补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血疗效及对碱性成纤维细胞生长因子、Rho家族成员A蛋白水平的影响

目的观察补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血疗效及对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、Rho家族成员A(Rho-A)蛋白水平的影响。方法将60例慢性再生障碍性贫血患者随机分为2组,对照组30例给予西药司坦唑醇、环孢素A治疗,观察组30例在此基础上加用补肾生血中药治疗,2组治疗时间均为6个月。观察2组治疗前后中医证候积分、外周血指标、非造血细胞百分率、骨髓增生程度、bFGF及Rho-A水平变化情况,统计2组近期疗效。结果 2组治疗后心悸头晕、周身乏力、面色口唇指甲苍白、盗汗出血、形寒肢冷及腰膝酸软积分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分均显著低于对照组(P均<0.05);2组治疗后血红蛋白、白细胞计数、血小板计数、bFGF及Rho-A均显著提高(P均<0.05),非造血细胞百分率均显著降低(P均<0.05),骨髓增生程度均显著改善(P均<0.05),且观察组治疗后各项指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。结论补肾生血中药治疗慢性再生障碍性贫血可有效缓解相关症状体征,改善外周血指标,促进骨髓增生复常,并有助于提高bFGF和Rho-A水平。

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。

Rho同源基因家族成员C在恶性肿瘤中的研究进展

癌症的发生发展机制一直被广大研究者探讨,其发生发展通常是由调节细胞基本过程的基因功能失常引起的。Rho同源基因家族成员C(RHOC)近年来已经成为研究热点。目前RHOC已经被广泛报道存在于众多恶性肿瘤细胞中,并发挥着重要作用,本文就RHOC在众多肿瘤细胞中的研究发展做一综述。

针刺调节RhoA/ROCK信号通路对创伤性脑出血大鼠血脑屏障的影响

目的:探究针刺调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路对创伤性脑出血(TICH)大鼠血脑屏障的影响。方法:随机将SD大鼠分为假手术(Sham)组、TICH组、针刺组、RhoA抑制剂组,除Sham组外,其余各组均采用自由落体击打法制备TICH模型,于TICH模型大鼠苏醒后,针刺组给予百会穴透刺患侧曲鬓穴针刺干预,RhoA抑制剂组给予Rhosin(40 mg/kg)腹腔注射干预,连续干预3 d。3 d后采用Loeffler评分法评估神经缺损程度(Loeffler评分与神经缺损程度呈负相关);烘干法测定脑组织含水量;原位末端标记测定法(TUNEL)染色检测脑组织神经元凋亡情况;伊文思蓝染色(Evans blue)检测血脑屏障损伤情况(伊文思蓝渗透量与血脑屏障损伤严重程度呈正相关);蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Sham组比较,TICH组Loeffler评分减少(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组Loeffler评分增加(P<0.05),脑组织含水量、神经元凋亡率、伊文思蓝渗透量减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Sham组比较,TICH组脑组织RhoA、ROCK蛋白表达增加(P<0.05);与TICH组比较,针刺组、RhoA抑制剂组RhoA、ROCK蛋白表达减少(P<0.05);针刺组与RhoA抑制剂组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺可保护TICH大鼠血脑屏障,可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路激活而改善脑水肿以及神经损伤。

芍药苷调控RhoA/ROCK2通路对阿尔茨海默病大鼠认知功能障碍的影响

目的探索芍药苷调控Ras同源基因家族成员(Rho)A/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)2通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能障碍的影响。方法取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芍药苷(20 mg/kg)组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、芍药苷(20 mg/kg)+Rhosin(40 mg/kg)组,除假手术组外,向其余各组大鼠海马CA1区注入β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1~42)多肽诱导建立AD模型,以药物分组干预后,通过Morris水迷宫实验测定各组大鼠逃避潜伏期,以评测其认知功能;通过苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠海马组织病理形态变化;通过试剂盒检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及血清致炎因子白细胞介素(IL)-6和干扰素(IFN)_(-γ)含量;通过Western印迹实验检测各组海马组织RhoA/ROCK2通路蛋白RhoA、ROCK2的表达水平。结果与假手术组相比,模型组神经元细胞结构萎缩,变性死亡,排列紊乱疏松,数目明显减少,海马组织呈现明显损伤,海马组织SOD含量显著降低(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物干预组海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与芍药苷组、Rhosin组分别相比,芍药苷+Rhosin组大鼠海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论芍药苷可能通过抑制RhoA/ROCK2通路激活,减弱AD大鼠氧化应激与炎症反应,缓解其海马组织病理损伤,提高大鼠学习记忆能力,改善其认知功能障碍。

