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ANTIBODY TO ONCOGENE PROTEIN PRODUCT AND ITS CONJUGATE WITH RICIN A-CHAIN
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作者 刘辉 隋文作 刘连瑞 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1991年第4期51-54,共4页
The proteins encoded by oncogene were thought to be tumor associated antigen. The protein P110 in MGC803, a human gastric cancer cell line, was purified as immunogen. The IgY to the gastric cancer was extracted from e... The proteins encoded by oncogene were thought to be tumor associated antigen. The protein P110 in MGC803, a human gastric cancer cell line, was purified as immunogen. The IgY to the gastric cancer was extracted from eggs laid by immunized hen. The IgY could react immunohistochemically with gastric cancers. Positive staining rates of PAF were 80% in gastric cancers and markedly higher than in cancers of other organs and normal gastric tissue. The IgY-Ricin A was synthesized by the IgY conjugated with Ricin A- chain. TCID50 of MGC803 treated by the IgY-Ricin A was 0. 01 mg/ml and markedly lower than other cell. These results showed the IgY-Ricin A were able to react with gastric cancers selectively. 展开更多
关键词 oncogene protein product ricin a-chain antibody.
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SELECTIVE KILLING OF GASTRIC CANCER CELLS BY MONOCLONAL ANTIBODY CONJUGATED WITH A CHAIN OF RICIN
2
作者 黎松 张学庸 +5 位作者 陈希陶 樊代明 谈立松 潘惠忠 黄利群 顾益群 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1989年第3期37-41,共5页
A specific cytotoxic agent against gastric cancer was constructed by covalently coupling the ricin A chain to monoclonal artibody, MGb2. MGb2 was modified by SPDP to introduce the 3-(2-pyridylthio) propionyl radical a... A specific cytotoxic agent against gastric cancer was constructed by covalently coupling the ricin A chain to monoclonal artibody, MGb2. MGb2 was modified by SPDP to introduce the 3-(2-pyridylthio) propionyl radical and then treated with a reduced A chain to give a disulfide linked conjugate that retained the original binding specificity of the antibody moiety. The conjugate obtained retained the activity of the antibody and the biological activity of the A chain well. 展开更多
关键词 SELECTIVE KILLING OF GaSTRIC CaNCER CELLS bY MONOCLONaL aNTIbODY CONJUGaTED WITH a chain OF ricin
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深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae中Ricin B-lectin型结构域基因的克隆与表达
3
作者 徐海鹏 阮灵伟 崔治中 《应用海洋学学报》 CAS CSCD 2014年第4期525-530,共6页
