艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病的疗效观察及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响

目的 观察艾灸联合保真汤加减治疗糖尿病肾病气阴两虚证的临床疗效及对CT灌注参数、Rho/ROCK信号通路蛋白的影响。方法 将146例糖尿病肾病气阴两虚证患者随机分为观察组(74例)和对照组(72例)。在对症治疗的基础上,对照组给予厄贝沙坦片,观察组给予艾灸联合保真汤加减。观察两组中医主症积分、CT灌注参数[血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, SCr)、尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate, UAER)和24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein quantification, 24 h Upro)]、肾血流指标[舒张末期血流速度(end-diastolic velocity, EDV)、肾段动脉的收缩期峰值流速(peak-systolic velocity, PSV)、搏动指数(pulsatility index, PI)和阻力指数(resistive index, RI)]、血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)]水平及Rho/ROCK信号通路[Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A, RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶Ⅰ(Rho-associated coiled-coil containing protein kinaseⅠ, ROCKI)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin, E-Cad)]蛋白水平,并比较两组临床疗效及不良反应。结果 观察组总有效率为97.3%(72/74),明显高于对照组的81.9%(59/72)(P<0.05)。观察组治疗后中医主症积分低于治疗前和对照组(P<0.05)。两组治疗后CT灌注参数降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组治疗后PSV、EDV较治疗前和对照组加快(P<0.05),RI、PI较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后血清炎性因子水平较治疗前和对照组降低(P<0.05)。观察组治疗后Rho A、ROCKI、α-SMA蛋白水平较治疗前和对照组降低(P<0.05),E-Cad蛋白水平较治疗前和对照组升高(P<0.05)。观察组不良反应发生率为1.4%(1/74),低于对照组的19.4%(14/72)(P<0.05)。结论 在对症治疗的基础上,艾灸联合保真汤加减可明显提高糖尿病肾病气阴两虚证患者的治疗效果,其机制可能与改善CT灌注参数,调节血清Rho/ROCK信号通路蛋白相关。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

Rho A-Rock 1信号通路对传染性脾肾坏死病毒感染的调控及作用

【目的】探究传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)复制增殖与Rho A-Rock 1通路的关系。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ISKNV感染CPB细胞12,24,48,72和96 h后病毒DNA拷贝数的变化;同时采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹方法检测病毒感染CPB细胞12,24,48和72 h后Rho A与Rock 1转录及蛋白表达水平的变化;通过Rho A抑制剂(CCG-1423和Rhosin)、Rock 1抑制剂(Thiazovivin和Y-27632)及siRNA抑制Rho A-Rock 1通路,研究Rho A-Rock 1通路抑制对ISKNV复制增殖的影响。【结果】ISKNV感染12~48 h,病毒的DNA拷贝数无显著变化,感染72 h病毒DNA拷贝数显著上升,感染96 h病毒的拷贝数上升变缓,说明ISKNV感染72 h时病毒正处于复制增殖的高峰期。RT-qPCR及蛋白免疫印迹结果表明,ISKNV感染72 h时,Rho A和Rock 1 mRNA转录水平和蛋白水平均显著上调。Rho A抑制剂Rhosin和CCG-1423及Rock 1抑制剂Y-27632和Thiazovivin均可使ISKNV基因组拷贝数和病变的CPB细胞数显著下调;利用siRNA敲降Rho A和Rock 1时,ISKNV的基因组拷贝数也显著下调。【结论】Rho A-Rock 1信号通路可正调控ISKNV的感染,抑制Rho A-Rock 1通路可显著抑制ISKNV复制增殖。

抑制Rho/ROCK通路对气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及相关机制

目的研究抑制Ras同源基因(Ras homolog gene,Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rhoassociated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)通路对心肌素(myocardin,MYOCD)参与的气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及分子机制。方法体外构建腺病毒载体Ad-ZsGreen-shRNA-hROCK1感染人气道平滑肌细胞,将细胞随机分为4组:ROCK1基因沉默对照(shNC)组、shNC+花生四烯酸(arachidonic acid,AA;Rho/ROCK通路激活剂)组、ROCK1基因沉默(shROCK1)组、shROCK1+AA组(各组n=3)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法、Western blot法检测ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测球状肌动蛋白和丝状肌动蛋白水平,免疫荧光染色法及细胞划痕实验检测细胞增殖及迁移情况。结果与shNC+AA组相比,shROCK1+AA组ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平降低,球状肌动蛋白、丝状肌动蛋白表达降低,细胞增殖、细胞迁移能力降低(P<0.05)。结论抑制Rho/ROCK通路致气道平滑肌细胞增殖及迁移能力受抑,其机制可能与MYOCD的下调有关.

