不同负荷剂量替格瑞洛对急性心肌梗死多支病变患者PCI术后溶栓分级及RhoA/Rho激酶活性的影响

目的探讨不同负荷剂量替格瑞洛对急性心肌梗死(AMI)多支病变患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌梗死溶栓(TIMI)分级及RAS同源基因家族成员(Rho)A/Rho激酶通路的影响。方法选取2020年1月—2022年1月秦皇岛市第一医院收治的100例AMI多支病变患者,按照药物的不同剂量进行分组。对照组予以90 mg负荷剂量替格瑞洛,观察组予以180 mg负荷剂量替格瑞洛。比较两组治疗前(入院即刻)、治疗后(PCI术后1年)TIMI分级、血小板参数、炎症反应指标[降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)]、心肌酶谱[肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)]及RhoA/Rho激酶通路活性。结果治疗后观察组TIMI分级优于对照组(H=2.120,P<0.05);治疗后观察组血小板计数、平均血小板体积低于对照组(t=7.639、4.838,P<0.05),但两组血小板压积比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组CRP、PCT、IL-6、cTnI、LDH、MB、RhoA、Rho激酶活性低于对照组(t=21.698、21.372、12.855、14.564、16.851、20.338、8.024、4.949,P<0.05)。结论AMI多支病变患者PCI术后接受负荷剂量替格瑞洛可改善TIMI血流分级,并有效缓解机体炎症反应、心肌酶损伤,其作用机制可能与RhoA/Rho激酶通路有关。

低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响

目的探讨低频电脉冲通过RhoA/Rho激酶信号通路在流产模型子宫内的影响。方法选取在河北省实验动物中心购入的30只雌性大鼠和15只雄性大鼠进行交配,将未怀孕的雌性大鼠分为正常组,怀孕的雌性大鼠随机分为模型组和低频电脉冲组,正常组的大鼠在处死前未接受任何治疗,模型组用于构建人工流产模型,低频电脉冲组采用电针疗法治疗。检测并比较3组宫内膜厚度、腺体数、纤维化面积比例、E-cadherin、β-catenin、CLDN1蛋白及Rho GTP酶激活蛋白(ArhGAP1)信使RNA(mRNA)、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平,以及RhoA、ROCK1、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果正常组、模型组、低频电脉冲组的大鼠各有10只。低频电脉冲组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组子宫内膜厚度高于模型组,子宫内膜腺体数多于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常组和低频电脉冲组子宫内膜纤维化面积比例低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组E-cadherin蛋白、β-catenin、CLDN1蛋白表达水平高于正常组,低频电脉冲组E-cadherin蛋白、β-catenin蛋白表达水平低于模型组,CLDN1蛋白表达水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组ArhGAP1 mRNA表达水平低于正常组,RhoA mRNA和ROCK1 mRNA表达水平高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低频电脉冲组ArhGAP1 mRNA表达水平高于模型组,RhoA mRNA、和ROCK1 mRNA表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组RhoA蛋白、ROCK1蛋白、IL-6蛋白、TNF-α蛋白表达水平高于正常组和低频电脉冲组(P<0.05)。结论人工流产后大鼠给予低频电脉冲可以抑制RhoA/Rho激酶信号,减少炎症反应和子宫内膜纤维化。

RhoA/Rho激酶通路在血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表达纤维连接蛋白中的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)纤维连接蛋白(FN)表达的影响,并探讨RhoA/Rho激酶通路在AngⅡ诱导FN表达中的相关机制。方法分别以不同时间(0、6、12、24、48h)和不同剂量(0、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)AngⅡ刺激体外培养的SD大鼠VAF,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测FN的表达变化,并分别应用表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒和Rho激酶抑制剂Y27632进行干预,观察其对AngⅡ诱导FN表达的影响。结果 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN。应用10-7 mol/L AngⅡ刺激VAF 24h,FN mRNA表达和蛋白表达增高最为明显(均P<0.05)。与AngⅡ刺激组比较,表达目的基因N19RhoA的重组腺病毒和Y27632可明显抑制AngⅡ诱导的FN mRNA(N19RhoA组0.78±0.11,Y27632组0.72±0.08比AngⅡ刺激组1.82±0.12,均P<0.05)和蛋白表达(N19RhoA组1.56±0.12,Y27632组1.43±0.12比AngⅡ刺激组3.89±0.32,均P<0.05)。结论 AngⅡ促进大鼠VAF表达FN,RhoA/Rho激酶通路参与了该过程的调控。

