含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)及其相关因子在T细胞分化及功能中的作用

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)是CD4谱系分化中的关键转录因子,并抑制CD8谱系生成。ThPOK蛋白表达促进CD4谱系分化,维持CD4谱系稳定性,并抑制CD8谱系分化。首先在胸腺内,ThPOK基因表达受T细胞受体(TCR)信号、基因增强子、基因沉默子等调节,且ThPOK表达受GATA结合蛋白3(GATA3)、Runt相关转录因子3(Runx3)、白血病/淋巴瘤相关因子(LRF)、胸腺细胞选择相关性高迁移率族盒基因(TOX)、Myc关联的锌指蛋白相关因子(MAZR)、E1A结合蛋白p300(P300)等转录因子影响,进而影响CD4、CD8谱系分化。而在外周T细胞中,ThPOK影响CD_4^+T细胞亚群、CD_8^+T细胞分化及功能。在此基础上,正逐步展开针对外周疾病中ThPOK作用的研究。

微小RNA-141-3p靶向调控含CUE结构域蛋白2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的 探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至2019年12月,从美国ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 雨蛙素干预处理后AR42J细胞中miR-141-3p的表达水平显著升高[(2.43±0.24)比(1.00±0.09)],CUEDC2的表达水平显著降低。miR-141-3p靶向负性调控CUEDC2表达。与转anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(136.54±14.58)ng/L比(226.48±20.54)ng/L]和IL-6[(115.89±11.65)ng/L比(193.47±18.63)ng/L]的分泌显著降低;与转染pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(158.74±15.32)ng/L比(236.87±18.66)ng/L]和IL-6[(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L]的分泌显著降低;转染si-CUEDC2可逆转转染anti-miR-141-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论 抑制miR-141-3p通过靶向CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。

Rho相关结构域BTB蛋白质1基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织芯片中Rho相关结构域BTB蛋白质1（RhoBTB1）的表达与临床病理特征的相关性及其临床意义.方法 采用组织芯片技术建立67例胃癌患者的组织芯片,应用免疫组织化学技术检测芯片中RhoBTB1的表达.结果 RhoBTB1在胃癌组织中表达的阳性率低于癌旁黏膜组织[（53±29）％比（63±28）％,Z=2.59,P＜0.05];根据临床病理资料,胃癌组织中RhoBTB1的表达高低与病理分级明显相关,低/未分化腺癌RhoBTB1基因的阳性表达率低于中/高分化腺癌[（38±26）％比（65±25）％,Z=4.10,P＜0.05],但其表达与性别、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、脉管转移及远处转移等因素无明显相关（P＞0.05）;RhoBTB1的表达与年龄、淋巴结转移数目和肿瘤大小等无明显相关（P＞0.05）.结论 RhoBTB1可能是与胃癌发生相关的候选抑癌基因,检测该基因的表达有助于评估胃癌的生物学行为和预后.

四君子汤对慢性肾脏病-蛋白质能量消耗模型小鼠的改善作用及机制研究

目的:研究四君子汤对慢性肾脏病-蛋白质能量消耗(CKD-PEW)模型小鼠骨骼肌萎缩的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将80只小鼠随机分为假手术组(n=10)和造模组(n=70)。造模组小鼠采用切除5/6肾联合低蛋白(4%酪蛋白)饮食法建立CKD-PEW模型。将造模成功的50只小鼠随机分为模型组,四君子汤低、中、高剂量组[2.34、4.68、9.36 g/(kg·d),以生药量计]和复方α-酮酸片组[阳性对照,1 g/(kg·d)],每组10只。各给药组小鼠灌胃相应药物,假手术组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续灌胃14 d。末次给药后,称定小鼠体质量、左侧胫骨前肌(TA)湿质量,并测定TA横截面积;检测小鼠TA蛋白合成与分解代谢情况;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测小鼠TA中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及胱天蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;采用Western blotting法检测小鼠TA中肌萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)、肌环指蛋白1(MuRF-1)、Rho相关蛋白激酶1(ROCK1)、磷酸化肿瘤抑制基因(p-PTEN)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组小鼠的体质量、TA湿质量、TA蛋白合成代谢能力以及PI3K、p-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05),TA横截面积显著减小(P<0.05),TA蛋白分解代谢能力、Bax/Bcl-2比值、Caspase-3 mRNA表达水平和Atrogin-1、MuRF-1、ROCK1、p-PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,四君子汤中、高剂量组和复方α-酮酸片组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05)。结论:四君子汤能够增加CKD-PEW模型小鼠体质量,抑制其骨骼肌萎缩;其机制可能与调控ROCK1/PTEN/Akt信号通路,抑制Atrogin-1和MuRF-1表达有关。

