新疆地区扇头蜱中Candidatus Rickettsia barbariae的检测与序列分析

为了解新疆地区血红扇头蜱和图兰扇头蜱中Candidatus Rickettsia barbariae立克次体感染状况,从新疆尉犁县采集蜱标本510只,其中血红扇头蜱90只,图兰扇头蜱420只。利用PCR方法对C.R.barbariae立克次体ompA、ompB、glt A和17k Da基因片段进行扩增。10只血红扇头蜱和53只图兰扇头蜱检测出C.R.barbariae阳性,阳性率分别为11.11%和12.62%。经序列分析,同一目的基因阳性序列相同,为同一序列。经比对分析,ompA基因序列与意大利撒丁岛的图兰扇头蜱中检测出的C.R.barbariae序列(EU272186.1)同源性为99.8%(583/584)。所测得ompB基因序列与意大利撒丁岛图兰扇头蜱中检测出的的C.R.barbariae Omp B基因序列(EU272187.1)同源性达100%(768/768)。所测得的glt A基因序列、17k Da基因序列与新疆花蠕形蚤Vermipsylla alakurt检测出的相应基因序列(KT284716.1、KT284715.1)同源性达100%(375/375、356/356)。结果表明,新疆尉犁县地区血红扇头蜱和图兰扇头蜱中存在C.R.barbariae自然感染,感染率较高。

广西凤山县野鼠感染斑点热群立克次体的分子流行病学研究

目的调查广西壮族自治区凤山县野鼠感染斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsiae,SFGR)的状况,了解其在当地流行的种类。方法用鼠笼在广西河池市凤山县捕捉野鼠,根据形态学特征与运用分子生物学方法对鼠种鉴定。解剖动物后取其脾脏组织提取总DNA样本,采用半巢氏PCR从样本中扩增立克次体外膜蛋白A(ompA),检测野鼠携带的斑点热群立克次体。对扩得DNA片段测序,并对获得的DNA序列进行同源性与系统进化分析。结果共捕获7种105只野鼠,除青毛鼠之外,从板齿鼠、小泡巨鼠、卡氏小鼠、锡金小鼠、黑缘齿鼠和罗赛鼠中检测到斑点热群立克次体,总阳性率为23.8%。基于ompA基因序列分析,检测到的斑点热群立克次体为敬信立克次体、饶氏立克次体和西伯利亚立克次体。结论广西壮族自治区凤山县的野鼠携带3种斑点热群立克次体,为斑点热的自然疫源地。因此应加强当地的蜱传立克次体病的监测与防控。

新疆阿拉尔市流浪猫源蜱种类鉴定及其携带立克次体PCR检测

为了解猫体表寄生蜱的种类及其携带立克次体情况,从新疆阿拉尔市某居民小区流浪猫体表采集蜱样本,基于形态学和分子生物学方法鉴定蜱种类,然后采用PCR法检测其立克次体携带情况,通过序列比对鉴定其基因型,并构建遗传进化树分析其分子遗传特征。结果显示:4只流浪猫中有1只体表寄生了3只蜱,通过形态学观察初步鉴定为图兰扇头蜱;基于蜱线粒体SSU rRNA和COX I基因对3只蜱DNA样本进行PCR扩增,经序列分析比对为图兰扇头蜱;基于立克次体OmpA和OmpB基因,分别对3只蜱DNA样本进行PCR扩增和序列比对分析发现,在2只蜱DNA样本中检测到的立克次体序列与我国图兰扇头蜱和黎巴嫩具环扇头蜱源暂定巴布瑞立克次体同源性为100%,将其鉴定为暂定巴布瑞立克次体。结果表明,阿拉尔市流浪猫体表存在图兰扇头蜱寄生,其可携带暂定巴布瑞立克次体。本研究结果为我国猫源寄生蜱及其传播病原学研究提供了基础资料。

