海洋酵母菌Rhodotorula benthica OY92产γ-氨基丁酸发酵条件优化

采用响应曲面法对海洋酵母菌株Rhodotorula benthica OY92摇瓶发酵产γ-氨基丁酸的发酵条件进行了优化。在单次单因子试验研究的基础上,利用Plaekett-Burman(PB)设计对发酵条件中相关影响因素的效应进行评价,表明MgSO4·7H2O、NaCl和起始pH显著影响γ-氨基丁酸发酵水平;采用3因素3水平Box-Behnken试验设计优化MgSO4·7H2O、NaCl浓度和起始pH,建立发酵培养基及发酵条件的二次多项式方程,预测获得在MgSO4·7H2O 1.21 g/L,NaCl 4.79 g/L,起始pH 5.75时发酵水平最高。经实验验证,预测值与验证试验平均值接近,在此条件下,γ-氨基丁酸发酵水平由优化前7.39 g/L提高到13.89 g/L。

海洋红酵母培养条件的研究

通过碳源、氮源及主要营养与环境条件等对海洋红酵母产菌量的影响试验,以及蔗糖、蛋白胨、酵母膏三因素三水平的正交试验,获得了海洋红酵母的最佳发酵条件:蔗糖1.5%,蛋白胨1.0%,酵母膏0.5%,磷酸二氢钾0.15%,硫酸镁0.01%,氯化钠1.0%,初始pH5.0,接种量8%,500mL三角瓶中培养基装量为80mL,发酵温度为28℃,摇床200r/min。在此优化的培养条件下,海洋红酵母的产菌量可达9.7亿个/mL,比优化前发酵培养基产菌量(5.6亿个/mL)提高了73.2%,比单因素试验结果(8.1亿个/mL)提高了19.8%。

紫外诱变筛选海洋红酵母S8的尿嘧啶缺陷型菌株

本课题组从海南天然海域筛选到一株高产类胡萝卜素的海洋红酵母菌株S8,该菌株对鱼无毒害,并与鱼共生,欲将其应用于盐诱导表达外源蛋白的海洋红酵母工程菌的构建。本研究利用紫外诱变筛选的方法处理S8菌株,通过统计其UV致死率、5-氟乳清酸致死率等筛选S8的尿嘧啶营养缺陷型突变株。研究结果表明,供试菌株通过紫外线诱变、5-氟乳清酸致死和回复突变率的实验筛选,共获得16株稳定的尿嘧啶缺陷型突变株,突变菌株在基本培养基中培养了8d仍不能生长。选择了其中的一株ST5进行了产胡萝卜素能力的测定,结果表明,在同样的培养条件下,野生型S8菌株细胞生物产量可达87.55g/L,类胡萝卜素含量可达520μg/g,突变株ST5的细胞生物产量为85.45g/L,类胡萝卜素含量为512μg/g;ST5的产胡萝卜素能力方面与野生型S8无明显差异。因此,尿嘧啶缺陷型菌株ST5可为下一步海洋红酵母工程菌的构建提供受体菌。

红鱼粉饲料中添加海洋红酵母对大菱鲆生长性能的影响

为研究用红鱼粉替代白鱼粉,并在替代饲料中添加两个不同梯度海洋红酵母对大菱鲆生长性能、体成分以及形体指标的影响。试验用白鱼粉、红鱼粉、海洋红酵母1g/kg+红鱼粉、海洋红酵母2g/kg+红鱼粉4种等氮等能的试验饲料分别饲喂初始体质量(213.48±0.23)g的大菱鲆,480尾试验鱼随机分为4组,每组设3个重复,每个重复40尾,试验期为6周。试验结果表明,与红鱼粉组相比,海洋红酵母1g/kg+红鱼粉组可显著提高大菱鲆的摄食率、相对质量增加率、特定生长率及蛋白质效率(P<0.05),效果与白鱼粉组相当,高于海洋红酵母2g/kg+红鱼粉组,但差异不显著(P>0.05)。各试验组大菱鲆的体成分和形体指标差异不显著(P>0.05)。据此,添加海洋红酵母1g/kg即能显著提高大菱鲆对红鱼粉替代白鱼粉饲料的摄食率、蛋白效率和生长性能,使得红鱼粉替代组的饲料性能达到了白鱼粉组的生长水平。

饲料中海洋红酵母不同添加量对大菱鲆摄食生长的影响

研究了大菱鲆饲料中添加不同含量的海洋红酵母对其摄食生长的影响.在基础饲料中分别添加0,0.5,1.0,1.5 g/kg的海洋红酵母制成4种试验料,分别饲喂初始体质量为（85.60士0.33）g的大菱鲆,试验用鱼共1 140尾,随机分为4组,每组设3个重复,每个重复95尾,试验期为4周.结果表明：各试验组间大菱鲆的摄食率、相对增重率、特定生长率和饵料系数均没有显著差异（P＞0.05）.说明在白鱼粉为主的大菱鲆饲料中添加海洋红酵母0.5～1.5 g/kg不能提高大菱鲆的摄食和生长性能.

