2022年昆明市学生餐中微生物污染现状分析及其菌种鉴定

为了解2022年昆明市学生餐中微生物污染现状,按照国家食品安全标准对昆明市的学生餐开展监测,利用统计软件SPSS 27.0对监测结果进行数据统计分析,采用RiboPrinter■全自动微生物基因指纹鉴定系统对检出的污染菌进一步鉴定分析。结果显示,对36家集体用餐配送企业的385批次盒饭开展检验,不合格26批次,总体不合格率为6.8%,其中,菌落总数不合格率4.2%,大肠埃希氏菌不合格率3.4%,金黄色葡萄球菌、沙门氏菌全部合格。污染菌纯化分离后得到68株菌株,进一步鉴定出51株菌株,包括19种细菌属,主要为芽孢杆菌属23株,占比33.8%;葡萄球菌属6株,占比8.8%;肺炎克雷伯氏菌5株,占比7.3%;大肠埃希氏菌属6株,占比8.8%;少动鞘氨醇单胞菌3株,占比4.4%;克氏库克菌、藤黄微球菌各2株,占比2.9%;不动杆菌、黄色氢噬胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌各1株,占比1.5%。由此可见,2022年昆明市学生餐食品安全总体状况良好,未发现高风险致病菌,但集体用餐配送企业应对条件致病菌引起重视,必须严格控制卫生条件,预防学生群体食源性疾病的发生。

应用全自动核糖体RNA基因指纹技术快速鉴定细菌菌种

应用RiboPrinter全自动核糖体RNA基因指纹技术对4株未知菌种进行快速鉴定,并与生理生化试验结合16SrDNA序列测定方法相比较。结果表明,两种方法均成功地完成了4株未知菌种的鉴定,其结果分别为大肠杆菌、嗜热链球菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。相比之下,生理生化试验结合16SrDNA序列测定的方法经济实用,而RiboPrinter系统更为简便、快速,在8h内快速地完成了4株未知菌种的鉴定,并且为菌株的基因分型以及溯源分析奠定了基础。

药品微生物实验室水系统分离37株微生物的鉴定及分析

目的针对目前国内微生物实验室试验用水的实际情况,探索试验用水微生物群落的组成及分布规律。方法参考国内外药典对纯化水微生物的检验方法,收集某实验室7个纯水使用点的纯化水,经薄膜过滤法处理,采用R2A琼脂培养基培养、分离和纯化,并进行革兰染色。分别运用基因型鉴定方法(16S rDNA序列分析、Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统),生化鉴定方法(Biolog自动微生物鉴定系统)对检出微生物进行鉴定,并对实验结果进行分析比较。结果本研究共培养获得37株细菌,主要为鞘氨醇单胞菌属和叶杆菌属等。16S rDNA序列分析能对37株微生物达到属或属水平以上的鉴定,Biolog自动微生物鉴定系统鉴定出13株微生物,Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统鉴定出17株微生物。结论16S rDNA序列分析适合对水系统中的微生物进行基于培养的群落分布分析,Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统更适用于同种/属细菌的分型及溯源分析。

《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中标准菌株的稳定性研究

目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收载标准菌株和1株对照标准菌株为试验菌株,分别对这些试验菌株冻存0.5年、1年、2年的样本及连续6代的传代样本进行菌落表型观察、Biolog生化鉴定分析、16S rRNA基因测序及Ribo Printer全自动基因指纹图谱分析,并使用Bio Numerics 7.6对核糖体图谱数据进行聚类分析。结果:试验菌株在经冻存及传代后,各菌株表型无明显差异;菌株的Biolog生化鉴定结果虽略有差异,但菌株关键生化代谢属性稳定,其鉴定结果均属Bcc;同时,各菌株的16S rRNA测序结果一致;核糖体带型相似值均大于0.95。结论:在本研究考察的冻存时间及传代次数内,3株《中国药典》洋葱伯克霍尔德菌群检查法拟收载的标准菌株的表型、基因型相对稳定。

药品微生物限度检查中微生物污染的鉴定和溯源分析

目的:结合药品微生物限度检验工作的实例,采用多种技术手段对药品微生物污染情况进行分析,寻找药品微生物污染来源,在确保检验结果准确性的同时,为药品微生物污染追踪溯源提供技术支持。方法:采用API鉴定系统、Vitek2 Compact鉴定系统、RiboPrinter系统和FTIR分析系统等方法,对从样品和环境中分离得到的10株菌株进行鉴定分型及同源性分析。结果:4株样品菌和1株环境菌同源,样品中的微生物污染是通过实验人员的手套进行传播,实验人员应注意无菌操作过程。结论:本文采用传统形态学、生化鉴定、FTIR及分子生物学等方法,阐述药品微生物限度检查中微生物污染鉴定和溯源分析的过程和方法,为药品微生物检查的过程控制提供信息,为药品微生物污染的溯源调查提供解决方案。