Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体。方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物。质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带。再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序。最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度。结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致。病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108vp/mL。结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体。

鸟苷酸解离抑制因子-2真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立

目的构建Rab蛋白鸟苷酸解离抑制因子-2(GDI2)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法聚合酶链反应(PCR)扩增GDI2基因片段,构建pcDNA3.1-GDI2真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性,脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株。免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达GDI2蛋白。结论 GDI2真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究GDI2过度表达对肿瘤侵袭和转移的影响奠定了实验基础。

胃癌中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2表达与临床病理的关系及罗格列酮对其表达的影响

目的探讨胃癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(Rho GDI)2的表达与临床病理的关系及可能机制。方法 60例胃癌患者,取相邻的胃癌癌旁组织为对照组。检测两组Rho GDI2的表达,并对Rho GDI2的表达与胃癌临床病理进行统计学分析。结果胃癌组织中Rho GDI2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2表达的阳性率(76.67%)显著高于癌旁组织(45.00%)(χ2=2.491 8,P=0.012 7);胃癌组织中Rho GDI2的表达与病理分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小有显著相关性(P<0.05);胃癌组织中Rho GDI2及MMP2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01);罗格列酮作用后胃癌组织中Rho GDI2 mRNA、MMP2 mRNA的表达水平明显低于作用前(P<0.01);罗格列酮作用前和作用后胃癌组织中Rho GDI2与MMP2的表达之间呈正相关(rs=0.595,P=0.000;rs=0.612,P=0.000)。结果 Rho GDI2在胃癌中呈高表达;胃癌中Rho GDI2的表达参与了胃癌的发病、转移和进展;罗格列酮可以抑制Rho GDI2的表达;Rho GDI2可能通过调控MMP2的表达参与胃癌的发病、转移及进展。

肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2的表达及临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌组织中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2（RhoGDI2）的表达与临床病理的关系及临床意义。方法：选择2011年7月至2015年1月期间70例肝细胞肝癌患者为研究对象，检测患者肝癌组织和癌旁组织RhoGDI2的表达，并对其表达与肝癌临床病理进行统计学分析。结果：RhoGDI2在肝细胞肝癌组织中的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织中RhoGDI2的阳性率（77．14％）高于癌旁组织（47．14％），差异有统计学意义（χ2=13．39，P=0．000）；不同病理分期、分化程度、肿瘤体积以及是否出现淋巴结转移与RhoGDI2的表达有显著相关性（P〈0．05）；肝细胞肝癌组织申RhoGDI2、MMP2（基质金属蛋白酶2）mRNA均高于癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）；siRNA干扰前肝细胞肝癌组织中RhoGDI2与MMP2的表达之间呈正相关（rs=0．581，P=0．000）；siRNA干扰后肝癌中RhoGDI2与MMP2亦呈正相关（rs=0．592，P=0．000）。结论：RhoG-D／2在肝细胞肝癌组织中呈高表达；RhoGDI2在肝细胞肝癌的发病、转移和进展中起重要作用；RhoGDI2与MMP2在肝细胞肝癌的发病、转移及进展中可能共同起作用。

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

RhoGDI2在肺鳞癌、腺癌组织和肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的本研究探讨RhoGDI2在肺鳞癌和腺癌组织及肺癌细胞系中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测112例肺癌组织标本中RhoGDI2蛋白和20例新鲜肺癌组织中RhoGDI2 mRNA的表达,结合肺癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western blot和RT-PCR方法检测肺癌细胞系中RhoGDI2蛋白和mRNA水平的表达情况。结果肺鳞癌和腺癌组织中RhoGDI2的表达与组织分级有关,随着分化程度的降低,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与TNM分期有关,随着分期级别的升高,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01);与是否淋巴结转移有关,存在淋巴结转移的标本,RhoGDI2蛋白表达降低(P<0.01)。RhoGDI2蛋白的表达与组织类型、患者的年龄和性别无关。在选取的肺癌细胞系A549、95D、SPC-A-1和NCI-H446中,无论mRNA水平还是蛋白水平RhoGDI2都有表达,但表达水平不尽相同,在A549、NCI-H446细胞系中表达较低,在SPC-A-1、95D细胞系中表达相对较高。结论RhoGDI2与肺癌的发生发展和转移过程有关,进一步研究RhoGDI2与其作用因子之间的相互作用,将有助于进一步揭示肺癌发生发展及转移过程。