BMSCexo促进E3泛素连接酶TRIM31而调控阿尔茨海默症小鼠认知功能障碍和NLRP3炎症小体的产生研究

目的探究骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCexo)对阿尔茨海默症(AD)小鼠认知功能障碍的影响和机制。方法提取并鉴定APP/PS1双转基因小鼠的骨髓间充质干细胞及其外泌体。APP/PS1小鼠分为模型组和BMSC exo组,C57BL/6J小鼠作为对照组,BMSC exo组小鼠每天尾静脉注射0.5μg BMSC exo,模型组和对照组注射等体积的无菌PBS溶液,连续给药21d后进行水迷宫行为学检测,记录各组小鼠逃避潜伏期、小鼠游泳轨迹及记录小鼠穿越原平台象限所在区域的时间占活动总时间的比例。Western blot检测小鼠脑组织中Toll样受体2(TRL-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、三基序的蛋白质31(TRIM31)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达。结果相比于对照组,模型组小鼠逃避潜伏期显著增加,小鼠活动轨迹没有目的性,小鼠穿越原平台象限所在区域的时间占活动总时间的比例显著减少,TRL-2、iNOS、NF-κB、NLRP3表达显著增加,TRIM31表达显著减少。相比于模型组,BMSC exo组小鼠逃避潜伏期显著减少,小鼠在原平台象限所穿越区域的时间占活动总时间的比例显著增加,TRL-2、iNOS、NF-κB、NLRP3表达显著减少,TRIM31表达显著增加。结论BMSC exo可改善AD小鼠认知功能障碍,其机制可能为促进TRIM31表达以及抑制NLRP3炎症小体的产生。

PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspse-1通路诱导大鼠子宫炎症反应

颗粒物(PM)对呼吸系统、心血管系统、神经系统和免疫系统均有损害,但目前关于吸入颗粒物对生殖损伤的研究较少。本研究旨在探讨细颗粒物(PM_(2.5))短期暴露对大鼠子宫炎症损伤及其作用机制。PM_(2.5)暴露30 d后,高剂量组大鼠的子宫脏器系数、内膜上皮细胞厚度和腺上皮高度均明显高于对照组(P<0.05),抑制剂MCC950则能明显降低PM_(2.5)对子宫的影响。子宫组织免疫荧光双染色结果显示,PM_(2.5)暴露组子宫内CD45白细胞和CD11b巨噬细胞均明显增加(P<0.05)。Elisa法检测子宫组织和血清中白介素1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1),暴露组子宫组织和血清中IL-1β和TGF-β1含量明显升高(P<0.05)。Western印迹法检测结果显示,PM_(2.5)上调核苷酸结合低聚体结构域样受体3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、pro-IL-1β、pro-Caspase-1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白质表达量(P<0.05)。与高剂量组相比,NLRP3抑制剂MCC950能明显降低NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白质表达水平(P<0.05)。综上,PM_(2.5)通过激活NLRP3/Caspase-1信号,诱导大鼠子宫炎症反应,为PM_(2.5)生殖毒性预防和治疗提供理论基础。

