RhoA/Rho激酶信号途径在门静脉高压发病机制中的研究进展

门静脉高压(PHT)是肝硬化后期的一个重要并发症,其引起的上消化道出血、脾大、腹腔积液、侧支循环形成严重影响患者的生存质量。由于PHT发病机制复杂、肝内和肝外存在诸多矛盾,导致临床上缺乏有效治疗PHT的药物,这也是目前PHT治疗的瓶颈问题之一。因此,深入研究PHT的形成机制,开发安全有效、不良反应少的药物一直是该领域的研究热点。调节血管收缩的Rho A/Rho激酶信号途径异常可能是PHT形成的关键机制之一。该文总结了近年来Rho A/Rho激酶信号途径在PHT发病机制中的研究进展,旨在为开发治疗PHT的药物提供新思路。

低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响

目的探讨低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响。方法选取在河北省实验动物中心购入的30只雌性大鼠和15只雄性大鼠进行交配,将未怀孕的雌性大鼠分为正常组,怀孕的雌性大鼠随机分为模型组和低频电脉冲组,正常组的大鼠在处死前未接受任何治疗,模型组用于构建人工流产模型,低频电脉冲组采用电针疗法治疗。检测并比较3组宫内膜厚度、腺体数、纤维化面积比例、E-cadherin、β-catenin、CLDN1蛋白及Rho GTP酶激活蛋白(ArhGAP1)信使RNA(mRNA)、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平,以及RhoA、ROCK1、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果正常组、模型组、低频电脉冲组的大鼠各有10只。低频电脉冲组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内膜腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组和低频电脉冲组子宫内膜纤维化面积比例低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组E-cadherin蛋白、β-catenin、CLDN1蛋白表达水平高于正常组,低频电脉冲组E-cadherin蛋白、β-catenin蛋白表达水平低于模型组,CLDN1蛋白表达水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组ArhGAP1 mRNA表达水平低于正常组,RhoA mRNA和ROCK1 mRNA表达水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低频电脉冲组ArhGAP1 mRNA表达水平高于模型组,RhoA mRNA、和ROCK1 mRNA表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组RhoA蛋白、ROCK1蛋白、IL-6蛋白、TNF-α蛋白表达水平高于正常组和低频电脉冲组(P<0.05)。结论人工流产后大鼠给予低频电脉冲可以抑制RhoA/Rho激酶信号,减少炎症反应和子宫内膜纤维化。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

RhoA/Rho激酶信号通路与先天性尿道下裂发生的相关性研究

目的通过构建先天性尿道下裂模型和在体外培养雄性胎鼠尿道海绵体组织来探讨RhoA/Rho激酶信号通路在先天性尿道下裂发生中的作用。方法通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]灌胃法建立先天性尿道下裂大鼠模型,处死大鼠获得尿道海绵体组织后,免疫组化检测RhoA和p-RhoA蛋白表达,荧光定量PCR(qPCR)检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平,Western blot检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA,p-RhoA,MLCP(myosin light chain phosphatase),p-MLCP,MLC(myosin light chain),pMLC蛋白的表达情况。同时对胎鼠的尿道海绵体组织进行体外培养,使用RhoA/Rho激酶通路的抑制剂处理培养中的尿道海绵体组织,观察RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平。结果成功构建了大鼠尿道下裂模型。免疫组化结果显示与对照组相比,先天性尿道下裂大鼠阴茎组织中p-RhoA表达明显增加。qPCR结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。Western blot结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中p-RhoA、p-MLCP、p-MLC蛋白的表达水平较对照组均明显升高(均P<0.05)。体外培养尿道海绵体组织实验发现,RhoA/Rho激酶通路抑制剂可阻碍RhoA/Rho激酶信号通路激活,从而抑制RhoA、ROCK1、ROCK2的表达并减轻DEHP对雄性胎鼠尿道段组织正常发育的抑制作用。结论 RhoA/Rho激酶信号通路激活与先天性尿道下裂的发生有关,抑制RhoA/Rho激酶信号通路激活可降低RhoA、ROCK1和ROCK2表达从而促进尿道海绵体组织正常发育。