RhoGDI2蛋白的高表达促进胃癌的侵袭和转移

目的:通过检测Rh oGTP酶解离抑制因子2(RhoGTPase dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)在胃癌和癌旁组织中的表达并结合临床病理特点进行分析,探讨RhoGDI2的蛋白表达水平与胃癌组织侵袭转移的关系及在肿瘤发生发展中的作用.方法:采用免疫组织化学方法检测127例肿瘤组织标本和癌旁标本中RhoGDI2蛋白的表达.结果:RhoGDI2阳性表达主要在血液淋巴细胞、粒细胞、巨噬细胞.胃癌细胞中也有表达,主要为胞浆表达.实验中发现胃癌组织中RhoGDI2阳性表达率为65.4%(83/127).且大多数在细胞浆中表达,低分化癌细胞核也有表达.在癌旁正常胃黏膜组织中表达阴性,胃癌组织中RhoGDI2的表达在低分化组显著高于高中分化组(χ2=9.702,P<0.05),随着原发肿瘤的浸润深度阳性表达率增高(浸润深度T3-4,或T1-2)(χ2=8.029,P<0.05),有淋巴结转移的阳性表达率显著高于无淋巴结转移(χ2=18.53,P<0.05),有远处转移较无远处转移的表达高(χ2=24.1,P<0.05)临床分期(Ⅲ-Ⅳ)显著高于临床分期(Ⅰ-Ⅱ)(χ2=8.530,P<0.05).RhoGDI2表达与性别(χ2=0.126,P>0.05)、年龄(<60岁,≥60岁)(χ2=0.916,P>0.05)、原发灶直径(<5 cm,≥5 cm)(χ2=2.620,P>0.05)无相关性.结论:RhoGDI2的表达与胃癌的发生发展和转移过程呈正相关,RhoGDI2可能参与胃癌发生发展中的侵袭及转移过程.

RhoGDI2调控TGF-β1对气道上皮-间质转化的研究

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho guanosine diphosphate dissociation inhibitor 2,RhoGDI2)在气道上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)中的作用,以及可能的作用机制,有助于揭示气道重塑的分子生物学机制并提供新的治疗靶点。方法:构建RhoGDI2过表达气道上皮细胞(16HBE)模型。Western Blot检测RhoGDI2蛋白的表达。构建成功后,Western Blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达;同时收集细胞培养上清液,双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中TGF-β1的表达水平。在RhoGDI2过表达16HBE细胞模型中加入TGF-β1抑制剂,进一步明确TGF-β1在RhoGDI2调控EMT过程中的作用。结果:(1)Western Blot检测16HBE过表达组RhoGDI2表达水平较对照组明显升高(P<0.01)。(2)过表达组16HBE中N-cadherin、Snail表达较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01),而E-cadherin表达明显下降(P<0.01);RhoGDI2过表达组细胞中、上清液中TGF-β1的表达水平亦较对照组明显升高(P<0.05、P<0.01)。(3)过表达组中加入TGF-β1抑制剂后,TGF-β1、N-cadherin、Snail表示水平下降,E-cadherin表达水平升高(P<0.05)。结论:RhoGDI2可通过调控TGF-β1的表达促进人气道EMT过程。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的研究RhoGDP解离抑制因子（Rho GDP dissociation inhibitor 2，RhoGDI2）mRNA及Bcl-2mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）中的作用和机制。方法30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD6h和48h组，每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况，并用Real—timeRT—PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平。结果（1）新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显。（2）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰，细胞凋亡率为（1．40±0．12）％。HIBD48h凋亡峰更为明显，细胞凋亡率达到（15．86±0．98）％。缺氧缺血后与假手术组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平较高（4．12±0．74、2．55±0．65），在HIBD6h后二者表达开始下降（3．19±0．77、1．96±0．36），48h降低更加明显（1．04±0．18、1．06±0．17），与假手术组比较，HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2mRNA的表达均明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。（4）缺氧缺血后各时间点RhoGDI2mRNA的表达和Bcl-2mRNA的表达呈正相关（r=0．831，P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后，随着凋亡的出现，RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平降低，提示RhoGDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生。

