基于Solexa高通量测序的唐古特红景天(Rhodiola algida)微卫星信息分析

利用所获得的Solexa高通量唐古特红景天转录组拼接EST序列进行微卫星位点的挖掘分析,期望为红景天属SSR标记的开发提供生物信息学依据。在得到的6552条EST序列中,三碱基最多,占总EST序列的41.50%;单核苷酸和二核苷酸重复类型的SSR含量相似,分别为27.76%和24.76%;二至六碱基微卫星分布密度与其对应的SSR含量成正比。在单核苷酸重复类型中,T和A重复类型最多,分别为总SSR的14.91%、12.70%,而G和C重复类型则很少;在二核苷酸重复类型中,AG重复类型最多,占总SSR的5.60%,GA和TC重复类型次之,分别为4.75%、4.72%;在三核苷酸重复类型中,GAA重复类型最多,为总SSR的1.85%,GAT次之,为1.79%,TTC、TCT、TCA、GGA、GCT、GAG重复类型间的SSR数相差不大;四、五、六核苷酸重复类型则很少。除五、六核苷酸重复类型外,其长度变化与其对应的重复类型碱基长度成反比;同种重复类型中,微卫星的长度与其对应的SSR数成反比。

低温诱导唐古特红景天细胞分泌抗冻蛋白

选择青海高原海拔 40 0 0m高山上生长的唐古特红景天为实验材料 ,以叶片为外植体 ,在MS +BA2 +NAA0 2 固体培养基上诱导出黄绿色、松脆愈伤组织 .愈伤组织细胞在同样成分的液体培养基中培养获得成功 .在悬浮培养液中可检测到分泌蛋白的存在 .经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明 ,低温锻炼或脱落酸 (ABA)诱导后 ,细胞分泌蛋白的多肽谱带数增加 .与此相对应的是 ,细胞的抗冻能力也明显提高 .PAS染色揭示多肽中均含有糖基 .通过测定热滞值 。

高山植物唐古特红景天粘液细胞及叶肉细胞表面糖蛋白与抗冻性的关系

分布于青海高原海拔 40 0 0m高山的唐古特红景天有很强的抗冻能力 ,其叶片半致死温度可达 - 2 6 .5℃ .在北京地区夏季 (7月 )驯化 2 0d后 ,长出新叶片的半致死温度升高为 - 15 .5℃ .光镜组织化学切片显示 ,在唐古特红景天叶片中 ,特别是维管组织周围 ,存在多糖、蛋白质或糖蛋白含量丰富的粘液细胞 ;高温驯化后长出的新叶片这种粘液细胞明显减少或消失 .电镜细胞化学研究揭示 ,在细胞壁外层及细胞间隙中分布着明显的糖蛋白 ,在北京地区驯化 2 0d的唐古特红景天叶片中这种糖蛋白明显减少 .因此推测 ,粘液细胞和叶肉细胞表面的糖蛋白层 ,对唐古特红景天抗冻能力可能起着重要的作用 .图版 1图 2参 2

藏药唐古特红景天水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用

目的研究藏药唐古特红景天水提物对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法利用高效液相色谱鉴定水提物的有效成分。采用MTT法检测不同浓度的水提物处理MCF-7肿瘤细胞12,24,48 h后细胞的存活率。光镜观察水提物处理后MCF-7细胞形态学的变化。使用Annexin V-FITC/PI双染色凋亡检测试剂盒,流式细胞术分析水提物对MCF-7细胞凋亡的影响。结果高效液相色谱结果证实,唐古特红景天水提物中有红景天苷和酪醇等成分的存在。MTT实验结果显示,水提物作用12 h,便对MCF-7肿瘤细胞的增殖产生抑制作用;在不同的检测时间点,从90μg/ml到450μg/ml的剂量范围对肿瘤细胞的存活均有不同程度的抑制作用,且最高抑制率高达98%。光镜观察发现,不同浓度的水提物作用后可引起肿瘤细胞出现胞浆空泡和凋亡小体。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞检测结果显示,低浓度的水提物处理后,肿瘤细胞出现早期凋亡,随着药物浓度增高,凋亡晚期和坏死细胞增多。结论唐古特红景天水提物可抑制体外培养MCF-7乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡的机制有关。

不同浓度尿素对唐古特红景天种子萌发的影响

以唐古特红景天为试材,采用随机区组设计,研究了不同浓度的尿素对藏药唐古特红景天种子发芽率、发芽势和发芽指数的影响,以期探寻唐古特红景天育苗最佳的尿素施肥量,为唐古特红景天的人工栽培提供理论依据。结果表明:尿素溶液对唐古特红景天种子的萌发有显著影响,浓度为0.3g/L的尿素溶液能极显著促进唐古特红景天种子的发芽率、发芽势和发芽指数等指标;浓度高于0.3g/L时,对唐古特红景天种子的萌发有抑制作用。

