Rho GTPases对肿瘤血管生成相关分子的作用

探讨RhoGTPases的 3个主要分子RhoA、Rac1和Cdc4 2对肿瘤血管生成相关分子的作用 .构建负显性RhoA、Rac1和Cdc4 2的真核表达质粒 ,在Lipofectamine2 0 0 0 介导下转染胃癌细胞AGS ,应用ELISA检测细胞培养上清中VEGF的含量 ,应用Western印迹检测肿瘤血管生成相关分子HIF 1α、P5 3和PTEN的表达水平 .成功地构建了负显性RhoA、Rac1和Cdc4 2的真核表达质粒 ,转染胃癌细胞AGS并经G4 18筛选出单克隆 .ELISA表明转染细胞培养上清中VEGF的含量可被明显抑制 ;Western印迹表明 ,负显性RhoGTPases在蛋白水平上可下调HIF 1α表达水平 ,上调P5 3的表达水平 .结果表明 ,Rho家族的 3个主要分子可能通过调节血管生成相关分子的表达来促进肿瘤血管生成 .

Rho GTPases研究进展及与肿瘤的关系

Ras相似物GTP酶（Rho GTPases）是Ras超家族的一个主要分支，在细胞的信号转导通路中起着非常重要的作用。Rho蛋白的过度表达与肿瘤的发生、发展密切相关，Rho GTPases参与细胞骨架重构、细胞运动、基因转录调控、细胞周期调控等，从而在肿瘤的增殖及凋亡中发挥作用。通过对其家族成员信号转导机制的研究，为肿瘤的治疗提供有效的靶点。

缺氧状况下Rho GTPases的表达和活性变化及其与肿瘤血管生成关系的研究

目的 探讨RhoGTPases在缺氧状态下的表达和活性变化以及与缺氧诱导的肿瘤血管生成的关系。方法 提取胃癌细胞AGS、SGC790 1和肝癌细胞HepG2 的总RNA ,采用半定量RT PCR检测缺氧状况下RhoGTPases家族分子的mRNA表达水平 ;应用Rho蛋白活性检测试验进一步检测其活性 ;Westernblot检测肿瘤血管生成相关分子HIF 1α、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、p5 3和PTEN的表达水平。结果 缺氧状况下 ,多种肿瘤细胞系中Rac1的mRNA表达水平均明显增高 ;Rac1活性迅速升高 ,约 3h达到高峰 ,且其活性与HIF 1α、VEGF呈正相关 ;而与p5 3、PTEN呈负相关。结论 Rho家族蛋白分子Rac1在缺氧诱导下被激活 。

血管新生过程中的Rho GTPase

缺血性心脑血管疾病是影响我国居民健康的头号杀手,血管新生参与组织缺血缺氧损伤后的修复过程,为缺血性心脑血管疾病的治疗提供有效方法。Rho GTPase家族在调节内皮细胞骨架形态、迁移和成管中起着核心作用。目前已发现Cdc42、Rac1及RhoA参与血管新生过程,其中Cdc42诱导内皮细胞丝状伪足的形成并指引内皮细胞迁移方向,促进受损血管内皮屏障的恢复;Rac1控制片状伪足的形成;RhoA调节黏着斑形成及内皮细胞迁移过程中前缘和后端基质黏附的动态重塑,三者协作参与缺血损伤后的血管新生过程。尽管Rho GTPase在血管新生中的作用尚未完全明了,但它从基础研究到临床应用的前景仍然值得探索,这对于防治缺血性心脑血管疾病有重要意义。

ARHGDIB在恶性肿瘤中的研究进展

侵袭和转移是恶性肿瘤难以治疗的重要因素,ARHGDIB参与多种恶性肿瘤的侵袭和转移,是一类具有重要作用的转移抑制剂。本文阐述ARHGDIB通过调节Rho GTP酶参与多种信号通路,调控恶性肿瘤的侵袭和转移。ARHGDIB在膀胱癌、胃癌及白血病中主要通过Rac通路发挥作用,而在肺癌、肝癌和胰腺导管腺癌中,其对PI3K/PKB/Akt信号通路的调控较常见。ARHGDIB通过调控肿瘤微环境中的炎症反应抑制恶性肿瘤的转移,因此,其在不同恶性肿瘤中可通过调控不同信号通路发挥作用。