结肠癌组织标本Rho解离抑制因子2的表达及其与临床病理的关系

目的探讨结肠癌Rho解离抑制因子2（RhoGDl2）基因的表达及其与临床病理的关系。方法运用组织芯片技术、免疫组织化学法检测75例结肠癌患者原发癌灶和癌旁正常结肠组织的RhoGDl2的表达及其与相应结肠癌临床病理参数之间的关系。运用Westernblot和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测18例配对结肠腺癌原发灶组织和癌旁5cm正常结肠组织的RhoGDl2的表达。结果RhoGDl2阳性率在结肠癌原发癌灶和癌旁正常组织分别为73．33％和33．33％（P〈0．05）；RhoGDl2阳性率与临床TNM分期相关（P〈0．01），与原发灶T分期范围相关（P〈0．05），与淋巴结N分期、远处转移M无明显相关（P〉0．05）。18例结肠癌RhoGDl2Westernblot灰度值高于正常组织的4．8倍（P〈0．05）。Real-timePCR结果显示癌灶组RhoGDl2相对表达量高于癌旁对照组（P〈0．05）；RhoGDl2表达阳性率与临床TNM分期明显相关（P〈0．01），与原发灶T分期明显相关（P〈0．05）。结论RhoGDl2在结肠癌中表达上调，与临床TNM分期明显相关。

二氢杨梅素通过调控鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2对结肠癌生长的抑制作用

目的研究二氢杨梅素(DHM)对结肠癌生长的抑制作用及其可能机制。方法 (1)细胞实验:实验分4组:对照组(以2%胎牛血清处理SW480结肠癌细胞)、低、中、高3个剂量实验组(分别以10,20,40μmol·L^(-1)DHM处理SW480结肠癌细胞);以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法检测SW480结肠癌细胞的增殖;以免疫印迹法检测SW480结肠癌细胞中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)蛋白的表达。(2)动物实验:在Balb/c裸小鼠右下肢皮下接种SW480结肠癌细胞悬液0. 2 mL构建移植瘤模型;按照体重将模型小鼠随机分4组:模型组、对照组(顺铂3 mg·kg^(-1))和低、高2个剂量实验组(20,60 mg·kg^(-1)DHM),每组5只;以免疫组化法检测结肠癌组织中RhoGDI2蛋白的表达。结果 (1)细胞实验:处理SW480结肠癌细胞1 d后,对照组和低、中、高3个剂量实验组对结肠癌细胞的抑制率分别为(2. 17±0. 53)%,(5. 83±1. 91)%,(16. 2±2. 82)%和(34. 51±1. 74)%;这4组的RhoGDI2灰度值分别为72. 16±2. 73,61. 39±3. 81,48. 76±3. 92和32. 39±3. 17。3个剂量实验组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。(2)动物实验:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组的RhoGDI2表达强度分别为8053. 60±236. 21,2791. 39±189. 72,6521. 28±172. 89和4381. 86±226. 33,低、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。结论 DHM能够抑制SW480结肠癌细胞的增殖和体内生长,其作用机制可能为抑制RhoGDI2蛋白的表达有关。

晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2和自然杀伤细胞活化受体2D的表达及意义

目的 探讨晚期肺癌患者血中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2 (RhoGDI2)、自然杀伤细胞活化受体2D(NKG2D)的表达水平及临床意义.方法 选择2012年1月至2014年12月50例中晚期肺癌患者为研究对象.肺鳞癌20例,肺腺癌18例,小细胞肺癌12例;Ⅲ期30例,Ⅳ期20例;淋巴结转移22例,无淋巴结转移28例.另选择2012年1月至2014年12月体检健康者50名为对照组.采用ELISA法检测RhoGDI2;采用流式细胞仪检测NKG2D.结果 肺癌Ⅳ、Ⅲ期患者RhoGDI2水平高于对照组[(70.19±8.54)、(49.76±7.25)、(5.62±1.26) μg/L];NKG2D表达水平低于对照组[(71.49±5.57)％、(78.97±6.62)％与(84.59±6.96)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);肺癌Ⅳ期患者RhoGDI2水平高于Ⅲ期患者[(70.19±8.54)与(49.76±7.25) μg/L],肺癌Ⅳ期患者NKG2D水平低于Ⅲ期患者[(71.49±5.57)％与(78.97±6.62)％],差异有统计学意义(P均＜0.05);发生淋巴结转移的患者RhoGDI2水平高于无淋巴结转移[(71.32±6.79)与(48.29±2.36) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.01),NKG2D水平低于无淋巴结转移患者[(72.36±6.62)％与(81.27±6.86)％],差异有统计学意义(P＜0.01).血清RhoGDI2、NKG2D表达之间呈负相关(r=-4.176,P=0.011).结论 RhoGDI2、NKG2D等指标的异常表达与肺癌的临床分期、肿瘤的淋巴结转移有关,而与肺癌的类型无关;RhoGDI2、NKG2D的表达之间呈负相关关系.

规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9靶向Rho GDIα基因敲除质粒的构建及其对小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6迁移的影响

目的利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建Rho鸟苷酸解离抑制因子α(GDIα)的基因敲除载体,并探讨干扰Rho GDIα后对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6迁移的影响。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计Rho GDIα的向导RNA(sgRNA)序列,并与PX458载体相连,构建Rho GDIα基因敲除重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1和PX458-Rho GDIα-sgRNA2;脂质体转染法将重组质粒转染入Hepa 1-6细胞抑制Rho GDIα的基因表达;RT-PCR法检测Rho GDIα被抑制后的mRNA表达情况;划痕法检测Rho GDIα干扰后Hepa 1-6细胞迁移距离的差异;迁移小室法检测抑制Rho GDIα后Hepa 1-6细胞迁移数量的差异。结果成功构建了Rho GDIα的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAs;转染有PX458-Rho GDIα-sgRNA1的Hepa 1-6细胞与对照组只转染空载体PX458的细胞相比,Rho GDIα的表达被明显抑制(P<0.05),而且该组细胞从划痕起始处迁移到空白处距离较远,从迁移小室上端迁移到底端数目明显增多,差异极其显著(P<0.01),说明Rho GDIα被抑制后肝癌细胞的迁移能力提高。结论CRISPR/Cas9法构建的重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1可以有效抑制Rho GDIα的基因表达;Rho GDIα被抑制后明显促进小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的迁移,提示在体情况下,Rho GDIα的表达可能起到抑制细胞迁移的重要作用,在肿瘤组织中,可以利用过表达Rho GDIα来抑制肿瘤细胞的转移。

RhoGDIs在调节RhoGTP酶中的作用

Rho特异鸟苷酸解离抑制因子（Rho- specific guanine nucleotide dissociation inhibitors, RhoGDIs）可以和RhoGTP酶结合形成复合物，来调节RhoGTP酶的活化状态，从而影响细胞的黏附、迁移、增殖等过程。RhoGDIs并不是简单的抑制RhoGTP酶，而是动态地调节RhoGTP酶的稳定、活化和循环。在本综述里，笔者将主要介绍RhoGDIs调节RhoGTP酶的活性、质膜穿梭以及竞争性作用的最新研究进展。

RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究

目的:阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1(Rho GDI1)和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法:采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞Rho GDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L^(-1) TNF-α处理组和Rho GDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测Rho GDI1、Rho A、ROCK表达及活化。结果:TNF-α处理和Rho GDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后Rho GDI1表达显著下降,TNF-α处理和Rho GDI1干扰均可显著提高Rho A表达以及ROCK活化。结论:TNF-α可能通过抑制Rho GDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。