地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症的效果及对Rho/ROCK信号通路的影响

目的探讨地诺孕素配合腹腔镜治疗子宫内膜异位症(EMT)的效果及对Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路的影响。方法选取2020年6月至2022年6月湖南妇女儿童医院救治的80例EMT患者,按随机数字表法分为对照组(40例)和观察组(40例)。对照组采用单纯腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗,观察组采用地诺孕素配合腹腔镜+醋酸亮丙瑞林微球治疗。治疗6个月后对比两组的临床疗效及不良反应发生情况;比较治疗前及治疗6个月后两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的视觉模拟评分法(VAS),卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平,以及Rho/ROCK信号通路相关分子(RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ)水平。结果观察组治疗总有效率为95.00%,高于对照组的85.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组性交痛、月经期间疼痛、非经期下腹疼痛的VAS评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组FSH、LH、E2水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组FSH、LH、E2水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组FSH、LH、E2水平均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗6个月后,两组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均低于对照组(P<0.05)。治疗6个月后,观察组的不良反应总发生率为5.00%,明显低于对照组的15.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地诺孕素配合腹腔镜治疗EMT有助于提高临床疗效,改善患者疼痛评分,降低患者雌激素水平,还可抑制Rho/ROCK信号通路相关因子的表达,降低不良反应发生率。

基于Rho/Rock通路研究麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的机制研究

目的观察麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的作用及可能的作用机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和麝香心痛宁组。采用球囊损伤法制备大鼠腹主动脉血管损伤模型,造模后灌胃给予大鼠麝香心痛宁片(200 mg·kg^(-1)),14 d后将大鼠处死,取其血清及腹主动脉,主动脉血管进行HE染色,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,ELISA法检测大鼠血管组织一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量PCR和Western blotting检测Rho、Rock1和Rock2 mRNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠腹主动脉血管组织内膜增生,腹主动脉血管部位弹力变弱且管壁增厚。麝香心痛宁治疗后血管内膜损伤程度减轻。与模型对照组相比,麝香心痛宁组大鼠血清SOD、GSH-Px活性升高,MCP-1、MDA活性降低(P<0.05);血管组织NO含量升高,ET-1、VEGF和IL-1β含量降低(P<0.05);Rho/Rock通路相关因子Rock1、Rock2、Rho的表达降低(P<0.05)。结论麝香心痛宁可抑制血管损伤后内膜增生,其作用机制可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。

炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的研究

目的探讨炎调方调控Rho/ROCK信号通路对脓毒症急性胃肠损伤小鼠肠上皮细胞凋亡的影响。方法取70只BALB/c小鼠随机分为空白组、假手术组和造模小鼠。除空白组、假手术组外,各组小鼠均采用盲肠结扎穿孔术(cecum ligation and puncture,CLP)构建脓毒症急性胃肠损伤小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、炎调方低、中、高剂量组和ROCK抑制剂组。采用HE染色观察小鼠回肠组织病理学改变;ELISA法检测各组小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组织化学检测观察PCNA、Ki-67的表达;蛋白印迹法检测回肠组织凋亡指标cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白表达;RT-qPCR检测小鼠回肠组织ROCK mRNA、MLC mRNA表达。结果较空白组和假手术组相比,模型组小鼠的Chiu’s病理评分、促炎介质(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA水平升高(P<0.05),而抑炎介质(IL-10)水平和回肠组织中PCNA、Ki-67表达降低(P<0.05)。与模型组比较,炎调方各组随着剂量增加,回肠组织病理学改变均得到不同程度改善,其Chiu’s病理评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平、cleaved caspase3蛋白、Bax蛋白、ROCK mRNA、MLC mRNA的表达降低(P<0.05),而IL-10水平、回肠组织中PCNA、Ki-67表达升高(P<0.05)。结论炎调方可能通过调控Rho/ROCK信号通路抑制脓毒症急性胃肠损伤小鼠的肠上皮细胞凋亡,从而具有减轻肠道组织炎症反应,最终达到防止肠黏膜组织损伤的作用。

Rho/ROCK通路与心律失常的研究进展

越来越多的证据表明,Rho/ROCK通路在不同程度上调控着细胞的生长、发育、迁移、增殖和死亡,并在各种疾病中发挥重要作用。此外,Rho/ROCK通路与成纤维细胞、Ca^( 2+)和炎症因子等的相互作用对肺动脉高压和心血管疾病的发生与发展产生了重要的影响。近年来Rho/ROCK通路在心律失常中发挥的作用备受关注,现通过总结相关研究,为抗心律失常药的研究提供进一步参考。

