miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究

背景与目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。micro RNA-335(mi R-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨mi R-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK1)基因的表达,并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法:理论预测并通过荧光素酶基因报告验证mi R-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region,UTR)的特异性结合作用;real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测mi R-335对ROCK1表达的负性调控作用;Transwell小室法检测mi R-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果:Targetscan预测显示,mi R-335与ROCK1 3'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示,mi R-335 mimic和ROCK1 3'-UTR能够靶向结合;mi R-335在MG-63细胞中低表达,ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示,转染mi R-335 mimic或转染ROCK1 si RNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示,过表达mi R-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论:mi R-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达,抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。

经尿道膀胱肿瘤整块剜除术治疗非肌层浸润性膀胱癌疗效及对血清金属蛋白酶-9、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、环氧合酶-2水平的影响

目的探讨经尿道膀胱肿瘤整块剜除术(ERBT)治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)疗效及对血清金属蛋白酶-9(MMP-9)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rock-2)、环氧合酶-2(Cox-2)水平的影响。方法我院诊治的150例NMIBC患者,按照随机数表法分为研究组与对照组各75例,分别给予ERBT和经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)。比较两组围术期相关指标、手术前后血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平、术后并发症以及预后情况。结果研究组手术时间、膀胱冲洗时间、首次下地时间等围术期指标低于对照组(P<0.05);术前1 d及术后3 d两组间血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后3 d两组上述指标水平均降低(P<0.05);研究组术后并发症发生率及术后1年复发率均低于对照组(P<0.05)。结论ERBT可降低血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平,其治疗NMIBC的效果与TURBT相当,但该术式减少术后并发症,促进患者恢复,并降低术后复发风险,更具有优势。

IgA肾病患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、视黄醇结合蛋白4表达水平及在评估病情和预测预后中的价值研究

目的检测IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(rho associated coiled coil containing protein kinase 2,ROCK2)、视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)表达水平,分析二者在评估患者病情及预测预后中的价值。方法选取2016年6月至2019年6月98例中国贵航集团302医院已确诊收治的IgAN患者为IgAN组,其中轻度IgAN 36例、中度IgAN 32例、重度IgAN 30例;同期选择在中国贵航集团302医院体检的健康者100名为对照组。酶联免疫吸附法检测血清中ROCK2、RBP4水平;采用Kaplan-Meier生存曲线分析ROCK2、RBP4表达水平与IgAN患者预后的关系;Pearson相关性分析ROCK2与RBP4表达相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析ROCK2、RBP4对IgAN的诊断价值;比例风险回归模型法分析IgAN患者预后的影响因素。结果IgAN组血清中ROCK2、RBP4表达水平分别为(24.25±5.31)μg/L、(59.70±9.43)μg/L,显著高于对照组的(15.57±4.16)μg/L、(32.14±7.82)μg/L,差异具有统计学意义(t=12.818、22.404,均P<0.001);轻度、中度、重度IgAN患者血清中ROCK2水平分别为(18.69±4.36)μg/L、(23.75±5.31)μg/L、(31.46±5.62)μg/L,RBP4表达水平分别为(45.37±7.86)μg/L、(62.48±8.12)μg/L、(73.94±8.65)μg/L。随着病情的加重,IgAN患者血清ROCK2、RBP4表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=51.854、102.234,均P<0.05);IgAN患者血清中ROCK2、RBP4表达水平与Lee氏分级、IgA/C3比值、病情程度有关(P<0.05);ROCK2、RBP4高表达组患者预后生存率分别为60.00%、74.19%,均显著低于低表达组的89.71%、91.67%,差异具有统计学意义(log rankχ^(2)=4.674,P=0.031);ROC曲线结果显示,血清ROCK2诊断IgAN的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.889,敏感度为80.61%,特异性为80.00%,截断值为18.79μg/L;RBP4诊断IgAN的AUC为0.986,敏感度为96.94%,特异性为95.00%,截断值为41.31μg/L;二者联合检测的AUC为0.997,敏感度为98.98%,特异性为94.86%。Pearson相关性分析显示,IgAN患者血清ROCK2与RBP4表达水平呈显著正相关(r=0.701,P<0.001);多因素比例风险回归模型法分析表明,IgA/C3(OR=2.683,95%CI:1.060~6.794)、ROCK2(OR=1.831,95%CI:1.027~3.264)、RBP4(OR=1.517,95%CI:1.104~2.084)均是IgAN患者预后生存的影响因素(均P<0.05)。结论ROCK2、RBP4在IgAN患者血清中高表达,二者与IgAN患者的临床病理特征、病情严重程度及预后关系密切,ROCK2、RBP4表达水平对IgAN的诊断具有一定的价值。