髓源性抑制细胞在鸟苷酸结合蛋白1促进胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其机制

目的:探讨髓源性抑制细胞(MDSC)在鸟苷酸结合蛋白1(GBP1)促进胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其相关机制。方法:选择过表达GBP1的胶质瘤U87细胞(U87-GBP1细胞)和转染空载体的对照U87-Lacz细胞进行实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两种U87细胞GBP1和CC趋化因子配体2(CCL2)mRNA相对表达量或蛋白表达水平,采用CCK-8法检测两种细胞增殖变化。利用免疫磁珠从健康人外周血中分选出CD14 +单核细胞和CD3 + T淋巴细胞。用U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14 +单核细胞,分别为U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组;采用流式细胞术检测CD14 +单核细胞中MDSC比例,用两培养液组作用的CD14 +单核细胞与活化的CD3 + T淋巴细胞共培养,流式细胞术检测活化的CD3 + T细胞增殖情况,分别以未经U87细胞培养液处理的单核细胞或活化CD3 + T淋巴细胞作为对照组。用加入抗人CCL2抗体U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14 +单核细胞,分别为U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组,采用流式细胞术分析CD14 +单核细胞中MDSC比例。分别将U87-GBP1细胞和U87-Lacz细胞原位接种至BALB/c裸鼠颅内致瘤,1周后各分为CC趋化因子受体2(CCR2)抑制剂RS504393治疗组(U87-Lacz+RS裸鼠组和U87-GBP1+RS裸鼠组)和未经治疗的对照组(U87-Lacz裸鼠组和U87-GBP1裸鼠组);30 d后处死裸鼠,分离全脑、脾脏和骨髓组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察裸鼠脑中移植瘤,计算移植瘤体积,采用流式细胞术检测各组织MDSC比例。 结果:U87-GBP1细胞中GBP1蛋白表达水平高于U87-Lacz细胞,但两组细胞体外增殖水平差异无统计学意义( P>0.05)。U87-GBP1培养液组MDSC比例高于U87-Lacz培养液组[(7.75±0.80)%比(4.50±0.08)%, P=0.003],两组均高于对照组[(2.55±0.31)%)]( F=18.27, P=0.002);U87-GBP1培养液组作用的活化CD3 + T淋巴细胞增殖率低于U87-Lacz培养液组[(47.38±0.08)%比(61.70±5.05)%, P=0.040]。U87-GBP1细胞中CCL2 mRNA相对表达量及其培养液中CCL2蛋白表达水平[30.66±0.17和(1 005.00±12.23)ng/L]高于U87-Lacz细胞[1.29±0.15和(111.60±11.44)ng/L](均 P<0.01),U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组MDSC比例分别低于U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组(均 P<0.05)。U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤体积大于U87-Lacz裸鼠组,U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组脑移植瘤体积较未经治疗的相应裸鼠组增长减慢,差异均有统计学意义(均 P<0.05);U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤、脾脏和骨髓中MDSC比例高于U87-Lacz裸鼠组,U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组各组织MDSC比例均较未经RS504393治疗相应裸鼠组低,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:GBP1可能通过促进胶质瘤U87细胞中CCL2表达,招募MDSC,在胶质瘤微环境中集聚形成免疫抑制,进而促进胶质瘤U87细胞在体内增殖。