作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基... 作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基因rgal.序列分析表明,RGAL与已知序列的相似性较低,其含有2个Ricin B-lectin型结构域,并且该结构域具有该家族所特有的β-三叶草形三维结构.多方面的分析结果显示RGAL可能是一个新颖的凝集素蛋白.对RGAL进行了原核重组表达,并对其复性条件进行了摸索优化,成功获得了其可溶性表达产物,为后续RGAL的生物活性分析奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 海洋生物学 凝集素 ricin b-lectin结构域 管状蠕虫Ridgeia piscesae 克隆表达
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计算机辅助设计使重组ricin-A链在E.coli中的高效表达 被引量:8
4
作者 裴武红 沈倍奋 +3 位作者 李伍举 胡美茹 黎燕 贺永怀 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期33-36,共4页
基于对螺旋区随机堆积的RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,建立了pBV220载体中外源基因高效表达的判别模型。该模型认为,外源基因的表达水平,与其5′端3039区域,以及3′端3039区域的二级结构自由能具有显... 基于对螺旋区随机堆积的RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,建立了pBV220载体中外源基因高效表达的判别模型。该模型认为,外源基因的表达水平,与其5′端3039区域,以及3′端3039区域的二级结构自由能具有显著的统计学意义;其次与3′端9bp的局部密码子偏性相关。据此模型,我们设计了用于克隆表达ricinA链的引物。将PCR扩增的基因克隆入pBV220载体中,在DH5α宿主中获得了高效表达(表达水平在20%以上),而且在pExSecI载体系统中亦获得了高效表达。 展开更多
关键词 重组ricin-a RNa 二级结构 CaD
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rRTA:DS27,ricin:DS27两种免疫毒素的初步比较 被引量:3
5
作者 裴武红 沈倍奋 +2 位作者 黎燕 贺永怀 赖春宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第1期4-7,共4页
目的:用重组的蓖麻毒素A链与抗CD5的单克隆抗体DS27交联为免疫毒素rTRA:DS27,与完整蓖麻毒素制备的ricin:DS27进行对比研究.方法:分析它们对靶细胞的特异性杀伤,对骨髓造血细胞增殖的影响,内化情况,以及NH_4cl对rRTA:DS27毒性的增强作用... 目的:用重组的蓖麻毒素A链与抗CD5的单克隆抗体DS27交联为免疫毒素rTRA:DS27,与完整蓖麻毒素制备的ricin:DS27进行对比研究.方法:分析它们对靶细胞的特异性杀伤,对骨髓造血细胞增殖的影响,内化情况,以及NH_4cl对rRTA:DS27毒性的增强作用.结果:rRTA:DS27具有更好的导向特异性,对骨髓造血功能影响较小,NH_4cl能明显增强rRTA:DS27的毒性.结论:rTRA:DS27免疫毒素具有更多的优点. 展开更多
关键词 蓖麻毒素a 免疫毒素 导向药物
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BALB/c小鼠免疫重组蓖麻毒素B链蛋白的免疫机制研究
6
作者 王俊虹 吴绘 魏茂提 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1758-1760,共3页
目的:探讨重组蓖麻毒素B链蛋白(rRTB)免疫雌性BALB/c小鼠的免疫机制。方法:雌性BALB/c小鼠分为rRTB组和PBS组,间隔14 d皮下多点注射,共4次。间接ELISA分析小鼠血清抗体效价和抗体分型,采用流式细胞仪检测脾细胞因子IFN-γ和IL-4。... 目的:探讨重组蓖麻毒素B链蛋白(rRTB)免疫雌性BALB/c小鼠的免疫机制。方法:雌性BALB/c小鼠分为rRTB组和PBS组,间隔14 d皮下多点注射,共4次。间接ELISA分析小鼠血清抗体效价和抗体分型,采用流式细胞仪检测脾细胞因子IFN-γ和IL-4。结果:血清IgG效价达到1∶10-7以上,且攻毒后产生二次免疫应答,与PBS对照组差别有统计学意义(P〈0.05);IgG1达到1∶10-5以上,与PBS对照组差别有统计学意义(P〈0.05);Ig G2a未发生明显变化。细胞因子检测结果表明IFN-γ的表达量与PBS组差异无统计学意义,而IL-4的表达量显著提高(P〈0.05)。结论:rRTB蛋白免疫可刺激小鼠产生高水平的特异性抗体和细胞因子,诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答,为候选疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 b链蛋白 免疫应答 生物恐怖
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RTA-RA_3是B_(220)特异性的有潜力的抗自身免疫的免疫毒素
7
作者 吴敏 林美淳 +5 位作者 张育华 曾云 周维其 陈正芳 任德莲 能势真人 《泸州医学院学报》 1994年第1期1-5,共5页