唐古特红景天乙醇提取物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的研究唐古特红景天75%乙醇提取物对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法采用高效液相色谱法鉴定提取物的有效成分;采用MTT试验检测提取物对MCF-7细胞增殖的影响;采用光镜观察药物处理后细胞形态学的变化;利用Annex-in V-FITC/PI双染色流式细胞术分析药物对细胞凋亡的影响。结果唐古特红景天中有红景天苷和酪醇等成分;在一定的剂量和时间范围内,提取物能抑制MCF-7细胞生长;通过光镜观察,见药物可引起肿瘤细胞出现胞浆空泡和凋亡小体;流式细胞术检测发现,低浓度的提取物可导致肿瘤细胞出现早期凋亡,随着药物浓度增高,晚期凋亡和坏死细胞逐渐增多。结论唐古特红景天75%乙醇提取物可抑制体外培养MCF-7乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与诱导肿瘤细胞凋亡的机制相关。

分光光度法测定藏药红景天微量铜的研究

用α ,β ,γ ,δ 四 (4 三甲铵苯基 )卟啉 [T(4 TMAP)P]在酸性溶液中与铜显色 ,在 42 0nm下用分光光度法测定藏药红景天中的铜。测定结果与火焰原子吸收法基本一致 ,标准回收率 96 4 10 4 4% ,11次测定的相对标准偏差为 2 12 4 5 3%。方法准确、快速。

唐古特红景天舒张SD大鼠肺小动脉的活性部位及其作用机制

目的研究唐古特红景天舒张大鼠肺小动脉的活性部位及其作用机制。方法利用大孔吸附树脂制备唐古特红景天95%乙醇提取物的不同洗脱流份(去离子水,30%乙醇,70%乙醇,95%乙醇)。采用大鼠肺小动脉血管环离体灌流技术,筛选药物舒血管作用的活性部位。制备内皮完整及去内皮血管环,验证活性部位舒血管作用的靶点。利用去甲肾上腺素(NE)及氯化钾(KCl)预收缩血管环,明确活性部位的舒血管作用与钙通道的关系。利用左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、四乙基氯化铵(TEA)、氯化钡(Ba Cl2)预处理血管环,阐释活性部位影响血管张力的机制。结果大孔吸附树脂的70%乙醇洗脱流份是唐古特红景天95%乙醇提取物舒张肺小动脉的活性部位。活性部位可剂量依赖性地舒张肺小动脉,其对内皮完整血管环的作用强于对去内皮血管环的作用,两者比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。活性部位舒血管的作用与其抑制细胞膜受体门控性钙通道有关。L-NAME、TEA、和Ba Cl2三种阻断剂能够不同程度地减弱活性部位对肺小动脉血管环的舒张作用。结论唐古特红景天舒血管作用的活性部位主要富集于大孔吸附树脂70%乙醇洗脱物里,其舒血管的效应主要作用于血管内皮,且呈现剂量依赖性。唐古特红景天舒张大鼠肺小动脉的可能作用机制:1、通过抑制细胞膜受体门控性钙通道,减少Ca2+流入血管平滑肌细胞引起血管舒张;2、作用于肺小动脉内皮,促进内皮细胞释放一氧化氮(NO)至平滑肌使平滑肌舒张;3、作用于肺小动脉平滑肌的钾离子通道,促进通道开放引起血管平滑肌舒张。

唐古特红景天的脯氨酰寡肽酶抑制活性成分研究

目的研究唐古特红景天的脯氨酰寡肽酶抑制作用及其活性成分。方法采用改进的Kato法测定唐古特红景天水提物和从中分离得到的10个化合物的脯氨酰寡肽酶抑制作用,并采用RP-HPLC法对水提物的活性成分进行分析和指认。结果水提物的脯氨酰寡肽酶抑制活性显著(质量浓度为100 mg.L-1,抑制率为91.7%),其中,apigenin 7-O-β-D-apiofuranosyl(1→2)-β-D-glucopyr-anoside(IC50=30.4μmol.L-1)和isolariciresinol 9-O-β-D-xylopyranoside(IC50=25.2μmol.L-1)显示出较强的活性。结论唐古特红景天水提物具有显著的脯氨酰寡肽酶抑制作用,从中发现了2个主要活性成分。

唐古特红景天舒张肺小动脉的有效部位及机制的初步研究(英文)

目的研究唐古特红景天舒张大鼠离体肺小动脉的有效部位及机制。方法制备唐古特红景天95％、70％醇提物及水提物，利用HPLC—DAD分析提取物的含量特征。测定不同提取物中总黄酮、总酚酸含量。采用大鼠肺小动脉血管环离体灌流技术，确定药物舒血管作用的有效部位。利用去甲肾上腺素（NE）及氯化钾（KCl）预收缩血管环，初步分析有效部位舒血管作用的机制。结果药物水提物中总黄酮及总酚酸的含量均为最高。水提物中具有末端吸收化合物的种类及含量较醇提物中的少，醇提物中仅化合物的含量差异较大。唐古特红景天舒张肺小动脉的有效部位主要富集于95％醇提物。药物有效部位可以浓度依赖性地舒张肺小动脉（0．76～7．6mg／mL），其舒血管作用与抑制细胞膜受体门控性钙通道的机制有关。结论唐古特红景天95％醇提物是其舒张肺小动脉的主要有效部位。有效部位可能通过抑制细胞膜受体门控性钙通道，减少Ca2＋流入血管平滑肌细胞而发挥舒张血管的作用。