右美托咪定减轻呼吸机相关性肺损伤模型大鼠肺组织损伤

目的探讨右美托咪定(DEX)对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠肺组织Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法建立VILI大鼠模型,将大鼠分为对照组(control组)、模型组(VILI组)、右美托咪定低、高剂量组(DEX-L、DEX-H组)、右美托咪定高剂量+溶血磷脂酸(LPA)组(DEX-H+LPA组)。测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D);HE染色观察肺组织病理形态;ELISA试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平;TUNEL染色法检测肺上皮细胞死亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及RhoA、ROCK1表达水平。结果DEX可以减轻VILI大鼠肺损伤,降低肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达(P<0.05),升高Bcl-2表达(P<0.05);LPA可以促使大鼠肺损伤加重,肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论右美托咪定可能通过抑制RhoA/ROCK1通路保护大鼠呼吸机相关性肺损伤。

银杏叶提取物对糖尿病肾病模型小鼠肾脏炎症的抑制作用及机制

目的探讨银杏叶提取物(GBE)抑制糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾脏炎症的作用及其可能机制。方法以高脂高糖喂养KK/Ay小鼠建立DN模型,并分为模型组、阳性对照组[二甲双胍200 mg/(kg·d)]和GBE低、高剂量组[100、200 mg/(kg·d)],每组6只;另取普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠6只,作为对照组。各药物组小鼠灌胃相应药液,对照组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续8周。检测小鼠的体重、空腹血糖、24 h摄食量、24 h尿量和血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素12(IL-12)、IL-10、晚期糖基化终末产物(AGEs)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,计算其双侧肾脏质量与体重的比值,观察其肾皮质的病理损伤和纤维化改变,并检测其肾皮质中巨噬细胞极化标志蛋白[M1型:诱导型一氧化氮合酶(iNOS);M2型:精氨酸酶1(Arg-1)]和AGEs-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/Ras同源基因家族成员A(RhoA/)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组比较,GBE低、高剂量组小鼠肾皮质增生、空泡、炎症细胞浸润、肾皮质纤维化等症状均有所好转;其体重、血清IL-10水平、肾皮质中Arg-1蛋白的表达水平均显著高于模型组(P<0.01);空腹血糖和24 h摄食量、尿量,血清MCP-1、IL-12、BUN、Scr、AGEs水平,双侧肾脏质量与体重的比值,肾损伤评分和肾间质纤维化比例,肾皮质中iNOS、RAGE、RhoA、ROCK1(GBE低剂量组除外)蛋白的表达水平均显著低于模型组(P<0.01)。结论GBE可改善DN模型小鼠的肾损伤,并减轻其炎症反应,其机制可能与抑制AGEs-RAGE/RhoA/ROCK信号通路、调节巨噬细胞极化有关。

泮托拉唑对肝硬化门静脉高压大鼠RhoA/ROCK通路及胃黏膜微循环的影响

目的:探讨泮托拉唑对肝硬化门静脉高压(PHT)大鼠Ras同源基因家族成员A/Rho相关激酶(RhoA/ROCK)通路及胃黏膜微循环的影响。方法:橄榄油和40%四氯化碳(CCl4)混合液注射,并同时猪油、胆固醇饲养建立肝硬化PTH大鼠模型,模型成功大鼠随机分为3组:模型组、泮托拉唑组(静脉滴注0.8 mg·kg^(-1)泮托拉唑)、泮托拉唑+U-46619组(静脉滴注0.8mg·kg^(-1)泮托拉唑+1.5 pg·kg^(-1)U-46619),同时设置对照组(静脉滴注等体积生理盐水),每日1次,连续5 d。右颈动脉插管检测门静脉压力(PVP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR);全自动生化仪检测肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(Alb)、球蛋白(GLO)、总蛋白(TP)水平,并计算AST/ALT、白蛋白/球蛋白(A/G);苏木精-伊红(HE)检测肝组织、胃黏膜组织形态学变化;蛋白免疫印迹(WB)检测胃黏膜组织RhoA、ROCK、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)蛋白水平。结果:模型组肝细胞多数空泡增大、肝细胞脂变、坏死严重,胃黏膜微绒毛损伤严重,细胞间稀疏,核收缩、深染,炎症浸润;泮托拉唑组肝细胞空泡症状不明显,胃黏膜微绒毛损伤得以缓解;泮托拉唑+U-46619组肝细胞脂变、坏死,胃黏膜微绒毛损伤相较于泮托拉唑组严重,细胞间隔变大、细胞核收缩、深染严重。与对照组相比,模型组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平升高,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平降低(P<0.05);与模型组相比,泮托拉唑组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平降低,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平升高(P<0.05);与泮托拉唑组相比,泮托拉唑+U-46619组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平升高,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平降低(P<0.05)。结论:泮托拉唑在肝硬化PHT中可以通过抑制RhoA/ROCK通路实现对胃黏膜损伤的缓解。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨四逆汤对心肌缺血再灌注氧化损伤作用机制