将抗B220单克隆抗体分泌克隆RA3注射至SCID小鼠腹腔以获取腹水,抗体经proteinA亲和层析柱提纯,再经SPDP双功能交联剂修饰后,与还原的去糖基蓖麻毒蛋白A链反应生成免疫毒素RTA-RA3.SephadexG150柱层析分离纯化此免疫毒素,在还原状... 将抗B220单克隆抗体分泌克隆RA3注射至SCID小鼠腹腔以获取腹水,抗体经proteinA亲和层析柱提纯,再经SPDP双功能交联剂修饰后,与还原的去糖基蓖麻毒蛋白A链反应生成免疫毒素RTA-RA3.SephadexG150柱层析分离纯化此免疫毒素,在还原状态下可见到免疫球蛋白重链、轻链及另一条带RTA.免疫毒素体内注射,研究MRL/+和MRL/lpr小鼠脾细胞的淋巴细胞标志.实验表明:RTA-RA3对脾B220+细胞有显著抑制作用.提示这一免疫毒素可用于治疗自身免疫性疾病。 展开更多
关键词 蓖麻毒蛋白a 自身免疫 单克隆抗体
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蓖麻毒素及其A、B链的提取分离纯化的研究
8
作者 许金熀 王雄莉 +4 位作者 任建人 鲁纯素 谢蜀生 马大龙 龙振洲 《北京医科大学学报》 CSCD 1989年第2期147-149,共3页
本文研究蓖麻毒素及其A、B链的提取、分离、纯化,根据B链能与Sepharose-6 B上的半乳糖结合,而A链不具有这一性质,用β-巯基乙醇使蓖麻毒素直接在Sepharose-6B柱上断链,然后分别用Tris-HCl和Tris-HCl-半乳糖溶液洗脱,首次把蓖麻毒素的制... 本文研究蓖麻毒素及其A、B链的提取、分离、纯化,根据B链能与Sepharose-6 B上的半乳糖结合,而A链不具有这一性质,用β-巯基乙醇使蓖麻毒素直接在Sepharose-6B柱上断链,然后分别用Tris-HCl和Tris-HCl-半乳糖溶液洗脱,首次把蓖麻毒素的制备、纯化以及A、B链的断链、分离结合起来,大大简化了工艺。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 提取 分离 纯化
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Plasma Accumulations of Vitamin B6 from an Oral Dose in a New Reversible Model for Mouse Gut Injury and Regeneration
9
作者 Pilar Jiménez Damián Cordoba-Diaz +5 位作者 Patricia Cabrero Mónica Aracil Manuel J. Gayoso Manuel Garrosa Manuel Cordoba-Diaz Tomás Girbés 《Food and Nutrition Sciences》 2013年第9期908-917,共10页
Chemically based rodent models are used to assess the positive effects promoted by foods and gut microbiota on gut health. Lectins with enzymatic activity, such as type 2 ribosome-inactivating proteins, might also pro... Chemically based rodent models are used to assess the positive effects promoted by foods and gut microbiota on gut health. Lectins with enzymatic activity, such as type 2 ribosome-inactivating proteins, might also prove useful for exploring these issues. Sub-lethal doses of the lectin nigrin from Sambucus nigra L. to mice promoted reversible derangement of gut epithelium by induction of apoptosis of transit amplifying cells of the small intestine crypts in a time-dependent course. The present work seeks to study vitamin B6 accumulation in plasma from an oral bolus in a mouse nigrin model. 24 h after sub-lethal nigrin b treatment, there was clear body weight reduction associated to a notable increase in Evan’s blue stain accumulation in excised small intestine, an increase in myeloperoxidase activity, and a near 50% reduction in plasma accumulation of vitamin B6. Histological analysis of small intestine sections of nigrin b-treated animals also revealed significant derangement of intestinal crypts. Seventy two hours after nigrin b treatment, stain uptake decreased and vitamin B6 accumulation was almost restored despite villi derangement. Large intestine crypts were scarcely or not at all