Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2及转化生长因子1的相关性

目的研究Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2(MMP2)、转化生长因子1(TGF-β1)的相关性。方法选择30只载脂蛋白E基因敲除小鼠为实验组,高脂饲料喂养,另选30只C57BL/6小鼠为对照组,普通饲料喂养。在喂养的第10、16、22、28及34周,取眼球血监测小鼠血脂水平;取小鼠腹主动脉作为标本,包埋切片并进行苏木精-伊红染色观察血管壁形态;应用免疫组化染色观察血管壁中ROCK1、MMP2、TGF-β1的表达;使用Image Pro Plus 6.0软件测量切片中血管壁厚度、斑块面积、血管壁中ROCK1、MMP2及TGF-β1的表达量。采用SPSS 27.0统计软件进行数据分析。采用单因素方差分析进行组间比较,两两比较采用Tukey检验。采用Pearson相关与线性回归分析ROCK1与血管壁厚度及斑块面积、MMP2、TGF-β1的关系。结果成功建立动脉粥样硬化小鼠模型。在喂养第10、16、22、28及34周,实验组血脂水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。自喂养第16周起,实验组小鼠血管内均有斑块形成,随着喂养时间的延长,斑块面积和血管壁厚度不断增加,差异有统计学意义(P<0.05);血管壁内ROCK1的表达逐步增高,其表达与斑块面积及血管壁厚度呈正相关(r=0.821,0.730;P<0.05)。线性相关分析及回归分析显示,ROCK1与MMP2、TGF-β1表达均呈正相关(r=0.801,0.906;P<0.05)。结论在动脉粥样硬化血管壁中存在ROCK1蛋白的表达,且表达量随着血管壁厚度增加而增高,ROCK1的表达与MMP2、TGF-β1呈显著正相关性。鉴于ROCK1蛋白的致血管痉挛作用,提示动脉粥样硬化血管壁可能易于痉挛,具体机制需进一步研究。

IgA肾病患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、视黄醇结合蛋白4表达水平及在评估病情和预测预后中的价值研究

目的检测IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(rho associated coiled coil containing protein kinase 2,ROCK2)、视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)表达水平,分析二者在评估患者病情及预测预后中的价值。方法选取2016年6月至2019年6月98例中国贵航集团302医院已确诊收治的IgAN患者为IgAN组,其中轻度IgAN 36例、中度IgAN 32例、重度IgAN 30例;同期选择在中国贵航集团302医院体检的健康者100名为对照组。酶联免疫吸附法检测血清中ROCK2、RBP4水平;采用Kaplan-Meier生存曲线分析ROCK2、RBP4表达水平与IgAN患者预后的关系;Pearson相关性分析ROCK2与RBP4表达相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析ROCK2、RBP4对IgAN的诊断价值;比例风险回归模型法分析IgAN患者预后的影响因素。结果IgAN组血清中ROCK2、RBP4表达水平分别为(24.25±5.31)μg/L、(59.70±9.43)μg/L,显著高于对照组的(15.57±4.16)μg/L、(32.14±7.82)μg/L,差异具有统计学意义(t=12.818、22.404,均P<0.001);轻度、中度、重度IgAN患者血清中ROCK2水平分别为(18.69±4.36)μg/L、(23.75±5.31)μg/L、(31.46±5.62)μg/L,RBP4表达水平分别为(45.37±7.86)μg/L、(62.48±8.12)μg/L、(73.94±8.65)μg/L。随着病情的加重,IgAN患者血清ROCK2、RBP4表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=51.854、102.234,均P<0.05);IgAN患者血清中ROCK2、RBP4表达水平与Lee氏分级、IgA/C3比值、病情程度有关(P<0.05);ROCK2、RBP4高表达组患者预后生存率分别为60.00%、74.19%,均显著低于低表达组的89.71%、91.67%,差异具有统计学意义(log rankχ^(2)=4.674,P=0.031);ROC曲线结果显示,血清ROCK2诊断IgAN的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.889,敏感度为80.61%,特异性为80.00%,截断值为18.79μg/L;RBP4诊断IgAN的AUC为0.986,敏感度为96.94%,特异性为95.00%,截断值为41.31μg/L;二者联合检测的AUC为0.997,敏感度为98.98%,特异性为94.86%。Pearson相关性分析显示,IgAN患者血清ROCK2与RBP4表达水平呈显著正相关(r=0.701,P<0.001);多因素比例风险回归模型法分析表明,IgA/C3(OR=2.683,95%CI:1.060~6.794)、ROCK2(OR=1.831,95%CI:1.027~3.264)、RBP4(OR=1.517,95%CI:1.104~2.084)均是IgAN患者预后生存的影响因素(均P<0.05)。结论ROCK2、RBP4在IgAN患者血清中高表达,二者与IgAN患者的临床病理特征、病情严重程度及预后关系密切,ROCK2、RBP4表达水平对IgAN的诊断具有一定的价值。