ω-3多不饱和脂肪酸对胃癌生长及RHO-ROCK1信号通路相关基因表达的影响

目的研究ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)对裸鼠体内胃癌细胞生长的影响及其是否通过RHO-ROCK1信号通路发挥作用。方法将16只BALB/C系裸鼠皮下注射SGC7901细胞建立荷瘤鼠模型后,随机分为两组,分别为灌胃ω-3 PUFAs药物干预组和灌胃生理盐水对照组,观察移植瘤生长情况及其形态学变化,q PCR检测肿瘤组织RHOA、RHOC及ROCK1 mRNA表达水平,免疫荧光和Western blot法分别检测RHOA、RHOC及ROCK1蛋白表达情况。结果药物干预组肿瘤体积和重量小于生理盐水组(抑制率为13. 63%),但差异无统计学意义(P> 0. 05); HE染色结果显示药物干预组相比于生理盐水组,肿瘤组织坏死呈多灶状、坏死区域炎症细胞浸润、细胞排列疏松、部分细胞肿胀呈空泡状; q PCR和Western blot结果显示药物干预组RHOA及ROCK1 mRNA和相应蛋白表达量显著减少(P <0. 05);免疫荧光结果显示药物干预组相比生理盐水组RHOA、RHOC及ROCK1蛋白表达量亦减少,趋势与mRNA结果一致。结论ω-3 PUFAs对裸鼠体内胃癌生长的影响可能是通过影响RHOA、RHOC及ROCK1的表达,从而抑制胃癌细胞的过度增殖,导致肿瘤组织坏死。

miR-142-3p靶向调控RHOBTB3基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响

目的观察肺癌组织miR-142-3p表达变化,探讨miR-142-3p靶向调控Rho相关结构域BTB蛋白质3(Rho-related BTB domain-containing protein 3,RHOBTB3)基因对肺癌A549细胞增殖能力的影响。方法肺癌患者35例,均行手术治疗,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p及RHOBTB3 mRNA相对表达量。将对数生长期A549细胞分为miR-142-3p组和对照组,分别转染表达miR-142-3p的慢病毒和阴性对照慢病毒,转染48 h时采用实时荧光定量PCR法检测miR-142-3p相对表达量。筛选出稳定转染的miR-142-3p组A549细胞分为稳转miR-142-3p组和miR-142-3p+RHOBTB3组,稳定转染的对照组A549细胞分为稳转对照组和RHOBTB3组,miR-142-3p+RHOBTB3组、RHOBTB3组采用脂质体转染法转染表达RHOBTB3的质粒,稳转miR-142-3p组、稳转对照组不做处理。转染48 h, 4组采用Western blot法检测RHOBTB3蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测培养96 h时细胞增殖率,采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数目。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-142-3p靶向结合RHOBTB3基因。结果肺癌组织miR-142-3p相对表达量(0.58±0.27)低于癌旁组织(1.06±0.34)(t=-6.508,P<0.001),RHOBTB3 mRNA相对表达量(1.24±0.32)高于癌旁组织(0.51±0.29)(t=10.020,P<0.001)。miR-142-3p组细胞miR-142-3p相对表达量(9.45±1.80)高于对照组(1.05±0.32)(t=11.240,P<0.001)。稳转miR-142-3p组RHOBTB3蛋白相对表达量(0.47±0.05)、细胞增殖率[(48.56±9.97)%]及细胞克隆形成数目[(47.00±8.39)个]均低于稳转对照组[0.79±0.07、(100.00±8.71)%、(165.67±13.92)个]和miR-142-3p+RHOBTB3组[0.77±0.06、(95.82±9.79)%、(141.33±12.88)个](P<0.05),RHOBTB3组RHOBTB3蛋白相对表达量(1.20±0.12)、细胞增殖率[(153.23±18.29)%]及细胞克隆形成数目[(267.83±23.25)个]均高于miR-142-3p+RHOBTB3组(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-3p+pMIR WT组荧光素酶活性(0.41±0.05)低于NC+pMIR WT组(1.01±0.12)(t=11.220,P<0.001),miR-142-3p+pMIRMUT组荧光素酶活性(0.95±0.09)与NC+pMIRMUT组(1.02±0.09)比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.216)。结论肺癌组织miR-142-3p表达下调、RHOBTB3表达上调,miR-142-3p可靶向RHOBTB3基因抑制肺癌A549细胞增殖。

