Rhopaladins类似物RPDPRH抗肝癌细胞增殖的实验研究

目的:选用肝癌HepG2和7402细胞株,探讨海洋生物碱Rhopaladins类似物(2E,4E)-N-环己基-1-对氟苯基-2-对氯苯乙烯基-4-对氯苄叉基-5-吡咯烷酮-2-酰胺(简称RPDPRH)对肝癌细胞的增殖抑制和周期阻滞的影响。方法:采用CCK-8实验检测Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2细胞以及肝癌HepG2和7402细胞的增殖抑制。平面克隆实验评估Rhopaladins类似物RPDPRH对肝癌HepG2和7402细胞克隆形成的影响。通过周期实验检测Rhopaladins类似物RPDPRH对肝癌HepG2和7402细胞的周期阻滞情况。采用Hoechst 33258染色法荧光观察经Rhopaladins类似物RPDPRH作用后的肝癌HepG2和7402细胞的凋亡情况。结果:CCK-8实验结果表明Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2细胞的增殖抑制作用较小,但对肝癌HepG2和7402细胞的增殖具有显著的抑制作用;通过克隆形成实验和细胞周期检测验证了Rhopaladins类似物RPDPRH能够抑制肝癌HepG2和7402细胞的克隆形成,并将肝癌细胞周期阻滞在G0/G1期;Hoechst 33258染色实验发现,经Rhopaladins类似物RPDPRH干预后,在荧光显微镜下可以明显观察到肝癌细胞的凋亡。结论:Rhopaladins类似物RPDPRH对肝LO2细胞具有较小的抑制作用,但其能够表现出很好地抑制人肝癌HepG2和7402两种细胞系的细胞增殖的作用,并且可能与将肝癌细胞周期阻滞在G0/G1期有关。

Rhopaladins类似物对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察Rhopaladins类似物(RPDPB)对宫颈Hela细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组、空白组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO培养液,空白组加入不含细胞的MEM培养液,分别于24、48、72 h采用CCK-8法检测OD值,计算细胞增殖抑制率。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测Annexin V-FITC和PI,计算细胞凋亡率。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用RT-PCR法检测细胞人乳头瘤病毒18 E6(HPV18 E6)、人乳头瘤病毒18 E7(HPV18 E7)、WNT2B、β-catenin mRNA和miR-145 RNA。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用Western blot法检测细胞WNT2B、β-catenin蛋白。结果与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率增加,且呈时间和剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率增加,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组HPV18 E6 mRNA、HPV18 E7 mRNA、WNT2B mRNA、β-catenin mRNA相对表达量降低,miR-145 RNA相对表达量升高,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组WNT2B、β-catenin蛋白相对表达量降低,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论RPDPB可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导细胞凋亡,呈时间和剂量依懒性,作用机制可能是其通过下调HPVE6/E7 mRNA表达,导致miR-145 RNA表达上调,进而抑制下游WNT2B/β-catenin通路中WNT2B、β-catenin mRNA和蛋白表达。

Rhopaladins类似物RPDPRO的绿色合成及抗肝癌活性研究

以3-对氯苯基丙烯醛、Z-2-溴甲基-3-苯基丙烯酸、对氟苯胺、环己基异腈为原料,以绿色、安全的乙醇/水作为混合溶剂,在pH值为4~6的条件下,通过Ugi 4C/S_(N)关环串联一锅法得到Rhopaladins类似物(2E,4E)-N-环己基-2-对氯苯乙烯基-1-对氟苯基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮-2-酰胺(简称RPDPRO),其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR、EI-MS表征。并用MTT法检测了其对正常肝细胞和肝癌细胞的细胞毒性,流式细胞术检测了其对肝癌细胞凋亡的影响,结果表明Rhopaladins类似物RPDPRO对正常肝细胞的毒性较低,并且可以显著抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡。