affected. Eight days after nigrin b treatment, vitamin B6 uptake and intestinal crypt structure had fully recovered. The nigrin b mice model supports the view that, under these conditions, the carrier-mediated vitamin B6 uptake component of the small intestine crypts is probably the most active when the vitamin is administered orally as a bolus. The findings provide insights into the suitability of the present mice model for nutritional or drug absorption studies in conditions of partially altered or injured intestinal mucosa. 展开更多
关键词 VITaMIN b6 Nigrin b Ribosome-Inactivating Protein SaMbUCUS ricin INTESTINES Mice MODEL
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抗人B细胞MAb—737与蓖麻毒蛋白偶联物对肿瘤细胞选择性杀伤
10
作者 吴敏 《泸州医学院学报》 1990年第3期232-232,共1页
具有针对B细胞类la抗原特异反应性MAb—737与蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素ricin—737体外0.1M乳糖存在时,此免疫毒素对含B细胞抗原的Burkitt's淋巴瘤细胞系Raji细胞表现出选择性地强力杀伤,半数杀伤浓度(IC50)为5×10-~11M... 具有针对B细胞类la抗原特异反应性MAb—737与蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素ricin—737体外0.1M乳糖存在时,此免疫毒素对含B细胞抗原的Burkitt's淋巴瘤细胞系Raji细胞表现出选择性地强力杀伤,半数杀伤浓度(IC50)为5×10-~11M。同样条件,对不含靶抗原的对照细胞K562没有显著杀伤,lC50为10-(~8)M,毒性比前者低500倍。游离毒蛋白IC50为5×10-~8M,比免疫毒素毒性低1000倍,动力学研究表明,免疫毒素作用1小时就可抑制靶细胞的增殖,并随处理时间延长,杀伤更趋显著。结果提示。 展开更多
关键词 选择性杀伤 免疫毒素 b细胞Mab 蓖麻毒蛋白 淋巴瘤细胞系 偶联物 ricin 同样条件 靶抗原 特异反应
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蓖麻毒素A链突变体的设计、表达与活性研究 被引量:10
11
作者 裴武红 冯健男 +2 位作者 雷红星 黎燕 沈倍奋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第3期270-272,294,共4页
利用蛋白质结构同源模建并结合表观静电势分析,设计了拟具有生物学活性的蓖麻毒素A链的突变体.将PCR扩增的突变体基因,导入pKK2233载体中,于大肠杆菌(E.coli)中获得高效、可溶性表达,而且。
关键词 蓖麻毒素 a链突变体 基因表达 分子设计
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rRTA:DS27免疫毒素的制备及胞内运输研究 被引量:5
12
作者 裴武红 沈倍奋 +4 位作者 黎燕 贺永怀 王国华 张贺秋 汪宝珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期174-176,共3页
目的:探讨免疫毒素rRTA:DS27的内化行为。方法:用原核系统来获得重组蓖麻毒素A链(rRTA);用胶体金双标记法进行Molt4细胞中免疫毒素的导向研究。结果:CMSephorose一步纯化到电泳纯的rRTA,电... 目的:探讨免疫毒素rRTA:DS27的内化行为。方法:用原核系统来获得重组蓖麻毒素A链(rRTA);用胶体金双标记法进行Molt4细胞中免疫毒素的导向研究。结果:CMSephorose一步纯化到电泳纯的rRTA,电镜观察到rRTA:DS27遵循特异的胞内运输途径。结论:上述结果对于深入了解免疫毒素的作用机理,并进而改善其临床应用具有重要作用。 展开更多
关键词 免疫毒素 胶体金标记 电镜 rRTa 制备
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蓖麻毒素A链突变体(MRTA)的分子设计 被引量:5
13
作者 冯健男 裴武红 +2 位作者 雷红星 吴加金 沈倍奋 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期120-125,共6页
利用同源模建的方法,借助分子力学优化、分子动力学模拟退火设计构建了删除部分氨基酸序列的蓖麻毒素A链突变体(MRTA)。采用泊松—玻尔兹曼方程对比分析了蓖麻毒素A链(RTA)与MRTA表观静电势分布,研究RTA与MRT... 利用同源模建的方法,借助分子力学优化、分子动力学模拟退火设计构建了删除部分氨基酸序列的蓖麻毒素A链突变体(MRTA)。采用泊松—玻尔兹曼方程对比分析了蓖麻毒素A链(RTA)与MRTA表观静电势分布,研究RTA与MRTA蛋白表面静电性质;通过半经验量子化学AM1与分子力学结合方法探讨RTA与MRTA功能域氨基酸前线分子轨道性质、能级分布。 展开更多