Rac1、Cdc42在肿瘤方面的研究

近年来对Rho家族蛋白的研究进展很快,其中以RhoA、Rac1、Cdc42最为人们所关注。这些小分子量G蛋白具有GTP酶活性,参与细胞周期调控和基因转录的调节。在调节细胞骨架、细胞运动、细胞凋亡、细胞恶性转化及肿瘤的浸润、转移等方面发挥重要作用。

Rnd3表达改变对糖尿病大鼠内皮祖细胞生物学特性的影响

目的:探讨糖尿病状态下Rho家族GTP酶3(Rnd3)表达改变对骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)一般生物学特性的影响。方法:高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素建立野生型及Rnd3基因敲除杂合子(Rnd3^(+/-))SD大鼠糖尿病模型。建模成功后,分离、培养各组大鼠骨髓源性EPCs并鉴定。CCK-8法测定细胞活力,Western blot检测各组EPCs中凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的表达,Transwell实验测定迁移能力,ELISA检测各组细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的水平,Matrigel成管实验检测EPCs管样结构形成能力。结果:高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素成功复制SD大鼠糖尿病模型。成功分离大鼠骨髓源性EPCs。糖尿病状态降低了EPCs的活力、迁移和旁分泌VEGF的能力,抑制了EPCs的Matrigel内成管能力,上述情况在Rnd3敲除后更明显。Rnd3敲除后Bcl-2水平下降而caspase-3表达上调。结论:Rnd3表达的维持对骨髓源性EPCs的增殖、迁移和血管生成等一般生物学特性具有正性调节作用。Rnd3表达不足加剧了糖尿病对EPCs一般生物学功能的损伤。

Rac1与肿瘤发生发展关系的研究进展

Ras相关C3肉毒毒素亚基1(Rac1)是Ras超家族Rho亚族Rho GTP酶的经典成员,生理状态下与细胞的多种生理生化活动密切相关。目前越来越多的证据表明,Rac1活性和表达异常与肿瘤发生、存活、转移、抗凋亡、耐药性等肿瘤特性密切相关。因基因突变或其他因素导致的Rac1活性上升或表达增加,可促进肿瘤的发生、发展和转移、侵袭,导致患者预后不良。然而,体外实验发现,使用特异性抑制剂或基因剔除技术等抑制Rac1活性或者降低其表达,可以抑制肿瘤的侵袭、转移等恶性行为。临床上部分抗肿瘤药物也是通过抑制Rac1达到抗肿瘤目的。

Rho GTP酶在肿瘤发生发展中的作用

Rho GTP酶属于Ras超家族的成员,在细胞中具有控制细胞形态、调控细胞增殖、黏附、迁移和膜运输等许多重要作用。近几年的研究表明,许多肿瘤(如乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌等)组织中的Rho GTP酶表达异常,此外,Rho GTP酶与恶性肿瘤的生长、转化、转移和凋亡也密切相关。对Rho GTP酶的研究不仅有利于深入了解肿瘤的发病机制,而且有利于开发抗肿瘤的靶向药物。

鸟苷酸交换因子P92GEF通过靶向调控RhoA抑制肿瘤细胞增殖侵袭（英文）

Dbl家族鸟苷交换因子(GEFs)是Rho家族蛋白发生恶性转化的主要调控单位,它通过使Rho蛋白从无活性的GDP形式转换为GTP形式的Rho蛋白而发挥作用,参与细胞骨架重排,细胞的生长和活力。P92GEF是一GEFs家族分子。本研究通过Real time PCR对P92GEF在人体48种正常组织中的表达情况进行了测定;GST-pulldown技术对P92GEF的体内GEF活性进行了检测;双荧光素酶报告基因检测技术对下游小分子进行转录因子活性检测;应用免疫荧光双染标记法完成了高表达P92GEF对正常细胞骨架形态的影响;在细胞表型实验中分别使用CCK8法、Transwell法及软琼脂克隆形成实验检测了高表达P92GEF对细胞增殖侵袭迁移及体外成瘤能力的影响。研究结果显示P92GEF有841个氨基酸,具有典型的Dbl家族分子结构域,在肺组织中表达量最高,能够促使正常成纤维细胞中的应力纤维(stress fiber)增多,P92GEF转染的NIH3T3细胞可以独立生长和形成继发性病灶,同时促使细胞增殖,侵袭及克隆形成能力增强,体外转录因子活性检测发现该基因可能与JAK/STAT通路有关。因此,P92GEF是一个典型的鸟苷交换因子家族分子,能激活Rho家族分子Rho A,具有明显的癌基因特征。