Rho相关结构域BTB蛋白质1基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织芯片中Rho相关结构域BTB蛋白质1（RhoBTB1）的表达与临床病理特征的相关性及其临床意义.方法 采用组织芯片技术建立67例胃癌患者的组织芯片,应用免疫组织化学技术检测芯片中RhoBTB1的表达.结果 RhoBTB1在胃癌组织中表达的阳性率低于癌旁黏膜组织[（53±29）％比（63±28）％,Z=2.59,P＜0.05];根据临床病理资料,胃癌组织中RhoBTB1的表达高低与病理分级明显相关,低/未分化腺癌RhoBTB1基因的阳性表达率低于中/高分化腺癌[（38±26）％比（65±25）％,Z=4.10,P＜0.05],但其表达与性别、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、脉管转移及远处转移等因素无明显相关（P＞0.05）;RhoBTB1的表达与年龄、淋巴结转移数目和肿瘤大小等无明显相关（P＞0.05）.结论 RhoBTB1可能是与胃癌发生相关的候选抑癌基因,检测该基因的表达有助于评估胃癌的生物学行为和预后.

四君子汤对慢性肾脏病-蛋白质能量消耗模型小鼠的改善作用及机制研究

目的:研究四君子汤对慢性肾脏病-蛋白质能量消耗(CKD-PEW)模型小鼠骨骼肌萎缩的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将80只小鼠随机分为假手术组(n=10)和造模组(n=70)。造模组小鼠采用切除5/6肾联合低蛋白(4%酪蛋白)饮食法建立CKD-PEW模型。将造模成功的50只小鼠随机分为模型组,四君子汤低、中、高剂量组[2.34、4.68、9.36 g/(kg·d),以生药量计]和复方α-酮酸片组[阳性对照,1 g/(kg·d)],每组10只。各给药组小鼠灌胃相应药物,假手术组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续灌胃14 d。末次给药后,称定小鼠体质量、左侧胫骨前肌(TA)湿质量,并测定TA横截面积;检测小鼠TA蛋白合成与分解代谢情况;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测小鼠TA中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及胱天蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;采用Western blotting法检测小鼠TA中肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)、肌环指蛋白1(MuRF-1)、Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)、磷酸化肿瘤抑制基因(p-PTEN)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组小鼠的体质量、TA湿质量、TA蛋白合成代谢能力以及PI3K、p-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05),TA横截面积显著减小(P<0.05),TA蛋白分解代谢能力、Bax/Bcl-2比值、Caspase-3 mRNA表达水平和Atrogin-1、MuRF-1、ROCK1、p-PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,四君子汤中、高剂量组和复方α-酮酸片组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05)。结论:四君子汤能够增加CKD-PEW模型小鼠体质量,抑制其骨骼肌萎缩;其机制可能与调控ROCK1/PTEN/Akt信号通路,抑制Atrogin-1和MuRF-1表达有关。

死亡结构域相关蛋白对卵巢癌细胞周期及化疗影响的研究

目的探索在卵巢癌细胞中下调死亡结构域相关蛋白(Daxx)后对其细胞周期及化疗耐药的影响。方法转染卵巢癌耐药细胞株C13k后分为阴性对照组(NC组)和下调Daxx组(siDaxx组)。设立多柔比星药物浓度梯度0、0.15、0.30、0.60μmol/L,流式细胞仪检测上述两组细胞周期变化。Western blot从蛋白水平检测细胞周期及凋亡相关蛋白cyclinB1、cleaved-parp的表达变化。流式细胞仪检测上述两组细胞凋亡的变化。结果在多柔比星0.30μmol/L时,下调Daxx蛋白使细胞发生明显的G2/M期阻滞,与NC组比较,siDaxx组G2/M期细胞百分比明显增高(P<0.05)。下调Daxx蛋白使细胞对多柔比星化疗耐药。结论 Daxx对卵巢癌化疗的影响可能与Daxx对细胞周期的调控作用有关。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

miR-142-3p靶向调控RHOBTB3基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响

目的观察肺癌组织miR-142-3p表达变化,探讨miR-142-3p靶向调控Rho相关结构域BTB蛋白质3(Rho-related BTB domain-containing protein 3,RHOBTB3)基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响。方法肺癌患者35例,均行手术治疗,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p及RHOBTB3 mRNA相对表达量。将对数生长期A549细胞分为miR-142-3p组和对照组,分别转染表达miR-142-3p的慢病毒和阴性对照慢病毒,转染48 h时采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p相对表达量。筛选出稳定转染的miR-142-3p组A549细胞分为稳转miR-142-3p组和miR-142-3p+RHOBTB3组,稳定转染的对照组A549细胞分为稳转对照组和RHOBTB3组,miR-142-3p+RHOBTB3组、RHOBTB3组采用脂质体转染法转染表达RHOBTB3的质粒,稳转miR-142-3p组、稳转对照组不做处理。转染48 h, 4组采用Western blot法检测RHOBTB3蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测培养96 h时细胞增殖率,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-142-3p靶向结合RHOBTB3基因。结果肺癌组织miR-142-3p相对表达量(0.58±0.27)低于癌旁组织(1.06±0.34)(t=-6.508,P<0.001),RHOBTB3 mRNA相对表达量(1.24±0.32)高于癌旁组织(0.51±0.29)(t=10.020,P<0.001)。miR-142-3p组细胞miR-142-3p相对表达量(9.45±1.80)高于对照组(1.05±0.32)(t=11.240,P<0.001)。稳转miR-142-3p组RHOBTB3蛋白相对表达量(0.47±0.05)、细胞增殖率[(48.56±9.97)%]及细胞克隆形成数目[(47.00±8.39)个]均低于稳转对照组[0.79±0.07、(100.00±8.71)%、(165.67±13.92)个]和miR-142-3p+RHOBTB3组[0.77±0.06、(95.82±9.79)%、(141.33±12.88)个](P<0.05),RHOBTB3组RHOBTB3蛋白相对表达量(1.20±0.12)、细胞增殖率[(153.23±18.29)%]及细胞克隆形成数目[(267.83±23.25)个]均高于miR-142-3p+RHOBTB3组(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-3p+pMIR WT组荧光素酶活性(0.41±0.05)低于NC+pMIR WT组(1.01±0.12)(t=11.220,P<0.001),miR-142-3p+pMIRMUT组荧光素酶活性(0.95±0.09)与NC+pMIRMUT组(1.02±0.09)比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.216)。结论肺癌组织miR-142-3p表达下调、RHOBTB3表达上调,miR-142-3p可靶向RHOBTB3基因抑制肺癌A549细胞增殖。