基于代谢组学的‘海尔特兹’红树莓果实中核苷、核苷酸和类似物含量的变化规律研究

本研究基于代谢组学,采用液相色谱-质谱联用法,针对‘海尔特兹’红树莓4个不同时期果实中17种核苷、核苷酸和类似物含量及变化规律进行研究。结果表明:在海尔特兹’红树莓果实发育过程中,脱氧胞苷酸、5-甲基脱氧胞苷、玉米素核苷、N-[(5-羟基-2-吡啶基)甲基]腺苷、反式玉米素-O-葡萄糖苷核糖苷、1-甲基腺苷、鸟苷、2-苯基氨基腺苷、1,7-二甲基鸟苷和胞苷2’,3’-环磷酸的含量在青果时期最高;UDP-4-脱氢-6-脱氧-D-葡萄糖和dTDP-D-葡萄糖的含量在黄果时期最高;尿苷二磷酸葡萄糖、8-羟基鸟苷、胞苷的含量在红果时期最高;1-甲基肌苷和脂酰腺苷酸的含量在深红果时期最高。本研究阐明了17种核苷、核苷酸和类似物在‘海尔特兹’红树莓在果实发育中的含量变化规律,为后期相关研究及应用提供了参考。

核苷类似物治疗乙型肝炎肝硬化并发食管静脉曲张临床价值研究

目的:探讨核苷类似物治疗乙型肝炎肝硬化并发食管静脉曲张临床价值。方法:选取乙型肝炎肝硬化并发食管静脉曲张患者88例,根据是否抗病毒治疗分为对照组(33例)和治疗组(55例)。比较两组患者治疗前后肝功能指标[白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)]、Child-Pugh评分和凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶原活动度(PTA)]以及治疗后乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)阴转率、食管静脉曲张程度和消化道出血情况。结果:抗病毒治疗后,治疗组患者TBIL、ALT、AST较治疗前降低,ALB较治疗前升高(均P<0.05)。抗病毒治疗后,治疗组患者PT较治疗前降低,且治疗组低于对照组;治疗组PTA较治疗前升高,且治疗组高于对照组(均P<0.05)。治疗组抗病毒治疗后Child-Pugh评分较治疗前降低,且治疗组Child-Pugh评分低于对照组(均P<0.05)。与对照组比较,治疗组在抗病毒治疗后HBV-DNA阴转率升高(P<0.05)。在未行EVL治疗患者中,治疗组食管静脉曲张减轻程度高于对照组(P<0.05)。在接受及未接受EVL治疗的患者中,治疗组消化道出血率低于对照组(均P<0.05)。结论:核苷类似物能够抑制乙型肝炎肝硬化并发食管静脉曲张患者HBV病毒复制,改善肝功能和凝血功能,减轻食管静脉曲张程度,降低消化道出血风险。

超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱用于化妆品中15种前列腺素类似物的快速筛查和测定

建立了超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱(UPLC-Q-TOF MS)快速筛查和测定化妆品中15种前列腺素类似物的方法。样品以饱和氯化钠作为分散剂(蜡质类样品以四氢呋喃分散),经乙腈提取,离心取上清液过滤后,采用Poroshell 120 EC-C_(18)柱(150 mm×3.0 mm,2.7μm)分离,以5 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱。在ESI正离子模式下,采用Targeted MS/MS模式采集15种前列腺素类似物的质谱信息,构建筛查数据库进行快速筛查,确证后的目标物通过外标法定量。结果表明,15种前列腺素类似物的线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.99;检出限为0.3~17.6μg/g,定量下限为1.1~58.8μg/g。在低、中、高3个加标水平下,水剂、膏霜、乳类、粉类、凝胶5类化妆品基质的回收率为70.1%~134%,相对标准偏差不大于7.5%。该方法简单高效、准确度好,可用于化妆品中前列腺素类似物的定性确证和定量分析,为化妆品风险识别提供技术支撑。

