RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法:组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝(MTT)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h)RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%(P<0.01)。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%(均P<0.01)。MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%(P<0.01)。结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。

Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白在子宫内膜癌中的表达及预后价值

目的分析原癌基因细胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、肿瘤相关长链非编码RNA 5(CARLo-5)及雷帕霉素不敏感的mTOR伴侣蛋白(Rictor)在子宫内膜癌中的表达及对远期预后生存的影响。方法分析2014年1月至2015年1月本院收治的63例子宫内膜癌患者标本组织(为子宫内膜癌组)及肿瘤旁(距离癌组织5cm以上)的正常组织(为癌旁组织组)。比较2组Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白的表达情况;绘制Kaplan-Meier生存曲线研究Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白对患者预后的影响,并采用多元Logistic回归分析影响子宫内膜癌患者预后生存的危险因素。结果Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白在子宫内膜癌组织中阳性表达率均高于癌旁组织组,差异有统计学意义(P<0.05)。Keplan-meier生存曲线显示:Ki-67阴性组平均生存时间较阳性组长,CARLo-5阴性组平均生存时间较阳性组长,Rictor蛋白阴性组平均生存时间较阳性组长,差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期、组织分化程度、预后评分、Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白表达子宫内膜癌患者是影响子宫内膜癌患者预后的单因素(P<0.05);经非条件多因素Logistic回归模型分析可知,低分化组织、预后评分≥7分、存在脉管瘤栓、肌层浸润≥1/2及Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白高表达为影响子宫内膜癌患者预后死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论Ki-67、CARLo-5及Rictor蛋白可作为预测子宫内膜癌患者远期预后的分子标志物和肿瘤治疗的潜在的靶点;对合并高危因素者临床需采取有效措施进行干预,以提高远期生存率。

结直肠癌组织中Rictor蛋白的表达及其与临床病理特征、预后的关系

目的观察结直肠癌组织中Rictor蛋白的表达情况及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取接受结直肠癌根治术治疗的90例结直肠癌患者作为研究对象,收集其结直肠癌组织标本,并取对应的癌旁正常结直肠组织作为对照。采用免疫组织化学方法检测结直肠癌组织和癌旁正常结直肠组织中Rictor蛋白的表达情况,分析结直肠癌组织中Rictor蛋白表达与临床病理特征、预后的关系,并采用单因素和多因素Cox回归分析探讨结直肠癌患者预后的影响因素。结果结直肠癌组织中Rictor蛋白阳性表达率为55.6%(50/90),高于癌旁正常结直肠组织的11.1%(10/90),差异有统计学意义(χ~2=40.034,P<0.001)。结直肠癌组织中Rictor蛋白阳性表达率与肿瘤最大直径、浸润深度、TNM分期、分化程度和淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。Rictor蛋白低表达患者的总体生存率高于Rictor蛋白高表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,Rictor蛋白高表达、TNM分期Ⅲ期是结直肠癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论Rictor蛋白在结直肠癌组织中高表达,与肿瘤恶性生物学行为和患者预后不良有关。

自噬相关蛋白ULK1与Raptor、Rictor在不同宫颈组织的表达及临床意义

目的 研究不同宫颈组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ULK1与Raptor、Rictor蛋白表达水平,并探讨其意义。方法 选取宫颈癌组织95例、宫颈鳞状上皮高级别病变(HSIL)组织30例、宫颈鳞状上皮低级别病变(LSIL)组织30例和慢性宫颈炎组织30例。采用免疫组织化学方法检测各组宫颈组织中ULK1与Raptor、Rictor的表达情况,并分析该指标与宫颈癌临床病理参数的关系。结果 ULK1与Raptor、Rictor在不同宫颈组织中表达,差异有统计学意义(P<0.05)。ULK1与Raptor、Rictor在宫颈癌组织中表达水平呈负相关(r=-0.640、-0.687,P<0.05)。ULK1、Raptor、Rictor表达与组织分化程度、FIGO分期、组织类型有关(P<0.05)。ULK1阴性表达患者的总生存率短于阳性表达患者,Raptor与Rictor阳性表达患者的总生存率短于阴性表达患者(P<0.05)。FIGO分期、组织类型、组织分化程度及ULK1、Raptor、Rictor阳性表达是宫颈癌患者预后影响因素(P<0.05),组织分化程度、淋巴结转移及Rictor是宫颈癌预后危险因素,ULK1是宫颈癌预后的独立保护因素(P<0.05)。结论 ULK1与Raptor、Rictor表达与不同宫颈病变的发生、发展及预后有关,有望成为宫颈病变进展和预后的有效预测指标。

