基于ROCK-2/Moesin信号通路探究下调SIP1对子宫内膜癌细胞凋亡侵袭迁移的影响

目的:探究下调SIP1对子宫内膜癌细胞凋亡、迁移、侵袭影响及其作用机制。方法:人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞分为对照组,NC组,SIP1下调组(转染si-SIP1),Y27632组(ROCK抑制剂),SIP1下调组+Y27632组(转染si-SIP1+ROCK抑制剂),通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力,通过Western blot检测各组细胞凋亡关键蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、细胞凋亡基因Bcl-2相关蛋白x(Bax)、Caspase家族蛋白3(Caspase3)、Rho相关激酶2(ROCK-2)和Moesin蛋白表达水平。20只SPF级BALB/c小鼠通过皮下荷瘤建立子宫内膜癌荷瘤模型,对照组(n=10)采用人子宫内膜癌HEC-1A细胞荷瘤,SIP1下调组(n=10)小鼠采用下调SIP1的人子宫内膜癌HEC-1A细胞荷瘤,每3天用游标卡尺测量瘤体积,连续测量21d绘制肿瘤生长曲线,实验终点测量每只小鼠肿瘤质量并检测肿瘤组织中ROCK-2及Moesin蛋白表达水平。结果:细胞实验结果表明,与对照组和NC组相比,SIP1下调组、Y27632组、SIP1下调+Y27632组细胞凋亡比例显著上升,细胞迁移数量减少,细胞侵袭数量减少(P<0.01),NC组与对照组没有显著的统计学差异(P>0.05)。Western blot结果表明,与对照组和NC组相比,SIP1下调组、Y27632组、SIP1下调+Y27632组细胞ROCK和Moesin蛋白表达水平有降低趋势(P<0.01)。小鼠实验结果表明,与对照组相比,下调SIP1后小鼠肿瘤生长速度显著降低,肿瘤质量显著降低(P<0.01),肿瘤组织ROCK-2及Moesin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:下调SIP1可导人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞凋亡,抑制其迁移和侵袭能力,介导ROCK-2/Moesin信号通路。

欧前胡素对人前列腺癌PC3细胞增殖凋亡及RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的:探讨欧前胡素对人前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法:设PC3细胞组、5-氟尿嘧啶组(100μg/mL)、欧前胡素低、高剂量组(60μg/mL、120μg/mL),以上各组每孔设6个平行样,培养72h。噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,Transwell腔室系统测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及蛋白免疫印迹法测定细胞RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白水平。结果:与PC3细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、欧前胡素低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05);与5-氟尿嘧啶组比较,欧前胡素低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(P<0.05);与欧前胡素低剂量组比较,欧前胡素高剂量组OD值、存活率、穿膜数、RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:欧前胡素能明显抑制人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭迁移,促进其凋亡,其机制可能与欧前胡素抑制人前列腺癌PC3细胞RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达进而抑制RhoA/ROCK1信号通路的激活有关。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法将雄性新西兰大耳白兔随机分为空白组和手术组,手术组采用高脂饲料喂养联合腹主动脉球囊损伤法建立AS易损斑块兔模型。将成模兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,分别给予相应干预,连续8周。ELISA检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白(APO)-A、APO-B含量,HE染色观察腹主动脉血管损伤程度,Western blot检测腹主动脉组织Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)蛋白表达,RT-PCR检测腹主动脉组织RhoA和ROCK1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL-C、APO-B含量显著增加,HDL-C、APO-A含量显著减少(P<0.01);腹主动脉内膜增厚,有斑块形成,斑块内可见多处出血,纤维帽薄,管腔狭窄,管腔内可见血栓;腹主动脉组织RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和西药组兔血清TC、TG、LDL-C、APO-B含量显著减少,HDL-C、APO-A含量显著增加(P<0.01,P<0.05);HE染色显示,直接灸组兔血管损伤程度未改善,隔药饼灸组和西药组兔血管中膜损伤程度稍减轻,3组均未见血栓形成,斑块稳定性较模型组增加;腹主动脉组织RhoA和ROCK1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论隔药饼灸能稳定AS易损斑块,其机制可能与抑制RhoA/ROCK1信号通路有关。

