Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2及转化生长因子1的相关性

目的研究Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)在动脉粥样硬化血管壁中的表达及其与基质金属蛋白酶2(MMP2)、转化生长因子1(TGF-β1)的相关性。方法选择30只载脂蛋白E基因敲除小鼠为实验组,高脂饲料喂养,另选30只C57BL/6小鼠为对照组,普通饲料喂养。在喂养的第10、16、22、28及34周,取眼球血监测小鼠血脂水平;取小鼠腹主动脉作为标本,包埋切片并进行苏木精-伊红染色观察血管壁形态;应用免疫组化染色观察血管壁中ROCK1、MMP2、TGF-β1的表达;使用Image Pro Plus 6.0软件测量切片中血管壁厚度、斑块面积、血管壁中ROCK1、MMP2及TGF-β1的表达量。采用SPSS 27.0统计软件进行数据分析。采用单因素方差分析进行组间比较,两两比较采用Tukey检验。采用Pearson相关与线性回归分析ROCK1与血管壁厚度及斑块面积、MMP2、TGF-β1的关系。结果成功建立动脉粥样硬化小鼠模型。在喂养第10、16、22、28及34周,实验组血脂水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。自喂养第16周起,实验组小鼠血管内均有斑块形成,随着喂养时间的延长,斑块面积和血管壁厚度不断增加,差异有统计学意义(P<0.05);血管壁内ROCK1的表达逐步增高,其表达与斑块面积及血管壁厚度呈正相关(r=0.821,0.730;P<0.05)。线性相关分析及回归分析显示,ROCK1与MMP2、TGF-β1表达均呈正相关(r=0.801,0.906;P<0.05)。结论在动脉粥样硬化血管壁中存在ROCK1蛋白的表达,且表达量随着血管壁厚度增加而增高,ROCK1的表达与MMP2、TGF-β1呈显著正相关性。鉴于ROCK1蛋白的致血管痉挛作用,提示动脉粥样硬化血管壁可能易于痉挛,具体机制需进一步研究。

IgA肾病患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、视黄醇结合蛋白4表达水平及在评估病情和预测预后中的价值研究

目的检测IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(rho associated coiled coil containing protein kinase 2,ROCK2)、视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)表达水平,分析二者在评估患者病情及预测预后中的价值。方法选取2016年6月至2019年6月98例中国贵航集团302医院已确诊收治的IgAN患者为IgAN组,其中轻度IgAN 36例、中度IgAN 32例、重度IgAN 30例;同期选择在中国贵航集团302医院体检的健康者100名为对照组。酶联免疫吸附法检测血清中ROCK2、RBP4水平;采用Kaplan-Meier生存曲线分析ROCK2、RBP4表达水平与IgAN患者预后的关系;Pearson相关性分析ROCK2与RBP4表达相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析ROCK2、RBP4对IgAN的诊断价值;比例风险回归模型法分析IgAN患者预后的影响因素。结果IgAN组血清中ROCK2、RBP4表达水平分别为(24.25±5.31)μg/L、(59.70±9.43)μg/L,显著高于对照组的(15.57±4.16)μg/L、(32.14±7.82)μg/L,差异具有统计学意义(t=12.818、22.404,均P<0.001);轻度、中度、重度IgAN患者血清中ROCK2水平分别为(18.69±4.36)μg/L、(23.75±5.31)μg/L、(31.46±5.62)μg/L,RBP4表达水平分别为(45.37±7.86)μg/L、(62.48±8.12)μg/L、(73.94±8.65)μg/L。随着病情的加重,IgAN患者血清ROCK2、RBP4表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=51.854、102.234,均P<0.05);IgAN患者血清中ROCK2、RBP4表达水平与Lee氏分级、IgA/C3比值、病情程度有关(P<0.05);ROCK2、RBP4高表达组患者预后生存率分别为60.00%、74.19%,均显著低于低表达组的89.71%、91.67%,差异具有统计学意义(log rankχ^(2)=4.674,P=0.031);ROC曲线结果显示,血清ROCK2诊断IgAN的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.889,敏感度为80.61%,特异性为80.00%,截断值为18.79μg/L;RBP4诊断IgAN的AUC为0.986,敏感度为96.94%,特异性为95.00%,截断值为41.31μg/L;二者联合检测的AUC为0.997,敏感度为98.98%,特异性为94.86%。Pearson相关性分析显示,IgAN患者血清ROCK2与RBP4表达水平呈显著正相关(r=0.701,P<0.001);多因素比例风险回归模型法分析表明,IgA/C3(OR=2.683,95%CI:1.060~6.794)、ROCK2(OR=1.831,95%CI:1.027~3.264)、RBP4(OR=1.517,95%CI:1.104~2.084)均是IgAN患者预后生存的影响因素(均P<0.05)。结论ROCK2、RBP4在IgAN患者血清中高表达,二者与IgAN患者的临床病理特征、病情严重程度及预后关系密切,ROCK2、RBP4表达水平对IgAN的诊断具有一定的价值。

