艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病的疗效观察及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响

目的 观察艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病气阴两虚证的临床疗效及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响。方法 将146例糖尿病肾病气阴两虚证患者随机分为观察组(74例)和对照组(72例)。在对症治疗的基础上,对照组给予厄贝沙坦片,观察组给予艾灸联合保真汤加减。观察两组中医主症积分、CT灌注参数[血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, SCr)、尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate, UAER)和24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantification, 24 h Upro)]、肾血流指标[舒张末期血流速度(end-diastolic velocity, EDV)、肾段动脉的收缩期峰值流速(peak-systolic velocity, PSV)、搏动指数(pulsatility index, PI)和阻力指数(resistive index, RI)]、血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)]水平及Rho/ROCK信号通路[Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A, RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶Ⅰ(Rho-associated coiled-coil containing protein kinaseⅠ, ROCKI)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin, E-Cad)]蛋白水平,并比较两组临床疗效及不良反应。结果 观察组总有效率为97.3%(72/74),明显高于对照组的81.9%(59/72)(P<0.05)。观察组治疗后中医主症积分低于治疗前和对照组(P<0.05)。两组治疗后CT灌注参数降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组治疗后PSV、EDV较治疗前和对照组加快(P<0.05),RI、PI较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后血清炎性因子水平较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后Rho A、ROCKI、α-SMA蛋白水平较治疗前和对照组降低(P<0.05),E-Cad蛋白水平较治疗前和对照组升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率为1.4%(1/74),低于对照组的19.4%(14/72)(P<0.05)。结论 在对症治疗的基础上,艾灸联合保真汤加减可明显提高糖尿病肾病气阴两虚证患者的治疗效果,其机制可能与改善CT灌注参数,调节血清Rho/ROCK信号通路蛋白相关。

炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的研究

目的探讨炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的影响。方法取70只BALB/c小鼠随机分为空白组、假手术组和造模小鼠。除空白组、假手术组外,各组小鼠均采用盲肠结扎穿孔术(cecum ligation and puncture,CLP)构建脓毒症急性胃肠损伤小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、炎调方低、中、高剂量组和ROCK抑制剂组。采用HE染色观察小鼠回肠组织病理学改变;ELISA法检测各组小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组织化学检测观察PCNA、Ki-67的表达;蛋白印迹法检测回肠组织凋亡指标cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白表达;RT-qPCR检测小鼠回肠组织ROCK mRNA、MLC mRNA表达。结果较空白组和假手术组相比,模型组小鼠的Chiu’s病理评分、促炎介质(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA水平升高(P<0.05),而抑炎介质(IL-10)水平和回肠组织中PCNA、Ki-67表达降低(P<0.05)。与模型组比较,炎调方各组随着剂量增加,回肠组织病理学改变均得到不同程度改善,其Chiu’s病理评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA的表达降低(P<0.05),而IL-10水平、回肠组织中PCNA、Ki-67表达升高(P<0.05)。结论炎调方可能通过调控Rho/ROCK信号通路抑制脓毒症急性胃肠损伤小鼠的肠上皮细胞凋亡,从而具有减轻肠道组织炎症反应,最终达到防止肠黏膜组织损伤的作用。

地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症的效果及对Rho/ROCK信号通路的影响

目的探讨地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症(EMT)的效果及对Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路的影响。方法选取2020年6月至2022年6月湖南妇女儿童医院救治的80例EMT患者,按随机数字表法分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组采用单纯腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗,观察组采用地诺孕素配合腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗。治疗6个月后对比两组的临床疗效及不良反应发生情况;比较治疗前及治疗6个月后两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的视觉模拟评分法(VAS),卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平,以及Rho/ROCK信号通路相关分子(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)水平。结果观察组治疗总有效率为95.00%,高于对照组的85.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组FSH、LH、E2水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组FSH、LH、E2水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组FSH、LH、E2水平均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均低于对照组(P<0.05)。治疗6个月后,观察组的不良反应总发生率为5.00%,明显低于对照组的15.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地诺孕素配合腹腔镜治疗EMT有助于提高临床疗效,改善患者疼痛评分,降低患者雌激素水平,还可抑制Rho/ROCK信号通路相关因子的表达,降低不良反应发生率。