慢性乙型肝炎患者接受核(苷)酸类似物抗病毒治疗后血清HBV-DNA的表达及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者接受核(苷)酸类似物(NAs)抗病毒治疗后血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)的表达及临床意义。方法回顾性分析2021年1月至2022年10月河南省人民医院83例采用NAs抗病毒治疗的CHB患者临床资料,根据血清学应答标准将其分为应答组(46例)和未应答组(37例)。比较两组基线资料、治疗前及治疗3、6、12个月时血清HBV-DNA水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)检验血清HBV-DNA对CHB患者NAs抗病毒治疗未应答的预测价值。结果治疗前,应答组和未应答组HBV-DNA比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗前至治疗12个月的HBV-DNA呈下降趋势,组间、时点、交互效应有统计学意义(P<0.05)。绘制ROC曲线显示,治疗3个月时HBV-DNA对CHB患者NAs抗病毒治疗未应答的预测价值较低(AUC=0.694,P=0.002),治疗6个月时HBV-DNA对CHB患者NAs抗病毒治疗未应答具有一定预测价值(AUC=0.751,P<0.001)。结论血清HBV-DNA表达在CHB患者NAs抗病毒治疗前后变化明显,且治疗6个月时血清HBV-DNA可作为抗病毒治疗未应答的预测指标。

还原型谷胱甘肽联合核苷类似物治疗乙肝肝硬化的临床分析

目的探究乙型肝炎(简称乙肝)肝硬化患者应用还原型谷胱甘肽联合核苷类似物治疗的效果。方法随机选取2020年2月—2023年2月南通市第三人民医院收治的60例乙肝肝硬化患者为研究对象,采用盲摸双色球法分为研究组、参照组,各30例。参照组行常规治疗,研究组采用还原型谷胱甘肽联合核苷类似物治疗。比较两组临床疗效、肝纤维化程度、肝功能及不良反应发生情况。结果干预前,两组肝纤维化程度、肝功能水平比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。干预后,研究组临床治疗总有效率(96.67%)高于参照组(80.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.043,P<0.05)。干预后,研究组肝纤维程度中层粘连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic,HA)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-collagen,Ⅳ-C)水平均低于参照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。干预后,研究组肝功能水平中总胆红素(Total Bilirubin,TBIL)、白蛋白(Albumin,ALB)、谷丙转氨酶(Glutamic Pyruvic Transaminase,GPT)及谷草转氨酶(Glutamic Oxaloacetic Transaminase,GOT)水平均优于参照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙肝肝硬化患者应用还原型谷胱甘肽联合核苷类似物治疗能够提高其治疗效果,改善肝纤维化程度及肝功能水平,且安全性较高。

核苷(酸)类似物序贯联合干扰素α-2b治疗低水平乙型肝炎表面抗原慢性乙型病毒性肝炎的效果观察

目的观察核苷(酸)类似物(NAs)序贯联合干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗低水平乙型肝炎表面抗原(HBsAg)慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的效果,为临床提供参考。方法选取2016年1月至2021年12月东莞市长安医院收治的80例低水平HBsAg CHB患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各40例。对照组患者单用NAs治疗,观察组患者在NAs治疗基础上序贯联合IFNα-2b治疗。比较两组患者HBsAg转阴情况、HBsAg水平、谷丙转氨酶(ALT)水平、血清乙型肝炎病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)水平,分析观察组患者不良反应发生情况。结果治疗12、24周,两组患者HBsAg转阴率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗48周,观察组患者HBsAg转阴率高于对照组(P<0.05)。治疗48周,观察组患者HBsAg水平均低于治疗前,且观察组低于对照组(均P<0.05)。两组患者血清ALT水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。两组患者血清HBV-DNA水平无时间、组间、交互效应差异(均P>0.05)。观察组部分患者发生流感样症状、食欲下降、乏力、白细胞计数降低、血小板减少等不良反应,但均能耐受,无严重不良反应发生。结论NAs序贯联合IFNα-2b治疗低水平HBsAg CHB患者能提高HBsAg转阴率,降低HBsAg水平,安全性良好,但对血清ALT水平、HBV-DNA水平影响不明显。

