RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究

目的:阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1(Rho GDI1)和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法:采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞Rho GDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L^(-1) TNF-α处理组和Rho GDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测Rho GDI1、Rho A、ROCK表达及活化。结果:TNF-α处理和Rho GDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后Rho GDI1表达显著下降,TNF-α处理和Rho GDI1干扰均可显著提高Rho A表达以及ROCK活化。结论:TNF-α可能通过抑制Rho GDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。

RhoGDI蛋白在肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨RhoGDI(Rhoguanine nucleotide dissociation inhibitor)蛋白在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用Western blotting检测苏州大学两所附属医院于2007-2008年收治的39例肺癌及5例肺炎性假瘤患者组织标本中RhoGDI蛋白的表达,并分析RhoGDI蛋白表达与患者临床病理指标的相互关系。结果:小细胞肺癌组织中RhoGDI蛋白的表达水平显著高于非小细胞肺癌和炎性假瘤[(0.903±0.228)vs(0.522±0.152),(0.485±0.095);均P<0.05)]。非小细胞肺癌组织中,低分化癌RhoGDI蛋白的表达水平显著高于中、高分化癌和炎性假瘤[(0.649±0.123)vs(0.458±0.138),(0.485±0.095);均P<0.05]。RhoGDI的表达在鳞癌与腺癌中没有显著差别。非小细胞肺癌Ⅰ～Ⅲ期的RhoGDI蛋白表达水平有逐渐增高趋势,但无显著性差别(F=0.6,P>0.05)。RhoGDI蛋白的表达与原发肿瘤大小(t=1.15,P>0.05)和淋巴结转移无明显相关(t=1.648,P>0.05)。非小细胞肺癌组织RhoGDI的表达水平与血清乳酸脱氢酶水平呈正相关(r=0.46,P<0.01)。结论:肺癌组织中RhoGDI蛋白表达的明显升高与肺癌的病理类型和分化程度有关。

鸟苷酸解离抑制因子-2真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立

目的构建Rab蛋白鸟苷酸解离抑制因子-2(GDI2)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法聚合酶链反应(PCR)扩增GDI2基因片段,构建pcDNA3.1-GDI2真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性,脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株。免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达GDI2蛋白。结论 GDI2真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究GDI2过度表达对肿瘤侵袭和转移的影响奠定了实验基础。

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体。方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物。质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带。再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序。最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度。结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致。病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108vp/mL。结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体。

RhoGDIs在调节RhoGTP酶中的作用

Rho特异鸟苷酸解离抑制因子（Rho- specific guanine nucleotide dissociation inhibitors, RhoGDIs）可以和RhoGTP酶结合形成复合物，来调节RhoGTP酶的活化状态，从而影响细胞的黏附、迁移、增殖等过程。RhoGDIs并不是简单的抑制RhoGTP酶，而是动态地调节RhoGTP酶的稳定、活化和循环。在本综述里，笔者将主要介绍RhoGDIs调节RhoGTP酶的活性、质膜穿梭以及竞争性作用的最新研究进展。

鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2通过调控miRNAs参与肺癌侵袭转移机制研究

目的探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)通过调控miRNA的变化参与肺癌侵袭转移过程。方法构建过表达和表达沉默的RhoGDI2表达载体,稳定转染肺癌A549细胞,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法验证。利用miRNA芯片,筛选可能受RhoGDI2调控的候选miRNAs。结果成功构建过表达和表达沉默的RhoGDI2表达载体,获得稳定表达细胞系,利用miRNA芯片筛选出12个可能受RhoGDI2调控的候选miRNAs。结论证实RhoGDI2在肿瘤细胞表达异常参与肿瘤侵袭转移过程,存在转录后水平的调控方式,为肺癌的侵袭转移机制提供实验及理论依据。

二氢杨梅素通过调控鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2对结肠癌生长的抑制作用

目的研究二氢杨梅素(DHM)对结肠癌生长的抑制作用及其可能机制。方法 (1)细胞实验:实验分4组:对照组(以2%胎牛血清处理SW480结肠癌细胞)、低、中、高3个剂量实验组(分别以10,20,40μmol·L^(-1)DHM处理SW480结肠癌细胞);以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(MTS)法检测SW480结肠癌细胞的增殖;以免疫印迹法检测SW480结肠癌细胞中鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)蛋白的表达。(2)动物实验:在Balb/c裸小鼠右下肢皮下接种SW480结肠癌细胞悬液0. 2 mL构建移植瘤模型;按照体重将模型小鼠随机分4组:模型组、对照组(顺铂3 mg·kg^(-1))和低、高2个剂量实验组(20,60 mg·kg^(-1)DHM),每组5只;以免疫组化法检测结肠癌组织中RhoGDI2蛋白的表达。结果 (1)细胞实验:处理SW480结肠癌细胞1 d后,对照组和低、中、高3个剂量实验组对结肠癌细胞的抑制率分别为(2. 17±0. 53)%,(5. 83±1. 91)%,(16. 2±2. 82)%和(34. 51±1. 74)%;这4组的RhoGDI2灰度值分别为72. 16±2. 73,61. 39±3. 81,48. 76±3. 92和32. 39±3. 17。3个剂量实验组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。(2)动物实验:模型组、对照组和低、高2个剂量实验组的RhoGDI2表达强度分别为8053. 60±236. 21,2791. 39±189. 72,6521. 28±172. 89和4381. 86±226. 33,低、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 001)。结论 DHM能够抑制SW480结肠癌细胞的增殖和体内生长,其作用机制可能为抑制RhoGDI2蛋白的表达有关。