2种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶对经皮冠状动脉介入治疗无复流的预测价值

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)1和ROCK2对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)无复流的预测价值。方法选取168例接受PCI的STEMI患者作为研究对象,根据是否发生无复流分为无复流组和血流正常组,并分别根据ROCK1、ROCK2表达情况分为高表达组和低表达组。使用酶联免疫吸附试剂盒检测患者血清ROCK1、ROCK2水平,分析无复流组与血流正常组的血清ROCK1、ROCK2水平差异,分析STEMI患者PCI无复流的危险因素,并分析ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值。结果168例STEMI患者中,46例发生无复流,发生率为27.38%。无复流组的Killip分级、发病至入院时间、未使用预防性无复流药物者占比、血清ROCK1水平、血清ROCK2水平高于或长于血流正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROCK1高表达组的无复流发生率高于ROCK1低表达组,ROCK2高表达组的无复流发生率高于ROCK2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logsitic回归分析显示,Killip分级为Ⅲ~Ⅳ级、发病至入院时间较长、未使用预防性无复流药物、血清ROCK1水平较高、血清ROCK2水平较高均为STEMI患者PCI无复流的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值较高,且两者联用后预测价值提升,曲线下面积为0.789(95%CI:0.711~0.867)。结论血清ROCK1、ROCK2水平较高是STEMI患者PCI无复流的危险因素,两者联合检测对PCI无复流具有较高的预测价值。

Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1的表达与老年慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压患者肺动脉压的相关性

目的探讨Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的表达与老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发肺动脉高压(PHT)患者肺动脉压(PAP)的相关性。方法 78例COPD患者依据患者是否并发PHT分为观察组(COPD并发PHT组)38例和对照组(单纯COPD组)40例,比较2组患者PAP、ROCK1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平,并对ROCK1水平与COPD并发PHT患者PAP的相关性进行分析。结果观察组患者PAP、单核细胞ROCK1及血清ROCK1、TNF-α、CRP水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。COPD并发PHT患者的血清和单核细胞ROCK1水平与PAP呈正相关(P<0.001)。结论血清和单核细胞内ROCK1表达升高可能与COPD患者出现PHT有关,ROCK1可以作为干预COPD向PHT进展的新靶点。

经尿道膀胱肿瘤整块剜除术治疗非肌层浸润性膀胱癌疗效及对血清金属蛋白酶-9、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、环氧合酶-2水平的影响

目的探讨经尿道膀胱肿瘤整块剜除术(ERBT)治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)疗效及对血清金属蛋白酶-9(MMP-9)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rock-2)、环氧合酶-2(Cox-2)水平的影响。方法我院诊治的150例NMIBC患者,按照随机数表法分为研究组与对照组各75例,分别给予ERBT和经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)。比较两组围术期相关指标、手术前后血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平、术后并发症以及预后情况。结果研究组手术时间、膀胱冲洗时间、首次下地时间等围术期指标低于对照组(P<0.05);术前1 d及术后3 d两组间血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后3 d两组上述指标水平均降低(P<0.05);研究组术后并发症发生率及术后1年复发率均低于对照组(P<0.05)。结论ERBT可降低血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平,其治疗NMIBC的效果与TURBT相当,但该术式减少术后并发症,促进患者恢复,并降低术后复发风险,更具有优势。

Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路阻断剂Y-27632对大鼠脂肪组织源性干细胞向神经元样细胞分化的诱导作用

目的：研究Y-27632对大鼠脂肪间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化作用.方法：原代培养大鼠脂肪间充质干细胞,将3～6代细胞随机分成4组,无血清对照组、无血清诱导组、血清对照组、血清诱导组.采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性核心抗原（NeuN）、血清应答因子（SRF）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin的表达,免疫印迹检测SRF、vimentin的表达.结果：在无血清情况下,Y-27632能够诱导脂肪组织源性干细胞（ADSCs）出现典型的神经元样细胞形态,免疫细胞化学检测显示神经元特异性蛋白巢蛋白、NeuN的阳性表达；而在10％血清条件下,这种诱导效应被抑制,巢蛋白、NeuN无阳性表达.免疫细胞化学染色显示无血清条件下,Y-27632能够显著抑制α-SMA的表达,同时SRF和vimentin也具有较强的阳性表达.免疫印迹检测显示无论是否存在血清,Y-27632均能够抑制SRF的表达；vimentin在无血清＋Y-27632组表达高于其他各组.结论：Y-27632能够诱导ADSCs向神经元样细胞分化并伴随神经特异标记物的表达.

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路与脑梗死关系的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A（Ras homolog gene family member A,Rho A）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK）信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运动、增殖、分化等,同时其与动脉粥样硬化、脑梗死、缺血-再灌注损伤的发生发展密切相关[1]。

Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

ROCK2和KLF6在急性缺血性脑卒中的表达变化及其与病情程度和预后的相关性

目的探究Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)和Krüppel样因子6(KLF6)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清表达变化及其与病情程度和预后的相关性。方法选取2021年1月至2023年3月在我院确诊的117例AIS患者作为研究组,另选120例在我院同期体检健康者作为对照组。根据美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分,将患者分为轻度(46例)、中度(40例)、重度(31例)组。根据改良Rankin量表将患者分为预后良好(74例)和预后不良(43例)组。酶联免疫吸附试验测定血清ROCK2和KLF6水平。Spearman分析ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分的关系;多因素Logistic回归分析AIS患者预后不良的危险因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ROCK2和KLF6水平对AIS患者预后不良的预测价值。结果与对照组相比,研究组ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05),与中度组相比,重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05)。相关性分析结果显示,ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.605,0.632,P<0.001)。与预后良好组相比,预后不良组患者ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。ROCK2、KLF6单独及联合预测AIS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.886(95%CI 0.822~0.949)、0.850(95%CI 0.770~0.930)、0.954(95%CI 0.919~0.988)。预后良好组与预后不良组患者总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及NIHSS评分比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示TG水平、NIHSS评分、ROCK2和KLF6是AIS患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论AIS患者ROCK2和KLF6表达上调,其水平与病情程度及预后不良密切相关。

Rho激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1在大鼠肝纤维化不同阶段表达及意义

目的观察Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（ROCK1）在大鼠肝纤维化过程中不同阶段的表达。方法72只200—250g雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组36只、肝纤维化模型组36只。正常对照组即正常饲养，模型组即腹腔注射四氯化碳，2次／周，剂量2ml／kg。分别在3、6d、2、4、6、8周时间点随机选取6只大鼠处死，苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏组织的病理学变化，观察肝纤维化程度。免疫组织化学方法检测ROCK1的组织定位及表达。利用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测不同时间段ROCK1基因mRNA转录水平的变化。结果免疫组织化学结果显示，给药后3、6d、2、4、6、8周，正常对照组ROCK1阳性表达率分别为11％、15％、13％、11％、17％、14％；模型组ROCK1阳性表达率分别为14％、15％、52％、65％、75％、80％；差异有统计学意义（P=0．001）。Real—timePCR检测显示ROCK1表达量（以对照组为1），模型组表达分别为1．018759、1．381913、1．831238、2．515323、2．257623、2．188587。结论ROCK1在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的过程中，其组织表达水平逐渐升高，说明Rho／ROCK通路可能是肝纤维化发生的另一条重要信号通路。