肝移植术后乙肝主动免疫重建受者停用HBIG和(或)核苷(酸)类似物的长期安全性和有效性

目的探讨乙型病毒性肝炎(乙肝)相关疾病肝移植受者接种乙肝疫苗成功后长期停用乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)和(或)核苷(酸)类似物(NAs)预防乙型肝炎病毒(HBV)再感染的安全性及有效性。方法回顾性分析76例接种乙肝疫苗后成功重建乙肝主动免疫的肝移植受者的基本资料,分析疫苗接种及应答情况、应答者停用HBIG和(或)NAs的随访结果、停用HBIG和(或)NAs后HBV再感染情况。结果肝移植术后至开始接种乙肝疫苗的时间间隔为26(20,40)个月。接种疫苗至应答时间为15(8,27)个月。初始76例受者全部停用HBIG,36例受者停用HBIG和NAs。随访期间,76例停用HBIG受者中12例恢复使用HBIG,36例停用HBIG和NAs者中16例恢复使用NAs。HBIG和NAs停用时间分别为135(98,150)个月与133(34,149)个月。16例应答者未接种过加强针,36例应答者定期接种加强针,第1次接种加强针的时间距离停用HBIG的间隔时间为44(11,87)个月,未接种加强针和接种加强针的应答者一般资料比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。截至随访日,9例受者失访,5例HBV再感染,3例受者死亡,1例受者移植物丢失并进行二次肝移植。5例HBV再感染受者中4例发生病毒变异。再感染者与未感染者是否停用过NAs、移植前乙型肝炎e抗原(HBeAg)是否为阳性差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论乙肝相关疾病肝移植术后乙肝主动免疫重建成功的受者长期停用HBIG是可行和安全的,但能否同时停用NAs还需要进一步研究。

海藻糖对高湿挤压肉类类似物品质特性的影响

为改善大豆蛋白肉类类似物的纤维化度和其他品质特性,探究高湿挤压过程中海藻糖(trehalose,TR)的添加比例对大豆蛋白肉类类似物品质的影响,采用湿法挤压技术制作大豆蛋白肉类类似物,分析TR的不同添加比例对大豆蛋白肉类类似物色泽、质构特性、流变特性和微观结构的影响。此外,还分析了TR的添加对肉类类似物中蛋白质二级结构的影响。结果表明,添加了6%TR的肉类类似物的硬度为(11.82±0.53)kgf,咀嚼度为(10.02±0.39)kgf,并且表现出了最高的纤维化度,为1.99±0.05,相比于未添加TR的样品增加了22%。表观观察到所有添加了TR的样品外观较0%TR的样品更平整光滑。此外,还发现添加了6%TR的样品的亮度值为56.68±0.19,最接近于熟制鸡胸肉的亮度值56.34±0.40。扫描电镜结果显示,添加了6%TR的肉类类似物相较于0%TR的样品有着更明显的各向异性结构。总而言之,肉类类似物中TR的最佳添加比例为6%,并且TR是制备高品质特性大豆蛋白肉类类似物的一种较理想的添加剂。

DMI−LiNO3离子液体类似物室温电沉积钕铁硼薄膜

研究1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)−LiNO_(3)离子液体类似物在室温条件下电沉积钕铁硼薄膜的可行性和反应机理。结果表明,循环伏安曲线中−1.83 V(vs Ag)处的还原峰对应于Fe(II)被还原为金属Fe,−2.01 V(vs Ag)处的还原峰对应于B(III)被还原为B。Fe(II)和B(III)的电化学还原反应是受扩散控制的不可逆过程,313 K下Fe(II)和B(III)的扩散系数分别为3.03×10^(−6)和6.74×10^(−7) cm^(2)/s。此外,XRD分析表明,在DMI−LiNO_(3)−Nd(CF_(3)SO_(3))_(3)−FeCl_(2)−H_(3)BO_(3)体系中以铝为基底电沉积2 h的产物含有NdFe_(3)B_(3);SEM和EDS分析表明,阴极产物中Nd、Fe和B元素呈均匀分布;XPS分析表明,钨基底表面中Nd、Fe和B的质量分数分别为27.44%、27.90%和7.51%。

胰岛素和胰岛素类似物——糖尿病治疗药物用药指导系列(一)

糖尿病是一组以长期血糖水平增高为特征的代谢紊乱症候群。本节是糖尿病治疗药物用药指导系列胰岛素和胰岛素类似物的第一部分。按照胰岛素起效快慢和维持作用时间,胰岛素可分为3类:(1)餐时胰岛素(短效人胰岛素和速效胰岛素类似物)。(2)基础胰岛素(中效胰岛素、长效动物胰岛素和长效胰岛素类似物)。(3)预混胰岛素。