RhoGDI2与β2肾上腺素能受体减敏的关系及机制研究

目的探讨Rho鸟苷酸解离抑制因子2（RhoGDI2）对气道平滑肌细胞B。。肾上腺素能受体（口zAR）减敏的关系。方法培养人气道平滑肌细胞，以RhoGDI2高表达质粒转染后，用Western blot法检测RhoGDI2的蛋白表达量，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞内腺苷-3’，5’-环化一磷酸（cAMP）的含量，并探究两者关系。检测转染后细胞膜表面B2AR蛋白表达量随时间的变化，及转染后G蛋白耦联受体激酶2（GRK2）、蛋白激酶A（PKA）磷酸化位点蛋白表达情况，再加入GRK2及PKA抑制剂后，用ELISA检测细胞内cAMP的变化。结果RhoGDI2高表达组与阴性对照组及空白组相比，高表达组平滑肌细胞内cAMP含量降低，差异有统计学意义，转染后24h、36h、48h、60h、72h气道平滑肌细胞膜表面8zAR蛋白表达量随转染时间的延长呈下降趋势；RhoGDI2高表达组的BzAR的355，356丝氨酸位点磷酸化水平高于345，346位丝氨酸位点磷酸化水平。RhoGDI2转染后加GRK2抑制剂组、RhoGDI2转染后加PKA抑制剂组与空白对照组相比，气道平滑肌细胞内cAMP含量降低，其中，RhoGDI2转染后加PKA抑制剂组与空白对照组相比差异有统计学意义，RhoGDI2转染后加GRK2抑制剂组与空白对照组相比差异无统计学意义。结论①RhoGDI2高表达可引起人气道平滑肌细胞β2AR的减敏。②RhoGDI2引起人气道平滑肌细胞膜表面β2AR的减敏是通过GRK2磷酸化β2AR起作用。

RhoGDI2在结直肠癌组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系

目的:研究鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho GDI2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其与临床侵袭转移的关系。方法:收集本院于2015年1月至2015年12月收治的80例CRC患者手术切除的原发灶组织和正常癌旁组织。采用免疫组化法检测各组织标本中Rho GDI2的表达情况,并分析其表达量与临床病理特征的相关性。结果:(1)Rho GDI2主要表达于CRC癌细胞胞浆中,在肿瘤原发灶和正常癌旁组织中的阳性表达率分别为26.25%和0.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)肿瘤原发灶中Rho GDI2的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤位置、大小、数量、组织学分级、原发灶分期、血管浸润、神经浸润间均不存在相关关系(P>0.05),而与淋巴结转移及远端转移有关(P<0.05)。结论:Rho GDI2在CRC肿瘤原发灶中呈阳性表达,且其高表达可促进CRC的侵袭转移,可作为CRC治疗的作用靶点。

RhoGDI2的研究进展

Rho鸟苷酸解离抑制因子-2（RhoGDI2）是小G蛋白调节因子家族成员之-，调控多种小G蛋白的生物学活性。它对Rho蛋白有双重调节作用，并从上游调节鸟苷酸交换因子、GTP酶活化蛋白的活性。目前研究表明RhoGDI2影响肿瘤侵袭转移，在多种恶性肿瘤中的异常表达将参与肿瘤的发生发展。研究RhoGDI2将有助于加深对肿瘤侵袭转移机制的了解，为预防肿瘤转移提供特异性、多靶位的治疗方法。另外，RhoGDI2在β2肾上腺素能受体（β2AR）减敏的哮喘小鼠肺组织中高表达，研究RhoGDIz和β2AR的关系为临床防治肚AR减敏提供-个新的切入点和治疗方向。

RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进其顺铂耐药性的研究

目的探讨抑制Rho蛋白鸟苷酸解离抑制因子-1(RhoGDI1)的表达对骨肉瘤顺铂耐药性的影响。方法在骨肉瘤细胞中通过siRNA抑制RhoGDI1的表达(si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组),CCK-8实验检测其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂耐药性的影响,划痕实验和体外Transwell检测其对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响,流式细胞术(FACS)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoGDI1对骨肉瘤细胞凋亡的影响。结果与si-Control组(转染无意序列)比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组骨肉瘤细胞的增殖速度明细降低(P<0.01),对顺铂的耐受性明显降低(P<0.01),迁移到下室的细胞数显著减少;划痕实验和FACS结果显示,与si-Control组比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组细胞的修复能力明显减弱(P<0.05、P<0.01),细胞凋亡率(P<0.01)和凋亡诱导因子Bax的表达水平明显升高(P<0.01)。结论RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进骨肉瘤细胞顺铂耐受性。