低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响

目的探讨低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响。方法选取在河北省实验动物中心购入的30只雌性大鼠和15只雄性大鼠进行交配,将未怀孕的雌性大鼠分为正常组,怀孕的雌性大鼠随机分为模型组和低频电脉冲组,正常组的大鼠在处死前未接受任何治疗,模型组用于构建人工流产模型,低频电脉冲组采用电针疗法治疗。检测并比较3组宫内膜厚度、腺体数、纤维化面积比例、E-cadherin、β-catenin、CLDN1蛋白及Rho GTP酶激活蛋白(ArhGAP1)信使RNA(mRNA)、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平,以及RhoA、ROCK1、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果正常组、模型组、低频电脉冲组的大鼠各有10只。低频电脉冲组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内膜腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组和低频电脉冲组子宫内膜纤维化面积比例低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组E-cadherin蛋白、β-catenin、CLDN1蛋白表达水平高于正常组,低频电脉冲组E-cadherin蛋白、β-catenin蛋白表达水平低于模型组,CLDN1蛋白表达水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组ArhGAP1 mRNA表达水平低于正常组,RhoA mRNA和ROCK1 mRNA表达水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低频电脉冲组ArhGAP1 mRNA表达水平高于模型组,RhoA mRNA、和ROCK1 mRNA表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组RhoA蛋白、ROCK1蛋白、IL-6蛋白、TNF-α蛋白表达水平高于正常组和低频电脉冲组(P<0.05)。结论人工流产后大鼠给予低频电脉冲可以抑制RhoA/Rho激酶信号,减少炎症反应和子宫内膜纤维化。

RhoA/Rho激酶信号通路与先天性尿道下裂发生的相关性研究

目的通过构建先天性尿道下裂模型和在体外培养雄性胎鼠尿道海绵体组织来探讨RhoA/Rho激酶信号通路在先天性尿道下裂发生中的作用。方法通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]灌胃法建立先天性尿道下裂大鼠模型,处死大鼠获得尿道海绵体组织后,免疫组化检测RhoA和p-RhoA蛋白表达,荧光定量PCR(qPCR)检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平,Western blot检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA,p-RhoA,MLCP(myosin light chain phosphatase),p-MLCP,MLC(myosin light chain),pMLC蛋白的表达情况。同时对胎鼠的尿道海绵体组织进行体外培养,使用RhoA/Rho激酶通路的抑制剂处理培养中的尿道海绵体组织,观察RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平。结果成功构建了大鼠尿道下裂模型。免疫组化结果显示与对照组相比,先天性尿道下裂大鼠阴茎组织中p-RhoA表达明显增加。qPCR结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。Western blot结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中p-RhoA、p-MLCP、p-MLC蛋白的表达水平较对照组均明显升高(均P<0.05)。体外培养尿道海绵体组织实验发现,RhoA/Rho激酶通路抑制剂可阻碍RhoA/Rho激酶信号通路激活,从而抑制RhoA、ROCK1、ROCK2的表达并减轻DEHP对雄性胎鼠尿道段组织正常发育的抑制作用。结论 RhoA/Rho激酶信号通路激活与先天性尿道下裂的发生有关,抑制RhoA/Rho激酶信号通路激活可降低RhoA、ROCK1和ROCK2表达从而促进尿道海绵体组织正常发育。

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体（IP3R）是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式。方法培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇（IP3）刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白（α-actin）、β主要组织相容性复合体（β-MHC）及即早基因（c-fos、c-myc）蛋白表达及肝素的干预作用。结果给予IP3（10^-7mmol/L）刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达（P〈0.05）,且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用（P〈0.05）。结论激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一。

炎调方调节RhoA/ROCK信号通路对急性胰腺炎大鼠肠屏障损伤的影响

目的观察炎调方调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶(ROCK)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠屏障损伤的影响。方法将84只大鼠随机分为对照组、模型组、炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组、溶血磷脂酸(LPA)组、炎调方+LPA组,每组12只。除对照组外,其他组构建AP大鼠模型。造模成功后立即进行给药处理,每6小时给药1次,共4次。ELISA法检测大鼠血清中淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平;HE染色检测大鼠胰腺组织和回肠组织病理变化;免疫组化染色检测大鼠回肠组织中ZO-1、Occludin蛋白平均光密度;Western blotting检测回肠组织中RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤严重,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度降低(P<0.05);与模型组比较,炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤减轻,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度升高,LPA组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与炎调方高剂量组比较,炎调方+LPA组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤加剧,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度降低(P<0.05)。结论炎调方可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善AP大鼠炎症反应及肠屏障损伤。