大豆-坚果奶酪类似物的制备及其性质研究

该研究采用大豆乳、腰果乳及巴旦木蛋白为原料制备一种奶酪类似物,目的是确定最佳工艺配方以制备出高品质的大豆-坚果奶酪类似物,然后评价其理化性质、感官特性、储藏稳定性和消化特性。研究结果显示:具有最佳品质的大豆-坚果奶酪类似物基本配方为(皆为质量分数):腰果乳50.00%,大豆乳50.00%;并以植物乳质量为基准,依次添加植物油3.09%(椰子油与葵花籽油比例为7:3)、巴旦木蛋白2.01%、TG酶0.33%、柠檬酸0.10%、乳酸0.10%;以凝乳质量为基准,添加胶体1.08%、蔗糖4.00%。大豆-坚果奶酪类似物硬度值0.88 N、整体感官评分7.71分,可以与商品化动物奶酪相媲美。此外,随着储藏时间增加其硬度值从0.94 N增加到1.15 N,无明显变硬和析水现象。体外消化结果显示其蛋白电泳条带在肠道消化180 min后全部消失,游离脂肪酸释放速率为60%。因此,制备的大豆-坚果奶酪类似物营养价值高,具有较佳的感官品质,储藏稳定性好且蛋白易于消化,能够作为动物奶酪的替代物以满足人们对奶酪的需求。

桔小实蝇BdorOBP2对甲基丁香酚及其结构类似物的结合分析

本文研究了桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白BdorOBP2对甲基丁香酚(ME)及其结构类似物的结合特性,以期为基于蛋白结构的新型引诱剂的分子设计提供靶标蛋白。本研究扩增获得气味结合蛋白BdorOBP2基因并进行序列分析。三维结构预测显示,BdorOBP2具有6个α螺旋,同时含有6个保守的半胱氨酸残基。荧光定量结果表明BdorOBP2在雌雄虫触角中的表达水平最高,同时在足、翅等组织中表现出性别差异表达特性,推测BdorOBP2具有识别性信息素和寄主挥发物的双重作用。在对BdorOBP2蛋白表达和纯化的基础上,采用荧光竞争结合试验分析了BdorOBP2与甲基丁香酚及其类似物的结合能力,结果显示BdorOBP2蛋白对丁香酚、异丁香酚、甲基丁香酚、异丁香酚甲醚等4种化合物的结合能力相当。BdorOBP2在感受寄主挥发物及性信息素过程中挥发重要作用,为基于靶标蛋白的新型行为调控剂的分子设计提供了重要参考。

抗肿瘤核苷类似物研究进展

癌症是一种以细胞异常增殖为特征的疾病,全球大约有六分之一的死亡是由癌症造成的。化疗是目前癌症治疗的主要手段之一,其中核苷类似物在化疗药物中占重要地位,主要结构为嘌呤或嘧啶核苷。目前,临床常用的药物并不能长久有效地控制癌症进展,而且核苷类似物存在选择性低,副作用较大等缺点,具有很大的改造空间,是药物研究的热点之一。本文论述了核苷类似物分类以及近年的研究进展。

核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎的肾脏安全性探讨

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是一项重大的公共卫生问题[1],中国是世界上HBV感染负担最重的国家之一,约有8600万慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者约有2800万例[2]。一方面,CHB仍然缺乏有效的根治方案,功能性治愈同样难以实现,绝大多数患者需要长期口服核苷(酸)类似物(NAs)进行抗病毒治疗[3],引发了NAs相关的肾损害事件。