Rho/ROCK信号通路在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致劳动年龄人群视力障碍的重要原因,其复杂的发病机制尚未完全明确。虽然一些新兴治疗方法在DR的治疗中取得显著疗效,但仍存在治疗效果欠佳及并发症等问题。Rho GTP酶是一种小分子蛋白,通过激活下游蛋白ROCK参与细胞骨架调节等多种细胞活动。在DR发病过程中Rho/ROCK信号通路被激活,抑制Rho/ROCK信号传导可能抑制DR的进展。本文从炎症、新生血管、血-视网膜屏障(blood retinal barrier,BRB)、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、糖尿病视网膜神经变性(diabetic retinal neurodegeneration,DRN)等方面阐述Rho/ROCK信号通路在DR发病机制中的研究进展,以期为DR的治疗提供新思路。

Rho/ROCK信号通路在神经可塑性中的研究进展

神经可塑性是大脑在发育过程中产生的能够适应外界环境变化的能力,发生机制是神经元产生突触可塑性,通过突触与大脑其他部位的神经元相互作用,最终实现大脑功能的可塑性变化。神经可塑性是神经发生过程中一种重要的分子基础,对中枢神经系统疾病的治疗具有重要意义。Rho/ROCK(Rho GTPase/Rho-associated protein kinase)信号通路是目前研究最为广泛的信号通路之一,它在神经发育和突触可塑性中都发挥了重要作用。本文就Rho/ROCK信号通路在神经可塑性中的作用及相关研究进展进行综述。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。

骨髓间充质干细胞基于Rho/ROCK信号通路对膝骨性关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的分析骨髓间充质干细胞(BMSCs)基于鼠抗Ras同源基因(Rho)/Rho相关螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法随机选取30只健康大鼠,其中正常组10只,模型组10只、BMSCs组10只,分别进行干预。对比各组软骨组织Mankin评分,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及RhoA、ROCK蛋白表达水平,分析BMSCs对KOA大鼠软骨细胞凋亡的影响。结果BMSCs组Mankin评分高于正常组、低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组血清MMP-1、TNF-α、Bax、RhoA、ROCK表达水平低于模型组、高于正常组,IL-10、Bcl-2表达水平高于模型组、低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs组软骨细胞凋亡指数低于模型组、高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Rho/ROCK信号通路调控BMSCs可改善KOA大鼠膝关节软骨病理状态、抑制炎症反应蔓延、调控Bax、Bcl-2蛋白表达、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关,证实BMSCs具有良好的抗软骨细胞凋亡疗效。

“三通针法”电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤大鼠胞浆型磷脂酶A2的影响

背景:胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)是治疗脊髓损伤的新型策略和靶标,其受RhoA/Rho kinase及MEK/ERK信号通路的调控。而电针可通过调控RhoA/Rho kinase和MEK/ERK信号通路治疗脊髓损伤。目的:探讨电针调控Rho/ROCK(Rho kinase)及MEK/ERK信号通路对脊髓损伤后cPLA2的影响。方法:90只雌性SD大鼠,随机取72只制备脊髓损伤模型,BBB评分后随机分为脊髓损伤组、电针治疗组、U0126治疗组(ERK阻断剂)和Y27632治疗组(ROCK阻断剂),另18只设为假手术组(只进行椎板咬除,但不进行脊髓撞击)。电针治疗组大鼠取大椎、腰阳关以及双侧次髎、足三里进行电针治疗,每天1次,每次20 min,共14次;U0126治疗组和Y27632治疗组分别予以U0126和Y27362隔天1次硬膜下腔注射。治疗结束经BBB评分后处死大鼠,收集脊髓组织,ELISA检测脊髓组织前列腺素E2、血小板活化因子的水平;TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;Western blot检测脊髓RhoA、ROCKⅡ、MEK、ERK1/2、p-ERK1/2、cPLA2、p-cPLA2蛋白的表达;qRT-PCR检测脊髓RhoA、ROCKⅡ、MEK、ERK1/2与cPLA2的基因表达。结果与结论:(1)与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠BBB评分明显下降(P<0.01),脊髓组织细胞凋亡阳性细胞数、前列腺素E2和血小板活化因子水平、p-cPLA2蛋白和cPLA2基因的表达均明显升高(P<0.01);除电针治疗组大鼠cPLA2基因表达降低差异无显著性意义外,各治疗组大鼠上述指标均明显逆转(P<0.01);(2)与假手术组比较,脊髓损伤组大鼠脊髓组织RhoA及ROCKⅡ蛋白和基因的表达、MEK和ERK1/2基因的表达、MEK和p-ERK1/2蛋白的表达均明显升高(P<0.01),电针治疗组及其他两治疗组大鼠上述指标均明显降低(P<0.01或P<0.05);(3)结果说明,电针能下调Rho/ROCK和MEK/ERK信号通路相关因子表达,抑制cPLA2的活性,减少神经细胞凋亡、减轻炎症反应,最终达到治疗脊髓损伤的作用。