炎调方调节RhoA/ROCK信号通路对急性胰腺炎大鼠肠屏障损伤的影响

目的观察炎调方调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho激酶(ROCK)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠屏障损伤的影响。方法将84只大鼠随机分为对照组、模型组、炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组、溶血磷脂酸(LPA)组、炎调方+LPA组,每组12只。除对照组外,其他组构建AP大鼠模型。造模成功后立即进行给药处理,每6小时给药1次,共4次。ELISA法检测大鼠血清中淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平;HE染色检测大鼠胰腺组织和回肠组织病理变化;免疫组化染色检测大鼠回肠组织中ZO-1、Occludin蛋白平均光密度;Western blotting检测回肠组织中RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤严重,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度降低(P<0.05);与模型组比较,炎调方低剂量组、炎调方高剂量组、乌司他丁组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤减轻,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度升高,LPA组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与炎调方高剂量组比较,炎调方+LPA组大鼠胰腺组织和回肠组织病理损伤加剧,淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO水平及RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高,ZO-1、Occludin蛋白平均光密度降低(P<0.05)。结论炎调方可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善AP大鼠炎症反应及肠屏障损伤。

RhoA/Rho激酶信号通路与肺动脉高压

目前研究已发现RhoA/Rho激酶信号通路参与了人体多种疾病的形成,如高血压、冠心病、脑率中等。肺动脉高压的病理学改变包括内皮细胞的损伤、增殖,肺血管平滑肌细胞的高反应性,炎症细胞迁移和黏附以及肺小血管形成和栓塞;Rho激酶调节细胞的多种生物学行为和功能,如收缩、黏附、迁移、增殖、凋亡、基因表达等。研究表明RhoA/Rho激酶信号通路通过多种方式参与了肺动脉高压的形成。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

RhoA/Rho激酶信号通路与先天性尿道下裂发生的相关性研究

目的通过构建先天性尿道下裂模型和在体外培养雄性胎鼠尿道海绵体组织来探讨RhoA/Rho激酶信号通路在先天性尿道下裂发生中的作用。方法通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]灌胃法建立先天性尿道下裂大鼠模型,处死大鼠获得尿道海绵体组织后,免疫组化检测RhoA和p-RhoA蛋白表达,荧光定量PCR(qPCR)检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平,Western blot检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA,p-RhoA,MLCP(myosin light chain phosphatase),p-MLCP,MLC(myosin light chain),pMLC蛋白的表达情况。同时对胎鼠的尿道海绵体组织进行体外培养,使用RhoA/Rho激酶通路的抑制剂处理培养中的尿道海绵体组织,观察RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平。结果成功构建了大鼠尿道下裂模型。免疫组化结果显示与对照组相比,先天性尿道下裂大鼠阴茎组织中p-RhoA表达明显增加。qPCR结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。Western blot结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中p-RhoA、p-MLCP、p-MLC蛋白的表达水平较对照组均明显升高(均P<0.05)。体外培养尿道海绵体组织实验发现,RhoA/Rho激酶通路抑制剂可阻碍RhoA/Rho激酶信号通路激活,从而抑制RhoA、ROCK1、ROCK2的表达并减轻DEHP对雄性胎鼠尿道段组织正常发育的抑制作用。结论 RhoA/Rho激酶信号通路激活与先天性尿道下裂的发生有关,抑制RhoA/Rho激酶信号通路激活可降低RhoA、ROCK1和ROCK2表达从而促进尿道海绵体组织正常发育。

RhoA/Rho激酶信号通路与阴茎勃起功能关系

ED为男性常见疾病,全球40～70岁男子中患病率达52%。近年来已认识到RhoA/Rho激酶信号通路在维持阴茎萎软与导致ED中发挥重要作用,本文总结了近年来对RhoA/Rho激酶信号通路的研究进展,并阐明其在阴茎勃起中的作用机制,以及NO/cGMP/PKG信号通路与RhoA/Rho激酶信号通路之间的相互关系,为进一步研究阴茎勃起过程中分子信号通路奠定基础。

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体（IP3R）是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式。方法培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇（IP3）刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白（α-actin）、β主要组织相容性复合体（β-MHC）及即早基因（c-fos、c-myc）蛋白表达及肝素的干预作用。结果给予IP3（10^-7mmol/L）刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达（P〈0.05）,且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用（P〈0.05）。结论激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一。

Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。

Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

藁本内酯通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善脂多糖诱导小鼠肾足细胞损伤

【目的】探讨藁本内酯对脂多糖(LPS)诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制。【方法】(1)体内实验:将小鼠随机分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC(RhoA阴性对照)组、藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA(RhoA过表达)组。除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤(AKI)模型。干预结束后,检测小鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,高碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白的表达。(2)体外实验:将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测细胞RhoA、ROCK蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK蛋白表达水平升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。利用过表达RhoA进行回补实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用(P<0.01)。【结论】藁本内酯可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤。

“起痿3号”联合西地那非对糖尿病勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及AKT/eNOS通路的影响研究