FBXW7和RhoA/Rho激酶蛋白表达参与糖尿病大鼠心肌纤维化

目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建立1型糖尿病大鼠模型,分别于2,4,8,12和16周进行检测。HE染色观察大鼠心脏组织形态变化;Masson染色和测定心肌羟脯氨酸(HYP)含量观察心肌胶原沉积程度;ELISA法检测血清中FBXW7,转化生长因子β_1(TGF-β_1)和结缔组织生长因子(CTGF)的含量;Western蛋白印迹和免疫组化法检测心肌中FBXW7,RhoA和ROCK1蛋白的表达。结果显微镜下可见糖尿病模型组大鼠心肌不同程度局灶性心肌细胞变性、坏死和纤维组织增生等。与正常对照组相比,4～16周时,模型组大鼠心肌组织中胶原沉积面积和胶原含量显著升高(P<0.05,P<0.01),呈递增趋势;2～4周时,大鼠血清中FBXW7含量显著增加(P<0.01),第8周时降低,但仍显著高于正常对照组(P<0.01);8～16周时,大鼠血清中TGF-β_1和CTGF含量逐渐升高(P<0.01)。Western蛋白印迹和免疫组化结果显示,模型组大鼠心肌RhoA和ROCK1蛋白表达在各时间点均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);2～12周模型组大鼠心肌FBXW7表达较正常对照组显著升高(P<0.01,P<0.01),第4周表达最高,8～16周表达下降,与时间呈负相关(r=-0.988,P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 FBXW7和RhoA/Rho激酶参与糖尿病大鼠心肌纤维化的发生发展,可能成为治疗糖尿病心肌病的靶点。

Rho激酶抑制剂在常见眼科疾病治疗中的作用机制研究进展

眼科疾病的发生发展与细胞生理功能和眼组织功能异常密切相关。Rho激酶抑制剂可参与多种细胞事件,包括诱导细胞骨架重组、细胞黏附、细胞增殖和血管生成,并可在细胞周期进展、细胞分化和细胞凋亡中发挥作用。Rho激酶抑制剂治疗青光眼的有效性在临床观察中已得到证实,一些动物及细胞实验中亦发现其对糖尿病视网膜疾病、增殖性视网膜疾病、角膜内皮功能障碍及角膜新生血管有良好的治疗作用。深入探讨Rho激酶抑制剂在眼部疾病发生发展中的作用机制,或可对眼部疾病的治疗有较好的帮助和促进作用。