目的:研究四逆汤对心肌缺血再灌注(IR)氧化损伤的保护作用及对人RAS同源基因家族成员A/Rho激酶(RhoA/ROCK)信号通路的调控作用。方法:将60只雄性SD大鼠分为空白对照组、再灌注损伤组、四逆汤组、阳性对照组。其中空白组大鼠行假手术,其余三组大鼠经心脏冠状动脉左前降支穿线(LAD)缺血处理30 min,再灌注(I/R)120 min。四逆汤组及阳性对照组分别采用四逆汤煎液13 g/(kg•d)、氟伐他汀悬液4 mg/(kg•d)灌肠2周,空白对照组及再灌注损伤组喂服0.9%氯化钠溶液。2周后检测各组大鼠髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。观察各组大鼠心尖组织病理形态,Western blot法检测大鼠左心室心肌组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果:与空白对照组比较,缺血再灌注组、阳性对照组以及四逆汤组大鼠血浆MPO及MDA水平均升高,血浆SOD水平降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。心肌组织出现纤维断裂、炎性浸润、水肿及出血灶等病理改变,RohA、ROCK1、ROCK2表达水平升高(均P<0.05)。心肌组织内Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高,其中阳性对照组与四逆汤组以上指标改善幅度均小于缺血再灌注组,且四逆汤组以上指标改善幅度优于阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:四逆汤通过抑制RhoA/ROCK信号通路活性、抑制细胞凋亡、减轻氧化应激反应,有效减轻IR大鼠心肌损伤程度,发挥心肌保护作用。

鹿茸多肽对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响

目的探讨鹿茸多肽(VAP)对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响。方法APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和鹿茸多肽组,每组20只,另以同窝同性别阴性小鼠20只设立为对照组。鹿茸多肽组小鼠鹿茸多肽100 mg/kg灌胃给药,每天1次,连续28 d。治疗后水迷宫实验检测并记录小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;透射电子显微镜观察突触的超微结构;免疫荧光切片观察海马CA1区Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ)的表达;Western blotting法检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白相对表达量;ELISA法测定海马β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)含量。结果与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组逃避潜伏期均缩短,跨越平台次数增多。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组小鼠海马区突触计数增多,突触间隙宽度减小,突触后致密物厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,对照组和鹿茸多肽组CA1区RhoA和ROCKⅡ表达量减少,Western blotting检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白表达水平也减少(P<0.05)。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组海马Aβ;含量均下降(P<0.05)。结论鹿茸多肽对阿尔茨海默病模型小鼠神经损伤有保护作用,其机制可能通过抑制Rho/ROCK通路中RhoA和ROCKⅡ的表达,促进突触结构的改变和Aβ;含量减少,减轻神经损伤,改善认知功能。