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体（IP3R）是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式。方法培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇（IP3）刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白（α-actin）、β主要组织相容性复合体（β-MHC）及即早基因（c-fos、c-myc）蛋白表达及肝素的干预作用。结果给予IP3（10^-7mmol/L）刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达（P〈0.05）,且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用（P〈0.05）。结论激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一。

RhoA/ROCK信号通路与心血管系统疾病关系的研究进展

心血管疾病是中国人群死亡的主要原因,然而其发病机制尚不明确。研究发现,RhoA/ROCK信号通路与高血压、冠心病、心力衰竭、心律失常等疾病的发生和发展密切相关。ROCK抑制剂也为心血管疾病的治疗提供新的思路,现就RhoA/ROCK信号通路在心血管疾病中研究做一综述。

醛固酮通过激活RhoA/ROCK信号通路诱导大鼠肝星状细胞迁移

目的探讨醛固酮(ALD)诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞迁移的作用及其机制。方法HSC-T6细胞分为阴性对照组、ALD单独处理组、安体舒通预处理组、Y27632预处理组。对照组仅用无血清DMEM培养,其余各组给予1 nmol/L ALD刺激24 h,但安体舒通和Y27632预处理分别在ALD刺激前,分别给予10 nmol/L安体舒通或Y27632预处理1 ho TransweU™实验观察细胞迁移情况、罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)的分布、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化;Western blot法检测细胞Rh。激酶通路上肌球蛋白轻链(MLC)、膜突蛋白(moesin)磷酸化水平。结果ALD处理的HSC-T6细胞迁移增加、F-actin数量增加、MLC和moesin蛋白的磷酸化增强。安体舒通和Y27632均可显著抑制以上作用并抑制MLC和moesin蛋白的磷酸化,两组的抑制效应无明显差别。结论ALD诱导的肝星状细胞的迁移可能与Ras同源蛋白A/Rh。相关卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路的激活有关。

Rho激酶抑制剂保护心肌缺血再灌注损伤的研究

Rho蛋白通过Rho/ROCK信号途径发挥各种生物效应并广泛参与各种生命活动过程,如平滑肌细胞收缩,调节细胞骨架组装,细胞凋亡等过程。近年来研究发现该信号途径与许多心血管疾病如冠心病,高血压,肺动脉高压等疾病的发生发展关系密切。研究表明ROCK蛋白也参与心肌缺血再灌注损伤过程。该文就Rho及其信号通路的生物学特性及在急性心肌缺血再灌注损伤过程中病理生理机制研究及临床应用前景作简要的综述。

平滑肌细胞骨架结构及其信号调节途径

平滑肌细胞骨架是一个复杂的动态性网络,是细胞生命活动不可缺少的细胞结构。Rho通过活化其下游靶分子促进应力纤维的形成,其中Rho-associated coiled-coil kinase(ROCK)和Dial在该过程中起关键作用;PKC通过在细胞内不同定位的亚型使细胞骨架蛋白磷酸化,发挥其调节细胞骨架重构的作用。两条信号转导途径通过Src途径相互联系,共同参与细胞骨架动力学的调节。

RhoA／Rho激酶信号通路在脑出血后血红蛋白影响血脑屏障通透性中的作用

目的探讨脑出血后血红蛋白是否通过激活RhoA／Rho激酶（ROCK）信号通路导致血脑屏障通透性增加。方法70只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（10只1、假手术组（30只）和血红蛋白组（30只），后2组再按照观察时间点的不同分为6h、12h和24h3个亚组（每个亚组10只）。血红蛋白组采用颅内注入血红蛋白法建立大鼠脑出血模型。采用伊文思蓝浓度检测评估各组大鼠血脑屏障的通透性，采用干湿法测定各组大鼠血肿周围脑组织的水含量．采用免疫组化染色检测RhoA和ROCK2蛋白在各组大鼠血脑屏障的表达分布情况，采用荧光定量PCR测定各组大鼠脑中RhoA和ROCK2mRNA的表达情况。结果与假手术组和正常对照组相比．血红蛋白组6h、12h和24h伊文思蓝渗透量和脑组织含水量均明显升高，差异均有统计学意义（RO．05）。免疫组化染色结果显示：正常对照组血脑屏障内皮细胞RhoA和ROCK2未见明显表达，血红蛋白组血肿侧血脑屏障内皮细胞中RhoA和ROCK2呈棕黄色表达，主要表达于胶质细胞的细胞质：实时荧光定量PCR结果显示：与正常对照组和假手术组相比．血红蛋白组RhoAmRNA表达在6h、12h和24h时均明显增高，血红蛋白组ROCK2mRNA表达在6h和12h均明显增高．差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑出血后血红蛋白可能通过激活RhoA／ROCK信号通路引起血脑屏障通透性增加，进而参与脑水肿的发生发展。