2种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶对经皮冠状动脉介入治疗无复流的预测价值

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)1和ROCK2对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)无复流的预测价值。方法选取168例接受PCI的STEMI患者作为研究对象,根据是否发生无复流分为无复流组和血流正常组,并分别根据ROCK1、ROCK2表达情况分为高表达组和低表达组。使用酶联免疫吸附试剂盒检测患者血清ROCK1、ROCK2水平,分析无复流组与血流正常组的血清ROCK1、ROCK2水平差异,分析STEMI患者PCI无复流的危险因素,并分析ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值。结果168例STEMI患者中,46例发生无复流,发生率为27.38%。无复流组的Killip分级、发病至入院时间、未使用预防性无复流药物者占比、血清ROCK1水平、血清ROCK2水平高于或长于血流正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROCK1高表达组的无复流发生率高于ROCK1低表达组,ROCK2高表达组的无复流发生率高于ROCK2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logsitic回归分析显示,Killip分级为Ⅲ~Ⅳ级、发病至入院时间较长、未使用预防性无复流药物、血清ROCK1水平较高、血清ROCK2水平较高均为STEMI患者PCI无复流的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值较高,且两者联用后预测价值提升,曲线下面积为0.789(95%CI:0.711~0.867)。结论血清ROCK1、ROCK2水平较高是STEMI患者PCI无复流的危险因素,两者联合检测对PCI无复流具有较高的预测价值。

miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究

背景与目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。micro RNA-335(mi R-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨mi R-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK1)基因的表达,并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法:理论预测并通过荧光素酶基因报告验证mi R-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region,UTR)的特异性结合作用;real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测mi R-335对ROCK1表达的负性调控作用;Transwell小室法检测mi R-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果:Targetscan预测显示,mi R-335与ROCK1 3'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示,mi R-335 mimic和ROCK1 3'-UTR能够靶向结合;mi R-335在MG-63细胞中低表达,ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示,转染mi R-335 mimic或转染ROCK1 si RNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示,过表达mi R-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论:mi R-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达,抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。

Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1的表达与老年慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压患者肺动脉压的相关性

目的探讨Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的表达与老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发肺动脉高压(PHT)患者肺动脉压(PAP)的相关性。方法 78例COPD患者依据患者是否并发PHT分为观察组(COPD并发PHT组)38例和对照组(单纯COPD组)40例,比较2组患者PAP、ROCK1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平,并对ROCK1水平与COPD并发PHT患者PAP的相关性进行分析。结果观察组患者PAP、单核细胞ROCK1及血清ROCK1、TNF-α、CRP水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。COPD并发PHT患者的血清和单核细胞ROCK1水平与PAP呈正相关(P<0.001)。结论血清和单核细胞内ROCK1表达升高可能与COPD患者出现PHT有关,ROCK1可以作为干预COPD向PHT进展的新靶点。

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路与脑梗死关系的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A（Ras homolog gene family member A,Rho A）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK）信号通路参与许多细胞的调控过程,包括转录、细胞骨架的改变、收缩、黏附、运动、增殖、分化等,同时其与动脉粥样硬化、脑梗死、缺血-再灌注损伤的发生发展密切相关[1]。

Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路阻断剂Y-27632对大鼠脂肪组织源性干细胞向神经元样细胞分化的诱导作用