海洋红酵母电转化条件的研究

采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化.通过调整参数,对影响电转化的主要因素进行探索,初步建立了载体pTEF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法.结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度为20mg/L和0.2cm电转化杯时,转化率达到最大值,为每微克质粒DNA52个转化子.经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆.首次建立了以海洋红酵母为宿主的高效电转化体系,为外源基因在海洋红酵母中的表达奠定了基础.

海洋红酵母的研究进展

海洋红酵母富含氨基酸、维生素及类胡萝卜素等多种营养物质,有较好的耐盐性,是天然色素源、极具潜力的饲料蛋白和食品添加剂,具有很高的应用价值。概述了海洋红酵母的主要特性,总结了国内外海洋红酵母菌种、培养条件及工业应用等方面的研究进展及发展前景。

二甲基亚砜法提取海洋红酵母β-胡萝卜素的最佳工艺

为了进一步探明二甲基亚砜法(DMSO法)提取海洋红酵母中β-胡萝卜素的最佳工艺,进而为海洋红酵母中β-胡萝卜素的工业化生产提供可靠的理论依据,采用DMSO法研究了温度、时间和料液比等因素对酵母菌株HN-3中β-胡萝卜素提取的影响。结果表明,用DMSO法提取海洋红酵母中β-胡萝卜素的最佳条件为:料液比1∶25,提取时间60 min,提取温度30℃。在此条件下提取的色素量高达345.7μg/g,比单因素条件下提取的(307.9μg/g)高10.93%。试验建立了海洋红酵母β-胡萝卜素提取的最佳工艺,为海洋红酵母β-胡萝卜素的高效提取奠定了基础。

不同培养条件对海洋红酵母类胡萝卜素累积的影响

[目的]探讨不同培养条件对海洋红酵母类胡萝卜素累积的影响,确定最佳培养条件。[方法]以海洋红酵母HN-3为材料,考察温度、pH、盐度和培养时间对海洋红酵母类胡萝卜素累积的影响。[结果]最佳培养条件为温度30℃、pH 6、盐度3%、培养时间48 h。该培养条件下海洋红酵母摇瓶发酵的类胡萝卜素产量为588.6μg/g,比初始发酵条件下的类胡萝卜素产量(478.8μg/g)提高了22.9%。[结论]为确定海洋红酵母累积类胡萝卜素的培养条件提供理论依据。

不同饵料对褶皱臂尾轮虫氨基酸脂肪酸组成的影响

为探究海洋红酵母和浓缩小球藻作为轮虫培育饵料的可行性,采用3种不同饵料(小球藻、浓缩小球藻、海洋红酵母)单独或混合对轮虫进行投喂,并测定这3种饵料以及不同试验组轮虫的氨基酸、脂肪酸两项指标来比较评价不同饵料对褶皱臂尾轮虫的营养价值。结果表明:3种饵料的小球藻非必需氨基酸总量显著高于其他两种饵料(P<0.05),浓缩小球藻的必需氨基酸含量最高;3种饵料中小球藻的饱和脂肪酸含量显著高于其他两种生物饵料(P<0.05),不饱和脂肪酸含量总量以海洋红酵母为最高,海洋红酵母的顺式油酸含量是小球藻和浓缩小球藻的14.1倍,顺式亚油酸是小球藻和浓缩小球藻的7.11和6.96倍。不同饵料投喂轮虫的氨基酸、脂肪酸比较结果表明,红酵母搭配2种藻类投喂轮虫相比单一饵料投喂轮虫的必需氨基酸含量有明显提高,但对提高轮虫脂肪酸含量效果欠佳。可见海洋红酵母和浓缩小球藻可以作为优良的轮虫培育饵料,这也将为轮虫的营养优化和大规模养殖技术发展提供参考。

L-苯丙氨酸解氨酶产生菌的原生质体诱变育种

原始菌株海洋红酵母M1202产生的L-苯丙氨酸解氨酶(PAL),能够逆反应催化反式肉桂酸(t-Ca)生成L-苯丙氨酸。对M1202进行原生质体紫外诱变获得一株转化率为原始菌株115%的菌株TM2,经6次传代,仍具有较好的遗传稳定性。