目的:探讨“起痿3号”联合西地那非对糖尿病勃起功能障碍(DED)大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及AKT/eNOS通路的影响。方法:用链脲佐菌素溶液腹腔注射SD雄性大鼠,成功造模糖尿病大鼠。饲养8周后,大鼠颈部注射阿扑吗啡,制备DED大鼠模型。将24只造模成功的大鼠随机分为模型对照组(MC组)、西地那非组[5 mg/(kg·d)](S组)、“起痿3号”低剂量[10 g/(kg·d)]+西地那非组[5 mg/(kg·d)](LQ+S组)及“起痿3号”高剂量[20 g/(kg·d)]+西地那非组[5 mg/(kg·d)](HQ+S组),每组6只,另配置6只空白对照组大鼠(BC组),BC组和MC组给予等量生理盐水,余组大鼠连续给药6周。颈部注射阿扑吗啡观察5组大鼠的勃起次数,通过Western印迹检测大鼠阴茎海绵体组织Rho激酶活性及p-AKT、eNOS的蛋白表达水平。结果:与BC组比较,所有造模后的大鼠血糖均升高,体质量降低,提示造模成功。与MC组对比,S组、LQ+S组及HQ+S组大鼠模型的勃起次数显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。HQ+S组大鼠勃起次数多于S组大鼠勃起次数,差异具有统计学意义(P<0.05)。与BC组对比,MC组大鼠阴茎海绵体中的Rho-GTP激酶活性表达水平显著提高(P<0.05);HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的Rho-GTP激酶活性表达水平显著低于S组(P<0.05)。各组大鼠阴茎海绵体中的p-AKT蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。与MC组对比,BC组、HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的eNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05);HQ+S组大鼠阴茎海绵体中的eNOS蛋白表达水平显著高于LQ+S组与S组(P<0.05)。结论:高剂量“起痿3号”联合西地那非能够改善DED大鼠勃起功能,其机制可能与通过抑制Rho-GTP激酶活性和增加e-NOS通路蛋白表达以释放更多NO有关。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。

RhoA/Rho激酶信号通路在肺动脉高压中作用及尼索地平对其影响

目的探讨Rho A/Rho激酶信号通路在大鼠肺动脉高压[5-羟色胺(HT)诱导]中对其肺动脉平滑肌细胞的作用及尼索地平(Nis)与此信号通路的关系。方法将原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)随机分为空白对照组、5-HT(1μmol/L)组,Nis(1×10^(-5)、1×10^(-6)、1×10^(-7)及1×10^(-8)mol/L)组。噻唑蓝(MTT比色法)测定大鼠PASMCs增殖,Western印迹法及RT-PCR法检测PASMCs增殖细胞的Rho A、Rho激酶mRNA及Rho激酶的调节亚单位p-磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(MYPT)1水平。结果不同浓度的Nis均能明显抑制5-HT诱导的PASMCs增殖(P<0.05),呈现出一定的浓度依赖性;并且降低5-HT诱导的Rho A、Rho激酶mRNA表达及MYPT1磷酸化。结论5-HT作用下肺动脉高压大鼠PASMCs存在增殖及Rho A/Rho激酶信号通路异常表现,Nis能够抑制该细胞异常增殖并调节信号通路表达。

飞燕草素调控RhoA/ROCK信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响

目的:探讨飞燕草素调控Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响。方法:将人结肠癌细胞SW620随机分为对照组、飞燕草素低浓度组(含45μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素中浓度组(含90μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度组(含180μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度+RhoA过表达组(转染RhoA过表达质粒+含180μmol/L飞燕草素培养基培养)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、Transwell及划痕实验分别检测SW620细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用流式细胞术检测SW620细胞凋亡情况。血管生成实验检测SW620细胞血管生成拟态形成情况。采用RT-qPCR检测SW620细胞RhoA、ROCK mRNA表达。采用Western blot检测SW620细胞RhoA、ROCK、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与对照组比较,飞燕草素低、中、高浓度组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平呈浓度依赖性降低,凋亡率呈浓度依赖性升高(均P<0.05)。与飞燕草素高浓度组比较,飞燕草素高浓度+RhoA过表达组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:飞燕草素可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减弱结肠癌细胞恶性生物学行为及血管生成拟态形成,并促进细胞凋亡。