2种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶对经皮冠状动脉介入治疗无复流的预测价值

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)1和ROCK2对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)无复流的预测价值。方法选取168例接受PCI的STEMI患者作为研究对象,根据是否发生无复流分为无复流组和血流正常组,并分别根据ROCK1、ROCK2表达情况分为高表达组和低表达组。使用酶联免疫吸附试剂盒检测患者血清ROCK1、ROCK2水平,分析无复流组与血流正常组的血清ROCK1、ROCK2水平差异,分析STEMI患者PCI无复流的危险因素,并分析ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值。结果168例STEMI患者中,46例发生无复流,发生率为27.38%。无复流组的Killip分级、发病至入院时间、未使用预防性无复流药物者占比、血清ROCK1水平、血清ROCK2水平高于或长于血流正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROCK1高表达组的无复流发生率高于ROCK1低表达组,ROCK2高表达组的无复流发生率高于ROCK2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logsitic回归分析显示,Killip分级为Ⅲ~Ⅳ级、发病至入院时间较长、未使用预防性无复流药物、血清ROCK1水平较高、血清ROCK2水平较高均为STEMI患者PCI无复流的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值较高,且两者联用后预测价值提升,曲线下面积为0.789(95%CI:0.711~0.867)。结论血清ROCK1、ROCK2水平较高是STEMI患者PCI无复流的危险因素,两者联合检测对PCI无复流具有较高的预测价值。

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1在大鼠肝纤维化不同阶段表达及意义

目的观察Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（ROCK1）在大鼠肝纤维化过程中不同阶段的表达。方法72只200—250g雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组36只、肝纤维化模型组36只。正常对照组即正常饲养，模型组即腹腔注射四氯化碳，2次／周，剂量2ml／kg。分别在3、6d、2、4、6、8周时间点随机选取6只大鼠处死，苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏组织的病理学变化，观察肝纤维化程度。免疫组织化学方法检测ROCK1的组织定位及表达。利用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测不同时间段ROCK1基因mRNA转录水平的变化。结果免疫组织化学结果显示，给药后3、6d、2、4、6、8周，正常对照组ROCK1阳性表达率分别为11％、15％、13％、11％、17％、14％；模型组ROCK1阳性表达率分别为14％、15％、52％、65％、75％、80％；差异有统计学意义（P=0．001）。Real—timePCR检测显示ROCK1表达量（以对照组为1），模型组表达分别为1．018759、1．381913、1．831238、2．515323、2．257623、2．188587。结论ROCK1在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的过程中，其组织表达水平逐渐升高，说明Rho／ROCK通路可能是肝纤维化发生的另一条重要信号通路。

麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。

飞燕草素调控RhoA/ROCK信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响

目的:探讨飞燕草素调控Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响。方法:将人结肠癌细胞SW620随机分为对照组、飞燕草素低浓度组(含45μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素中浓度组(含90μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度组(含180μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度+RhoA过表达组(转染RhoA过表达质粒+含180μmol/L飞燕草素培养基培养)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、Transwell及划痕实验分别检测SW620细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用流式细胞术检测SW620细胞凋亡情况。血管生成实验检测SW620细胞血管生成拟态形成情况。采用RT-qPCR检测SW620细胞RhoA、ROCK mRNA表达。采用Western blot检测SW620细胞RhoA、ROCK、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与对照组比较,飞燕草素低、中、高浓度组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平呈浓度依赖性降低,凋亡率呈浓度依赖性升高(均P<0.05)。与飞燕草素高浓度组比较,飞燕草素高浓度+RhoA过表达组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:飞燕草素可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减弱结肠癌细胞恶性生物学行为及血管生成拟态形成,并促进细胞凋亡。

AIM2,ROCK1在老年急性冠状动脉综合征患者中的表达及诊断、预后价值

目的探讨黑素瘤缺乏因子2(melanoma deficiency factor 2,AIM2)和Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho associated coiled coil containing protein kinase 1,ROCK1)在老年急性冠状动脉综合征(acute coronary syn⁃drome,ACS)患者中的表达及诊断、预后价值。方法选取2019年12月至2022年12月海军军医大学第一附属医院95例老年ACS患者为ACS组,同期选取健康体检志愿者95名作为对照组。然后对老年ACS患者预后随访6个月,根据主要不良心血管事件(major adverse cardiac events,MACE)发生情况将其分为MACE组28例和未发生MACE组67例。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测AIM2和ROCK1的表达情况;多因素Logistic回归分析老年ACS患者发生MACE的影响因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析AIM2、ROCK1对ACS的诊断效能及发生MACE的预测价值。结果与对照组相比,ACS组患者血清AIM2、ROCK1浓度均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。血清AIM2、ROCK1浓度二者联合诊断ACS的曲线下面积(area under the curve,AUC)最高,优于血清AIM2、ROCK1各自单独诊断(Z二者联合-AIM2=3.308、P<0.001,Z二者联合-ROCK1=4.336、P<0.001)。与未发生MACE组相比,MACE组血清AIM2、ROCK1血清浓度高,且差异有统计学意义(P<0.05);有高血压史患者比例较高,差异有统计学意义(P<0.05)。根据多因素Logistic回归分析结果可以发现,AIM2、ROCK1、高血压史是影响MACE发生的危险因素(P<0.05)。血清AIM2、ROCK1二者联合预测发生MACE的AUC最高,优于血清AIM2、ROCK1各自单独预测(Z二者联合-AIM2=2.828、P=0.005,Z二者联合-ROCK1=2.072、P=0.038)。结论AIM2和ROCK1在老年ACS患者血清中呈高表达状态,且与患者发生MACE密切相关,通过检测AIM2和ROCK1的表达情况可能有助于早期诊断和评估老年ACS患者的预后。

RTN1-C基于Nogo-A/RhoA/ROCK2信号通路对脑卒中模型大鼠认知功能的干预作用

目的分析内质网膜相关蛋白(RTN1-C)基于髓鞘相关生长抑制因子(Nogo-A)/Rho激酶(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)2信号通路对脑卒中模型大鼠认知功能的干预作用。方法选取清洁级健康雄性大鼠48只,随机选取12只为正常组,剩余36只建立脑卒中模型分为模型组(注射等体积生理盐水)、对照组(5μl慢病毒注射,为无意义序列)、RTN1-C干预组(5μl慢病毒注射)各12只。Morris水迷宫检测大鼠的认知功能,网屏测试实验检测四肢抓握能力、疲劳转棒实验检测协调能力、酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,计算大鼠血脑屏障通透性、脑梗死率、脑血流灌流量,显微镜观察大脑皮层完整神经元数目,Western印迹法检测Nogo-A、RhoA、ROCK2蛋白。结果与模型组、对照组相比,RTN1-C干预组潜伏期较短、四肢抓握能力评分较低、行走时间较长;血脑屏障通透性、脑梗死率较小,脑血流灌流量、大脑皮层完整神经元数目较大;SOD水平较高,MDA、ROS水平较低;Nogo-A、RhoA、ROCK2水平较低,均有统计学差异(均P<0.05)。结论RTN1-C可通过调控Nogo-A、RhoA、ROCK2蛋白和SOD、MDA、ROS水平,改善脑卒中大鼠脑损伤程度和应激反应,提高认知功能。

TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究肌原纤维形成调节因子1(MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)途径减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡(P<0.01),下调CHOP表达(P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高(P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡(P<0.01)、CHOP表达上调(P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降(P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化(P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。

地塞米松联合垂体后叶素预防产后出血的效果及对RhoA、ROCK蛋白影响

目的:分析地塞米松联合垂体后叶素预防产后出血效果及对RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)的影响。方法:选择2017年6月-2018年12月本院分娩的88例高危妊娠产妇为研究对象,根据简单随机法分为对照组(n=46)和观察组(n=42)。对照组采用地塞米松,观察组在对照组基础上联合垂体后叶素,比较两组止血效果,干预前后RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白、血压、心率和不良反应。结果:干预后观察组总有效率(97.6%)高于对照组(84.8%),产后2h(172.0±23.2ml)、产后24h出血量(255.1±31.2ml)、产后出血率(2.4%)均低于对照组(287.3±38.7ml、340.2±45.3ml、15.2%),产后24h血红蛋白(121.1±16.0 g/L)高于对照组(113.1±13.3 g/L),RhoA(0.59±0.07 ng/ml)、ROCKⅠ(0.40±0.06 ng/ml)、ROCKⅡ(0.38±0.05 ng/ml)蛋白高于对照组(P<0.05);两组舒张压、收缩压、心率和不良反应发生无差异(P>0.05)。结论:地塞米松联合垂体后叶素可加强子宫收缩,调节RhoA、ROCK蛋白表达,预防宫缩乏力所致的产后出血,且用药安全。

ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β_1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的A549细胞上皮—间质转化(EMT)的抑制作用。方法将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组(用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT)、Y-27632组(对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预)。采用MTT法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子(SRF)、心肌相关转录因子(MATF-A)表达。结果与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调(P均<0.05);Y-27632组能显著抑制上述变化(P均<0.05)。结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力。

pGV141-ROCK2真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

目的:克隆人Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)基因,构建pGV141-ROCK2真核表达载体,并观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)中的表达。方法:以RT-PCR的方法获得ROCK2基因的CDS区,经Xho I、Kpn I双酶切后,连接到pGV141载体中;将构建的pGV141-ROCK2真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将其转染入HUVEC-C中;采用western blot法检测转染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表达情况。结果:PCR法、双酶切法检测到的目标条带与目的条带大小一致,测序结果显示重组质粒中插入的ROCK2基因序列与Gen Bank编码上的编码区完全一致;与未转染重组质粒的HUVEC-C比较,转染pGV141-ROCK2载体的HUVECC中ROCK2蛋白的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建pGV141-ROCK2真核表达载体,体外转染入HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表达显著增加。

ROCK1蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究食管鳞癌组织中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)表达水平,探讨其在食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化S-P法检测60例食管鳞癌标本中ROCK1的表达及分布情况,结合患者的年龄、性别、分期、转移情况,了解ROCK1蛋白表达情况与不同患者临床参数之间的关系。结果:食管鳞癌组织中ROCK1蛋白表达明显高于正常食管组织,ROCK1蛋白在分期较晚及有转移的患者中较高表达,并具有统计学意义(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中,ROCK1蛋白的表达高低与肿瘤的浸润和转移密切相关。

