n-Butanol Extract of Rhynchosia volubilis Lour: A Potent Spermicidal Agent In Vitro

Summary： Rhynchosia volubilis Lout has been a major drug in a folk prescription for contraception in China, whereas its mechanism remains unknown. Its antifertility effects on male mice and antimicrobial activities on sexually transmitted infection （STI） pathogens were previously reported. This study was undertaken to develop the n-Butanol extract of Rhynchosia volubilis Lour （BERVL） as a spermicidal agent with STI prevention. The spermicidal activities of BERVL with different doses were assessed using selected high-motile sperms of normal human semen samples, and their inhibitory effects on Lactobacillus acidophilus were determined. The mechanism of the spermicidal activity was explored by aqueous Eosin Y and Hoechst 33342/PI staining. The results showed spermicidal activities and inhibi- tory effects of BERVL on Lactobacillus acidophilus were dose-dependent. Dose of 90 mg/mL BERVL terminated all progressive sperm motility within 2 min, and had slight inhibitory effect on Lactobacillus acidophilus, suggesting it was an effective and safe dose for contraception use. About 80% sperms exposed to BERVL displayed changes consistent with high permeability of head membrane. It is concluded that BERVL as spermicide has advantages over N-9 with strong ability to instantaneously kill human sperm and possesses light inhibitory effect on Lactobacillus acidophilus.

离子液体提取分离鹿藿中异黄酮化合物

以1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([Bmim]BF4)离子液体取代天然产物研究中的溶剂,对具有抗雄性生育活性和抑菌作用的鹿藿根中的异黄酮成分进行提取和分离。从鹿藿根的70%乙醇粗提物中,成功分离纯化得到3种异黄酮类化合物,它们均是首次从植物鹿藿中分离得到。经过波谱分析鉴定,3种化合物的结构被确定为木豆酮(Cajanone)、鸡豆黄素A(Biochanin A)和1种新的异黄酮类化合物,被命名为3-[4'-(1″-甲氧基)-丙基氧代]-苯基-5,7-二羟基异黄酮(3-[4'-(1″-methoxy)-propoxy]-phenyl-5,7-dihydroxy-isoflavone)。建立了植物鹿藿中异黄酮含量的测定方法:以木豆酮化合物为标准品,在其紫外最大吸收峰270 nm处,测得生药中总异黄酮的含量为0.73%;测得平均加样回收率99.94%,相对标准偏差3.66%,离子液体回收率76.7%。

鹿藿根4种提取物抗雄性小鼠生育作用比较

目的:比较4种鹿藿根提取物(乙醇提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水溶物)的抗生育作用。方法:60只雄性昆明种小鼠分为生理盐水对照组、雷公藤多苷对照组、乙醇提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组及水溶物组,每组10只。各组药物浓度均为1%,雷公藤多苷为0.1%水溶液。每次0.1ml/10g,灌胃,1次/d,连续给药,共11周。在用药10周后,一对一雌雄合笼交配1周。分笼10d后处死雌鼠,观察妊娠率、活胎数、死胎数。11周后处死雄性小鼠观察附睾精子、附睾及睾丸病理变化情况及血清睾酮含量测定。结果:连续用药11周,与生理盐水对照组相比,实验组小鼠妊娠率下降,其中水溶物组最为明显(P<0.05)。雷公藤多苷对照组和水溶组精子明显减少(P<0.05)。组织学观察鹿藿根提取物对精原细胞、初级精母细胞影响不显著。各提取物组血清睾酮差异无显著性(P>0.05)。生理盐水对照组、雷公藤多苷对照组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、乙醇提取物组及水溶物组的抗精子发生效应积分分别0、(5.3±1.5)、(2.6±1.7)、(2.9±1.2)、(2.2±0.9)、(2.1±1.0)分。结论:4种鹿藿根提取物均有抗生育作用,但水溶物作用更强且对睾丸组织及睾丸生精能力影响较小。

鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用

目的研究鹿藿醇提取物的体外杀精及抗菌作用。方法(1)鹿藿醇提取物按照国际计划生育基金会认可的杀精子实验方法,对10只小鼠附睾精子悬液和10例人精液进行体外杀精实验。(2)用试管法及琼脂平皿稀释法观察鹿藿醇提取物对几种临床常见致病菌的体外抑菌作用。结果鹿藿醇提取物对小鼠和人精子最低杀精浓度分别为50和100mg/ml;对标准菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌MIC(试管法)分别为1.0,1.0,4.0,4.0 mg/ml。对临床分离菌金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌MIC(试管法)分别为0.5,2.0,8.0 mg/ml。结论鹿藿醇提取物对小鼠和人精子有一定杀精作用,对临床常见致病菌有比较强的抗菌作用。

