho/Rop蛋白结合并调节其活性,参与调控水稻生长发育、激素应答以及非生物胁迫等多种生物学过程。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的研究RhoGDP解离抑制因子（Rho GDP dissociation inhibitor 2，RhoGDI2）mRNA及Bcl-2mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）中的作用和机制。方法30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD6h和48h组，每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况，并用Real—timeRT—PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平。结果（1）新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显。（2）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰，细胞凋亡率为（1．40±0．12）％。HIBD48h凋亡峰更为明显，细胞凋亡率达到（15．86±0．98）％。缺氧缺血后与假手术组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平较高（4．12±0．74、2．55±0．65），在HIBD6h后二者表达开始下降（3．19±0．77、1．96±0．36），48h降低更加明显（1．04±0．18、1．06±0．17），与假手术组比较，HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2mRNA的表达均明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。（4）缺氧缺血后各时间点RhoGDI2mRNA的表达和Bcl-2mRNA的表达呈正相关（r=0．831，P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后，随着凋亡的出现，RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平降低，提示RhoGDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生。

吸烟对肺组织D4-GDI表达的影响及其与慢性阻塞性肺疾病相关性的蛋白质组学研究

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是环境因素与遗传因素共同作用的结果,而吸烟是导致COPD发生的最主要危险因素,然而,吸烟导致COPD的机制及COPD的遗传易感机制目前尚未完全阐明.蛋白质组学研究方法具有高效和信息含量丰富的特点,为COPD研究提供了有力的帮助,被认为在COPD的研究领域具有广阔的前景.运用二维凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质组学研究方法结合生物信息学技术,对不吸烟者、非COPD吸烟者和吸烟COPD患者的肺组织进行蛋白质组比较,共鉴定出24种表达差异蛋白.研究发现,非COPD吸烟者肺组织ρ-GDP解离抑制因子2(D4-GDI)表达水平为不吸烟者的1.7倍,吸烟COPD患者肺组织D4-GDI表达水平接近非COPD吸烟者的2倍.通过免疫组织化学染色和Western-blotting检测对肺组织D4-GDI表达水平进行验证,获得了与蛋白质组学研究相一致的结果.结果首次说明:吸烟能够导致肺组织D4-GDI表达水平升高,D4-GDI参与了COPD的发病机制而且可能与COPD易感性相关.

GDI2通过p75NTR通路调节结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的:探讨GDP解离抑制因子2(GDI2)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡以及细胞周期的影响及其机制。方法:TCGA数据库分析GDI2 mRNA在CRC肿瘤组织中的表达。将CRC细胞分为sh-NC组和sh-GDI2组,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GDI2基因表达,western blotting检测GDI2蛋白和神经生长因子受体(p75NTR)通路关键因子(IKK、p-NF-κB和p-IκB)的表达。构建异种移植瘤裸鼠模型,观察GDI2对CRC肿瘤生长的影响。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞相比,GDI2在CRC患者肿瘤组织和细胞系中的表达上调(P<0.05)。sh-GDI2能抑制CRC细胞增殖、迁移、侵袭,阻滞细胞周期进程,并促进凋亡(均P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-GDI2组p75NTR蛋白表达上调,IKK、p-NF-κB、p-IκB蛋白表达下调(均P<0.05)。敲低GDI2可明显抑制裸鼠体内CRC肿瘤的生长(P<0.05)。结论:敲低GDI2可能通过p75NTR信号通路抑制CRC细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

RhoGDI2在结直肠癌组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系

目的:研究鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho GDI2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系。方法:收集本院于2015年1月至2015年12月收治的80例CRC患者手术切除的原发灶组织和正常癌旁组织。采用免疫组化法检测各组织标本中Rho GDI2的表达情况,并分析其表达量与临床病理特征的相关性。结果:(1)Rho GDI2主要表达于CRC癌细胞胞浆中,在肿瘤原发灶和正常癌旁组织中的阳性表达率分别为26.25%和0.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)肿瘤原发灶中Rho GDI2的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤位置、大小、数量、组织学分级、原发灶分期、血管浸润、神经浸润间均不存在相关关系(P>0.05),而与淋巴结转移及远端转移有关(P<0.05)。结论:Rho GDI2在CRC肿瘤原发灶中呈阳性表达,且其高表达可促进CRC的侵袭转移,可作为CRC治疗的作用靶点。

结肠癌组织标本Rho解离抑制因子2的表达及其与临床病理的关系

目的探讨结肠癌Rho解离抑制因子2（RhoGDl2）基因的表达及其与临床病理的关系。方法运用组织芯片技术、免疫组织化学法检测75例结肠癌患者原发癌灶和癌旁正常结肠组织的RhoGDl2的表达及其与相应结肠癌临床病理参数之间的关系。运用Westernblot和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测18例配对结肠腺癌原发灶组织和癌旁5cm正常结肠组织的RhoGDl2的表达。结果RhoGDl2阳性率在结肠癌原发癌灶和癌旁正常组织分别为73．33％和33．33％（P〈0．05）；RhoGDl2阳性率与临床TNM分期相关（P〈0．01），与原发灶T分期范围相关（P〈0．05），与淋巴结N分期、远处转移M无明显相关（P〉0．05）。18例结肠癌RhoGDl2Westernblot灰度值高于正常组织的4．8倍（P〈0．05）。Real-timePCR结果显示癌灶组RhoGDl2相对表达量高于癌旁对照组（P〈0．05）；RhoGDl2表达阳性率与临床TNM分期明显相关（P〈0．01），与原发灶T分期明显相关（P〈0．05）。结论RhoGDl2在结肠癌中表达上调，与临床TNM分期明显相关。