Rho/ROCK2通路在阿尔茨海默病病理进程中的重要作用

Rho/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路是生物体中广泛存在的经典信号通路,参与多种生理调节过程。ROCK有2种亚型,即ROCK1和ROCK2。在阿尔茨海默病(AD)患者脑中,Rho/ROCK2表现为活性上调,并伴有Aβ42水平升高,以及神经细胞突起的形态与功能异常,推测AD的发生、发展与Rho或ROCK2的高表达或过度激活有关。目前Rho/ROCK2通路被认为是预防和治疗AD的一个有效的靶通路,而Rho或ROCK2,也成为药物研发的重要靶点。研究发现,降低Rho或ROCK2的表达,或者抑制Rho或ROCK2的活性均可减少Aβ42诱导的神经毒性,保护神经元,减缓AD的发展。因此,Rho/ROCK2的特异性抑制对中枢神经损伤修复及AD的治疗有重要的意义。为此,本文针对Rho/ROCK2通路在阿尔茨海默病发展中的作用做一综述。

鹿茸多肽对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响

目的探讨鹿茸多肽(VAP)对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响。方法APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和鹿茸多肽组,每组20只,另以同窝同性别阴性小鼠20只设立为对照组。鹿茸多肽组小鼠鹿茸多肽100 mg/kg灌胃给药,每天1次,连续28 d。治疗后水迷宫实验检测并记录小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;透射电子显微镜观察突触的超微结构;免疫荧光切片观察海马CA1区Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ)的表达;Western blotting法检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白相对表达量;ELISA法测定海马β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)含量。结果与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组逃避潜伏期均缩短,跨越平台次数增多。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组小鼠海马区突触计数增多,突触间隙宽度减小,突触后致密物厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,对照组和鹿茸多肽组CA1区RhoA和ROCKⅡ表达量减少,Western blotting检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白表达水平也减少(P<0.05)。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组海马Aβ;含量均下降(P<0.05)。结论鹿茸多肽对阿尔茨海默病模型小鼠神经损伤有保护作用,其机制可能通过抑制Rho/ROCK通路中RhoA和ROCKⅡ的表达,促进突触结构的改变和Aβ;含量减少,减轻神经损伤,改善认知功能。

右美托咪定对结肠癌模型大鼠的治疗作用及对RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的:探讨右美托咪定对结肠癌模型大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法:通过1,2-二甲肼诱导建立结肠癌大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组,右美托咪定低(25μg/kg)、中(50μg/kg)和高(100μg/kg)剂量组,每组6只。另取6只未造模大鼠作为正常组。各组大鼠给予相应药物处理4周,观察大鼠的一般状况;检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;解剖观察肿瘤的生长和分布情况;采用苏木精-伊红染色观察病理学变化;检测正常结肠组织和结肠癌组织中RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果:正常组大鼠体重随时间增长,结肠组织结构正常,无炎症细胞浸润;模型组大鼠体重增长缓慢,肛门红肿溃破、大便稀溏,结肠上可见突出肿瘤组织,结肠组织结构异常,炎症细胞浸润程度严重;右美托咪定低、中和高剂量组大鼠体重均高于模型组,肠壁糜烂出血情况有不同程度的减轻,结肠组织结构相比于模型组较为完整,炎症细胞浸润程度有所降低。相较于正常组,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平以及结肠癌组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);相较于模型组,右美托咪定低、中和高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平以及结肠癌组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:右美托咪定对结肠癌大鼠具有一定的治疗作用,可能与其抑制RhoA/ROCK1通路有关。

Rho激酶抑制剂在常见眼科疾病治疗中的作用机制研究进展

眼科疾病的发生发展与细胞生理功能和眼组织功能异常密切相关。Rho激酶抑制剂可参与多种细胞事件,包括诱导细胞骨架重组、细胞黏附、细胞增殖和血管生成,并可在细胞周期进展、细胞分化和细胞凋亡中发挥作用。Rho激酶抑制剂治疗青光眼的有效性在临床观察中已得到证实,一些动物及细胞实验中亦发现其对糖尿病视网膜疾病、增殖性视网膜疾病、角膜内皮功能障碍及角膜新生血管有良好的治疗作用。深入探讨Rho激酶抑制剂在眼部疾病发生发展中的作用机制,或可对眼部疾病的治疗有较好的帮助和促进作用。