利多卡因调节RhoA/ROCK轴对结直肠癌细胞生物学行为的影响

该文主要探讨利多卡因(lidocaine,Lido)通过调节Ras同源基因家族成员A(Rho A)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)轴对结直肠癌(CRC)细胞生物学行为的影响。该研究使用0~1250μmol/L的利多卡因处理人结直肠癌细胞LS513,CCK-8法检测细胞活力筛选适宜药物浓度。将细胞分为对照组(Control组)、利多卡因低浓度组(Lido-L组,500μmol/L Lido)、利多卡因中浓度组(Lido-M组,750μmol/L Lido)、利多卡因高浓度组(Lido-H组,1000μmol/L Lido)和利多卡因高浓度+ROCK信号通路激活剂LPA组(Lido-H+LPA组,1000μmol/L Lido+10μmol/L LPA)。Edu检测细胞增殖;划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Westernblot检测PCNA、Bax、Bcl-2、RhoA、ROCK1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达情况。该研究得出与0μmol/L利多卡因相比,500μmol/L、750μmol/L、1000μmol/L和1250μmol/L利多卡因处理的LS513细胞活力显著降低(P<0.05),选择500μmol/L、750μmol/L和1000μmol/L的利多卡因进行后续实验。与Control组相比,Lido-L组、Lido-M组和Lido-H组LS513细胞Edu阳性率,划痕愈合率,细胞侵袭数及PCNA、N-cadherin、Bcl-2、RhoA和ROCK 1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率以及E-cadherin和Bax蛋白表达增加(P<0.05);与Lido-H组相比,Lido-H+LPA组LS513细胞Edu阳性率,划痕愈合率,细胞侵袭数及PCNA、N-cadherin、Bcl-2、RhoA和ROCK 1蛋白表达水平显著增加(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin和Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。利多卡因可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞恶性生物学行为。

白芍总苷调节RhoA/ROCK1信号通路对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨白芍总苷通过调节Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(RhoA/ROCK1)信号通路对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法 通过阻断肝动脉和门静脉1 h建立肝缺血再灌注损伤大鼠模型,设假手术组、模型组、白芍总苷(100 mg/kg)组、白芍总苷+Rhosin(100 mg/kg+40 mg/kg)组和白芍总苷+LPA(100 mg/kg+1 mg/kg)组,每组8只。连续治疗6周后,检测各组大鼠血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)];HE、TUNEL染色法观察肝组织病理改变和细胞凋亡,并计算肝损伤评分和凋亡指数(AI);分光光度法检测肝组织中氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量],ELISA检测炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量;通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测肝组织中RhoA、ROCK1、核因子-κB p65(NF-κB p65)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型半胱氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)m RNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,白芍总苷组和白芍总苷+Rhosin组血清ALT、AST、TBiL水平显著降低(P<0.05);肝组织病理改变和细胞凋亡状况均明显改善,肝损伤评分和细胞AI均显著降低(P<0.05);SOD、CAT活性显著升高,MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05);RhoA、ROCK1、NF-κB p65、Bax、C-Caspase-3m RNA和蛋白表达均显著降低,Bcl-2m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与白芍总苷组相比,Rhosin可显著增强白芍总苷对模型大鼠肝功能、肝组织病变、细胞凋亡、氧化应激、炎症及RhoA/ROCK1信号通路相关m RNA和蛋白表达的作用;LPA则显著逆转了上述调控作用。结论 白芍总苷可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路,减轻氧化应激、炎症和细胞凋亡,从而对大鼠肝缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。

消渴通痹方含药血清对高糖损伤后HUVEC细胞骨架及RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:观察消渴通痹方含药血清对高糖损伤后人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)F肌动蛋白(F-actin)、Ras基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RHOA)、Rho相关蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil containing kinase, ROCK)蛋白表达的影响。方法:将高糖损伤后HUVEC模型分为高糖模型组、22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%、15%含药血清组,另设正常对照组,应用免疫荧光法检测F-actin的动态变化,Western blot检测F-actin、ROCK、p-ROCK和RhoA蛋白表达。结果:高糖刺激HUVEC骨架蛋白F-actin聚集到细胞中央,形成大量的应力纤维;22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%含药血清干预后能够改善F-actin的聚集状态,使F-actin重新分布在细胞周边。与正常对照组比较,高糖模型组F-actin积分光密度值升高,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),ROCK蛋白表达明显下调(P<0.05);与高糖模型组比较,22.5 g/kg消渴通痹方5%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显下调(P<0.05),ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05);10%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低、F-actin蛋白表达明显下调(P<0.01或P<0.05),RHOA、ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹方可能通过抑制RHOA/ROCK信号通路的异常激活稳定或保护内皮细胞骨架。

调节膀胱逼尿肌舒缩相关信号通路的研究

膀胱生理功能障碍是控制排尿的中枢神经或周围神经受损害后引起的排尿功能障碍。膀胱正常排尿和储尿功能很大程度上取决于膀胱逼尿肌细胞(DSMC)的舒缩性。膀胱逼尿肌是一种特殊的平滑肌,舒缩性依赖于肌动蛋白细胞骨架的完整性,因此稳定的肌丝结构是保障逼尿肌正常舒缩的基础。本文针对调节膀胱逼尿肌收缩与舒张的相关信号通路进行综述。