中药调控Rho/ROCK信号通路抑制肿瘤转移的研究进展

Ras同源基因(Ras homolog gene,Rho)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho-associated coiled coil-forming protein kinase,ROCK)信号通路与肿瘤的发生发展有密切联系,Rho/ROCK通路被异常激活后Rho/Rac蛋白与下游效应子合作并激活特定的信号网络,可直接或间接影响癌细胞的运动,促进肿瘤的转移进程。近年来,许多研究表明具有清热解毒,活血化瘀的中药复方抗肿瘤疗效显著,并且单味中药的配伍在抗肿瘤中能起到协同作用,延缓肿瘤进展。本文基于Rho/ROCK信号通路介导肿瘤转移的理论视角,将中药复方及单味中药作用于Rho/ROCK通路的具体机制进行总结,发现中医药经Rho/ROCK信号通路对肿瘤转移产生疗效的可能机制包括:抑制肿瘤血管生成拟态、降低血管通透性、减少癌细胞的增殖、促进癌细胞凋亡、恢复细胞极性并诱导细胞骨架改变、减少细胞外基质降解抑制癌细胞侵袭。此外,将本文提及的中药复方和单体总结成表,以方便读者查阅。本文针对目前研究领域的现状进行分析与评价,旨在为研究提供一定的参考。

扶正解毒方对脓毒血症肠损伤大鼠模型Rho/Rock信号通路的影响

目的探讨扶正解毒方减轻脓毒血症肠损伤的作用及机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、Rho激酶抑制剂组(Y-27632)、扶正解毒方低剂量组、扶正解毒方高剂量组、蒙脱石散组,每组各10只。药物干预4周后,收集大鼠血清及结肠组织,HE染色观察各组大鼠结肠组织形态学改变,ELISA法比较各组大鼠血清炎症因子水平、氧化应激水平,Western blottng法检测各组大鼠结肠组织Rho/Rock信号通路相关蛋白水平。结果低剂量、高剂量扶正解毒方均可以明显改善大鼠脓毒血症肠损伤,有效降低大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、HMBG1水平(P<0.05),并且血清及结肠组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量也明显下降(P<0.05),扶正解毒方低剂量、高剂量组大鼠结肠组织Rho、Rock蛋白的表达显著下调(P<0.05),ZO-1、Occludin蛋白的表达显著上调(P<0.05)。结论扶正解毒方可以通过抑制Rho/Rock信号通路,减少肠道炎症和氧化应激,从而改善大鼠脓毒血症引起的肠道损伤,其作用呈一定的剂量依赖性。

基于Rho/ROCK信号通路的麦粒灸对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能保护作用机制探讨

目的观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)降压作用及主动脉血管内皮功能的保护并探讨其可能的机制`。方法将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,WKY大鼠设为空白组。模型组、空白组不施灸,麦粒灸组实行麦粒灸治疗。观测各组大鼠血压、血清一氧化氮(NO)含量、主动脉形态学改变。采用Western blot法和qPCR法测定各组大鼠主动脉组织中RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1mRNA表达水平。结果与模型组相比,麦粒灸组血压下降,主动脉内膜增生不明显,仅部分内膜脱落,血清NO含量明显上升,主动脉RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA含量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论麦粒灸能有效降低SHR血压,保护主动脉血管内皮功能,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路表达相关。

中药调控Rho/ROCK信号通路治疗平滑肌细胞功能异常疾病机制及研究进展

中药调控Rho/ROCK信号通路的研究是近年研究的热点之一,其介导了多种平滑肌细胞功能异常的疾病。单味中药及其提取物和一些中药复方可以通过调节Rho/ROCK信号通路治疗表型转化异常所导致的平滑肌细胞功能异常疾病。中药干预Rho/ROCK信号通路的优势和作用靶点尚未明确,需要归纳与总结。就此查阅近十几年来国内外文献,对Rho/ROCK信号通路与平滑肌细胞的相关性和作为治疗靶点的中药治疗优势等进行综述。

