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粘红酵母ATP:柠檬酸裂解酶基因的克隆表达和酶学性质
被引量:
2
1
作者
赵检
王旭颖
+3 位作者
王茂淋
郑世学
喻子牛
张吉斌
《化学与生物工程》
CAS
2011年第7期44-48,共5页
从粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中克隆得到ATP:柠檬酸裂解酶基因两个亚基acl1和acl2,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行诱导表达,通过Ni柱纯化目的蛋白,以实时波长扫描对重组蛋白的酶学性质进行测定。SDS-PAGE分析表明,两个亚...
从粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中克隆得到ATP:柠檬酸裂解酶基因两个亚基acl1和acl2,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行诱导表达,通过Ni柱纯化目的蛋白,以实时波长扫描对重组蛋白的酶学性质进行测定。SDS-PAGE分析表明,两个亚基ACL1和ACL2的分子量分别为66 kDa和55 kDa。重组蛋白的酶学测定表明,经毕赤酵母表达后,单个亚基酶活性不到1.0 U.mg-1,双亚基混合后具有较高的酶活性,当混合质量比为1∶1时全酶的酶比活力达到最大,为6.5 U.mg-1,酶反应的最佳条件为:pH值8.5、37℃反应10 min。为提高油料作物油脂含量提供了新的转基因材料。
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关键词
粘红酵母
atp
:柠檬酸裂解酶
克隆
表达
酶比活
酶特性
下载PDF
职称材料
粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取方法研究
2
作者
林樟楠
张建安
+1 位作者
王智琴
刘宏娟
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期103-108,共6页
为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和...
为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和珠体装量方面对玻璃珠法粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取工艺进行了优化。可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定结果表明:玻璃珠法提取粗酶优于其他3种方法。对玻璃珠法进行进一步优化,得到的最优化的提取条件为细胞干重与珠体重量之比为1∶1,冰浴震荡时间为20min,在此条件下,ATP-柠檬酸裂解酶比活可达到0.98U·mg^(-1),分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.9,2.2,2.1倍,可溶性蛋白浓度为6.5mg·m L^(-1),分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.4,4.1,3.3倍。经过优化的玻璃珠法提取粘红酵母胞内粗酶液操作简便,且能够保持较高的ATP-柠檬酸裂解酶活性,是较理想的粘红酵母粗酶提取方法。
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关键词
粘红酵母
粗酶提取
atp
-柠檬酸裂解酶
比活力
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职称材料
题名
粘红酵母ATP:柠檬酸裂解酶基因的克隆表达和酶学性质
被引量:
2
1
作者
赵检
王旭颖
王茂淋
郑世学
喻子牛
张吉斌
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室微生物农药国家工程研究中心
出处
《化学与生物工程》
CAS
2011年第7期44-48,共5页
基金
转基因生物新品种培育重大专项项目(2009ZX08009-120B)
文摘
从粘红酵母(Rhodotorula glutinis)中克隆得到ATP:柠檬酸裂解酶基因两个亚基acl1和acl2,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行诱导表达,通过Ni柱纯化目的蛋白,以实时波长扫描对重组蛋白的酶学性质进行测定。SDS-PAGE分析表明,两个亚基ACL1和ACL2的分子量分别为66 kDa和55 kDa。重组蛋白的酶学测定表明,经毕赤酵母表达后,单个亚基酶活性不到1.0 U.mg-1,双亚基混合后具有较高的酶活性,当混合质量比为1∶1时全酶的酶比活力达到最大,为6.5 U.mg-1,酶反应的最佳条件为:pH值8.5、37℃反应10 min。为提高油料作物油脂含量提供了新的转基因材料。
关键词
粘红酵母
atp
:柠檬酸裂解酶
克隆
表达
酶比活
酶特性
Keywords
rhodotorula glutinis; atp:citrate lyase; clone; expression; enzyme specific activity; enzyme characteristic;
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取方法研究
2
作者
林樟楠
张建安
王智琴
刘宏娟
机构
清华大学核能与新能源技术研究院
沈阳农业大学畜牧兽医学院
沈阳化工研究院
出处
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期103-108,共6页
基金
清华大学自主科研计划项目(2012Z02144)
工业生物催化教育部重点实验室(清华大学)开放基金项目(2015302)
文摘
为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和珠体装量方面对玻璃珠法粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取工艺进行了优化。可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定结果表明:玻璃珠法提取粗酶优于其他3种方法。对玻璃珠法进行进一步优化,得到的最优化的提取条件为细胞干重与珠体重量之比为1∶1,冰浴震荡时间为20min,在此条件下,ATP-柠檬酸裂解酶比活可达到0.98U·mg^(-1),分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.9,2.2,2.1倍,可溶性蛋白浓度为6.5mg·m L^(-1),分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.4,4.1,3.3倍。经过优化的玻璃珠法提取粘红酵母胞内粗酶液操作简便,且能够保持较高的ATP-柠檬酸裂解酶活性,是较理想的粘红酵母粗酶提取方法。
关键词
粘红酵母
粗酶提取
atp
-柠檬酸裂解酶
比活力
Keywords
rhodotorula
glutinis
crude
enzyme
extraction
atp
-
citrate
lyase
specific
activity
分类号
Q939.97 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
粘红酵母ATP:柠檬酸裂解酶基因的克隆表达和酶学性质
赵检
王旭颖
王茂淋
郑世学
喻子牛
张吉斌
《化学与生物工程》
CAS
2011
2
下载PDF
职称材料
2
粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取方法研究
林樟楠
张建安
王智琴
刘宏娟
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
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统计分析
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