关键词 蓖麻毒素a 分子力学 分子设计 突变体
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蓖麻毒素A链(RTA)功能域突变体构效关系的量子化学研究 被引量:3
14
作者 冯健男 裴武红 +2 位作者 吴加金 黎燕 沈倍奋 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第9期1415-1418,共4页
结合对蓖麻毒素A链(RTA)功能域氨基酸(Tyr80,Trr123,Gln177,Arg180)点突变后对其生物活性影响的实验研究,利用半经验量子化学AMI方法对RTA功能域及其点突变进行了理论计算.通过分析前线分子轨道性质和能级,从理论上探讨了其... 结合对蓖麻毒素A链(RTA)功能域氨基酸(Tyr80,Trr123,Gln177,Arg180)点突变后对其生物活性影响的实验研究,利用半经验量子化学AMI方法对RTA功能域及其点突变进行了理论计算.通过分析前线分子轨道性质和能级,从理论上探讨了其功能域点突变对其生物活性的影响,并预测了突变体(Tyr123→TrP)比RTA生物活性高. 展开更多
关键词 蓖麻毒素a 功能域 RTa 突变体 构效关系
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基于蓖麻毒素B链的新型黏膜免疫佐剂设计及靶向效果初步评价 被引量:2
15
作者 郭建巍 秦力维 +3 位作者 冯健男 付凯飞 王珍光 赵强元 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期974-980,988,共8页
目的:利用自主知识产权抗体3E1,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位,基因工程合成后,动物实验评价绿色荧光蛋白在基于RTB活性肽靶向下在体内的分布,为后续研究奠定基础。方法:用生物信息学技术,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位;... 目的:利用自主知识产权抗体3E1,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位,基因工程合成后,动物实验评价绿色荧光蛋白在基于RTB活性肽靶向下在体内的分布,为后续研究奠定基础。方法:用生物信息学技术,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现肽-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达;动物实验评价小鼠舌下口服肽-GFP融合蛋白后GFP在体内的分布。结果:建立了自主知识产权单抗3E1与RTB相互作用的空间构象,判定出四个活性区域,构建了4个含不同活性肽的GFP原核表达载体,获得了高纯度蛋白;经舌下口服免疫BALB/c小鼠后,免疫组化和流式细胞术证实,P1-GFP免疫组GFP和CD11c在不同组织中的分布与对照组有明显区别。P1-GFP初次免疫后,GFP主要分布于空肠,再次免疫后,GFP主要集中于回肠、肠相关淋巴组织和小肠PP结;初次免疫后CD11c+细胞主要分布于肠系膜淋巴结,胃和空肠,再次免疫后肠系膜淋巴结中的CD11c+细胞不再占优势,空肠中CD11c+细胞明显增加。结论:基于RTB的活性肽P1与GFP融合蛋白口服免疫小鼠后,P1-GFP经P1肽的导向,初次和再次免疫后GFP在体内的分布不同,再次免疫后范围更广。P1的导向使GFP直接进入小肠PP结和肠系膜淋巴结两个黏膜免疫应答的主要诱导及效应部位,利于免疫应答的发生。 展开更多
关键词 蓖麻毒素b 黏膜免疫 小分子肽 靶向分布
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重组蓖麻毒素A链与几种天然单链核糖体失活蛋白的活性研究 被引量:3
16
作者 裴武红 王润华 +1 位作者 郑硕 沈倍奋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期71-74,共4页
采用pExSecⅠ载体系统进行了蓖麻毒素A链的原核表达,经CM-Sepharose一步纯化后,获得了纯度约80%的重组蓖麻毒素A链.将其与几种天然单链核糖体失活蛋白进行了超螺旋DNA裂解研究和无细胞体系中蛋白合成抑制... 采用pExSecⅠ载体系统进行了蓖麻毒素A链的原核表达,经CM-Sepharose一步纯化后,获得了纯度约80%的重组蓖麻毒素A链.将其与几种天然单链核糖体失活蛋白进行了超螺旋DNA裂解研究和无细胞体系中蛋白合成抑制试验,结果表明,重组蓖麻毒素A链具有类似于天然单链核糖体失活蛋白的活性。 展开更多
关键词 蓖麻毒素a 核糖体失活蛋白 无细胞体系
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基于RTB的新型免疫增强剂构建、表达及免疫效果评估 被引量:2
17
作者 郭建巍 秦力维 +2 位作者 冯健男 付凯飞 王珍光 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期966-969,共4页