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。

Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

藁本内酯通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善脂多糖诱导小鼠肾足细胞损伤

【目的】探讨藁本内酯对脂多糖(LPS)诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制。【方法】(1)体内实验:将小鼠随机分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC(RhoA阴性对照)组、藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA(RhoA过表达)组。除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤(AKI)模型。干预结束后,检测小鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,高碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白的表达。(2)体外实验:将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测细胞RhoA、ROCK蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK蛋白表达水平升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。利用过表达RhoA进行回补实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用(P<0.01)。【结论】藁本内酯可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。

飞燕草素调控RhoA/ROCK信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响

目的:探讨飞燕草素调控Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响。方法:将人结肠癌细胞SW620随机分为对照组、飞燕草素低浓度组(含45μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素中浓度组(含90μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度组(含180μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度+RhoA过表达组(转染RhoA过表达质粒+含180μmol/L飞燕草素培养基培养)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、Transwell及划痕实验分别检测SW620细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用流式细胞术检测SW620细胞凋亡情况。血管生成实验检测SW620细胞血管生成拟态形成情况。采用RT-qPCR检测SW620细胞RhoA、ROCK mRNA表达。采用Western blot检测SW620细胞RhoA、ROCK、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与对照组比较,飞燕草素低、中、高浓度组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平呈浓度依赖性降低,凋亡率呈浓度依赖性升高(均P<0.05)。与飞燕草素高浓度组比较,飞燕草素高浓度+RhoA过表达组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:飞燕草素可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减弱结肠癌细胞恶性生物学行为及血管生成拟态形成,并促进细胞凋亡。

不同负荷剂量替格瑞洛对急性心肌梗死多支病变患者PCI术后溶栓分级及RhoA/Rho激酶活性的影响

目的探讨不同负荷剂量替格瑞洛对急性心肌梗死(AMI)多支病变患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌梗死溶栓(TIMI)分级及RAS同源基因家族成员(Rho)A/Rho激酶通路的影响。方法选取2020年1月—2022年1月秦皇岛市第一医院收治的100例AMI多支病变患者,按照药物的不同剂量进行分组。对照组予以90 mg负荷剂量替格瑞洛,观察组予以180 mg负荷剂量替格瑞洛。比较两组治疗前(入院即刻)、治疗后(PCI术后1年)TIMI分级、血小板参数、炎症反应指标[降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)]、心肌酶谱[肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)]及RhoA/Rho激酶通路活性。结果治疗后观察组TIMI分级优于对照组(H=2.120,P<0.05);治疗后观察组血小板计数、平均血小板体积低于对照组(t=7.639、4.838,P<0.05),但两组血小板压积比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组CRP、PCT、IL-6、cTnI、LDH、MB、RhoA、Rho激酶活性低于对照组(t=21.698、21.372、12.855、14.564、16.851、20.338、8.024、4.949,P<0.05)。结论AMI多支病变患者PCI术后接受负荷剂量替格瑞洛可改善TIMI血流分级,并有效缓解机体炎症反应、心肌酶损伤,其作用机制可能与RhoA/Rho激酶通路有关。

补阳还五汤通过调节HUVEC细胞Rho/Rho激酶信号通路作用于动脉粥样硬化的研究

目的研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及其机制。方法采用Hcy造模,将内皮细胞随机分为10组,即空白组(10%空白血清),模型组(Hcy+10%空白血清),补阳还五汤低剂量组(5%含药血清+Hcy)、中剂量组(10%含药血清+Hcy)、高剂量组(20%含药血清+Hcy),10%FBS+Hcy对照组,Rho激酶(ROCK)阻断剂Y27632+Hcy组,靶分子肌球蛋白轻链激酶(MLCK)阻断剂ML-7+Hcy组,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580+Hcy组,细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+Hcy组,24 h后,用IP裂解液(含PMSF)裂解细胞。用蛋白质印迹法(Western blot)测定ROCK、MLCK蛋白水平,用RT-PCR技术测定ROCK、MLCK m RNA的表达情况,并用激光共聚焦测定细胞骨架结构蛋白纤维肌动蛋白(F-actin)的变化。结果 Western blot与RT-PCR结果显示:模型组与空白组比较,HUVEC细胞ROCK、MLCK蛋白以及其m RNA水平明显上升,而补阳还五汤含药血清组和抑制剂组对其有明显的下调作用。激光共聚焦检测骨架蛋白F-actin实验中,与空白组比较,模型组细胞应力纤维明显增多;而补阳还五汤各剂量组相对于模型组,应力纤维的形成明显降低。结论补阳还五汤可能通过调节内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路,阻止细胞骨架的改变,减轻内皮细胞损伤而发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