目的：研究Y-27632对大鼠脂肪间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化作用.方法：原代培养大鼠脂肪间充质干细胞,将3～6代细胞随机分成4组,无血清对照组、无血清诱导组、血清对照组、血清诱导组.采用倒置显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性核心抗原（NeuN）、血清应答因子（SRF）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、vimentin的表达,免疫印迹检测SRF、vimentin的表达.结果：在无血清情况下,Y-27632能够诱导脂肪组织源性干细胞（ADSCs）出现典型的神经元样细胞形态,免疫细胞化学检测显示神经元特异性蛋白巢蛋白、NeuN的阳性表达；而在10％血清条件下,这种诱导效应被抑制,巢蛋白、NeuN无阳性表达.免疫细胞化学染色显示无血清条件下,Y-27632能够显著抑制α-SMA的表达,同时SRF和vimentin也具有较强的阳性表达.免疫印迹检测显示无论是否存在血清,Y-27632均能够抑制SRF的表达；vimentin在无血清＋Y-27632组表达高于其他各组.结论：Y-27632能够诱导ADSCs向神经元样细胞分化并伴随神经特异标记物的表达.

经尿道膀胱肿瘤整块剜除术治疗非肌层浸润性膀胱癌疗效及对血清金属蛋白酶-9、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、环氧合酶-2水平的影响

目的探讨经尿道膀胱肿瘤整块剜除术(ERBT)治疗非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)疗效及对血清金属蛋白酶-9(MMP-9)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rock-2)、环氧合酶-2(Cox-2)水平的影响。方法我院诊治的150例NMIBC患者,按照随机数表法分为研究组与对照组各75例,分别给予ERBT和经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)。比较两组围术期相关指标、手术前后血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平、术后并发症以及预后情况。结果研究组手术时间、膀胱冲洗时间、首次下地时间等围术期指标低于对照组(P<0.05);术前1 d及术后3 d两组间血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后3 d两组上述指标水平均降低(P<0.05);研究组术后并发症发生率及术后1年复发率均低于对照组(P<0.05)。结论ERBT可降低血清MMP-9、Rock-2、Cox-2水平,其治疗NMIBC的效果与TURBT相当,但该术式减少术后并发症,促进患者恢复,并降低术后复发风险,更具有优势。

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用

Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用。

Rho相关的卷曲蛋白激酶1参与β淀粉样蛋白介导的大鼠原代神经元损伤

目的·探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled coil protein kinase 1,ROCK1)是否参与了β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)引起大鼠海马神经元损伤的过程。方法·用Aβ40寡聚肽处理大鼠海马原代神经元,建立神经元损伤模型。利用免疫印迹法检测ROCK1蛋白表达水平,试剂盒检测ROCK1激酶活性,激光共聚焦显微镜检测荧光染料Fluo-8AM标记的细胞内钙离子负荷,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。加入ROCK1抑制剂Y-27632,观察其对Aβ40效应的影响。结果·10μmol/L Aβ40寡聚肽能引起神经元内钙超载,ROCK1蛋白表达增加和活性升高,以及细胞凋亡比例升高;而Y-27632能对抗Aβ40引起的这些效应。结论·ROCK1参与了Aβ40诱导的神经元内钙超载及神经毒性的产生,而ROCK1抑制剂能拮抗Aβ毒性效应。

子痫前期患者胎盘组织中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶Ⅱ的表达

子痫前期是一种复杂的多器官疾病，是引起孕产妇死亡的主要原因之一，其发病机理尚不完全清楚。然而，子痫前期在孕妇分娩后自行痊愈这一事实表明，胎盘在子痫前期发病中有重要作用。Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（Rock）属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族成员，有RockⅠ和RockⅡ两种亚型，与平滑肌收缩、细胞的迁移和轴突的生长等细胞活动有关。越来越多的研究显示，RhoA-Rock通路在许多疾病尤其是心血管系统疾病，如高血压、动脉粥样硬化和冠状动脉痉挛等的发生、发展中起着非常重要的作用。推测Rock与子痫前期的发生可能有一定关系，本研究通过检测子痫前期患者胎盘组织中的RockⅡ蛋白及其mRNA的表达，探讨RockⅡ与子痫前期发病的关系。