Rho/ROCK信号通路在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致劳动年龄人群视力障碍的重要原因,其复杂的发病机制尚未完全明确。虽然一些新兴治疗方法在DR的治疗中取得显著疗效,但仍存在治疗效果欠佳及并发症等问题。Rho GTP酶是一种小分子蛋白,通过激活下游蛋白ROCK参与细胞骨架调节等多种细胞活动。在DR发病过程中Rho/ROCK信号通路被激活,抑制Rho/ROCK信号传导可能抑制DR的进展。本文从炎症、新生血管、血-视网膜屏障(blood retinal barrier,BRB)、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、糖尿病视网膜神经变性(diabetic retinal neurodegeneration,DRN)等方面阐述Rho/ROCK信号通路在DR发病机制中的研究进展,以期为DR的治疗提供新思路。

束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

目的探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型,将大鼠分为4组:Control组(n=15,每日禁食水6 h);Stress组(n=15,每日束缚6 h);Stress+Fasudil组(n=15,每日束缚6 h,束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液);Fasudil组(n=15,每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液)。用高架十字迷宫实验(EPM)检测各组大鼠行为学变化,ELISA检测血清CORT和S100B水平,检测脑组织伊文思蓝(EB)的渗漏情况以评估渗透性的改变,免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化,Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况,透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果与Control组相比,Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为;Stress组和Stress+Fasudil组血清CORT含量均显著高于Control组(P<0.001);与Control组和Stress+Fasudil组相比,Stress组EB渗漏含量和S100B含量均显著升高(P<0.05);Stress组紧密连接蛋白的表达显著低于Control组和Stress+Fasudil组(P<0.05);Pull-down实验和Western blot分析证实,Stress组RhoA-GTP(P<0.001)、ROCK2(P<0.001)、p-MLC2(P<0.05)的表达显著高于Control组和Stress+Fasudil组;脑微血管内皮细胞超微结构显示,Stress组呈现显著的形态学改变。结论束缚应激能够通过激活Rho/ROCK信号通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤。

槐耳多糖调节Rho/ROCK信号通路对结肠癌SW620细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨槐耳多糖调节Rho/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路影响结肠癌SW620细胞恶性生物学行为。方法:人结肠癌细胞株SW620分为对照组、槐耳多糖组、水仙环素(Rho/ROCK途径激活剂)组、槐耳多糖+水仙环素组。分析各组细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和集落形成能力。免疫印迹检测RhoA、ROCK1、增殖细胞周期相关核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、caspase-3蛋白表达水平。建立裸鼠结肠癌移植瘤模型验证槐耳多糖对裸鼠体内移植瘤生长的影响。结果:槐耳多糖抑制SW620细胞增殖、迁移、侵袭、克隆集落数,并增加细胞凋亡以及RhoA、ROCK1、Ki67、MMP2蛋白表达水平。水仙环素逆转了槐耳多糖对SW620细胞恶性生物学行为的抑制作用。结论:槐耳多糖通过抑制Rho/ROCK信号通路抑制SW620细胞恶性生物学行为。

基于RhoA/ROCK通路探讨益智仁对糖尿病肾病防治作用及机制研究

目的研究益智仁(Alpinia Oxyphylla Fructus,AOF)对糖尿病肾病的防治作用及机制。方法用浓度为30 mmol/L的高糖培养基诱导HK-2细胞48 h造模,实验分为正常组、模型组、卡格列净组、益智仁组,药物处理24 h,采用Western-blot和qPCR技术检测RhoA/ROCK信号通路上的相关蛋白和基因表达变化。流式细胞术检测细胞凋亡、CCK-8检测细胞增殖、活性氧(ROS)检测氧化应激。结果与正常组比较,模型组HK-2细胞的细胞活性降低,凋亡率增加,ROS含量升高,RhoA/ROCK信号通路上的基因和蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较,益智仁组HK-2细胞活性升高,细胞凋亡率和ROS的含量降低,RhoA/ROCK信号通路上的基因和蛋白表达量降低(P<0.05)。结论益智仁通过抑制RhoA/ROCK信号通路促进HK-2细胞增殖及抑制细胞凋亡;降低了HK-2的炎性反应、氧化应激和改善肾小管上皮细胞纤维化对糖尿病肾病有一定的治疗作用。