抑制HIF-1α表达对糖尿病小鼠RhoA/ROCK信号转导通路的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子1(HIF-1)α表达对糖尿病小鼠RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)信号转导通路的影响。方法糖尿病小鼠33只随机数字表法分为3组-模型组、NC组与抑制组,每组各11只小鼠。NC组与抑制组在玻璃体腔分别注射含siRNA NC序列、HIF-1α序列和转染试剂的混合液,模型组注射等剂量的磷酸盐缓冲液。建模后12周,测定3组小鼠的血糖水平、体重、心脏重量、心脏重量/体重比;采用黄嘌呤氧化法测超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;用Image-Pro图像分析软件计算RhoA、ROCK蛋白的相对表达量。结果建模后12周,抑制组小鼠的血糖水平、体重、心脏重量、心脏重量/体重比、SOD含量、MDA含量、RhoA、ROCK蛋白相对表达量分别为(16.83±1.22)mmol/L、(30.11±2.13)g、(0.09±0.02)g、(2.99±0.12)mg/g、(294.29±12.40)U/mgprot、(1.30±0.22)nmol/mgprot、(0.77±0.09)、(0.87±0.10)。NC组分别为(16.29±1.44)mmol/L、(23.98±1.11)g、(0.12±0.01)g、(5.00±0.14)mg/g、(176.88±14.85)U/mgprot、(2.70±0.42)nmol/mgprot、(2.39±0.15)、(2.48±0.17)。模型组分别为(8.22±0.33)mmol/L、(23.10±0.32)g、(0.12±0.02)g、(5.19±0.26)mg/g、(178.09±16.02)U/mgprot、(2.68±0.87)nmol/mgprot、(2.37±0.16)、(2.45±0.22)。抑制组小鼠的血糖水平、心脏重量、心脏重量/体重比、MDA含量、RhoA、ROCK蛋白相对表达水平低于NC组与模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组小鼠体重、血清SOD含量高于NC组与模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NC组与模型组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制HIF-1α表达在糖尿病小鼠的应用能抑制RhoA/ROCK信号转导通路的激活,降低血清MDA表达,促进SOD的释放,从而降低糖尿病小鼠的血糖水平与心脏重量、心脏重量/体重比,促进恢复正常体重。

丹参酚酸B盐抑制大鼠肝星状细胞中内皮素-1激活的RhoA/ROCK Ⅱ信号通路

目的探讨丹参酚酸B盐(Sal B)对大鼠肝星状细胞(HSC)中内皮素-1(ET-1)激活的RhoA/ROCK信号通路的影响。方法采用肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠HSC。免疫蛋白印迹法检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(MYPT1)磷酸化。特异性抗体沉淀ROCK,进行体外磷酸化反应,以磷酸化底物Thr696-MYPT1(654-880)的含量反映ROCK活性。GST下拉实验检测RhoA活性。结果在大鼠HSC中,ET-1刺激后,RhoA和ROCK Ⅱ活性显著增加,ROCK I活性无明显变化,MYPT1 Thr696和Thr850磷酸化水平均显著增加。ET-1刺激1 min和10 min时,RhoA活性分别是基础状态下的1.95倍(P<0.05)和5.84倍(P<0.01)。ET-1刺激2.5 min和15 min时,ROCK Ⅱ活性分别是基础状态下的3.49倍和4.83倍,均P<0.01,差异有统计学意义。ET-1刺激2.5 min时,MYPT1 Thr696磷酸化水平是基础状态下的3.86倍;刺激15 min时,Thr696磷酸化达到高峰,是基础状态下的5.17倍。Thr850磷酸化亦在ET-1刺激15 min达到高峰,是基础状态下的3.33倍,均P<0.01,差异有统计学意义。在ET-1刺激前给予10-5 mol/L Sal B预处理,则使ET-1诱导的RhoA和ROCK Ⅱ活性分别下降66.84%和76.79%,ET-1诱导的MYPT1 Thr696磷酸化下降80.09%,对Thr850磷酸化水平无影响。结论 Sal B能显著抑制大鼠HSC中ET-1诱导的RhoA和ROCK Ⅱ活化,抑制MYPT1Thr696磷酸化。