FBXW7和RhoA/Rho激酶蛋白表达参与糖尿病大鼠心肌纤维化

目的探究F框/含蛋白7 WD-40域蛋白(FBXW7)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)的表达与糖尿病心肌纤维化的关系。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,采用一次性ip链脲佐菌素60 mg·kg^(-1)建立1型糖尿病大鼠模型,分别于2,4,8,12和16周进行检测。HE染色观察大鼠心脏组织形态变化;Masson染色和测定心肌羟脯氨酸(HYP)含量观察心肌胶原沉积程度;ELISA法检测血清中FBXW7,转化生长因子β_1(TGF-β_1)和结缔组织生长因子(CTGF)的含量;Western蛋白印迹和免疫组化法检测心肌中FBXW7,RhoA和ROCK1蛋白的表达。结果显微镜下可见糖尿病模型组大鼠心肌不同程度局灶性心肌细胞变性、坏死和纤维组织增生等。与正常对照组相比,4～16周时,模型组大鼠心肌组织中胶原沉积面积和胶原含量显著升高(P<0.05,P<0.01),呈递增趋势;2～4周时,大鼠血清中FBXW7含量显著增加(P<0.01),第8周时降低,但仍显著高于正常对照组(P<0.01);8～16周时,大鼠血清中TGF-β_1和CTGF含量逐渐升高(P<0.01)。Western蛋白印迹和免疫组化结果显示,模型组大鼠心肌RhoA和ROCK1蛋白表达在各时间点均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);2～12周模型组大鼠心肌FBXW7表达较正常对照组显著升高(P<0.01,P<0.01),第4周表达最高,8～16周表达下降,与时间呈负相关(r=-0.988,P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 FBXW7和RhoA/Rho激酶参与糖尿病大鼠心肌纤维化的发生发展,可能成为治疗糖尿病心肌病的靶点。

Rho激酶抑制剂在常见眼科疾病治疗中的作用机制研究进展

眼科疾病的发生发展与细胞生理功能和眼组织功能异常密切相关。Rho激酶抑制剂可参与多种细胞事件,包括诱导细胞骨架重组、细胞黏附、细胞增殖和血管生成,并可在细胞周期进展、细胞分化和细胞凋亡中发挥作用。Rho激酶抑制剂治疗青光眼的有效性在临床观察中已得到证实,一些动物及细胞实验中亦发现其对糖尿病视网膜疾病、增殖性视网膜疾病、角膜内皮功能障碍及角膜新生血管有良好的治疗作用。深入探讨Rho激酶抑制剂在眼部疾病发生发展中的作用机制,或可对眼部疾病的治疗有较好的帮助和促进作用。

Rho激酶抑制剂在神经退行性疾病中应用

人体中的Ros同源类似物(Rho)相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)简称为Rho相关激酶(ROK),属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,相对分子质量约为160 kD。1996年,ROCK作为Rho蛋白(又称Rho.GTP蛋白)下游的一个肌动蛋白细胞骨架的调节因子首次被发现。在哺乳动物体内, ROCK存在两种亚型,ROCK1与ROCK2,它们具有不同的分布特点,一级结构的同源性约为65%,但它们具有非常相似的空间构象和功能域的空间排布。

孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶通路关键信号分子表达的影响

目的观察孕鼠补充牛磺酸对宫内生长受限（IUGR）胎鼠脑组织Ras同源基因-Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（Rho—ROCK）通路中关键信号分子及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响，以探讨牛磺酸是否可通过该信号途径促进IUGR胎鼠皮质神经元增殖。方法采取低蛋白饮食法建立IUGR模型，将30只孕鼠按妊娠顺序分为对照组、IUGR模型组（IUGR组）及IUGR＋孕鼠补充牛磺酸组（IUGR＋牛磺酸组），牛磺酸组自妊娠第12天开始于饲料中添加牛磺酸300mg／（kg·d）直至自然分娩。采用实时定量（Real．time）-PCR法检测各组胎鼠脑组织中Ras同源基因（Rho基因）、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶基因（ROCK2基因）及PCNA基因mR．NA水平，同时采用免疫组织化学法检测各组胎鼠脑组织PCNA蛋白的表达。结果1．IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织鼢oA、ROCK2及PCNAmRNA水平：肋oAmRNA分别为1．757±0．041、1．498±0．011和1．000±0．000（P〈0．05），ROCK2mRNA分男1为1．548±0．231、1．094±0．049和1．000±0．000（P〈0．05）．PCNAmRNA分别为2．007±0．800、3．034±0．670和1．000±0．000（P〈0．05）。2．IUGR组、牛磺酸组与对照组胎鼠脑组织PCNA免疫组织化学阳性细胞数分别为（22．24±6．17）、（77．80±14．60）和（11．30±3．18）个／高倍视野（P〈0．05）。结论孕鼠补充牛磺酸可能通过抑制Rho—ROCK信号途径而发挥对IUGR胎鼠的脑保护作用及促进IUGR胎鼠脑发育，为产前补充牛磺酸促进IUGR脑发育提供了理论依据。