Ras超家族亚群A/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞成骨分化的作用机制

目的探讨Ras超家族亚群A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rock-1)在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用机制。方法取8只雄性大鼠(购自上海西普尔必凯动物实验有限公司)的主动脉瓣膜消化培养至第3代后免疫荧光鉴定。小干扰RNA(siRNA)-RhoA转染VICs后用无机磷酸盐成骨培养基(IP-OIM)分别诱导转染组(RNAi),阴性对照组(NC)及空白对照组(CON)的成骨分化,并通过蛋白质印迹法(Western blot)与聚合酶链反应(PCR)评估转染后RhoA、Rock-1、Runt相关转录因子2(Runx-2)及骨钙素(OST)的变化;7 d行碱性磷酸酶(ALP)活性相关检测,14 d行钙含量相关检测评估其早期与晚期成骨分化趋势。用IP-OIM刺激转染后的VICs 60 min,并通过Western blot检测SMAD1/5/9的磷酸化变化。采用单因素方差分析。结果鉴定后的VICs转染siRNA-RhoA并用IP-OIM培养,经过Western blot及PCR检测后可知RNAi的RhoA(Western blot:0.330±0.020;PCR:0.357±0.060)及Rock-1(Western blot:0.366±0.020;PCR:0.383±0.040)比CON均出现表达下调(RhoA Western blot:t=36.680,P<0.05 PCR:t=10.610,P<0.05;Rock-1 Western blot:t=31.240,P<0.05 PCR:t=13.210,P<0.05),差异有统计学意义,RNAi的OST(Western blot:0.520±0.030;PCR:0.510±0.070)和Runx-2(Western blot:0.573±0.020;PCR:0.57±0.060)比CON也出现了下降(OST Western blot:t=16.630,P<0.05;PCR:t=6.970,P<0.05;Runx-2 Western blot:t=21.040,P<0.05;PCR:t=6.710,P<0.05),差异有统计学意义。在7 d的ALP染色中RNAi的颜色最浅,ALP活性检测中RNAi[(1.005±0.101)U/mg]活性比较NC[(2.042±0.116)U/mg]和CON[(1.931±0.136)U/mg]明显下降(t=10.570,P<0.05;t=9.400,P<0.05),差异有统计学意义。在14 d的相对钙含量测定中RNAi[(22.290±1.981)ng/L]钙含量比较NC[(41.100±2.440)ng/L]和CON[(41.760±1.215)ng/L]明显下降(t=10.530,P<0.05;t=14.510,P<0.05),差异有统计学意义;同样茜素红钙沉积染色中,也是RNAi颜色最浅。经IP-OIM分别刺激60 min,RNAi的SMAD1/5/9的磷酸化水平(0.337±0.030)比CON明显下降(t=25.480,P<0.05),差异有统计学意义。结论无机磷酸盐可通过RhoA/Rock-1引起瓣膜间质细胞的成骨分化,SMAD1/5/9的磷酸化在此过程中起重要作用。

芍药苷调控RhoA/ROCK2通路对阿尔茨海默病大鼠认知功能障碍的影响

目的探索芍药苷调控Ras同源基因家族成员(Rho)A/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)2通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能障碍的影响。方法取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芍药苷(20 mg/kg)组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、芍药苷(20 mg/kg)+Rhosin(40 mg/kg)组,除假手术组外,向其余各组大鼠海马CA1区注入β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1~42)多肽诱导建立AD模型,以药物分组干预后,通过Morris水迷宫实验测定各组大鼠逃避潜伏期,以评测其认知功能;通过苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠海马组织病理形态变化;通过试剂盒检测海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及血清致炎因子白细胞介素(IL)-6和干扰素(IFN)_(-γ)含量;通过Western印迹实验检测各组海马组织RhoA/ROCK2通路蛋白RhoA、ROCK2的表达水平。结果与假手术组相比,模型组神经元细胞结构萎缩,变性死亡,排列紊乱疏松,数目明显减少,海马组织呈现明显损伤,海马组织SOD含量显著降低(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物干预组海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与芍药苷组、Rhosin组分别相比,芍药苷+Rhosin组大鼠海马组织病理损伤均减轻,海马组织SOD含量均显著升高(P<0.05),逃避潜伏期、海马组织ROS及MDA含量、血清IL-6和IFN_(-γ)含量、海马组织RhoA及ROCK2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论芍药苷可能通过抑制RhoA/ROCK2通路激活,减弱AD大鼠氧化应激与炎症反应,缓解其海马组织病理损伤,提高大鼠学习记忆能力,改善其认知功能障碍。

Rho激酶抑制剂在神经退行性疾病中应用

人体中的Ros同源类似物(Rho)相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)简称为Rho相关激酶(ROK),属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,相对分子质量约为160 kD。1996年,ROCK作为Rho蛋白(又称Rho.GTP蛋白)下游的一个肌动蛋白细胞骨架的调节因子首次被发现。在哺乳动物体内, ROCK存在两种亚型,ROCK1与ROCK2,它们具有不同的分布特点,一级结构的同源性约为65%,但它们具有非常相似的空间构象和功能域的空间排布。