基于ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路研究唐古特红景天活性部位抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压的作用机制

目的本研究基于ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路研究唐古特红景天活性部位(ACRT)抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压的作用机制。方法将大鼠分为对照组、模型组、给药组,模型组和给药组大鼠在低压氧舱(模拟海拔4500米)内通过诱导构建高原缺氧性肺动脉高压模型。给药组分别灌胃给予250、125、62.5 mg/Kg的ACRT。给药4周后,测定大鼠肺动脉压,观察肺组织切片,测定与肺组织中ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路相关的蛋白表达情况。结果不同剂量给药组ACRT能显著抑制大鼠的肺动脉压升高,抑制大鼠的肺血管重塑、炎性病变,抑制大鼠的肺小动脉内皮Ⅰ、Ⅱ型上皮细胞线粒体肿胀,并调控大鼠肺组织中与ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路相关的蛋白活化,其中高剂量给药组效果最佳。结论ACRT具有显著的抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压作用,其具体作用机制可能与调控ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路有关。

唐古特红景天降低大鼠低氧性肺动脉高压的作用及对ET-1,eNOS mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究唐古特红景天95%乙醇提取物对大鼠慢性低氧性肺动脉高压(HPH)的作用及其分子机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低氧组、低氧+生理盐水组、低氧+低剂量药物组(1.25 g.kg-1.d-1)、低氧+高剂量药物组(2.5 g.kg-1.d-1)5组,每组15只。除对照组外,其余各组动物均置于低压氧舱内(模拟海拔4 500 m的高原环境),每24 h开舱0.5 h进行灌药等处理,连续30 d。检测各组大鼠的肺血流动力学变化、右心室肥厚指数;光镜观察直径50～100μm的肺动脉管壁厚度占外径的百分比(WT%);采用实时荧光定量PCR方法,检测各组动物肺组织内皮素-1(ET-1)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达;采用ELISA法检测各组动物血清ET-1和eNOS蛋白的含量。结果:与低氧对照组和低氧生理盐水组相比,高剂量唐古特红景天干预,具有以下药理作用:①降低大鼠的平均肺动脉压(mPAP),右心室肥厚指数(RV/LV+S),血红蛋白含量(Hb),红细胞压积(Hct)(P<0.01);②减轻大鼠肺动脉的肌化程度(P<0.05);③降低大鼠肺组织ET-1 mRNA表达,上调大鼠肺组织内皮细胞(eNOS)mRNA表达(P<0.05);④降低大鼠血清ET-1蛋白的含量,上调大鼠血清内皮细胞eNOS蛋白的含量(P<0.05)。结论:唐古特红景天对于HPH的形成具有一定的防治作用,其药理作用机制与上调eNOS mRNA和蛋白表达、抑制ET-1 mRNA和蛋白表达有关。

藏药唐古特红景天不同添加水平对甘南高原全奶牦牛生产性能的影响

选用120头甘南高原全奶牦牛,按试验要求随机均分4组,每组3个重复,每组10头牦牛。分别饲喂含唐古特红景天为0、50、100、200mg/kg的紫花苜蓿-青稞秸-豆饼型基础日粮,饲养试验时间为80d。结果显示,唐古特红景天对全奶牦牛生产性能有极显著影响(P<0.01),高于对照组;试验4组的日采食量、鲜奶日产量、乳脂率、乳蛋白率和体况评分最高,且与对照组差异极显著(P<0.01),试验3组的乳糖率最高且与对照组差异显著。结果表明,饲料中添加唐古特红景天可通过增强机体免疫功能和抗病性,滋补强身,补血益气,加快新陈代谢,从而提高奶牛的生产性能。

唐古特红景天化学成分和药理作用的研究进展

唐古特红景天Rhodiola algida是青藏高原地区特有的药用植物,具有高原人参之美称,主要化学成分包括醇类、黄酮类、苯丙素类、有机酸类、烷烃类及萜类等,具有抗缺氧、抗氧化、抗癌、抑制脯氨酰寡肽酶活性、抗衰老、保护肝脑等药理作用。通过对近年来关于唐古特红景天化学成分、药理活性和毒理研究进行综述,以期提高人们对传统药用植物的认识、利用及保护意识,为唐古特红景天进一步的综合开发利用提供参考。

唐古特红景天提取工艺研究

目的确定唐古特红景天药材的最佳提取工艺。方法采用超声、回流、冷浸法,采用L9(34)正交试验法,考察提取温度、乙醇浓度、溶剂量、提取时间4因素对红景天苷、酪醇含量和提取率的影响。结果回流提取为最适提取方法,最佳提取工艺条件为:8倍量50%乙醇80℃提取2次,每次提取1.0 h。结论该研究结果为有效利用唐古特红景天资源及其工业生产提供了依据。