Rho/ROCK信号通路对在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的探讨Rho/ROCK信号通路激活后,在异位子宫内膜间质细胞中NF-κB、MMP-9和TIMP-1表达的变化情况及可能的作用机制,为临床提供新的治疗靶点。方法取90例卵巢处子宫内膜在异位病灶以及90例正常子宫内膜,分离、纯化间质细胞,建立体外间质细胞培养模型。酶免疫吸附的方法分析ROCKⅠ激酶活性。QPCR法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的转录水平,免疫印迹(Western blot)法检测NF-κB、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达水平。结果在异位子宫内膜间质细胞多呈梭形或者多角形,贴壁和增殖较快;在异位子宫内膜间质细胞的ROCKⅠ激酶活性和转录水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01);在异位子宫内膜间质细胞的NF-κB、MMP-9转录水平和蛋白表达水平显著高于正常子宫内膜(P<0.01),而TIMP-1的转录水平和蛋白表达水平显著低于正常子宫内膜(P<0.01)。结论在异位子宫内膜间质细胞中Rho/ROCK信号通路处于激活状态,Rho/ROCK信号通路激活以后,在异位子宫内膜间质细胞NF-κB、MMP-9的表达均升高,TIMP-1的表达降低。其机制可能与该通路激活后引起下游基因表达变化有关。

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5 ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho(RhoA、RhoB、RhoC)、Rho激酶(ROCKI、ROCKII)及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变薄(P<0.05);两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少(P<0.05);两组角蛋白比较,模型组表达下降(P<0.05);两组波形蛋白比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组(P<0.05)。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。

Rho/Rock信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用

目的评价Rho/Rock信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤（ventilator-induced lung injury,VILI）中的作用。方法选择健康雄性SD大鼠96只,12~15周龄,体重300~350g,采用随机数字表法将大鼠随机分为四组：空白对照组（C组）、Rho激酶抑制药法舒地尔组（F组）、高潮气量组（H组）和高潮气量＋Rho激酶抑制药法舒地尔组（HF组）,每组24只。C组和F组不行机械通气,H组和HF组行高潮气量40ml/kg机械通气4h。F组和HF组在机械通气前1h给予腹腔注射法舒地尔10mg/kg。分别于通气前（T0）、通气后4h（T1）、8h（T2）和24h（T3）每组随机取6只大鼠,采集血样,测定血清TNF-α、IL-6及IL-10浓度;采血结束后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,采用考马斯亮兰法检测BALF总蛋白;测定肺组织湿/干重比（W/D）;光镜下行肺组织病理学损伤评分;采用分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;采用Western blot和RT-PCR法分别检测肺组织RhoA、Rock2蛋白含量和mRNA表达水平。结果与C组比较,T1~T3时H组和HF组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-10浓度、BALF总蛋白含量、肺组织W/D、病理学损伤评分、MPO活性、RhoA、Rock2蛋白含量和mRNA表达水平明显升高（P〈0.05）;与H组比较,T1~T3时HF组大鼠血清TNF-α、IL-6浓度、BALF总蛋白含量、肺组织W/D、病理学损伤评分、MPO活性、RhoA、Rock2蛋白含量和mRNA表达水平明显下降,血清IL-10浓度明显升高（P〈0.05）。结论Rho激酶抑制药法舒地尔可减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤,其机制可能与其抑制Rho/Rock信号通路,降低肺组织内炎性反应有关。

麝香通心滴丸对高血压大鼠血管内皮功能及Rho/ROCK信号通路的影响

目的探讨麝香通心滴丸对自发性高血压大鼠血管内皮的作用及其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法SPF级自发性高血压大鼠20只及同类正常血压大鼠10只,随机分为正常血压组(对照组)、自发性高血压模型组(SHR组),麝香通心滴丸组(STX组),每组10只。观测各组大鼠血压变化;检测大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血管中内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量;实时PCR检测血管组织中ET-1及VEGF mRNA的表达;利用Western blotting检测血管组织中Rho/ROCK信号通路相关蛋白RhoA、ROCK及MLC蛋白的表达。结果与SHR组比较,STX组大鼠血压明显降低;SOD活性及NO含量显著增加,而MDA水平却明显降低;ET-1及VEGF蛋白及mRNA水平明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);同时,与SHR组比较,STX组大鼠血管组织RhoA、ROCK及MLC蛋白表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论麝香通心滴丸对自发性高血压大鼠模型的血管内皮有保护作用,可能与抑制Rho/ROCK信号通路相关蛋白表达有关。