右美托咪定减轻呼吸机相关性肺损伤模型大鼠肺组织损伤

目的探讨右美托咪定(DEX)对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠肺组织Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶1(ROCK1)信号通路的影响。方法建立VILI大鼠模型,将大鼠分为对照组(control组)、模型组(VILI组)、右美托咪定低、高剂量组(DEX-L、DEX-H组)、右美托咪定高剂量+溶血磷脂酸(LPA)组(DEX-H+LPA组)。测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D);HE染色观察肺组织病理形态;ELISA试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的水平;TUNEL染色法检测肺上皮细胞死亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及RhoA、ROCK1表达水平。结果DEX可以减轻VILI大鼠肺损伤,降低肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达(P<0.05),升高Bcl-2表达(P<0.05);LPA可以促使大鼠肺损伤加重,肺损伤评分、W/D、细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、cleaved caspase-3、RhoA、ROCK、α-SMA表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论右美托咪定可能通过抑制RhoA/ROCK1通路保护大鼠呼吸机相关性肺损伤。

RhoA／Rho激酶信号通路在TGF—β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

目的 观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA／Rho激酶信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF—β1（10ng／ml）刺激后，分不同作用时间（0、3、6、24h）提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度，Western—blot检测a—SMA的表达水平；并用相同的方法检测不同浓度TGF—β1（0、2、10、50ng／ml）刺激人皮肤成纤维细胞后，a-平滑肌肌动蛋白（d—smoothmuscleactin，a—SMA）的表达水平。用RhoA／Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后，再用TGF—β1刺激，作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Y-27632（10μmol／L）组作为阴性对照组，只用TGF-β（10ng／ml）刺激组作为阳性对照组，分别检测a-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果10ng／mlTGF-β按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0h为1．0，3h为1．9±0．2、6h为2．1±0．1，24h为3．1±0．1。24h较其他3个时间点a-SMA表达量明显上升（n=4，P〈0．05）。不同浓度TGF—β1刺激人皮肤成纤维细胞后，a—SMA的表达量分别为：0ng／ml为1．0，2ng／ml为1．4±0．2，10ng／ml为3．2±0．1，50ng／ml为3．1±0．2。10ng／ml表达量明显高于0ng／ml和2ng／ml（n=4，P〈0．05），较50ng／ml差异无统计学意义（n=4，P〉0．05）。用Y-27632（10μmol／L）处理后，再用TGF—β1刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组a—SMA的表达量（1．2±0．2）较阳性对照组（2．9±0．1）明显降低（n=5，P〈0．05），与空白对照组（1．0）和阴性对照组（1．1±0．1）相比差异均无统计学意义（n=5，P〉0．05）。结论RhoA／Rho激酶信号通路参与了TGF—B。诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化过程。

淫羊藿苷通过调节RhoA/ROCK信号通路改善AD神经元和树突损伤的机制

目的:观察淫羊藿苷对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的作用,并探讨其改善神经元和树突损伤的作用机制。方法:通过对大鼠双侧侧脑室注射β样淀粉蛋白1-42(Aβ_(1-42),2.5 g·L^(-1))建立AD模型,并将大鼠分为模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组(0.03、0.06、0.09 g·kg^(-1)),另设空白组。空白组和模型组按10 mL·kg^(-1)的剂量灌胃等体积的生理盐水。采用Morris水迷宫评估大鼠的认知功能。采用尼氏染色观察大鼠海马CA1区病理形态。采用高尔基染色观察大鼠海马CA1区树突棘密度和树突长度。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、RhoA、ROCK1和ROCK2的m RNA表达水平。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限驻留时间显著减少(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠逃避潜伏期减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限驻留时间增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度显著减少(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、Rho A、ROCK1、ROCK2的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、Rho A、ROCK1、ROCK2的m RNA和蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿苷改善AD认知功能、神经元和树突损伤可能与抑制Rho A/ROCK信号通路相关。

