应用全自动核糖体RNA基因指纹技术快速鉴定细菌菌种

应用RiboPrinter全自动核糖体RNA基因指纹技术对4株未知菌种进行快速鉴定,并与生理生化试验结合16SrDNA序列测定方法相比较。结果表明,两种方法均成功地完成了4株未知菌种的鉴定,其结果分别为大肠杆菌、嗜热链球菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。相比之下,生理生化试验结合16SrDNA序列测定的方法经济实用,而RiboPrinter系统更为简便、快速,在8h内快速地完成了4株未知菌种的鉴定,并且为菌株的基因分型以及溯源分析奠定了基础。

药品微生物实验室水系统分离37株微生物的鉴定及分析

目的针对目前国内微生物实验室试验用水的实际情况,探索试验用水微生物群落的组成及分布规律。方法参考国内外药典对纯化水微生物的检验方法,收集某实验室7个纯水使用点的纯化水,经薄膜过滤法处理,采用R2A琼脂培养基培养、分离和纯化,并进行革兰染色。分别运用基因型鉴定方法(16S rDNA序列分析、Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统),生化鉴定方法(Biolog自动微生物鉴定系统)对检出微生物进行鉴定,并对实验结果进行分析比较。结果本研究共培养获得37株细菌,主要为鞘氨醇单胞菌属和叶杆菌属等。16S rDNA序列分析能对37株微生物达到属或属水平以上的鉴定,Biolog自动微生物鉴定系统鉴定出13株微生物,Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统鉴定出17株微生物。结论16S rDNA序列分析适合对水系统中的微生物进行基于培养的群落分布分析,Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统更适用于同种/属细菌的分型及溯源分析。

《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中标准菌株的稳定性研究

目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收载标准菌株和1株对照标准菌株为试验菌株,分别对这些试验菌株冻存0.5年、1年、2年的样本及连续6代的传代样本进行菌落表型观察、Biolog生化鉴定分析、16S rRNA基因测序及Ribo Printer全自动基因指纹图谱分析,并使用Bio Numerics 7.6对核糖体图谱数据进行聚类分析。结果:试验菌株在经冻存及传代后,各菌株表型无明显差异;菌株的Biolog生化鉴定结果虽略有差异,但菌株关键生化代谢属性稳定,其鉴定结果均属Bcc;同时,各菌株的16S rRNA测序结果一致;核糖体带型相似值均大于0.95。结论:在本研究考察的冻存时间及传代次数内,3株《中国药典》洋葱伯克霍尔德菌群检查法拟收载的标准菌株的表型、基因型相对稳定。