肿瘤坏死因子-α抑制剂己酮可可碱对糖尿病大鼠阴茎海绵体RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的:研究糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中RhoA/Rho激酶信号通路改变以及肿瘤坏死因子(TNF)吨抑制剂己酮可可碱(PTX)对该信号通路和阴茎勃起功能的影响。方法:SD大鼠分为对照组、糖尿病组和糖尿病药物干预组;高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素注射诱导糖尿病;腹腔埋置微渗透泵持续慢性给药;在体记录阴茎海绵体窦内压(ICP):ELISA检测血清TNF-α浓度;Western blot检测海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)以及RhoA/Rho激酶信号通路分子的蛋白表达水平。结果:与糖尿病组比,糖尿病药物干预组血清TNF-α浓度明显下降(P<0.01),阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1和p-MYPT1表达下调(P<0.05),eNOS和nNOS表达增加(P<0.05),阴茎ICP指数显著升高(P<0.05)。结论:TNF-α促进阴茎海绵体组织RhoA/Rho激酶信号通路的激活与表达上调,参与糖尿病性勃起功能障碍的发病机制:PTX对糖尿病大鼠的勃起功能有保护作用。

RhoA/ROCK信号通路在动脉粥样硬化发生中的作用

Rho A/ROCK通路参与细胞肌动蛋白骨架的调节、细胞的收缩、黏附、增生、分化及基因的表达等。越来越多的证据表明,其在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要作用。对Rho A/ROCK通路的研究将拓展对有关心血管疾病的认识,有望为心血管疾病提供新的治疗靶点。

雄激素调控RhoA/Rho激酶改善去势大鼠勃起功能障碍的机制研究

目的探究雄激素调控RhoA/Rho激酶改善去势大鼠勃起功能障碍的机制。方法 40只健康8周龄SD雄性大鼠随机分成4组:A组为对照组;B组为实验组,给予手术切除双侧睾丸;C、D组为干预组,大鼠手术去势后每天给予不同浓度的十一酸睾酮(安特尔)灌胃(C组:20mg/kg,D组:10mg/kg),其余组给予等量的生理盐水。治疗8周后,检测大鼠血清睾酮浓度,海绵体测压评价大鼠勃起功能,Western blot检测大鼠阴茎海绵体S1P2/RhoA/Rho激酶的含量。结果相较于A组[(17.08±1.53)nmol/L]、C组[(15.47±1.62)nmol/L]和D组[(8.73±2.12)nmol/L]大鼠的血清睾酮浓度,B组[(1.34±0.62)nmol/L]明显降低(均P<0.05);海绵体测压结果显示B组MaxICP/MAP明显小于A组、C组和D组(均P<0.05);Western blot检测S1P2、RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白在B组表达明显高于A组、C组和D组(均P<0.05)。结论应用安特尔进行雄激素替代治疗可以通过抑制S1P2/RhoA/Rho激酶的激活,从而抑制阴茎海绵体平滑肌收缩,改善去势大鼠勃起功能。

阿托伐他汀抑制RhoA/Rho激酶活性逆转低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉高压和肺血管重构

目的:探讨阿托伐他汀是否通过抑制肺动脉RhoA/Rho激酶通路的激活而逆转低氧所致的大鼠肺动脉高压及肺血管重构。方法:32只成年雄性Westar大鼠随机分成4组:A组为正常对照组;B,C,D组建立常压低氧性肺动脉高压大鼠模型,自低氧干预第1天起C组每日给予1mg/mL阿托伐他汀溶液10mg/kg灌胃,D组以生理盐水10mL/kg灌胃。模型建成时右心导管测定肺动脉平均压(mPAP);肺组织病理切片对肺小血管周围炎性细胞浸润和肺血管结构改变进行评分,采用病例图像分析系统测定肺小动脉管壁厚度占外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%),评价肺血管重构的严重程度;Western印迹检测肺动脉组织蛋白中RhoA的表达,Rho激酶的调节亚单位MYPT-1磷酸化水平。结果:低氧干预B组大鼠mPAP,右室肥大指数[RV/(LV+S)],WT%,WA%分别为(29.6±1.1)mmHg,(39.0±0.7)%,(35.6±2.4)%,(56.5±5.1)%,较正常对照A组[(16.8±0.7)mmHg,(29.4±0.5)%,(22.3±1.2)%,(36.6±2.3)%]增高,差异均有统计学意义(P<0.05);经阿托伐他汀干预C组大鼠mPAP,RV/(LV+S),WT%,WA%分别为(25.3±3.2)mm-Hg,(36.3±2.1)%,(29.2±3.2)%,(48.1±2.7)%,较正常对照A组高(P<0.05),同时较低氧干预B组低(P<0.05);生理盐水对照D组上述指标均与低氧干预C组无明显差别。Western印迹结果显示:在B组大鼠肺动脉组织中RhoA,磷酸化MYPT-1表达明显较A组大鼠上调,C组大鼠则较B组大鼠有明显减低。结论:阿托伐他汀能显著降低低氧性肺动脉高压大鼠的mPAP,改善肺血管的重构,其作用机制可能与阿托伐他汀抑制肺动脉中RhoA/Rho激酶活性有关。