目的利用自主知识产权抗体3E1,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位,通过构建含肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现含肽的绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,评价小鼠舌下口服含蓖麻毒素B链肽的绿色荧光蛋白后黏膜... 目的利用自主知识产权抗体3E1,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位,通过构建含肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现含肽的绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,评价小鼠舌下口服含蓖麻毒素B链肽的绿色荧光蛋白后黏膜免疫应答的能力。方法用生物信息学技术,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体;镍金属离子鏊合柱纯化目的蛋白;间接ELISA测定小鼠舌下口服不同肽-GFP融合蛋白后各种抗体水平的变化。结果实现了含不同肽的GFP在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,获得了纯度大于90%的肽-GFP融合蛋白。免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体。免疫组血清中IgG2b、IgG3、IgA水平与对照组无明显差异。结论分别用4个小分子肽-GFP融合蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠的血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体,激发了Th1型免疫应答。 展开更多
关键词 蓖麻毒素b 黏膜免疫 小分子肽 Th1型免疫应答
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蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定 被引量:2
18
作者 陈欣虹 刘琼 詹金彪 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第3期201-206,共6页
 目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;...  目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。 展开更多
关键词 蓖麻蛋白 蓖麻毒素a 发光蛋白质类 重组融合蛋白质类/生物合成 基因表达 大肠杆菌/代谢 聚合酶链反应
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蓖麻蛋白A链与单抗3G11偶联物的制备及体外生物活性研究 被引量:1
19
作者 宋波 戴垚 +2 位作者 黎维勇 金文闻 陈华庭 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期899-901,共3页
目的:Ⅳ型胶原酶在肿瘤生长和转移的多个环节发挥着重要作用。将抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体3G11与蓖麻毒素A链(RA)偶联形成免疫毒素(ITs),并评价了该偶联物的体外生物活性。方法:从蓖麻籽中提取纯RA,与N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸... 目的:Ⅳ型胶原酶在肿瘤生长和转移的多个环节发挥着重要作用。将抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体3G11与蓖麻毒素A链(RA)偶联形成免疫毒素(ITs),并评价了该偶联物的体外生物活性。方法:从蓖麻籽中提取纯RA,与N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)修饰的单抗3G11偶联,进一步纯化后得到3G11-RA。以ELISA实验测定ITs的免疫反应性,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验对其体外细胞毒性进行评价。结果:ITs基本保持了单抗3G11对人肝癌细胞BEL-7402的免疫反应性,其对BEL-7402的细胞毒性比RA显著增强近50倍,而对人正常肝细胞LO2的毒性与RA相似。结论:3G11-RA免疫毒素对BEL-7402肝癌细胞具有较好的免疫反应性和体外细胞毒性。 展开更多
关键词 单克隆抗体 蓖麻毒素a 免疫毒素 体外细胞毒性 肿瘤生长
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蓖麻毒素对肝癌细胞核转录因子NF-κB的激活作用 被引量:2
20
作者 董巨莹 彭宣宪 药立波 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1109-1111,共3页
目的:探讨蓖麻毒素细胞毒性作用的分子机理。方法:采用免疫细胞化学和 Western blot等方法观察蓖麻毒素作用于人肝癌细胞后,引起核转录因子 NFκ B的变化。结果: 100 pmol/L的蓖麻毒素处理细胞后,随着时间的延长( 30 min、 1 h... 目的:探讨蓖麻毒素细胞毒性作用的分子机理。方法:采用免疫细胞化学和 Western blot等方法观察蓖麻毒素作用于人肝癌细胞后,引起核转录因子 NFκ B的变化。结果: 100 pmol/L的蓖麻毒素处理细胞后,随着时间的延长( 30 min、 1 h和 2 h), NFκ B由胞浆逐渐向核内转移, 2 h后胞浆和胞核的着色均变浅,表明 NFκ B的活性略有减弱;随着蓖麻毒素浓度的增大,核内棕色颗粒也有加深的趋势。结论:本结果表明蓖麻毒素通过其糖配基与肝癌细胞相互作用后,能启动核转录因子 NFκ B的表达。 NFκ B激活在其抗癌作用中起着重要作用。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 肝癌细胞 NF-Κb 激活作用
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