翻白草含药血清对高糖培养肾小管上皮细胞增殖作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:探讨翻白草含药血清对高糖培养小鼠肾小管上皮细胞增殖及其对转分化机制的影响。方法:制备各组大鼠含药血清;10%胎牛血清(FBS)-RPMI 1640培养基培养小鼠肾小管上皮细胞,传代培养后按3 000个/孔接种于96孔培养板,分为正常组、高糖组、厄贝沙坦组及翻白草组;加入相对应6%含药血清的高糖RPMI 1640培养基;培养12,24,48,60 h时分别观察各组细胞形态,并应用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组吸光度A;高糖培养24 h后应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肾小管上皮细胞小G蛋白(RhoA),Rho蛋白激酶1(ROCK1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(Ecadherin)蛋白表达情况。结果:高糖培养后肾小管上皮细胞由扁平不规则的多角形变为长梭形;加入相应含药血清干预后细胞呈扁平不规则的多角形;与正常组比较,12 h时高糖组肾小管上皮细胞呈明显增殖状态(P<0.05),24,48,60 h时增殖显著(P<0.01);与高糖组比较,12 h时翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P<0.05),24,48,60 h时翻白草组抑制肾小管上皮细胞增殖作用显著增强(P<0.01);与厄贝沙坦组比较,48,60 h翻白草组能抑制肾小管上皮细胞增殖(P<0.05);与模型组比较,翻白草组E-cadherin蛋白表达显著增加,RhoA,ROCK1和α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:翻白草含药血清可以抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、抑制肾小管上皮细胞转分化,可能与RhoA/ROCK信号通路有关。

氧化苦参碱调控RhoA/ROCK信号通路介导溃疡性结肠炎E-cadherin及TGF-β的影响

目的:通过检测小鼠结肠组织中Rho激酶(ROCK),E-钙黏蛋白(E-cadherin)及转化生长因子-β(TGF-β)相关指标变化,探讨氧化苦参碱通过RhoA/ROCK信号通路介导上皮-间充质转化,防治溃疡性结肠炎(UC)及其相关癌变的机制。方法:48只SPF级Balb/c雄性小鼠随机分为正常组,模型组,氧化苦参碱低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg^(-1)),Rho激酶抑制剂(Y-27632)组(10 mg·kg^(-1))。采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用1周法制备UC模型,腹腔注射的方式给药,正常组和模型组腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)。自造模起,每天记录小鼠体质量、粪便的性状、隐血及肉眼血便情况,连续给药1周,第8天处死全部小鼠,评估UC小鼠疾病活动指数(DAI);对小鼠结肠进行病理学评分;采用透射电镜观察各组小鼠结肠组织超微结构变化;酶联免疫吸附法测定法(ELISA)检测结肠组织TGF-β含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测小鼠结肠组织Rho激酶-1(ROCK-1),Rho激酶-2(ROCK-2),E-cadherin,TGF-β蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组光镜下见黏膜及黏膜下层大量炎性细胞浸润、腺体排列紊乱、伴有不同程度肠黏膜缺损、甚有溃疡形成,电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,细胞器肿胀,DAI评分显著升高(P <0. 01),结肠组织ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA含量均显著升高(P <0. 01),结肠长度显著降低(P <0. 01),结肠组织E-cadherin,TGF-β蛋白和mRNA表达显著减少(P <0. 01);与模型组比较,各治疗组小鼠光镜及电镜下病理表现均有不同程度的改善,DAI评分显著降低(P <0. 01),结肠长度显著增加(P <0. 01),结肠组织ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA表达水平显著下降(P <0. 01),E-cadherin,TGF-β蛋白和mRNA表达显著上升(P <0. 01);与氧化苦参碱中剂量组比较,氧化苦参碱低、高剂量组ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA含量均明显升高(P <0. 05,P <0. 01),TGF-β和E-cadherin蛋白和mRNA含量显著降低(P <0. 01)。结论:氧化苦参碱可通过下调Rho激酶表达,上调E-cadherin和TGF-β表达,诱导肠上皮细胞凋亡,介导上皮-间充质转化,从而达到缓解溃疡性结肠炎的功效。