小胶质细胞介导慢性偏头痛的发病机制研究进展

小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞,其活化后发生形态改变,释放多种促炎因子,参与中枢敏化并介导疼痛的发生。研究表明,血小板二磷酸腺苷受体亚基12受体-Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路与小胶质细胞活化及形态改变显著相关,并在慢性偏头痛的发生过程中发挥着至关重要的作用。本文就小胶质细胞在慢性偏头痛发生、发展过程中的作用机制进行综述。

基于RhoA/ROCK信号通路研究消渴通痹方含药血清对高糖诱导的HUVEC屏障功能和细胞凋亡的影响

目的:探讨Rho相关蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil containing kinase, ROCK)抑制剂Y27632和消渴通痹方含药血清对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)屏障功能和细胞凋亡的影响。方法:制备消渴通痹方含药血清,将SD大鼠随机分为正常对照组和消渴通痹方22.5 g/kg组,每天灌胃1次,连续7 d。根据葡萄糖的浓度和消渴通痹方含药血清的浓度将实验分为正常对照组、高糖模型组、Y27632 10μmol/L组和消渴通痹方22.5 g/kg 5%、10%、15%含药血清联合Y27632 10μmol/L组。各组细胞传代8代~15代时,应用辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)检测HUVEC的单层通透性,流式细胞术检测HUVEC凋亡,Western blot检测闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)和Ras基因家族成员A (Ras homolog gene family member A, RhoA)、ROCK蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,高糖模型组HRP吸光度、细胞凋亡率、RhoA、p-ROCK/ROCK的比值都显著升高,ZO-1、Occludin蛋白表达显著下调(P<0.01)。与高糖模型组相比,Y27632 10μmol/L组HRP吸光度、细胞凋亡率显著降低(P<0.01),ZO-1、RhoA蛋白表达显著上调(P<0.01);消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组HRP吸光度、细胞凋亡率显著降低、RhoA蛋白表达显著下调(P<0.01),ZO-1、Occludin蛋白表达显著上调(P<0.01);10%、15%消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组p-ROCK/ROCK的比值显著降低(P<0.01)。与Y27632组相比,消渴通痹方22.5 g/kg各浓度含药血清联合Y27632组HRP吸光度、凋亡率明显降低、RhoA蛋白表达明显下调(P<0.01或P<0.05);ZO-1、Occludin蛋白表达上调(P<0.05);15%消渴通痹方22.5 g/kg含药血清联合Y27632组p-ROCK/ROCK的比值降低(P<0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹方能改善高糖诱导的HUVEC细胞屏障功能、降低内皮细胞凋亡、增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。

淫羊藿苷通过调节RhoA/ROCK信号通路改善AD神经元和树突损伤的机制

目的:观察淫羊藿苷对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的作用,并探讨其改善神经元和树突损伤的作用机制。方法:通过对大鼠双侧侧脑室注射β样淀粉蛋白1-42(Aβ_(1-42),2.5 g·L^(-1))建立AD模型,并将大鼠分为模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组(0.03、0.06、0.09 g·kg^(-1)),另设空白组。空白组和模型组按10 mL·kg^(-1)的剂量灌胃等体积的生理盐水。采用Morris水迷宫评估大鼠的认知功能。采用尼氏染色观察大鼠海马CA1区病理形态。采用高尔基染色观察大鼠海马CA1区树突棘密度和树突长度。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、RhoA、ROCK1和ROCK2的m RNA表达水平。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限驻留时间显著减少(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠逃避潜伏期减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限驻留时间增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度显著减少(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、Rho A、ROCK1、ROCK2的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、Rho A、ROCK1、ROCK2的m RNA和蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿苷改善AD认知功能、神经元和树突损伤可能与抑制Rho A/ROCK信号通路相关。