Nesfatin-1通过RhoA/ROCK-1通路促进人胃癌AGS细胞的增殖

目的研究Nesfatin-1对人胃癌AGS细胞增殖的影响及其可能的影响机制。方法将人胃癌AGS细胞分为Nesfatin-1组和对照组,分别用浓度为0.1、1、10、100 nmol/L的Nesfatin-1刺激胃癌AGS细胞,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况。选择最佳浓度的Nesfatin-1来刺激AGS细胞,观察Rho激酶抑制剂(Y-27632)对胃癌AGS细胞增殖的影响;各组细胞内RhoA、ROCK-1蛋白表达采用Westem blotting法检测。结果Nesfatin-1呈浓度和时间依赖性促进胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),胃癌细胞内RhoA、ROCK-1蛋白表达明显升高(P<0.05),ROCK抑制剂Y-27632可阻滞Nesfatin-1促进胃癌AGS细胞的增殖(P<0.05),降低RhoA、ROCK-1蛋白表达(P<0.05)。结论Nesfatin-1可促进胃癌AGS细胞的增殖,其机制可能与其调节RhoA/ROCK-1信号通路有关。

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的:探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法:采用OSBPL2基因敲除(Osbpl2-KO)HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果:Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内毛细胞静纤毛变短且排列紊乱;Western blot检测结果表明,在HEI-OC1细胞和小鼠耳蜗中OSBPL2-KO均导致RhoA/ROCK2信号通路的抑制。结论:在听觉细胞中OSBPL2介导的RhoA/ROCK2信号通路在维持肌动蛋白细胞骨架形态和功能的过程中发挥重要的调控作用。

基于RhoA/ROCK1信号通路探讨抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌纤维化的影响

目的通过RhoA/ROCK1信号通路探讨抗纤益心方对扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)大鼠心肌纤维化的作用机制。方法将4周龄Wistar雄性大鼠100只随机选取10只作为正常组,其余90只通过呋喃唑酮诱导DCM大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组,抗纤益心方高(3.6 g·kg^(-1)·d^(-1))、中(1.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量(0.9 g·kg^(-1)·d^(-1))及卡托普利组(10.125 mg·kg^(-1)·d^(-1))。连续给药4周后,超声检测大鼠心脏功能,HE、Masson检测心肌组织病理变化,Western blot、Real-time PCR检测心肌组织中Ras同源蛋白家族成员A(ras homologous family member A,RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(rho associated coiled coil forming protein kinase 1,ROCK1)、肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)、p-MLC、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、COI-I、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白和mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠心脏功能明显降低(P<0.01),心肌组织结构异常、心肌纤维化明显,纤维化因子α-SMA、COI-1、CTGF的表达升高(P<0.01),RhoA/ROCK1信号通路表达上调(P<0.01);与模型组比较,抗纤益心方高、中剂量和卡托普利组大鼠心功能明显改善(P<0.05,P<0.01),心肌结构和心肌纤维化明显减轻,纤维化因子表达降低,RhoA/ROCK1信号通路表达下调(P<0.05,P<0.01);而低剂量组改善不明显(P>0.05)。结论抗纤益心方可以通过下调RhoA/ROCK1信号通路的来抑制扩张型心肌病大鼠心肌纤维化的发展。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1信号通路及PI3K、Akt、mTOR表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔腹主动脉RhoA/ROCK1信号通路及PI3K、Akt、mTOR蛋白表达的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法70只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组、西药组和抑制剂组。采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发斑块破裂制备AS易损斑块模型。各组分别给予相应干预,连续8周。采用ELISA检测血清载脂蛋白A(APO-A)、载脂蛋白B(APO-B)含量,HE染色观察腹主动脉内膜、中膜增生情况并测量内膜、内膜-中膜厚度,免疫组化染色检测Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho同源物相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)蛋白表达,Western blot检测腹主动脉磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清APO-A含量显著减少(P<0.01),APO-B含量显著增加(P<0.01),内膜、内膜-中膜厚度增加,腹主动脉RhoA、ROCK1、PI3K、Akt、mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,隔药饼灸组兔血清APO-A含量显著增加(P<0.01),APO-B含量显著减少(P<0.01),内膜、内膜-中膜厚度减少,腹主动脉RhoA、ROCK1、Akt、mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清APO-B含量显著减少(P<0.01);与隔药饼灸组比较,抑制剂组兔腹主动脉PI3K蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制RhoA/ROCK1信号通路,降低Akt、mTOR蛋白表达,促进细胞自噬,稳定AS易损斑块。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路的影响,探讨其稳定AS易损斑块可能的作用机制。方法70只新西兰大耳白兔随机分为空白组(10只)和手术组(60只),采用高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤+基因转染+药物触发建立AS易损斑块兔模型。将手术组兔随机分为模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组和抑制剂组,直接灸组和隔药饼灸组取“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”和双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,2组穴位隔日交替施灸,西药组予阿托伐他汀1.96 mg/(kg·d)口服,抑制剂组耳缘静脉注射盐酸法舒地尔10 mg/(kg·d),空白组和模型组只捆绑不干预,连续8周。ELISA检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色观察兔腹主动脉内膜和中膜形态,免疫组化染色检测腹主动脉Ras同源物基因组成员A(RhoA)、Rho相关卷曲形成蛋白激酶1(ROCK1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,天狼猩红染色测定胶原纤维含量。结果与空白组比较,模型组兔血清HDL-C含量显著减少(P<0.01),LDL-C含量显著增加(P<0.01);腹主动脉结构紊乱,内膜增厚;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),胶原纤维含量显著减少(P<0.01)。与模型组比较,隔药饼灸组兔血清HDL-C含量显著增加(P<0.05),LDL-C含量显著减少(P<0.01);斑块中细胞形态较模型组更为完整,内膜、中膜界限明显;腹主动脉组织RhoA、ROCK1和MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01),胶原纤维含量显著增加(P<0.01)。结论隔药饼灸可调节AS易损斑块兔HDL-C、LDL-C含量,稳定易损斑块,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK1/MMP-9信号通路、增加胶原纤维含量,进而增加纤维帽厚度有关。