天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质中RhoA和ROCK-2蛋白表达的影响

目的研究天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK-2)表达的影响。方法大脑中动脉阻塞法(MCAO)造模后,天麻素组腹腔注射天麻素制剂治疗,其他组不加干预。采用Nissl染色观察缺血侧额叶皮质神经细胞变化情况;免疫组化和Western blot检测缺血侧额叶皮质中RhoA、ROCK-2蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,模型组缺血侧额叶皮质区细胞胞体明显萎缩,胞质减少,部分胞核固缩;Nissl染色细胞数减少(P<0.001);RhoA和ROCK-2蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,天麻素组缺血侧额叶皮质细胞萎缩程度减轻;Nissl染色细胞数增加(P<0.05);RhoA和ROCK-2蛋白表达减少(P<0.05)。结论天麻素可对脑缺血后缺血侧额叶皮质发挥保护作用,其机制可能与抑制RhoA、ROCK-2蛋白表达有关。

对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变

目的探讨对香豆酸(p-CA)对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法将大鼠分为6组:对照组(n=10)、DN组(n=10)、低剂量对香豆酸组(L-p-CA)(n=10)、中剂量对香豆酸组(M-p-CA)(n=10)、高剂量对香豆酸组(H-p-CA)(n=10)和RhoA激动剂U-46619组(U-46619)(n=12)。对照组大鼠为健康SD大鼠,其他组大鼠均为高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠。造模后,对照组和DN组大鼠灌胃2 mL 0.5%羧甲基纤维素溶液,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠分别灌胃2 mL剂量为50,100,200 mg/(kg·d)的对香豆酸溶液,U-46619组大鼠同时灌胃1 mL对香豆酸溶液(剂量为200 mg/(kg·d))以及1 mL剂量为30μg/(kg·d)的RhoA激动剂U-46619。各组大鼠均干预12周。治疗后检测各组大鼠生化指标水平:空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和24 h尿蛋白;以及血清氧化应激指标水平:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)。通过苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色评价大鼠肾脏损伤和纤维化。通过qRT-PCR检测肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)转录活性。通过Western blot检测肾脏TNF-α、IL-1β、MCP-1、RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果与对照组比较,DN组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平升高(P<0.05);肾组织发生明显病变,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与DN组比较,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与L-p-CA组和M-p-CA组比较,H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与H-p-CA组比较,U-46619组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平均升高(P<0.05);肾组织病变加重,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变。

特发性膜性肾病患者血清ROCK2、renalase水平及其诊断价值

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2)、肾胺酶(renalase)在特发性膜性肾病(IMN)患者血清中的表达变化及其对IMN的诊断价值。方法选取2019年1月—2020年11月河北以岭医院肾病科收治IMN患者120例为IMN组,另选取同期医院进行健康体检的志愿者120例为健康对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清ROCK2、renalase水平,Pearson法分析ROCK2、renalase水平与部分临床指标的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ROCK2、renalase及二者联合诊断IMN的价值。结果IMN组ROCK2、renalase水平均显著高于健康对照组(t/P=12.837/<0.001、11.066/<0.001)。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期IMN患者血清ROCK2逐次升高(F/P=77.154/<0.001),而Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期血清renalase水平逐次升高,但Ⅳ期血清renalase水平低于Ⅲ期(F/P=163.042/<0.001)。Alb与血清ROCK2、renalase水平呈负相关(r/P=-0.302/0.009、-0.402/<0.001),PLA2R抗体、BUN、SCr、24 h尿蛋白与血清ROCK2、renalase水平均呈正相关(r/P=0.336/<0.001、0.264/0.011、0.315/0.007、0.320/<0.001,0.359/<0.001、0.284/0.010、0.420/<0.001、0.412/<0.001);ROC曲线显示:血清ROCK2、renalase及二者联合诊断IMN的AUC分别为0.908、0.907、0.965,二者联合优于各自单独预测效能(Z=3.597,3.755,P均<0.001)。结论ROCK2与renalase在IMN患者血清中均高表达,二者联合诊断IMN的价值较高。

麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。