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无乳链球菌表面蛋白Rib基因克隆与重组表达 被引量:2
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作者 张荣 杜欣军 +2 位作者 徐桂香 王菲 王硕 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期24-28,共5页
无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的常见病原微生物之一,其表面蛋白作为一种高免疫原性的生物大分子,具有较高的种内特异性,是理想的候选疫苗与免疫检测靶标。本研究通过对无乳链球菌高免疫原性表面蛋白Rib的重组表达与抗体制备,为后期无乳... 无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的常见病原微生物之一,其表面蛋白作为一种高免疫原性的生物大分子,具有较高的种内特异性,是理想的候选疫苗与免疫检测靶标。本研究通过对无乳链球菌高免疫原性表面蛋白Rib的重组表达与抗体制备,为后期无乳链球菌的疫苗研制与检测奠定了良好的基础。首先提取了无乳链球菌基因组DNA,从中成功扩增出长度为452bp的编码表面蛋白Rib N端的基因片段。将这一片段连入重组表达载体pET-26b,转化受体菌株BL21(DE3)后利用IPTG进行诱导,结果表达了分子质量约为18ku的外源蛋白。在低温表达条件下,对IPTG诱导浓度进行优化,结果表明,IPTG的最适诱导浓度为0.05mmol/L。将诱导后的菌体进行超声波破碎并进行SDS-PAGE检测,结果显示重组蛋白以包涵体形式存在,对其进行变性、复性处理,利用亲和凝胶纯化后获得了纯度较高的重组蛋白。将重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,经检测抗体效价达到1∶480 000。 展开更多
关键词 无乳链球菌 表面蛋白 rib基因 克隆与表达
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Modification of the rib operon derived from Bacillus subtilis and its expression in Escherichia coli
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作者 张会图 Meng Kun +6 位作者 Wang Yaru Luo Huiying Yuan Tiezheng Yang Peilong Bai Yingguo Yao Bin Fan Yunliu 《High Technology Letters》 EI CAS 2007年第1期85-90,共6页
A riboflavin operon (rib operon) derived from Bacillus subtilis 368 was modified on structure and the resulting operons were expressed in various strains of Escherichia coli. The results showed that the optimization... A riboflavin operon (rib operon) derived from Bacillus subtilis 368 was modified on structure and the resulting operons were expressed in various strains of Escherichia coli. The results showed that the optimization of the rib operon and the host strain used for expression are two main factors affecting the riboflavin production. Replacing the promoterl and rfn box of the rib operon with a strong constructive promoter spol drastically increased the expression of the rib genes. When E. coli JM109 was used as the host strain, the highest riboflavin production reached 95.3μg/mL (about eight times higher than that of the unmodified r/b operon). In addition, when tetracycline (20 μg/mL) was used as the selective pressure, compared with the ampicillin resistant transformants, a higher riboflavin yield was obtained in tetracycline resistant host strain. 展开更多
关键词 ribOFLAVIN OPERON Escherichia coli Bacillus subtilis
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