Rho激酶信号通路与大鼠心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Rho激酶信号通路在心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡组织中的表达变化及对心肌细胞凋亡的影响作用。方法选取健康雄性Wistar大鼠,通过结扎左前降支建立大鼠心肌梗死模型,将24 h后仍然存活的大鼠选取30只,随机分为模型组和治疗组(法舒地尔5 mg/kg,2次/d)各15只,并另外选取健康雄性大鼠15只作为假手术组,假手术组和模型组给予等量生理盐水处理,比较4 w后3组心肌梗死面积及Rho激酶mRNA、蛋白等指标的表达差异。结果 3组左心室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)差异均有统计学意义(P<0.05),模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于治疗组和假手术组(P<0.05),LVEDP显著高于治疗组和假手术组(P<0.05),治疗组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于假手术组(P<0.05),LVEDP显著高于假手术组(P<0.05)。治疗组心肌缺血面积低于模型组但差异不显著(P>0.05);治疗组心梗面积显著低于模型组(P<0.05)。3组Rho激酶mRNA、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05);组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中的Rho激酶mRNA、Bax蛋白达显著增加,同时Bcl-2蛋白表达降低,法舒地尔能够降低Rho激酶mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌梗死面积。

Rho/Rho激酶信号通路与脉管收缩

Rho/Rho激酶信号通路在正常血管、淋巴管等脉管收缩过程中发挥重要的调节作用,并参与休克后血管反应性和钙敏感性的双相调节以及休克淋巴管低反应性的发生。以Rho/Rho激酶为靶点,对于干预休克脉管系统低反应性的发生具有重要意义。本文综述Rho/Rho激酶信号通路在脉管收缩中的调节机制。

RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用

目的探讨RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定能引起细胞生长显著性抑制最小浓度(1μmol/L)的紫杉醇。流式细胞仪检测细胞周期和RhoA蛋白表达,Western blotting检测ROCKI、细胞周期蛋白(cyclins)及周期依赖性激酶(CDKs)的表达。结果紫杉醇处理C33A细胞后,G2/M细胞数和RhoA/ROCKI蛋白表达显著性增加,并呈时间依赖性;而cyclin B1、A、D1和CDK1蛋白表达显著性降低。上述现象被RhoA抑制剂C3转移酶全部反转;却被ROCKI蛋白抑制剂Y-27632部分反转,但与对照相比差异仍显著。紫杉醇或RhoA/ROCKI抑制剂对CDK2的表达无显著性影响。结论紫杉醇诱导了宫颈鳞癌C33A细胞的G2/M期阻滞,其机制与RhoA活性增强后抑制特异的cyclins和CDKs有关,而下游通路中ROCKI活性仅起到部分作用。

RhoA/Rho激酶信号途径在门静脉高压发病机制中的研究进展

门静脉高压(PHT)是肝硬化后期的一个重要并发症,其引起的上消化道出血、脾大、腹腔积液、侧支循环形成严重影响患者的生存质量。由于PHT发病机制复杂、肝内和肝外存在诸多矛盾,导致临床上缺乏有效治疗PHT的药物,这也是目前PHT治疗的瓶颈问题之一。因此,深入研究PHT的形成机制,开发安全有效、不良反应少的药物一直是该领域的研究热点。调节血管收缩的Rho A/Rho激酶信号途径异常可能是PHT形成的关键机制之一。该文总结了近年来Rho A/Rho激酶信号途径在PHT发病机制中的研究进展,旨在为开发治疗PHT的药物提供新思路。

同型半胱氨酸通过Rho激酶信号通路促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力与迁移

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)活力和迁移的作用及可能的分子机制。方法:分离培养大鼠BASMCs,给予不同浓度的Hcy刺激后,用CCK-8法初步测定细胞活力的变化,Western blot检测Rho激酶信号通路的活性。然后固定Hcy的浓度(1 mmol/L),并采用ROCK抑制剂Y-27632作为工具药对细胞进行处理,流式细胞术检测细胞的周期分布,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移情况;检测细胞抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平反映细胞的氧化应激状态。结果:Hcy可浓度依赖性地提高BASMCs的活力,并上调细胞中GTP-RhoA和ROCK2的蛋白表达(P<0.05);同浓度的Hcy处理细胞后,48 h处理组的细胞活力显著高于24 h处理组(P<0.05)。Hcy处理组BASMCs中S期细胞的比例明显升高,G0/G1期细胞的比例显著降低(P<0.05);加入Y-27632预处理可显著抑制Hcy处理组BASMCs的G1/S期转换。划痕实验和Transwell的实验结果显示,Hcy处理组BASMCs的迁移率显著高于对照组;加入Y-27632预处理可抑制Hcy处理组BASMCs的迁移(P<0.05)。此外,Hcy可降低BASMCs中SOD和GSH-Px的活性,同时升高MDA的含量;相较Hcy处理组,加入Y-27632预处理后,细胞内SOD和GSH-Px的活性升高,MDA的含量降低(P<0.05)。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的活力及迁移,其作用机制可能与激活Rho激酶信号通路并提高细胞内氧化应激的水平有关。

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。