海蜇(Rhopilema esculentum)Notch基因的cDNA克隆和表达

基于转录组454 GS FLX测序结果,利用RACE和RT-PCR技术克隆了海蜇(Rhopilema esculentum)Notch基因的c DNA全长,并分析了其m RNA在海蜇不同发育阶段的表达差异,以探讨Notch基因对海蜇无性生殖的影响。结果显示,海蜇Notch基因的c DNA全长为6768 bp,包括90 bp的5?非编码区、6066 bp的开放阅读框及612 bp包含AATAAA加尾信号的3?非翻译区。SMART分析表明,海蜇Notch为分泌蛋白,其信号肽由21个氨基酸组成。成熟肽由2000个氨基酸组成,包括37个结构域、26个表皮生长因子样结构域、3个富含半胱氨酸的Notch/Lin-12(NL)结构域、1个NOD结构域、1个NODP结构域、1个跨膜结构域和6个锚蛋白结构域ANK,并含有25个N-糖基化位点。同源分析表明,海蜇Notch与来自刺胞动物门的海葵(Nematostella vectensis)的Notch相似性为39%,与无脊椎动物和脊椎动物的氨基酸相似度分别为35%–37%和34%–38%。RT-PCR分析表明,Notch基因在海蜇无性繁殖的4个发育时期均有表达,螅状体阶段的表达量最高,横裂体阶段表达量最低,螅状体的表达量是横裂体的1.85倍。这些研究结果为进一步研究Notch信号通路在海蜇无性繁殖中的调控作用奠定了基础。

海蜇(Rhopilema esculentum)Wnt5基因：cDNA克隆、基因组结构与表达

采用转录组454 GS FLX测序和RACE技术,首次解析了海蜇Wnt5基因的cDNA和基因组结构。结果表明,Re-Wnt5基因的cDNA全长1647bp,其中编码区长1059bp,编码了353个氨基酸的多肽;Re-Wnt5基因组含有4个外显子和3个内含子。SMART分析表明,Re-Wnt5具有Wnt家族共同的结构特征,包括一个由20个氨基酸组成的信号肽,2个N-糖基化位点和24个保守的参与二硫键形成的半胱氨酸。多序列比对和系统进化分析表明,Re-Wnt5基因与来自刺胞动物、无脊椎动物和脊索动物的Wnt5、脊椎动物的Wnt5a和Wnt5b具有高度相似性,Wnt5a和Wnt5b两个进化分支发生在脊索动物文昌鱼之后。实时荧光定量PCR显示,Re-Wnt5基因在海蜇四个发育阶段均有表达,其中横裂体阶段的表达量最高,分别是螅状体、碟状体和水母体表达量的12.38、9.99和13.01倍。