对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变

目的探讨对香豆酸(p-CA)对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法将大鼠分为6组:对照组(n=10)、DN组(n=10)、低剂量对香豆酸组(L-p-CA)(n=10)、中剂量对香豆酸组(M-p-CA)(n=10)、高剂量对香豆酸组(H-p-CA)(n=10)和RhoA激动剂U-46619组(U-46619)(n=12)。对照组大鼠为健康SD大鼠,其他组大鼠均为高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠。造模后,对照组和DN组大鼠灌胃2 mL 0.5%羧甲基纤维素溶液,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠分别灌胃2 mL剂量为50,100,200 mg/(kg·d)的对香豆酸溶液,U-46619组大鼠同时灌胃1 mL对香豆酸溶液(剂量为200 mg/(kg·d))以及1 mL剂量为30μg/(kg·d)的RhoA激动剂U-46619。各组大鼠均干预12周。治疗后检测各组大鼠生化指标水平:空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和24 h尿蛋白;以及血清氧化应激指标水平:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)。通过苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色评价大鼠肾脏损伤和纤维化。通过qRT-PCR检测肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)转录活性。通过Western blot检测肾脏TNF-α、IL-1β、MCP-1、RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果与对照组比较,DN组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平升高(P<0.05);肾组织发生明显病变,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与DN组比较,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与L-p-CA组和M-p-CA组比较,H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与H-p-CA组比较,U-46619组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平均升高(P<0.05);肾组织病变加重,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变。

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1在大鼠肝纤维化不同阶段表达及意义

目的观察Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（ROCK1）在大鼠肝纤维化过程中不同阶段的表达。方法72只200—250g雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组36只、肝纤维化模型组36只。正常对照组即正常饲养，模型组即腹腔注射四氯化碳，2次／周，剂量2ml／kg。分别在3、6d、2、4、6、8周时间点随机选取6只大鼠处死，苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏组织的病理学变化，观察肝纤维化程度。免疫组织化学方法检测ROCK1的组织定位及表达。利用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测不同时间段ROCK1基因mRNA转录水平的变化。结果免疫组织化学结果显示，给药后3、6d、2、4、6、8周，正常对照组ROCK1阳性表达率分别为11％、15％、13％、11％、17％、14％；模型组ROCK1阳性表达率分别为14％、15％、52％、65％、75％、80％；差异有统计学意义（P=0．001）。Real—timePCR检测显示ROCK1表达量（以对照组为1），模型组表达分别为1．018759、1．381913、1．831238、2．515323、2．257623、2．188587。结论ROCK1在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的过程中，其组织表达水平逐渐升高，说明Rho／ROCK通路可能是肝纤维化发生的另一条重要信号通路。

麦冬皂苷B调节Rho A/ROCK1信号通路对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨麦冬皂苷B(ophiopogonin B,OP-B)对胃荷瘤大鼠肿瘤生长的影响及其作用机制。方法 将66只体质量为180~200 g的6周龄SPF级SD大鼠(雌雄各半)按随机数字表法分为模型组,OP-B低、中、高剂量组,激活剂组,每组10只。采用原位移植Walker-256肿瘤组织建立胃荷瘤模型,OP-B低、中、高剂量组大鼠分别灌胃17.5、35、70 mg/kg的OP-B并腹腔注射等量生理盐水,激活剂组灌胃70 mg/kg的OP-B并腹腔注射1 mg/kg的Rho A/ROCK1信号通路激活剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA),模型组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;记录移植瘤质量及体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肿瘤组织形态;原位末端转移酶标记技术(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡;免疫组织化学染色检测肿瘤组织细胞核增殖抗原67(proliferating cell nuclear antigen, Ki-67)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测Ras同源基因家族蛋白A(Ras homologous gene family member A,Rho A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase1,ROCK1)的表达;Western blot检测Rho A、ROCK1蛋白表达。结果 与模型组比较,OP-B低、中、高剂量组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著降低,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著升高(P<0.05);与OP-B高剂量组比较,激活剂组肿瘤质量和体积、Ki-67阳性率及Rho A、ROCK1 mRNA和蛋白表达显著升高,抑瘤率、肿瘤细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3阳性率显著降低(P<0.05)。结论 OP-B可能通过抑制Rho A/ROCK1信号通路的激活,抑制胃荷瘤大鼠肿瘤生长。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。