全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱经卵传播新塔拉塞维奇立克次体的检测研究

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔拉塞维奇立克次体的感染情况，从而研究新塔拉塞维奇立克次体在蜱生活周期中的传递规律。共采集牛寄生饱血雌蜱91只，其中全沟硬蜱14只，森林革蜱55只，嗜群血蜱24只。新塔拉塞维奇立克次体感染率为85．71％，5．45％，12．50％。卵的最低感染率分别为全沟硬蜱（2％）、森林革蜱（1．3％）、嗜群血蜱（1．1％），幼蜱的最低感染率分别为全沟硬蜱（5％）、森林革蜱（1．7％）、嗜群血蜱（2．2％）。且3种蜱雌蜱、卵、幼虫均检测到的新塔拉塞维奇立克次体，序列比对一致。感染的幼蜱均可通过叮咬使小鼠感染，三种蜱都能经卵传播新塔拉塞维奇立克次体。全沟硬蜱感染率高可能是东北林区新塔拉塞维奇立克次体的主要媒介蜱。

江西省啮齿动物携带立克次体分子流行病学研究

目的调查江西省部分县区啮齿动物携带的立克次体。方法在江西省南丰县、铜鼓县、上犹县、浮梁县、上高县、上饶市广信区捕获啮齿动物,运用形态学结合分子生物学方法鉴定其种类。采用巢式PCR方法检测捕获的啮齿动物的脾脏组织样本中的柯克斯体属、斑点热群、东方体属和无形体属立克次体。结果捕获啮齿动物6种共393只,包括黑线姬鼠、褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、社鼠和臭鼩鼱,黑线姬鼠为优势鼠种(311/393)。从19只黑线姬鼠检出柯克斯体(6.11%),从2只黑线姬鼠检出东方体(0.64%),从1只黑线姬鼠检出斑点热群立克次体(0.32%)。对扩增阳性基因片段测序和对获得基因序列做同源性比对,结果浮梁县黑线姬鼠检出新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体;铜鼓县和上饶市广信区黑线姬鼠检出贝氏柯克斯体;南丰县黑线姬鼠检出恙虫病东方体。除黑线姬鼠外,其它5种啮齿动物均未检出立克次体。结论江西省部分地区的黑线姬鼠携带贝氏柯克斯体、新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体等立克次体病原体,人群存在相关立克次体感染的风险,疾控和医疗机构应加强立克次体病的监测。

黑龙江口岸斑点热群立克次体调查研究

为了解黑龙江口岸地区斑点热群立克次体在人群、鼠类、蜱类中的分布特征，针对黑龙江省9个中俄边境口岸，采集出入境人群的血液样本215份、鼠类样本204份、蜱类样本188份，利用半巢式PCR方法对所有样本进行斑点热群立克次体特异性片段扩增，通过基因测序对斑点热群立克次体分型。结果在哈尔滨机场及嘉荫两个口岸的大仓鼠及小家鼠中检测到2例劳氏立克次体Rickettsia raoultii，为首次在黑龙江口岸鼠样本中检测出劳氏立克次体；在188份蜱样本中，检出斑点热群立克次体阳性样本101例，感染率达53．7％，其中劳氏立克次体89例，新塔拉塞维奇立克次体Candidatus Rickettsia tarasevichiae11例，黑龙江立克次体Rickettsia heilottgjiaagii1例，同样首次在黑龙江口岸全沟硬蜱中检测到新塔拉塞维奇立克次体。黑龙江中俄边境口岸开展SFGR的长期监测具有非常重要的公共卫生学意义。