阿托伐他汀对自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘修复及RhoA/Rock1通路的影响

目的探讨阿托伐他汀对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘修复及RhoA/Rock1通路的影响。方法采用MOG35-55免疫建立EAE小鼠模型,小鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、高脂饮食组、高脂饮食+阿托伐他汀组,每组6只,阿托伐他汀每只小鼠每天按0.5 mL混悬液灌服,连续28 d。各组小鼠神经功能评分,采用苏木精-伊红(HE)、固蓝(LFB)染色、透射电镜及免疫组化染色方法检测各组小鼠脊髓组织炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、一氧化氮(NO)的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测脑组织RAS同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关蛋白激酶1(Rock1)蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测脊髓组织硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)及脑组织RhoA、Rock1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠见较多炎性细胞浸润、发生明显脱髓鞘改变、部分髓鞘崩解、断裂、脱失;模型小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO的含量及脑组织RhoA、Rock1蛋白和mRNA表达均明显升高(P<0.01),脊髓组织NG2、MBP蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组小鼠见极少量炎性细胞浸润、脱髓鞘程度明显好转,明显降低小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO的含量及脑组织RhoA、Rock1蛋白和mRNA表达(P<0.05),明显升高MBP、NG2蛋白和mRNA表达(P<0.05);高脂饮食+阿托伐他汀组明显降低小鼠神经功能评分、脑组织RhoA、Rock1蛋白表达,明显升高NG2 mRNA表达。结论阿托伐他汀能改善EAE小鼠炎性细胞浸润及脱髓鞘程度,降低高脂饮食EAE小鼠神经功能评分,其中作用机制可能与调节RhoA/Rock1通路改善脱髓鞘程度,从而发挥对EAE小鼠的治疗作用有关。