Erbin在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与NLRP3炎症小体的关系

目的评价ErbB2相互作用蛋白(Erbin)在小鼠脓毒症相关性脑病(SAE)中的作用及其与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体在其中的作用。方法SPF级健康雄性野生型C57BL/6小鼠和Erbin(-/-)C57BL/6小鼠各60只,8~10周龄,体重20~25g,采用随机数字表法分为4组(n=30):野生型假手术组(WT+Sham组)、野生型SAE组(WT+SAE)、Erbin(-/-)假手术组(EKO+Sham组)和Erbin(-/-)+SAE组(EKO+SAE组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠SAE模型。于造模后7 d时行旷场实验(移动总距离),造模后8 d时行新物体识别实验(识别指数),造模后10 d时行Morris水迷宫实验(目标象限停留时间)。于造模后24 h时处死小鼠取海马组织,采用HE染色观察海马组织病理学结果,并计数神经元,计算神经元存活率;采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达;采用免疫组化法计数NLRP3阳性细胞;采用ELISA法检测IL-1β、TNF-α和IL-18含量。结果与WT+Sham组比较,WT+SAE组目标象限停留时间缩短,识别指数和神经元存活率降低,海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高,NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05);与EKO+Sham组比较,EKO+SAE组目标象限停留时间缩短,识别指数和神经元存活率降低,海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高,NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05);与WT+SAE组比较,EKO+SAE组目标象限停留时间缩短,识别指数和神经元存活率降低,海马组织IL-1β、IL-18、TNF-α含量和NLRP3阳性细胞计数升高,NLRP3、caspase-1和ASC表达上调(P<0.05);4组移动总距离比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Erbin可通过抑制NLRP3炎症小体的活化,对SAE小鼠产生内源性保护作用。

TXNIP/NLRP3信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的评价硫氧还蛋白相互作用蛋白/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（TXNIP/NLRP3）信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。 方法清洁级健康雄性SD大鼠，8～12周龄，体重200～220 g，采用腹腔注射1%链脲佐菌素65 mg/kg的方法建立糖尿病模型。取糖尿病模型制备成功的大鼠24只，采用随机数字表法分为3组（n＝8）：假手术组（S组）、肾缺血再灌注组（I/R组）和TXNIP抑制剂白藜芦醇组（R组）。R组于糖尿病模型制备成功后第3周每天腹腔注射白藜芦醇10 mg/kg，连续7 d。糖尿病模型制备成功后第4周，采用双侧肾蒂夹闭25 min再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤模型。再灌注48 h时处死大鼠取肾组织，观察病理学结果，采用比色法测定MDA含量、SOD活性和组织超氧阴离子清除力，采用ELISA法检测IL-1β和IL-18含量，采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。采用Western blot法测定肾组织TXNIP、NLRP3和caspase-1的表达。左心室取血标本，测定血清BUN和Cr浓度。 结果与S组比较，I/R组和R组血清Cr浓度和细胞凋亡指数升高，肾组织超氧阴离子清除力降低，TXNIP、NLRP3和caspase-1表达上调，I/R组血清BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β和IL-18含量升高，SOD活性降低（P〈0.05），肾组织病理学损伤加重；与I/R组比较，R组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织MDA、IL-1β、IL-18含量和细胞凋亡指数降低，SOD活性和组织超氧阴离子清除力升高，TXNIP、NLRP3和caspase-1表达下调（P〈0.05），肾组织病理学损伤减轻。 结论糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤的病理生理机制与TXNIP/NLRP3信号通路激活有关。