长角血蜱经卵传播斑点热群立克次体新基因型Candidatus Rickettsia longicornii的研究

目的确认长角血蜱是否具有经卵传播斑点热群立克次体(Spotted fever group rickettsia,SFGR)新基因型Candidatus Rickettsia longicornii的能力。方法采集牛体表饱血长角血蜱,在实验室诱导产卵,并采用聚合酶链式反应检测蜱卵中Candidatus R. longicornii核酸。扩增长角血蜱母体和蜱卵中Candidatus R. longicornii基因序列,分析同源性和遗传进化关系。结果共采集55只饱血长角血蜱(雌性成蜱),检测Candidatus R. longicornii核酸,21只阳性,阳性率为38.18%。共收集约2 500只长角血蜱蜱卵,分成50组检测Candidatus R. longicornii,6组阳性,蜱卵最低感染率为0.24%。经同源性分析,长角血蜱母体和蜱卵Candidatus R. longicornii基因序列与首次在韩国发现的蜱源ROK-HL727株Candidatus R. longicornii基因序列同源性均达到99.79%以上。母体和蜱卵2个Candidatus R. longicornii基因序列间同源性达到99.69%以上,在系统进化关系上均与ROK-HL727株基因序列处于同一个分支,且遗传关系较近。结论长角血蜱母体SFGR Candidatus R. longicornii基因型感染率较高,且可经卵传播该基因型。

2023年贵州省六盘水市部分地区蜱传立克次体调查

目的 了解贵州省六盘水市部分地区蜱携带立克次体感染率,为当地蜱传立克次体病防控工作提供参考依据。方法 2023年4—6月在贵州省六盘水市盘州市大山镇高兴村捕捉牛、羊体表寄生蜱,采用形态学和分子生物学方法对蜱种进行鉴定。采用巢式PCR法检测蜱携带的立克次体,包括斑点热群立克次体、柯克斯体属、无形体属、埃立克体属和东方体属,扩增的阳性片段测序后与Gen Bank已知序列进行同源性比对。结果 共采集200只蜱,经鉴定均为微小扇头蜱。巢式PCR联合测序鉴定出蜱携带敬信立克次体暂定种(40.50%)、贝氏柯克斯体(1.50%)和柯克斯体共生菌(27.00%),未检测出无形体、埃立克体及东方体。结论 贵州省六盘水市部分地区微小扇头蜱携带敬信立克次体暂定种、贝氏柯克斯体和柯克斯体共生菌;当地有关部门需加强家畜和人群蜱传立克次体感染监测,减少蜱传立克次体病危害。

内蒙古自治区牙克石市全沟硬蜱携带立克次体的研究

目的了解内蒙古自治区(内蒙古)大兴安岭地区蜱携带的斑点热群立克次体和无形体属细菌的流行情况与种类。方法在阿龙山林区采集蜱并根据形态学特征进行鉴定,运用PCR方法扩增17 kDa与16S rRNA基因分别对2010年捕获蜱中的两类病原体进行检测,同时扩增阳性样本中立克次体的全长16S rRNA和gltA基因,将扩增产物测序后进行序列分析。运用MegAlign软件分析序列的相似性,并通过PhyML3.1软件构建进化树进行系统发生分析。结果在阿龙山林区采集点共捕获蜱293只,经形态学鉴定全部为全沟硬蜱。其中斑点热群立克次体、无形体的感染率分别为9.56%和0。序列分析显示该地区蜱携带的斑点热群立克次体均为新塔拉塞维奇立克次体,16S rRNA和gltA基因与该种立克次体已知序列的同源性分别为100.00%和99.80%,氨基酸同源性为100.00%。进化分析结果显示本研究在牙克石市全沟硬蜱中检测到的新塔拉塞维奇立克次体与俄罗斯的菌株为同一基因型。结论内蒙古大兴安岭地区蜱中存在可致病的斑点热群新塔拉塞维奇立克次体。