一贯煎联合骨髓间充质干细胞调控RhoA/ROCK1通路抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探究一贯煎联合骨髓间充质干细胞在治疗肝纤维化过程中对RhoA/ROCK1通路的作用。方法:将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、干细胞组、一贯煎+干细胞组;四氯化碳腹腔注射6周制备肝纤维化动物模型,干预4周后取材。记录大鼠阴虚表征情况;检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量;HE、Masson染色观察病理改变;实时PCR、蛋白质印迹法检测肝组织中RhoA、Rho相关激酶1(ROCK1)、α-SMA和COL-1 mRNA及蛋白表达;IHC检测α-SMA、COL-1阳性面积。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠具有明显阴虚表征,肝脏出现明显炎症浸润和纤维增生,肝组织RhoA、ROCK1、α-SMA、胶原蛋白-1(COL-1)mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著增加(P<0.05);与模型对照组比较,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、骨髓干细胞、一贯煎+干细胞组大鼠的阴虚表征、肝脏炎症和纤维化程度减轻,RhoA、ROCK1、α-SMA和COL-1 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著减少(P<0.05),其中一贯煎+干细胞组较一贯煎中剂量组、干细胞组效果更优(P<0.05)。结论:一贯煎与骨髓干细胞可通过调控RhoA/ROCK1通路抑制肝星状细胞活化从而发挥抗纤维化的作用,二者协同作用效果优于各自单独作用效果。

大鼠急性高眼压后视网膜RhoA、ROCK-2和ET-1的表达及其相关性研究

目的观察急性高眼压损伤后RhoA、Rho激酶-2(Rho-associated kinase-2,ROCK-2)和内皮素(endothelin-1,ET-1)在大鼠视网膜中的分布、表达及其相关性。方法 30只SD大鼠随机分为正常组(N组)、急性高眼压损伤后1d组(H1组)、3d组(H3组)、5d组(H5组)和7d组(H7组),制作急性高眼压模型后,用免疫组织化学法观察各组RhoA、ROCK-2和ET-1在视网膜中的分布、平均吸光度(average optical density,AOD)及其相关性,Western blotting法观察各组RhoA和ROCK-2在视网膜中的蛋白表达量。结果 N组神经节细胞层中仅见散在几个RGCs中表达RhoA、ROCK-2或ET-1,其余各层均未见相应的阳性染色;损伤组视网膜中RhoA、ROCK-2和ET-1的分布范围随损伤时间的延长而扩大,其AOD值均高于相应N组(H1和H3组:均为P<0.05;H5和H7组:均为P<0.01),其中ET-1表达量分别与RhoA和ROCK-2表达量呈显著正相关(r分别为0.58738和0.80667,均为P<0.05);H1、H3、H5、H7组视网膜中RhoA和ROCK-2蛋白表达均高于N组(均为P<0.05),并随时间的延长显著增加,两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论急性高眼压损伤可以激活视网膜中RhoA/ROCK-2通路,使RhoA和ROCK-2分布范围变广、表达增加,并诱导ET-1释放增加,二者之间有显著正相关性。RhoA/ROCK-2通路的激活在大鼠急性高眼压后视网膜损伤中起到重要作用。

水蛭素抑制RhoA/Rho激酶信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症反应和纤维化的影响

目的 探讨水蛭素抑制RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症反应和纤维化的影响。方法 2020年1—6月,将52只清洁级SD大鼠随机数字表法分为造模组(42只)和对照组(10只)。造模组大鼠通过气管内滴注脂多糖(LPS)溶液建立COPD模型,建模后的大鼠随机数字表法分为模型组、水蛭素组(50 U/kg)、ROCK激活剂组[溶血磷脂酸(LPA,40μg/kg)组、水蛭素+LPA组(50 U/kg水蛭素+40μg/kg LPA)],10只/组。药物组和激活剂组分别按照相应剂量进行干预;其余各组给予生理盐水干预。干预结束后,检测各组大鼠肺功能指标-呼气峰值流速(PEF)及0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)、用力肺活量比值(FVC);颈总动脉取血,检测血清中炎性因子指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;分离肺组织,观察肺组织形态学变化、肺纤维化程度以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达情况。结果 对照组大鼠无肺组织损伤;与对照组PEF(11.21±1.12)V/mL,FEV0.3(31.68±3.24)mL/s,FVC(8.56±0.85)V/mL,IL-1β(65.78±6.66)ng/L,TNF-α(100.32±10.02)ng/L相比,模型组大鼠肺组织损伤及纤维化较为严重,PEF(7.41±0.71)V/mL、FEV0.3(22.42±2.21)mL/s、FVC(4.61±0.46)V/mL较显著降低(P<0.05),而IL-1β(158.63±15.89)ng/L、TNF-α(545.37±54.56)ng/L显著增加,RhoA、Rho激酶1(ROCK1)蛋白表达也增加(P<0.05);与模型组相比,经水蛭素组大鼠肺组织损伤及纤维化程度得到改善,PEF(5.34±0.53)V/mL、FEV0.3(16.15±1.62)mL/s、FVC(8.21±0.82)V/mL较模型组显著增加(P<0.05),而IL-1β(68.72±6.88)ng/L、TNF-α(115.35±11.55)ng/L显著降低,RhoA、ROCK1蛋白表达均显著降低(P<0.05);LPA可减弱水蛭素对COPD大鼠炎症反应和肺纤维化的改善作用(P<0.05)。结论 水蛭素可以降低炎症细胞浸润,改善肺组织损伤和肺纤维化,可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