苦参碱调节RhoA-ROCK信号通路对冠心病模型大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探讨苦参碱(Matrine)对冠心病(coronary heart disease,CHD)大鼠辅助T细胞17(helper T cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞平衡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)-Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路的影响。方法建立冠心病模型,将实验大鼠分为对照组、模型组、苦参碱低剂量(50 mg·kg^(-1))组、苦参碱高剂量(200 mg·kg^(-1))组及苦参碱高剂量(200 mg·kg^(-1))+LPA组(10 mg·kg^(-1))。超声心动图进行大鼠心功能检测;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法进行白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)水平检测;流式细胞术检测Th17、Treg数量及Th17/Treg比值;免疫组化进行内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1(ET-1)蛋白表达水平检测;Masson染色进行大鼠心肌组织的病理形态变化观察;TTC染色检测各组大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色进行心肌组织中细胞凋亡情况检测;试剂盒检测RhoA活性;Western Blot法进行半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平检测。结果与对照组比较,模型组心肌组织有大量蓝色胶原纤维沉积,左室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,LVESV)、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平明显升高,左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular shortening fraction,LVFS)、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,Matrine-L组、苦参碱高剂量组心肌组织蓝色胶原纤维逐渐减少,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平依次明显降低,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平依次明显升高(P<0.05)。与苦参碱高剂量组比较,苦参碱高剂量+LPA组心肌组织蓝色胶原纤维增多,LVEDV、LVESV、IL-17、Th17、Th17/Treg、ET-1、心肌梗死面积、细胞凋亡率、TUNEL阳性率、Bax、Caspase-3、RhoA活性、RhoA、ROCK1、ROCK2表达水平明显升高,LVEF、LVFS、TGF-β、Treg、eNOS、Bcl-2表达水平明显降低(P<0.05)。结论苦参碱通过抑制RhoAROCK信号通路调节Th17/Treg细胞平衡,改善冠心病大鼠心肌损伤。

藁本内酯通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善脂多糖诱导小鼠肾足细胞损伤

【目的】探讨藁本内酯对脂多糖(LPS)诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制。【方法】(1)体内实验:将小鼠随机分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC(RhoA阴性对照)组、藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA(RhoA过表达)组。除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤(AKI)模型。干预结束后,检测小鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,高碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白的表达。(2)体外实验:将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测细胞RhoA、ROCK蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK蛋白表达水平升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。利用过表达RhoA进行回补实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用(P<0.01)。【结论】藁本内酯可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤。

鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成

目的观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态(VM)形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌(HCC)转移侵袭的分子机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲煎丸高(H)、中(M)、低剂量(L)及生理盐水(N)灌胃,4 d后采血,制备药物血清。肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632(P)干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量。结果鳖甲煎丸可显著抑制HepG2细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组(P<0.01),Y-27632完全抑制了HepG2细胞VM的生成(P<0.01);同时,鳖甲煎丸和Y-27632都能够抑制HepG2细胞中RhoA、ROCK1的表达(P<0.05),降低细胞培养上清中VEcadherin、PI3K的表达水平(P<0.05)。结论鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的Hep G2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关。

血管紧张素Ⅱ对大鼠肝星状细胞收缩及Rho-Rock通路的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肝星状细胞(HSC)Rock通路的影响机制。方法采用HSC-T6细胞株,给予AngⅡ1μmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;另予AngⅡ10μmol/L处理,免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的表达水平。观察AngⅡ1型受体(AT-1受体)阻断剂伊贝沙坦和Rho激酶特异性抑制剂Y27632对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rock通路Rock2(Rho kinase 2)mRNA的表达。结果AngⅡ可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15min达到峰值后逐渐减低。伊贝沙坦和Y27632处理组可抑制AngⅡ诱导的MLC蛋白磷酸化水平。AngⅡ处理组Rock2mRNA的表达显著增强,伊贝沙坦和Y27632均可抑制Rock2 mRNA的表达。结论AngⅡ可以通过Rock通路来诱导HSC的收缩。

Rho和ROCK蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌Rho和ROCK蛋白的表达及其与上皮性卵巢癌进展之间的关系。方法应用Western blot方法,观察了66例上皮性卵巢癌和22例正常卵巢组织Rho和ROCK蛋白的表达,并分析Rho/ROCK蛋白表达与生存期的关系。结果RhoA、C和ROCK蛋白在卵巢癌组织中表达增加,且在伴有肿瘤转移的淋巴组织中表达高于没有肿瘤转移的淋巴组织(P<0.05)。RhoA、C和ROCK间的表达呈正相关(P<0.05),RhoA、C和ROCK的表达与肿瘤分化、淋巴转移和短综合生存期相关(P<0.05)。多变量分析显示,只有RhoC是影响生存的独立因素(P<0.05)。RhoA和C是影响综合生存期的因素(P<0.05)。结论在上皮性卵巢癌中,RhoA、C和ROCK蛋白高表达,Rho/ROCK通路可能参与了上皮性卵巢癌的进展。