黄芩苷对大鼠膝关节骨性关节炎的炎症调节作用研究

目的研究黄芩苷治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法将60只大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组(用弗氏完全佐剂构建模型)、低剂量实验组(20 mg·kg^(-1)黄芩苷)、高剂量实验组(40 mg·kg^(-1)黄芩苷)和阳性对照组(5 mg·kg^(-1)Rho激酶抑制药Y-27632),每组10只,连续治疗4周。检测大鼠关节肿胀度,并评估Lequesne MG评分;收集关节液和软骨组织,用苏木精-伊红染色法观察大鼠软骨组织病理变化,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测关节液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测软骨组织中Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)、Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)mRNA表达水平,用蛋白质印迹法检测软骨组织中RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平。结果空白对照组、假手术组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性对照组大鼠治疗4周后膝关节直径分别为(9.88±0.34)、(9.96±0.31)、(13.54±0.70)、(13.35±0.54)、(11.89±0.37)和(11.67±0.41)mm,IL-6水平分别为(19.82±1.78)、(20.69±1.84)、(83.26±4.45)、(83.62±4.71)、(42.30±2.98)和(38.44±2.53)pg·mL^(-1),TNF-β水平分别为(8.86±1.41)、(9.45±1.37)、(33.71±2.63)、(34.14±2.83)、(23.71±1.93)和(20.85±1.69)pg·mL^(-1),RhoA mRNA表达水平分别为1.00±0.13、1.04±0.11、1.69±0.26、1.64±0.20、1.24±0.18和1.14±0.17,ROCK1 mRNA表达水平分别为1.00±0.15、1.02±0.12、1.48±0.19、1.53±0.21、1.21±0.17和1.16±0.18,ROCK2 mRNA表达水平分别为1.00±0.14、1.06±0.11、1.41±0.20、1.43±0.18、1.18±0.17和1.15±0.16。模型组与假手术组比较,高剂量实验组与模型组或低剂量实验组比较,阳性对照组与模型组或低剂量实验组比较,上述指标在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论黄芩苷可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻膝骨关节炎大鼠炎性反应。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃肠动力的影响

目的:通过观察逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃组织RAS同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达的影响,探讨其调节肝郁脾虚证大鼠胃肠动力的作用机制。方法:72只SD雄性大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氟西汀组(0.0018 g·kg^(-1))、逍遥散高(16.7 g·kg^(-1))、中(8.35 g·kg^(-1))、低(4.175 g·kg^(-1))剂量组,每组12只。除正常组外,其余各组大鼠采用慢性束缚应激方法造模,造模同时正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^(-1)生理盐水灌胃,各药物组大鼠给予相应剂量的药物灌胃,每日1次,共21 d。造模结束后,测定各组大鼠胃排空率、小肠推进率;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃排空率、小肠推进率及胃组织RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,逍遥散高、中、低剂量组明显升高大鼠胃排空率、小肠推进率及胃组织RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃肠动力的改善可能与上调胃组织RhoA/ROCK信号通路的活性有关。

脓毒症急性肺损伤患者RhoA/ROCK1和NF-κB/NLRP3信号通路及其下游信号分子的变化

目的 分析Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)、核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及其下游信号分子在脓毒症患者急性肺损伤(ALI)中的变化。方法 回顾性分析海口市第四人民医院2018年1月-2020年12月122例脓毒症患者临床资料,其中41例并发ALI(ALI组),81例无ALI(非ALI组),并纳入32名健康体检者作为对照组。脓毒症患者均于入院24 h内收集外周静脉血标本,对照组则收集体检当日外周静脉血。比较3组外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB、NLRP3信使核糖核酸(mRNA)表达水平,并记录NF-κB/NLRP3信号通路上游基因(RhoA、ROCK1)、下游基因[半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及下游炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18];根据肺损伤预测评分(LIPS)将41例并发ALI的脓毒症患者分为LIPS≥7分组,LIPS<7分组,比较两组上述基因mRNA、炎症因子水平,并评估脓毒症并发ALI患者LIPS评分与上述基因mRNA、炎症因子表达水平的相关性。结果 ALI组LIPS评分高于非ALI组(P<0.05)。ALI组与非ALI组PBMCs NF-κB、NLRP3、RhoA、ROCK1、caspase-1 mRNA相对表达水平及血清IL-1β、IL-18高于对照组(P<0.05),ALI组高于非ALI组(P<0.05)。脓毒症并发ALI患者中,LIPS≥7分组PBMCs NF-κB、NLRP3、RhoA、ROCK1、caspase-1 mRNA相对表达水平及血清IL-1β、IL-18高于LIPS<7分组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,LIPS评分与上述各基因mRNA及炎症因子均呈正相关(r=0.389、0.472、0.511、0.539、0.518、0.469、0.457,P均<0.05)。结论 Rho/ROCK、NF-κB/NLRP3信号通路及其下游信号分子可能共同参与了脓毒症ALI的发生发展,临床可针对该发生机制探寻治疗新方向。