麝香乌龙丸对人脐静脉内皮细胞的细胞连接及RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:观察麝香乌龙丸对高浓度1-磷酸鞘胺醇(S1P)诱导下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞连接及RhoA/RhoA激酶(ROCK)信号通路的影响,探讨麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:将HUVEC分为4组:对照组,高浓度S1P组,高浓度S1P+麝香乌龙丸组,高浓度S1P+S1PR2拮抗剂JTE013组。采用免疫荧光检测HUVEC中细胞连接相关蛋白ROCK、ZO-1的变化,Western blot检测RhoA、ROCK、磷酸化RhoA激酶(p-ROCK)、ZO-1蛋白的表达水平。结果:高浓度S1P干预后,HUVEC中RhoA、p-ROCK、ROCK蛋白表达均上调,ZO-1表达下调,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。麝香乌龙丸能够下调RhoA、ROCK、p-ROCK蛋白的表达,上调ZO-1表达,与高浓度S1P组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:麝香乌龙丸能够通过RhoA/ROCK通路调控HUVEC细胞连接相关蛋白ROCK、p-ROCK及ZO-1的表达,稳定HUVEC的血管屏障,这可能是麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎的机制之一。

化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响

【目的】观察化瘀祛痰方对急性心肌缺血大鼠心肌组织RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)信号通路中RhoA、ROCK1 mRNA表达的影响,探讨其防治机制。【方法】将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组10只。西药组予以单硝酸异山梨酯水溶液(剂量为3.125 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,中药低、中、高剂量组予以化瘀祛痰方水煎液(剂量分别为10.4、20.8、41.6 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,空白组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,给药7 d。预灌胃7 d后,除正常组外,其余各组大鼠给予腹腔注射异丙肾上腺素(Iso)复制急性心肌缺血模型。观测大鼠心电图ST段总偏移值。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织结构,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清内皮素1(ET-1)含量,qPCR法检测心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA的表达。【结果】与空白组比较,模型组心肌纤维大片断裂,间质出现明显出血,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组心肌纤维断裂情况改善,间质出血减少,心电图ST段偏移值、血清ET-1含量、心肌组织RhoA与ROCK1的mRNA表达水平均降低(P<0.05)。【结论】化瘀祛痰方可改善心肌缺血状态,其机制可能与降低心肌组织RhoA、ROCK1 mRNA表达,从而抑制心肌收缩,改善心肌血流量有关。

益肾化湿颗粒通过RhoA/ROCK1信号通路对糖尿病肾病炎症的影响

目的探讨益肾化湿颗粒通过RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成的蛋白激酶(ROCK)1信号通路对糖尿病肾病炎症的影响。方法SD大鼠分为对照组、糖尿病肾病组、干预组,构建糖尿病肾病模型,干预时间为4周。留取血清、尿液,检测24 h尿蛋白定量、血肌酐、血糖、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。留取肾组织,光镜下观察肾组织病理改变,Western blot检测肾组织RhoA、ROCK1、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白的相对表达情况。结果动物模型建立前,3组大鼠体重、血糖、血肌酐比较,差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预前,与对照组比较,糖尿病肾病组24 h尿蛋白定量、血肌酐、NF-κB、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05),而干预组与糖尿病肾病组以上指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预后,与糖尿病肾病组比较,干预组24 h尿蛋白定量、血肌酐、NF-κB、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。对照组肾组织的肾小球结构完整,糖尿病肾病组肾小球、肾小管提示中晚期改变,干预组较糖尿病肾病组有减轻。与对照组比较,糖尿病肾病组肾组织RhoA、ROCK1、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白相对表达水平升高(P<0.05);与糖尿病肾病组比较,干预组肾组织ROCK1、NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。结论益肾化湿颗粒通过RhoA/ROCK1信号通路减轻糖尿病肾病炎性因子的表达延缓糖尿病肾病进展。