吉林延边地区蜱复合感染新塔拉塞维奇立克次体及SFTSV调查研究

目的为了解吉林省延边地区蜱类新塔拉塞维奇立克次体(candidatus rickettsia tarasevichiae, CRT)和复合感染新布尼亚病毒(sever fever thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)的感染情况。方法采集吉林省延边朝鲜族自治州(延边州)延吉、汪清、珲春、敦化、安图、和龙6个县游离蜱,进行形态学分类,通过巢式多聚核苷酸链式反应(nested polymerase chain reaction, nested PCR)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测蜱体内CRT和SFTSV。对其CRT进行目标DNA测序,分析同源性和系统进化关系。结果此研究共采集各种蜱类1 032只,分别为全沟硬蜱(ixodes persulcatus)(35.56%)、森林革蜱(dermacentor silvarum)(20.64%)、日本血蜱(haemaphysalis japonica)(20.45%)、长角血蜱(haemaphysalis longicornis)(10.47%)、嗜群血蜱(haemaphysalis concinna)(8.33%)以及其他种类(4.55%)。全沟硬蜱、长角血蜱、日本血蜱、森林革蜱检测出CRT,最低感染率(minimum infection rate per 100 ticks,MIR)为10.47%。嗜群血蜱、日本血蜱、全沟硬蜱、长角硬蜱、森林革蜱检测出SFTSV,最低感染率为2.52%。全沟硬蜱、日本血蜱、森林革蜱3种蜱存在CRT和SFTSV复合感染现象,复合感染MIR为1.26%。本研究CRT ompA和17kDa基因序列与中国河南信阳株(KX365196.1)序列同源性达100%。系统进化分析,延边地区蜱CRT ompA基因序列和该河南信阳株基因序列成为一簇,而17kDa基因则形成独立分支。结论本研究首次从吉林省延边地区游离蜱中检测出CRT,全沟硬蜱为主要媒介宿主。因此,可以明确该地区为新塔拉塞维奇立克次体病自然疫源地。同时发现,延边地区蜱类存在CRT与SFTSV复合感染的现象。因此,在该地区必须加强新塔拉塞维奇立克次体病和发热伴血小板减少综合征(sever fever thrombocytopenia syndrome, SFTS)疫情监测。

辽宁省东部山区长角血蜱中SFGR DNA的检测和序列分析

目的调查辽宁省东部地区蜱类携带斑点热群立克次体(SFGR)情况及种型分布。方法采集辽宁省本溪、宽甸长角血蜱,提取DNA,采用PCR扩增SFGR ompA基因,并进行测序和聚类分析。结果 65份(368只)长角血蜱标本有7份扩增出SFGR OmpA基因片段,阳性率为10.77%。对其中3份标本的扩增片段(BH36、BH30、KD9)测序后进行聚类分析,ompA基因序列与SFGR河北株暂定种Candidatus R.hebeiii(HQ651815、HQ651817)同处于一个分支,同源性为99.83%~100%;与R.heilongjiangensis和R.japonica遗传距离较近,与其他SFGR遗传距离较远。结论辽宁省东部地区长角血蜱携带SFGR Candidatus R.hebeiii,且感染较普遍。

2019—2020年内蒙古部分地区蜱携带斑点热群立克次体的调查

目的了解内蒙古中东部地区蜱感染斑点热群立克次体情况。方法2019—2020年5-6月,在内蒙古额尔古纳市、满洲里市、阿尔山市、锡林浩特市、阿日哈沙特口岸和额布都格口岸,采用人工布旗法采集蜱,用PCR的方法扩增斑点热群立克次体omp A基因,对阳性样本进行序列测定并构建系统进化树。结果共采集到379只蜱,其中草原革蜱146只(38.5%)、森林革蜱200只(52.8%)、全沟硬蜱33只(8.7%),斑点热群立克次体阳性率为63.9%,共检测到拉欧蒂立克次体(Rickettsia raoultii)、新塔拉塞维奇立克次体(Rickettsia(Candidatus)tarasevichiae)、西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)3种立克次体。基于omp A基因片段的进化分析显示,3种立克次体分别与俄罗斯发现的拉欧蒂立克次体Tomsk株(MK304548)、我国黑龙江发现的新塔拉塞维奇立克次体哈尔滨株Bayan-68(MN450411)、前苏联发现的西伯利亚立克次体(U4807.1)关系密切,同源性99.8%~100.0%。结论森林革蜱和草原革蜱是内蒙古中东部地区的优势蜱种,草原革蜱斑点热群立克次体的感染率高于其他蜱种,应当引起重视。