一株海洋红酵母的鉴定及营养成分分析

为探究海洋红酵母Rhodotorula benthica作为水产蛋白源饵料的可能性,采用生理生化分析和分子鉴定的方法,对该酵母进行了属性鉴定、培养性能初探和一般营养成分测定等研究。结果表明:此菌株的菌落形态、生殖方式和生理生化特性等指标鉴定结果均符合红酵母属性;利用真菌ITS基因引物对酵母菌总DNA进行扩增,测序获得598 bp目的片段,经NCBI Gen Bank比对,此酵母菌的ITS序列与斯鲁菲亚红酵母Rhodotorula slooffiae序列一致性为99%~100%,故将该菌株鉴定为斯鲁菲亚红酵母;对此海洋红酵母进行液体培养基扩培,获得其生长曲线在48 h时达生长峰值,生物量为2.25×10~8cfu/m L,类胡萝卜素含量为83.6μg/g。研究表明,此株海洋红酵母含有丰富的维生素、不饱和脂肪酸、蛋白质等营养物质,在水产养殖产业中具有较好的应用前景。

海洋红酵母的作用机理及其在畜禽水产养殖中的应用

海洋红酵母富含蛋白质、氨基酸、维生素等多种营养物质,还富含胡萝卜素和虾青素等天然色素,能显著提高动物生产性能、增强免疫力、净化环境和减少抗生素用量,是生态养殖的优良添加剂,具有很高的应用价值。文章就海洋红酵母的作用机理及其在畜禽水产养殖中的应用作以综述。

海洋红酵母菌活化培养虾青素工艺及其研究进展

本文对虾青素的生产技术进行了简述,对酵母发酵虾青素的工艺进行了探讨。概述了海洋红酵母的活化培养特性,总结了海洋红酵母菌种特性、培养条件及工艺应用等方面的研究进展及发展前景。

海洋红酵母的液体培养

目的探讨提高海洋红酵母的液体高密度培养方法。方法在摇瓶培养条件下,测定温度、pH、装液量、接种量及摇床转速对海洋红酵母BY2菌株生长的影响,进一步放大培养至50L发酵罐,在培养过程流加氨水以控制pH稳定在5.3~5.5的条件下,考察不同葡萄糖浓度对海洋红酵母BY2菌株发酵菌量的影响。结果摇瓶最适培养条件为温度25℃,pH 5.5,接种量8%、装液量40mL/250mL三角瓶、摇床转速200r/min,在此培养条件下,24h时菌量达到8.9×10^8 CFU/mL;扩大至50L发酵罐,葡萄糖初始浓度为40、60、80、100g/L各罐20~24h时的菌量相应达到26.6×10^8、29.5×10^8、47.8×10^8、66.8×10^8 CFU/mL。结论提高初始葡萄糖浓度,流加氨水稳定发酵过程的pH,可以显著提高BY2菌株的发酵菌量。

强效抗氧化活性虾青素的发现及其生物合成菌海洋红酵母培养条件优化的研究

目的确认一株极地海洋红酵母(Rhodotorula sp.)产生典型次生代谢产物虾青素和优化其产生虾青素的培养条件.方法海洋红酵母保存菌株经过活化培养和发酵培养,单因素和响应面试验设计优化发酵条件,采用高效液相色谱法(HPLC)分析海洋红酵母次生代谢产物,用标准样品鉴定海洋红酵母次生代谢产物;测定海洋红酵母源虾青素的抗氧化能力.结果从极地分离源分离的一株海洋红酵母产出多种代谢产物,其主要代谢产物是虾青素.单因素实验表明硫酸锌添加量为100.00 mg/L,虾青素产出量最高为24.10 mg/ml;乙酰水杨酸添加量为100.00 mg/L,虾青素产量最高为25.00 mg/ml,发酵时间为5 d,虾青素产量最高为25.30 mg/ml.响应面实验结果显示,发酵时间为6.64 d、硫酸锌添加量为113.50 mg/L、乙酰水杨酸添加量为111.00 mg/L,液体培养海洋红酵母产出虾青素27.00 mg/ml.海洋红酵母源虾青素与Vc等多种抗氧化剂比较具有显著抗氧化活性.结论从极地分离源发现的主要次生代谢产物是虾青素的极地海洋红酵母,用硫酸锌和乙酰水杨酸调控虾青素的生源合成能促进虾青素产生,为大规模生产虾青素提供了可行性.