斑点热群立克次体内蒙W-88蛛89102抗原的蛋白免疫印迹分析

蛋白免疫印迹试验表明从内蒙通辽病人旺某血标本分离的斑点热群立克次体W-88株与西伯利亚立克次体(232株及246株)的蛋白图谱完全相同,具有2个分子量为130KD及181KD的主要抗原性多肽及1个反应较弱的分子量为110KD的抗原性多肽,此与其它斑点热群立克次体不同。说明W-88株为西伯利亚立克次体。斑点热群立克次体中西伯利亚立克次体、立氏立克次体、康氏立克次体及派氏立克次体相互间抗原有较强的交叉反应。小蛛立克次体、澳大利亚立克次体与上述立克次体仅有微弱的交叉反应。说明斑点热群立克次体主要抗原分子有相同的决定簇。

气相色谱-质谱法对斑点热群立克次体——中国分离株的识别研究

本文报告应用气相色谱-质谱法分析了13株斑点热群立克次体(7株中国分离株和6株国际标准株)泛影葡胺密度梯度离心纯化物的全细胞脂肪酸成分。结果表明,各被检测的立克次体株所含主要脂肪酸成分百分含量有区别,所得色谱图经多元聚类法处理的7株中国分离株与国际标准株中的西伯利亚立克次体相近,而与其它国际标准株则有明显区别。

斑点热群立克次体中国分离株染色体DNA限制性核酸内切酶分析

应用限制性核酸内切酶Hind Ⅲ、BamHI、Pst Ⅰ及EcoRI,对本研究室从斑点热病人分离的立克次体An-84、Se-85、W-883株,从蜱分离的FT-84、MT-842株、从蜱卵分离的TO-85株及中国参考株JH-74蜱株与7株斑点热群立克次体国际标准株,进行了染色体DNA限制性核酸内切酶酶切片段电泳图谱分析。结果表明不同种的斑点热群立克次体国际标准株的DNA酶切图谱不相同,各具特征。7株中国分离株与国际标准株西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)的DNA酶切图谱完全一致,株间未发现有差异。由此证明中国分离株均属西伯利亚立克次体,所致疾病为北亚蜱传斑点热(NorthAsia Tick-Borne Spotted Fever)。

浙江省蜱标本中斑点热群立克次体rOmpA和gltA基因检测

目的了解浙江省部分山区蜱中感染斑点热群立克次体的状况,探讨以外膜蛋白A(rOmpA)和柠檬酸合成酶基因(gltA)为靶基因的PCR方法可行性。方法利用PCR方法,检测天台县左溪镇和临安县西天目地区共46组蜱类标本中rOmpA和gltA基因特异片段。对所检测到的阳性结果进行克隆与序列测定,并进行聚类分析。结果从46组蜱标本中检测发现2组长角血蜱中斑点热群立克次体的rOmpA和gltA基因片段均为阳性,核酸序列基本一致,但推测斑点热群立克次体种的进化位置存在差异。结论浙江省部分山区存在蜱中感染斑点热群立克次体的状况。利用rOmpA和gltA基因能从标本中检测到斑点热群立克次体,但从2个结果推测立克次体的分类位置存在差异。

斑点热群立克次体 BJ-93 株的分离和鉴定

用鸡胚卵黄囊培养法从北京市昌平县境内采集的中华革蜱中分离到了一株立克次体，命名为ＢＪ－９３株立克次体。经形态学及血清学试验证实为斑点热群立克次体。分别用微量免疫荧光法、十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳法、单克隆抗体免疫酶斑点法、单克隆和多克隆抗体免疫印迹法、聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析法对该分离株进行鉴定并同已知国际标准株、国际及国内参考株进行比较。结果表明：ＢＪ－９３株立克次体与西伯利亚立克次体ＢＪ－９０株在抗原多肽上和基因片段上完全一致，与西伯利亚立克次体２４６株在基因片段上一致，但在抗原性多肽及蛋白多肽图谱上略有差异。

2019—2020年内蒙古部分地区蜱携带斑点热群立克次体的调查

目的了解内蒙古中东部地区蜱感染斑点热群立克次体情况。方法2019—2020年5-6月,在内蒙古额尔古纳市、满洲里市、阿尔山市、锡林浩特市、阿日哈沙特口岸和额布都格口岸,采用人工布旗法采集蜱,用PCR的方法扩增斑点热群立克次体omp A基因,对阳性样本进行序列测定并构建系统进化树。结果共采集到379只蜱,其中草原革蜱146只(38.5%)、森林革蜱200只(52.8%)、全沟硬蜱33只(8.7%),斑点热群立克次体阳性率为63.9%,共检测到拉欧蒂立克次体(Rickettsia raoultii)、新塔拉塞维奇立克次体(Rickettsia(Candidatus)tarasevichiae)、西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)3种立克次体。基于omp A基因片段的进化分析显示,3种立克次体分别与俄罗斯发现的拉欧蒂立克次体Tomsk株(MK304548)、我国黑龙江发现的新塔拉塞维奇立克次体哈尔滨株Bayan-68(MN450411)、前苏联发现的西伯利亚立克次体(U4807.1)关系密切,同源性99.8%~100.0%。结论森林革蜱和草原革蜱是内蒙古中东部地区的优势蜱种,草原革蜱斑点热群立克次体的感染率高于其他蜱种,应当引起重视。