上调ARHGAP10对前列腺癌细胞和AKT/β-catenin通路的影响

目的:探讨上调RhoGTP酶激活蛋白10(ARHGAP10)对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:将体外培养的PC-3细胞分为CN(对照)组、NC组(转染空载体)和ARHGAP10组(转染ARHGAP10过表达质粒),采用MTT法、Transwell小室和流式细胞术分别检测各组PC-3细胞增殖、侵袭迁移和凋亡情况,Western blot检测PC-3细胞中Ki67、MMP-2、E-cadherin、Vimentin、Bcl-2、Bax、AKT、p-AKT和β-catenin蛋白表达。结果:与CN组和NC组比较,ARHGAP10组细胞增殖活力、侵袭迁移能力和Ki67、MMP-2、Vimentin、Bcl-2、p-AKT、β-catenin蛋白表达水平以及AKT、β-catenin mRNA表达水平均明显降低,而细胞凋亡率和E-cadherin、Bax蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:上调前列腺癌细胞中ARHGAP10的表达可抑制细胞增殖、侵袭迁移并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其对AKT/β-catenin通路的抑制有关。

宫腔粘连患者子宫内膜组织ArhGAP29、LOXL 2及TGF-β1的表达及临床意义

目的探讨宫腔粘连患者子宫内膜组织中RhoGTP酶激活蛋白29(ArhGAP29)、赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,并分析3个指标在宫腔粘连发病中的作用机制。方法选取2016年3月到2017年10月该院收集的76例宫腔粘连患者粘连周围的子宫内膜组织作为观察组标本,另选取该院同期收集的30例输卵管性不孕患者的正常子宫内膜组织标本作为对照组标本。采用免疫组化法检测子宫内膜组织中ArhGAP29、LOXL2及TGF-β1的表达,并分析3个指标的表达与宫腔粘连患者临床病理特征的关系以及3个指标之间的相关性。结果观察组患者子宫内膜组织中ArhGAP29的免疫组化反应评分(IRS)低于对照组,LOXL2及TGF-β1的IRS得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);宫腔粘连患者子宫内膜组织ArhGAP29表达与美国生育学会(AFS)分级、闭经有关(P<0.05);TGF-β1表达与AFS分级有关(P<0.05);LOXL2表达与刮宫次数有关(P<0.05)。ArhGAP29表达分别与LOXL2、TGF-β1表达呈负相关(P<0.05),LOXL2表达与TGF-β1表达呈正相关(P<0.05)。结论宫腔粘连患者子宫内膜组织中的ArhGAP29呈低表达,LOXL2及TGF-β1呈高表达,三者之间存在相关性,其均可能是通过影响子宫内膜纤维化进程来影响宫腔粘连的进展。

中国人群非综合征型唇腭裂遗传背景研究新进展

非综合征型唇腭裂(NSCL/P)是人类最普遍的颅颌面畸形之一,病因复杂,目前普遍认为其发病机制主要与遗传和环境因素有关。通过流行病学调查、全基因组关联研究和动物模型分析等,在NSCL/P易感基因座的鉴定方面取得了重大进展。围绕中国人群进行的NSCL/P遗传病因学最新研究显示,与NSCL/P发病率有重要关系的易感基因有RhoGTP酶激活蛋白29(Arhgap29)、抑癌基因p53、甲状腺转录因子2(TTF2或FOXE1)、成纤维细胞生长因子(FGF)、Sprouty基因(SPRY)、脊髓灰质炎病毒受体相关基因(PVRL)。研究表明,Arhgap29、p53、FOXE1、FGF、SPRY及PVRL基因与中国人群NSCL/P的发生有明显关联。同时,单核苷酸位点包括rs4791774(p53)、rs7043516(FOXE1)等在不同的人群中缺乏一致性,甚至会出现背离现象,这可能源于中国民族构成的复杂性以及NSCL/P的遗传异质性。固而有必要针对其遗传背景、作用机制开展进一步研究。

肝癌缺失基因-1基因结构域调控人结肠癌HT29细胞增殖的实验研究

目的探讨肝癌缺失基因-1（DLC-1）基因主要结构域在调控人结肠癌HT29细胞增殖中的作用。方法分别构建DLC-1基因Rho蛋白GTP酶活化蛋白（RhoGAP）、SAM、START结构域敲除的亚克隆重组质粒，并转染至人结肠癌HT29细胞，另设野生型HT29细胞组（对照组）、pcDNA3．1-HT29细胞组（空载体组）和pcDNA3．1-HT29-DLC-1细胞组（全长转染组）作为对照。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、平板克隆实验检测细胞增殖的改变；流式细胞术检测细胞凋亡；pull-down方法分析RhoA蛋白活性。组间差异采用方差分析。结果转染成功48h后，与对照组及空载体组相比，全长转染组细胞增殖（F=146．36）及RhoA蛋白活性（F=698．08）明显抑制（P均〈0．05），细胞早期凋亡增加（F=294．08，P〈O．05）。敲除RhoGAP转染组细胞的增殖能力（F=0．99）、细胞凋亡（F=0．049）及RhoA蛋白活性（F=5．769）与对照组及空载体组相比差异均无统计学意义（P均〉0．05）；敲除SAM转染组细胞比DLC-1基因全长转染组更显著地抑制了细胞增殖（F=31．00，P〈0．05），使Rh0A蛋白活性下调（F=92．57，P〈0．05），凋亡增加（F=130．44，P〈0．05）；敲除START转染组相对于DLC-1基因全长转染组，细胞增殖能力增强（F=15．47，P〈0．05），凋亡细胞减少（F=110．23，P〈0．06），RhoA蛋白活性上调（F=199．39，P〈0．05）。结论DLC-1基因抑制HT29细胞增殖具有RhoGAP依赖性，SAM结构域可能是内源性RhoGAP活性的自身抑制区域，START结构域可能协助RhoGAP结构域而起作用。