Rho/ROCK信号通路与子痫前期发病的关系

子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期特有的疾病,是指既往血压正常的育龄妇女妊娠20周后出现高血压和蛋白尿或终末器官受损等一系列临床症状的疾病,其发病率和病死率有逐年增高的趋势,也是全世界孕产妇和围产儿发病及死亡的主要原因之一。子痫前期疾病发病机制尚不明确,但目前公认的发病机制是在妊娠早期胚囊植入子宫内膜层时滋养细胞侵袭能力的异常和子宫螺旋小动脉重铸障碍导致胎盘浅着床,从而产生高血压、蛋白尿等一系列子痫前期疾病的临床症状。而研究证实Rho/ROCK信号传导通路通过调节滋养细胞和血管内皮细胞形态、极性的改变、细胞骨架的重建、细胞迁移、增殖、凋亡以及侵袭等方面起着重要的作用,因此推测子痫前期疾病的发生、发展的整个过程可能都有Rho/Rock信号传导通路的参与,并起着重要的作用。

Rho/ROCK信号通路在HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏及β淀粉样蛋白沉积中的作用

目的探讨Rho/ROCK信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障破坏及对β淀粉样蛋白(Amyloid-beta,Aβ)沉积中的作用。方法将培养的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelial cells,h CMEC/D3)予以不同浓度的Rho/ROCK信号传导通路抑制剂盐酸法舒地尔(Hydroxyfasudil,HF)刺激细胞,并设立对照组,观察其对细胞活力的影响,分别予以HIV-1 Tat、HF刺激细胞,以蛋白免疫印迹法和实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测h CMEC/D3中紧密连接蛋白Occludin、晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE,转移血液Aβ到脑组织)的蛋白和mRNA表达的变化。结果 HF在30μmol/L(0.17±0.02)以下时对h CMEC/D3活力无明显影响(P>0.05)。HIV-1 Tat能抑制h CMEC/D3的Occludin蛋白(0.71±0.03、P<0.001)与mRNA(0.41±0.05、P<0.05)表达,同时上调RAGE蛋白(0.83±0.01、P<0.001)和mRNA(1.93±0.66、P<0.05)表达。HF预处理细胞2 h后与HIV-1 Tat共培养可以显著增加Occludin蛋白与mRNA的表达(0.93±0.03、P<0.001;1.04±0.45、P<0.05),同时可以明显减少RAGE蛋白与mRNA的表达(0.54±0.01、P<0.001,1.08±0.43、P<0.05)。结论 HIV-1 Tat可使紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达下调导致血脑屏障破坏,诱导Aβ转运受体RAGE的蛋白和mRNA过度表达,从而可能导致Aβ在脑内沉积增加;阻断Rho/ROCK信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏作用,阻止RAGE蛋白和mRNA的过度表达。

Rho/Rock信号通路在TGF-β_1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制

目的探讨Rho/Rock信号通路在TGF-β_1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞(ISMC)表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组:空白对照组和TGF-β_1刺激组,以不同浓度(1、5、10、20、50 ng/m L)TGF-β_1刺激细胞24 h,用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白(SM22α)和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达;再以上述得出的最佳TGF-β_1浓度刺激细胞,在不同时间(6、12、24、48 h)收集细胞,采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平;经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后,随机分为以下各组:空白对照组、TGF-β_1(10ng/m L)刺激组及TGF-β_1(10 ng/m L)+法舒地尔(Fasudil)(10、30、50μmol/L)组,分别采用FQ-RT-PCR法检测SM22α、OPN、Rho A、Rock-1 mRNA的表达;Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平;根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果 10 ng/m L TGF-β_1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。TGF-β_1+Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF-β_1刺激组高(P<0.01),且在Fasudil浓度为30μmol/L时达到高峰,随后下降;TGF-β_1+Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF-β_1刺激组低,呈浓度依赖性,至30μmol/L达最低(P<0.05),后又呈上升趋势。Western blot结果显示TGF-β_1+Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF-β_1刺激组低,至Fasudil浓度为30μmol/L达最低(P<0.05)。同时FQ-RT-PCR结果显示TGF-β_1刺激组的Rho A和Rock-1 mRNA表达水平较空白对照组高(P<0.01),在Fasudil浓度为30μmol/L时TGF-β_1+Fasudil组的Rho A和Rock-1mRNA表达水平较TGF-β_1刺激组低(P<0.05)。电镜下观察各组细胞显示,空白对照组(×20 000)ISMC高尔基体肥大,线粒体及粗面内质网正常,10 ng/m L TGF-β_1刺激后细胞内线粒体增多,在上述基础上加入30μmol/L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论 10 ng/m L TGF-β_1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化,且该过程可能通过Rho/Rock信号通路实现;Rho/Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF-β_1刺激的SM22α的表达,下调OPN的表达水平,抑制大鼠ISMCs表型转化。