胰高血糖素样肽-1类似物研发进展

目的总结胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物的研发进展。方法检索PubMed和Web of Science数据库自建库起至2024年2月20日的GLP-1类似物相关文献,从研发概况、单分子多靶点GLP-1受体激动剂(GLP-1RA)、除治疗糖尿病外的其他适应证及其药物研发新趋势方面,总结GLP-1类似物的研发进展。结果与结论GLP-1类似物的研发经历了从短效到长效,从注射剂到口服剂,并扩展到多靶点治疗的过程。目前,多靶点GLP-1RA包括GLP-1R/葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽受体、GLP-1R/胰高血糖素受体(GCGR)、GLP-1R/GLP-2R、GLP-1R/胰淀素3受体(AMY3R)、GLP-1R/成纤维细胞生长因子21受体(FGF-21R)等双靶点激动剂,以及GLPR/GLP-1R/GCGR、GLP-1R/GCGR/FGF-21R等三靶点激动剂。GLP-1类似物展现了在2型糖尿病、超重、肥胖症、心血管疾病、多囊卵巢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、慢性肾脏病等疾病治疗的巨大潜力,疗效优于单靶点的双靶点和三靶点GLP-1RA是近年来研发的重点。GLP-1类似物的重组腺相关病毒载体基因治疗为研发新趋势,其现阶段存在的安全性、依从性等问题和可供参考的解决方法也一并被提出。

围产期饲粮中添加蛋氨酸羟基类似物异丙酯和N-氨甲酰谷氨酸对奶牛产奶性能和血浆代谢组的影响

本试验旨在研究围产期饲粮中添加蛋氨酸羟基类似物异丙酯(HMBi)和N-氨甲酰谷氨酸(NCG)对奶牛产奶性能、血浆差异代谢物和代谢通路的影响。选择年龄、胎次、体况、上一胎次产奶量及预产期相接近的围产期母牛100头,随机分为2组,每组50头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+30 g/d的HMBi+20 g/d的NCG。试验期为42 d,其中围产前期21 d,围产后期21 d。结果表明:与对照组相比,试验组产后第21天产奶量显著提高(P<0.05),乳脂产量有增加趋势(P=0.09),乳尿素氮含量有降低趋势(P=0.07),乳脂率、乳蛋白率、乳蛋白产量和体细胞数差异不显著(P>0.05);试验组奶牛血浆代谢组中有17个代谢物上调,15个代谢物下调,主要富集在亚油酸代谢、维生素的消化和吸收代谢、丙酮酸代谢、维生素B 6代谢、不饱和脂肪酸的生物合成等代谢途径。由此可见,围产期饲粮中添加HMBi和NCG可以提高奶牛产奶量和乳脂产量,降低乳尿素氮含量,增强机体抗氧化能力和免疫能力,改善机体脂质代谢,缓解能量负平衡。

分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定不同品种柑橘果实不同部位中3种柠檬苦素类似物的含量

提出了分散固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定4个品种柑橘果实的4个部位(油胞层、白皮层、囊衣、果肉)中柠檬苦素、诺米林、黄柏酮含量的方法。取5.0 g均质后的样品,加入5 mL水,涡旋混匀后加入20 mL体积比5∶5的丙酮-乙腈混合溶液,混匀后超声提取10 min,离心5 min。用3 mL水活化2 g EMR-Lipid吸附剂,加至上清液中,涡旋30 s,加入5 g质量比1∶4的氯化钠-硫酸镁混合物和15 mg石墨化碳黑,迅速摇匀后离心1 min。吸取全部上清液,于40℃氮吹至近干,残渣用10.0 mL体积比9∶1的0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液和乙腈的混合溶液复溶,过0.22μm滤膜,滤液按照优化的仪器工作条件测定。进行色谱分析时,以CAPCELL PAK ADME HR色谱柱作固定相,以不同体积比的0.1%甲酸溶液和乙腈的混合溶液作流动相进行梯度洗脱分离;进行质谱分析时,以电喷雾离子源正离子(ESI+)和多反应监测(MRM)模式检测。结果显示:3种柠檬苦素类似物的质量浓度在0.10~10.0 mg·L^(-1)内和对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)均为0.01 mg·kg^(-1);按标准加入法进行回收试验,回收率为83.1%~90.5%,测定值的相对标准偏差(n=6)为2.6%~5.6%;方法用于30个实际样品的分析,柠檬苦素类似物在不同品种柑橘果实及其不同部位中的含量分布差异显著,柚类品种中柠檬苦素类似物总测定值较高且主要分布在囊衣部位,其他品种主要分布在白皮层和油包层。