中药鹿藿的抑菌实验研究

研究发现中药鹿藿在体外可瞬间抑制人类精子的运动。为了研究中药鹿藿的抑菌作用,本实验对几种女性生殖道常见致病菌和条件致病菌进行了体外抑菌实验,发现鹿藿对金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟氏菌和大肠杆菌有抑制作用,并可抑制常见耐药菌株的生长。金黄色葡萄球菌的MIC折合生药为31.25mg/mL,大肠杆菌的MIC250mg/mL,淋球菌的MIC为31.25mg/mL。结果表明中药鹿藿在能有效抑制精子运动的浓度可以抑制某些男、女性生殖道常见细菌的生长。

鹿藿醋酸乙酯提取物抗雄性小鼠生育研究及成分分析

目的:研究鹿藿醋酸乙酯提取物(Rhynchosia volubilis Lour ethyl acetate extract,RVLEAE)的抗生育作用及化学成分分析。方法:①用溶剂萃取法提取有效部位,减压蒸馏浓缩制成浸膏;②抗生育实验:80只雄性小鼠分为4组即生理盐水(NS)对照组,阳性药物(雷公藤多苷10 mg·kg^(-1)·d^(-1))对照组,鹿藿醋酸乙醇提取物低、高剂量(醋酸乙酯浸膏100,400 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,灌胃,每天1次,连续给药11周。给药2,10周后,合笼交配,1周后处死部分雄鼠观察附睾精子、附睾及睾丸病理变化、血清睾酮含量以及体重变化情况;分笼10 d后处死雌鼠,观察妊娠率、活胎数、死胎数;③化学成分分析用柱层析分离、薄层色谱初步分析及红外色谱、核磁共振波谱定性分析。结果:RVLEAE连续用药2周,小鼠妊娠率明显下降。妊娠抑制率明显增高。连续用药10周后作用仍较明显。3周时的精子数量,在高、低剂量组减少量为明显。连续给药后精子数量减少。RVLEAE对小鼠睾丸及附睾组织影响不大。血清睾酮含量,阳性对照组明显增高,而高、低剂量组与生理盐水对照组差异无显著性。RVLEAE的主要成分为糖及苷类、醇和酚类化合物。3号组分被鉴定为β-甲基2,4-二甲氧基-L-吡喃岩藻糖苷。6号组分被鉴定为α,β-D-吡喃葡萄糖和α,β-甲氯基-D-吡喃葡萄糖单糖的混合物。结论:RVLEAE有抗生育作用,作用部位主要在附睾,作用机制可能是糖苷类化合物干扰了精子在附睾的成熟。

鹿藿种子萌发特性研究

以野生鹿藿(Rhynchosia volubilis)种子为试验材料,研究其种子的形态特征、吸水率和不同处理条件下的发芽情况。结果表明:经过砂纸处理的种子最高吸水率为108.58%,是未经处理的16.91倍;机械处理下种子的萌发情况最好,发芽率和发芽势分别提高到96.67%和76.67%;其次为98%浓硫酸处理20min较好,发芽率达91.11%,发芽势达56.67%;热水浸种处理也可明显提高鹿藿种子萌发能力,以80℃的热水浸种处理萌发能力最强,其发芽率为68.89%,发芽势为42.22%;氢氧化钠处理较以上3种处理,萌发效果一般,最高发芽率仅为42.22%。

鹿藿的引种与扦插繁育研究

以琅琊山野生鹿藿为材料进行了引种栽培试验,同时研究了不同基质、不同激素种类与浓度、不同穗条长度等处理对鹿藿枝条生根的扦插试验。结果表明:引种的鹿藿在试验地对环境适应能力较好,栽培管理较容易;不同扦插基质中,河沙基质的扦插效果最好,生根率达到63.3%,不同激素种类与浓度处理中,150mg·L^(-1) IBA处理鹿藿插穗生根效果最好,生根率达到98.9%;三种不同茎节处理中,以保留4个茎节的生根效果最好,生根率达75.3%。

鹿藿种子萌发期耐旱性和耐盐性的研究

用PEG-6000和不同钠盐(NaCI、Na_2SO_4、NaHCO_3、复合钠盐)溶液对鹿藿(Rhynchosia volubilis)种子进行了发芽试验,研究鹿藿种子萌发时期的耐旱性和耐盐性。结果表明:低浓度的PEG(5%)对种子萌发有引发作用,随着PEG浓度的继续升高有抑制作用。在不同钠盐胁迫下,鹿藿种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数随着盐浓度的增加均逐渐降低,除低浓度的Na_2SO_4溶液(0.3%)处理能促进鹿藿的胚根和胚芽生长外,其他处理组胚根和胚芽生长均逐渐受到抑制,鹿藿种子对4种钠盐的耐盐强弱顺序为Na_2SO_4>复合盐> NaCl> NaHCO_3。