RhoA—Rock信号通路在转化生长因子β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的探讨RhoA—Rock信号通路在转化生长因子β1（TGF—β1）诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转分化中的作用。方法体外培养sD大鼠原代腹膜间皮细胞，静止24h后，采用随机数字表法随机分为以下4组：正常对照组、TGF—β1（10μg／L）刺激组、TGF—β1（10μg／L）＋Y-27632（Rock特异性抑制剂，10μmol／L）组（Y-27632预处理2h）、Y-27632（10μmol／L）组。用TGF—B1（10μg／L）刺激RPMC不同时间，观察α平滑肌肌动蛋白（α—SMA），E钙黏素（E—cadherin）、I型胶原（ColⅠ）的表达。RT-PCR法检测E—cadherin、α-SMA和Col ⅠmRNA表达。Western印迹法检测RhoA（包括总RhoA及活化的RhoA）、E—cadherin、α—SMA、ColⅠ和波形蛋白（vimentin）表达。活化的RhoA南膜蛋广1提取试剂盒提取。结果（1）TGF—β1（10μg/L）刺激RPMC能诱导RhoA活化，于10min开始出现活性升高，为对照组的（2．57±0．52）倍（P〈0．05）；1h达高峰，为对照组的（4．35±0．41）倍（P〈0．05）。（2）TGF—β1（10μg／L）刺激RPMC能导致E-cadherinmRNA和蛋白表达下调，Q—SMA、ColⅠmRNA和蛋白表达上调，呈时间依赖性。（3）Rock特异性抑制剂Y-27632能显著下调仪-SMA、ColⅠmRNA的表达，较TGF-β1刺激组各降低了53．8％和55．7％（均P〈0．05），并且能下调α—SMA、ColI和vimentin蛋白的表达，较TGF-β1刺激组分别降低了42．6％、60．1％和58．1％（均P〈0．05），但不能上调E—eadherinmRNA和蛋白的表达。结论TGF-β1可通过RhoA—Rock信号通路介导大鼠腹膜问皮细胞转分化，抑制该通路可作为防治腹膜纤维化的潜在靶点：

右美托咪定减轻呼吸机相关性肺损伤模型大鼠肺组织损伤

目的探讨右美托咪定(DEX)对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠肺组织Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法建立VILI大鼠模型,将大鼠分为对照组(control组)、模型组(VILI组)、右美托咪定低、高剂量组(DEX-L、DEX-H组)、右美托咪定高剂量+溶血磷脂酸(LPA)组(DEX-H+LPA组)。测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D);HE染色观察肺组织病理形态;ELISA试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平;TUNEL染色法检测肺上皮细胞死亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及RhoA、ROCK1表达水平。结果DEX可以减轻VILI大鼠肺损伤,降低肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达(P<0.05),升高Bcl-2表达(P<0.05);LPA可以促使大鼠肺损伤加重,肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论右美托咪定可能通过抑制RhoA/ROCK1通路保护大鼠呼吸机相关性肺损伤。

SPRED1与急性髓系白血病的发病

SPRED1是一种抑癌基因,其编码的SPRED1蛋白属于Sprouty相关的蛋白家族,主要分布在脑组织,可通过酪氨酸磷酸化等方式调节活性,从而对造血进行调控。SPRED1可抑制Ras-MAPK和RhoA细胞信号传导通路从而抑制肿瘤的发生。SPRED1基因失活可通过上述途径使急性髓系白血病细胞增殖、存活期延长及诱发血管新生,从而促进AML的发生。我们应用Array技术,RT-PCR技术及免疫组化等方法初步证实SPRED1在AML患者中表达减低。本文就SPRED1与急性髓系白血病的发病关系作一综述,旨在探讨白血病的发病机制,为临床诊疗提供新的靶向。