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

重组人红细胞生成素对高糖诱导人肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制

目的探讨重组人红细胞生成素(rh EPO)对高糖诱导的正常人肾小管上皮(HK-2)细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法将体外培养的HK-2细胞按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组(高糖终浓度为30mmol/L)、甘露醇对照组(甘露醇浓度为24.5 mmol/L)、rh EPO对照组(rh EPO终浓度为20 U/m L)、不同浓度rh EPO干预组(高糖终浓度为30 mmol/L+rh EPO终浓度分别为5、10、20 U/m L)及Rho激酶抑制剂(Y27632)组(Y27632终浓度为30μmol/L+高糖终浓度为30 mmol/L),各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测各组HK-2细胞Rho A、ROCK1 m RNA的表达;MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术分析细胞凋亡。结果高糖诱导组Rho A及ROCK1m RNA表达较空白对照组显著升高(P<0.05),不同浓度rh EPO干预组Rho A m RNA及ROCK1 m RNA的表达较高糖诱导组显著减少(P<0.05),高糖诱导组及不同浓度rh EPO干预组Rho A m RNA与ROCK1 m RNA表达呈正相关。rh EPO可明显促进HK-2细胞增殖(P<0.05),而高糖可诱导正常人肾小管上皮细胞凋亡,加入不同浓度rh EPO或Y27632干预后,其凋亡明显受抑制(P<0.05),且在实验rh EPO浓度范围内,rh EPO促进增殖及抑制凋亡的作用呈现浓度依赖性。结论 rh EPO可促进高糖诱导的HK-2细胞增殖,抑制高糖诱导的HK-2细胞凋亡,其机制可能与阻断Rho A/ROCK信号通路有关。

氟伐他汀拮抗溶血磷脂酰胆碱致心律失常作用的机制研究

目的探讨降脂药氟伐他汀抑制外源性溶血磷脂酰胆碱(LPC)致心律失常作用的机理。方法 20只雄性SD大鼠,随机分为LPC组和氟伐他汀处理组,应用Langendorff装置行离体心脏灌注。LPC 5μmol/L灌注5 min后冲洗30 min;氟伐他汀组先灌注10μmol/L氟伐他汀30 min,然后灌注5μmol/L LPC 5 min。细胞膜电流测定部分:采用全细胞膜片钳技术,测定LPC对大鼠心室肌细胞膜电流的影响,并观察氟伐他汀的拮抗LPC的作用。结果 LPC可引起离体心脏严重的心律失常,以短阵室速和室颤常见,氟伐他汀可基本拮抗LPC的致心律失常作用;LPC可诱发心肌细胞的巨大非选择性阳离子电流(INSC),这一作用可被氟伐他汀显著抑制;LPC诱发的INSC亦可被小分子G蛋白Rho的抑制剂和Rho激酶抑制剂所拮抗。结论氟伐他汀通过抑制LPC诱发的非选择性阳离子电流来拮抗LPC的致心律失常作用,LPC的致心律失常作用与小分子G蛋白Rho/Rho激酶信号途径有关。

RhoA／ROK通路在桡动脉、乳内动脉、大隐静脉中的表达及功能研究

冠状动脉旁路移植术（CABG）术后桥血管痉挛，使围手术期心绞痛和心肌梗死的发病率升高，是影响患者预后的重要因素。小G蛋白超家族成员RhoA与效应子Rho激酶（Rho kinase，ROK）构成的信号通路与血管平滑肌发生非Ca^2＋依赖性收缩相关。明确RhoA／ROK信号通路在不同桥血管中的表达和功能是否存在差异，以及此差异是否为桡动脉更易发生痉挛的原因，