阿魏酸钠干预对Rho/Rock信号通路的影响及其对肝脏的保护作用

目的:探讨阿魏酸钠(SF)干预后对Rho/Rock信号通路相关蛋白表达及肝脏的影响,阐明其对脏器的保护作用。方法:雄性Wistar大鼠20只,分为正常对照组、模型组、阳性药组及SF干预组。除正常对照组外,其余组大鼠注射盐酸异丙肾上腺素(Iso)15mg.kg-1诱发大鼠心肌纤维化模型;稳定2d后,除模型组外,其余2组给予SF和贝那普利。利用Masson染色分析给予SF后心肌胶原的含量变化;RT-PCR法分析Rho A和Rock mRNA表达;采用免疫组织化学染色分析心肌Rock蛋白表达;拉曼光谱分析肝脏的损伤。结果:与正常对照组比较,注射Iso后3周,Rho A和Rock mRNA表达即有所增加(P<0.01);给予SF和贝那普利后,Rho A和Rock基因和蛋白表达水平较模型组明显降低(P<0.01);拉曼光谱分析结果显示,给予SF后大鼠肝脏组织的峰位较模型组向右移动1个单位,趋近正常对照组峰位。结论:SF可能通过阻断Rho/Rock信号通路进而起到抑制纤维化的作用,同时又起到肝脏保护作用。

基于Rho/ROCK信号通路的麦粒灸对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能保护作用机制探讨

目的观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)降压作用及主动脉血管内皮功能的保护并探讨其可能的机制`。方法将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,WKY大鼠设为空白组。模型组、空白组不施灸,麦粒灸组实行麦粒灸治疗。观测各组大鼠血压、血清一氧化氮(NO)含量、主动脉形态学改变。采用Western blot法和qPCR法测定各组大鼠主动脉组织中RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1mRNA表达水平。结果与模型组相比,麦粒灸组血压下降,主动脉内膜增生不明显,仅部分内膜脱落,血清NO含量明显上升,主动脉RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA含量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论麦粒灸能有效降低SHR血压,保护主动脉血管内皮功能,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路表达相关。

Rho—Rock通路在血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞收缩中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促进肝星状细胞（HSC）收缩时Rho激酶介导的非Ca^2＋依赖性信号转导通路的作用机制。方法采用HSC—T6细胞系，给予AngⅡ10μmol／L处理，聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性；蛋白质印迹法检测肌球蛋白轻链（MLC）和磷酸化MLC表达水平。观察AngⅡ1型受体阻断剂伊贝沙坦、蛋白激酶C特异性抑制剂stauro、Rho激酶特异性抑制剂Y27632、肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7对磷酸化MLC表达水平的影响；逆转录聚合酶链反应检测Rho-Rock通路RhoA激酶2（Rock2）、RhoAGTP、Rho鸟核苷酸转化因子（RhoGEF）mRNA的表达。结果AngⅡ可诱导HSC收缩；还可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化，并呈时间依赖性，15min达到峰值后逐渐减低。AngⅡ＋伊贝沙坦组和AngⅡ＋Y27632组诱导的MLC蛋白磷酸化水平均低于AngⅡ组（1．12±0．09、1．22±0．10vs1．33±0．06，P=0．003）；而AngⅡ＋ML-7＋stauro组磷酸化MLC蛋白水平（1．43±0．09）高于AngⅡ＋Y27632组（P=0．003）；AngⅡ＋Y27632＋ML-7＋stauro组水平较低（0．64±0．04，P=0．000）。AngⅡ组Rock2、RhoAGTP、RhoGEF mRNA的表达均高于相应对照组（0．36±0．01vs0．12±0．01、0．80±0．01vs0．40±0．02、0．65±0．11vs0．33±0．09，均P〈0．05），AngⅡ＋伊贝沙坦组3种元件的表达均低于AngⅡ组。AngⅡ＋Y27632组Rock2与RhoGEF mRNA的表达（0．15±0．01、0．28±0．08）较AngⅡ组低，RhoA GTP的表达（1．14±0．02）则较高。AngⅡ＋ML-7＋stauro组3种元件的表达均高于对照组，AngⅡ＋Y27632＋ML-7＋stauro3组3种元件的表达（0．23±0．01、0．83±0．02、0．69±0．08）均高于AngⅡ＋ML-7＋stauro组（均P〈0．05）。结论AngⅡ可以通过Rho—Rock通路来诱导HSC的收缩。