D2^(+)根治性胃腺癌切除术后组织Rictor蛋白阳性患者无进展生存预测列线图模型的构建及预测效果分析

目的构建预测D2^(+)根治性胃腺癌切除术后病变组织检测Rictor蛋白阳性患者无进展生存(PFS)的列线图模型,并分析其预测价值。方法回顾性收集2005年5月至2020年12月于山西省肿瘤医院接受D2^(+)根治性切除术的1366例胃腺癌患者组织样本,使用免疫组织化学SP法检测Rictor蛋白表达。Rictor阳性676例,按7∶3比例进行简单随机分组,其中训练队列496例,验证队列180例。采用多因素Cox比例风险模型分析Rictor蛋白表达情况及其他临床病理因素与Rictor阳性患者PFS的关系,确定PFS独立影响因素。根据PFS独立影响因素构建预测胃腺癌患者3年和5年PFS率的列线图。进行10000次重复采样的内部交叉验证,检验预测模型的准确度。通过校准曲线、时间受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)和决策曲线分析(DCA)进一步评估模型的内部和外部预测能力。应用列线图模型对训练队列496例PFS进行评分,采用X‑tile软件获得评分的最佳临界值,根据最佳临界值将总体队列、训练队列和验证队列病例分为低危组(≤最佳临界值)和高危组(>最佳临界值),采用Kaplan‑Meier法分析各队列低危组和高危组PFS差异。结果多因素Cox回归分析显示,性别、年龄、pT分期、阳性淋巴结数、神经侵犯、肿瘤长径、网膜侵犯、Clavien‑Dindo术后并发症分级、CGA的表达为Rictor阳性胃腺癌训练队列PFS的独立影响因素。依据上述指标构建预测Rictor阳性胃腺癌患者3年和5年PFS率的列线图。内部验证和外部验证的校准曲线显示列线图预测与实际PFS吻合较好。时间ROC曲线显示,内部验证和外部验证模型预测3年PFS率的AUC分别为0.834(95%CI 0.746~0.823)、0.799(95%CI 0.699~0.868),预测5年PFS率的AUC分别为0.817(95%CI 0.718~0.821)、0.795(95%CI 0.675~0.895)。模型整体预测的C指数为0.795(95%CI 0.764~0.825),优于美国癌症联合委员会(AJCC)第8版TNM分期的0.693(95%CI 0.662~0.723);外部验证DCA示,模型预测的C指数为0.769(95%CI 0.718~0.821),优于AJCC第8版TNM分期的0.715(95%CI 0.669~0.760)。X‑tile软件分析示训练队列模型PFS评分的最佳临界值为265.08,所有队列、训练队列和验证队列低危组分别有457、337、120例,高危组分别有219、159、60例。Kaplan‑Meier生存分析显示,所有队列、训练队列和验证队列低危组中位PFS时间均未达到,高危组中位PFS时间分别为24、24、28个月,各队列低危组和高危组间PFS差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论首次成功构建了针对Rictor阳性表达的胃腺癌患者PFS预测的列线图模型,该模型能较好区分PFS风险低危和高危患者。对于Rictor表达阳性的高危胃腺癌患者,除了控制肿瘤的转移和术后并发症,还应该注意针对Rictor表达阳性的靶向治疗。