鹿藿水提取物抗雄性小鼠生育作用研究

目的研究鹿藿水提取物的抗雄性小鼠生育作用的影响。方法雄性小鼠分为4组,给药,然后与雌鼠合笼交配,观察雌鼠给药70 d、停药20 d妊娠率。结果用药70 d作用较明显。停药20 d,与阴性对照组结果非常接近。结论鹿藿水提取物具有良好的抗生育作用,停药后不影响后续生育能力。

有机酸对鹿藿铅锌尾矿重金属积累的影响

[目的]研究有机酸对鹿藿(Rhynchosia volubilis Lour.)重金属积累的影响。[方法]以铅锌尾矿砂为栽培基质,通过盆栽试验,研究外施乙二胺四乙酸(EDTA)和柠檬酸(CA)2种有机酸对鹿藿Pb、Zn、Cd、Cu积累的影响。[结果]EDTA和CA提高了鹿藿Pb和Cu的富集,尤其是高浓度EDTA显著促进鹿藿对Pb、Cu和Cd金属离子的吸收和向地上部分转运,高浓度EDTA有效提高了Zn向地上部分的转运。[结论]EDTA对重金属富集的促进作用优于CA。

鹿藿的化学成分研究

目的研究鹿藿Rhynchosia volubilis的化学成分。方法采用硅胶柱色谱法分离纯化,薄层色谱及现代波谱技术进行结构鉴定。结果从其乙醇提取物的氯仿、醋酸乙酯萃取部分分离得到12个化合物,结构分别鉴定为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、苜蓿素(3)、5,7,3′-三羟基-4′-甲氧基异黄酮(4),表儿茶素(5)、豆甾-5-烯-3β,7α-二醇(6)、槲皮素(7)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(8)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(9)、没食子酸(10)、大豆苷元(11)和大萼赝靛素(12)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

鹿藿的化学成分研究

目的研究鹿藿Rhynchosia volubilis的化学成分。方法采用硅胶、ODS、Toyopearl HW-40C、Sephadex LH-20柱色谱以及半制备HPLC等方法进行纯化,根据理化性质及波谱数据对化合物进行结构鉴定。结果从鹿藿石油醚提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为(-)-sigmoidin E(1)、lupinifolin(2)、precatorin B(3)、木豆酮(4)、槐花多糖B(5)、5,3′-二羟基-4′-甲氧基-5′-γ,γ-二甲基烯丙基-2″,2″-二甲基吡喃并[5,6:6,7]异黄烷酮(6)、染料木素(7)、甘草异黄酮A(8)、erylatissin B(9)、neo-bavaisoflavone(10)、羽扇豆醇(11)、桦木醛(12)、穿贝海绵甾醇(13)。化合物1~10均为含异戊烯基的黄酮类,其中化合物1、2为二氢黄酮、3~6为二氢异黄酮、7~10为异黄酮。化合物11~12为羽扇豆烷型三萜,化合物13为甾醇类。结论化合物1、5~6、8~10、12、13均为首次从鹿藿属植物中分离得到,化合物1~3、5~13均为首次从该植物中分离得到。

鹿藿正丁醇提取物体外杀精作用及机制探讨

目的研究鹿藿正丁醇提取物（11-ButanolextractofRhynchosiavolubilisLour，BERVL）的体外杀精子作用及机制。同时观察该提取物体外对嗜酸乳酸杆菌的影响，初步评估BERVL作为杀精子剂的可行性和安全性。方法体外杀精子实验以生理盐水为阴性对照，壬苯醇醚（nonoxynolum-9，N-9）为阳性对照，显微镜下观察浓度为250mg／ml，125mg／ml，100mg／ml，90ms／ml，62．5mg／ml的BERVL对人精子活力的影响；体外抑茵实验用试管稀释法和琼脂稀释法；体外杀精子机制探讨：用伊红Y水试验和Hoechst33342／PI荧光双染，显微镜下检测精子膜功能和精子凋亡。结果BERVL在90mg／ml浓度组：体外杀精实验，原地活动精子百分率为（4．730±3．231）％；体外抑菌试验，对嗜酸乳酸杆菌抑制率为32．96％-35．70％；伊红Y水溶液染色，精子头部未着色百分率为（7．846±4．706）％。Hoechst33342／PI荧光双染．凋亡精子百分率为（4．977±2．267）％，死精子百分率为（90．111±4．509）％。结论90mg／ml为BERVL较安全理想的体外杀精浓度。BERVL有显著的体外杀精子作用，可能与破坏精子膜和加速精子凋亡及死亡有关。