Effects of two efflux pump inhibitors on the drug susceptibility of Riemerella anatipestifer isolates from China

The objective of this study was to verify the supposition that efflux might be involved in the drug resistance of Riemerella anatipestifer isolates. Two broad-spectrum effiux pump inhibitors, carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone （CCCP） and Phe-Arg-β-naphthylamide （PAL3N）, on the contribution of minimum inhibitory concentrations of amikacin, streptomycin, chloramphenicol, tetracycline, ceftdaxone, ceftazidime, nalidixic acid, levofloxacin, enrofloxacin, as well as ciprofloxacin against 69 clinical R. anatipestifer isolates were investigated. We first reported that the two efflux pump inhibitors could restore the antimicrobial susceptibility of R. anatipestiferisolates. It is suggested that active efflux system is possible to be linked with the development of resistance in R. anatipestifer isolates.

A homolog of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from Riemerella anatipestifer is an extracellular protein and exhibits biological activity

研究目的:对鸭疫里默氏杆菌的三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)进行鉴定和生物学特征分析。创新要点:首次证实鸭疫里默氏杆菌具有GAPDH的同源体酶(RaGAPDH)是一种无信号肽和跨膜区的胞外蛋白酶,具有将3-磷酸甘油醛转化为1,3-二磷酸甘油酸的活性,可与纤维蛋白溶酶原及纤维蛋白原发生结合,推测该酶可能是鸭疫里默氏杆菌的一个新发现的毒力因子。研究方法:1.对分离自重庆、四川地区的鸭疫里默氏杆菌(表1)菌体细胞表面蛋白(图1a)和CZ2、SC12、YC1三株菌胞外蛋白(图1b)的GAPDH活性进行检测,对其编码基因进行PCR鉴定(图2)和克隆测序分析(图3);2.采用染色体步移技术获得CZ2的GAPDH编码基因进行原核表达(图4a和4c);3.以获得的具有活性的重组GAPDH为抗原,制备鼠原多克隆抗体并采用Western-blot方法对鸭疫里默氏杆菌的胞外分泌蛋白进行检测分析(图4b);4.采用固相配体结合试验检测RaGAPDH与纤维蛋白溶酶原、血纤维蛋白原、肌动蛋白和纤连蛋白的结合作用(图5)。重要结论:鸭疫里默氏杆菌具有三磷酸甘油醛脱氢酶同源体,具有GAPDH活性,能与纤维蛋白溶酶原和血纤维蛋白原结合,可能是其重要的毒力因子。

鸭疫里默氏菌噬菌体宿主谱的拓宽

为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合液中单一噬菌体的噬菌谱。结果表明,30代噬菌体混合液可裂解79.2%(19/24)的鸭疫里默氏菌试验菌株;30代噬菌体混合液中分离出的单一噬菌体能裂解的试验菌株数量为2~9株;裂解数最多的5株单一噬菌体,以各自宿主菌传代10次,噬菌谱没有发生变化;将裂解谱互补的单一噬菌体混合,4株噬菌体即可裂解19株试验菌株,与30代噬菌体混合液相同。说明建立的方法可以拓宽噬菌体混合液、单一噬菌体的噬菌谱,为噬菌体鸡尾酒制剂的毒株选择奠定了基础。

鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育及肠黏膜屏障功能的影响

为了为鸭疫里默氏菌与机体的相互作用及作用机制研究提供基础数据,以雏鸭为研究对象,开展鸭人工感染鸭疫里默氏菌试验,分别测定感染组和对照组1、2、3、5、9、14 d等不同时间段的体质量、小肠各肠段的长度以及血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶含量;荧光定量PCR法检测肠黏膜屏障功能相关基因MUC2和MYLK的表达量,探讨鸭疫里默氏菌感染对鸭生长发育和肠黏膜屏障功能的影响。结果表明,与对照组相比,感染组5、9 d体质量显著降低;感染鸭疫里默氏菌5 d十二指肠和空肠的长度显著降低;感染鸭疫里默氏菌1 d血浆中内毒素和血清中乳酸脱氢酶的含量均显著增加;鸭人工感染鸭疫里默氏菌的MUC2和MYLK表达量在十二指肠和空肠主要表现为下调,而在回肠MUC2的表达量表现为先下降再上调,MYLK的表达量表现为先下调再恢复至对照水平。综上,鸭人工感染鸭疫里默氏菌会减缓鸭的体质量增长和小肠生长,引起鸭的肠黏膜屏障功能相关基因的表达发生变化。

尾丝蛋白在噬菌体吸附鸭疫里默氏菌中的作用

【目的】以鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer)噬菌体CRP2为对象,研究尾丝蛋白(Tail fiber protein,TFP)对噬菌体吸附功能的影响。【方法】克隆ORF70假定的TFP基因,构建重组表达载体pET28a(+)-TFP,在大肠杆菌E.Coli BL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析纯化。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定重组蛋白与CRP2噬菌体的宿主菌外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)的结合作用。竞争吸附试验测定重组蛋白对CRP2噬菌体吸附率的影响。【结果】构建了pET28a(+)-TFP重组表达质粒,在大肠杆菌中得到了可溶性表达。纯化的重组蛋白可以与宿主菌的OMP结合,也可以抑制CRP2对其宿主菌的吸附。【结论】ORF70编码的TFP是噬菌体CRP2的一种受体结合蛋白,其对应的受体是宿主菌的OMP。

小鹅瘟病毒、鹅星状病毒Ⅰ型与鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及病原分析

【目的】2023年4月,河南新乡某地鹅场雏鹅群急性发病,死亡率高达25%,为确定引起该鹅场雏鹅发病的病因,本研究对送检的病死雏鹅进行剖检和实验室诊断。【方法】无菌采集病死雏鹅肝脏、脾脏、肾脏和小肠等组织样品及心血和肝脏外层纤维素性渗出物,通过对心血及肝脏外层纤维素性渗出物样品进行细菌分离培养、革兰染色镜检观察、16S rRNA基因及药物敏感性试验鉴定病鹅感染细菌及感染菌株的药物敏感性情况;通过PCR/RT-PCR方法对其常见雏鹅病毒性传染病病原核酸进行检验,并对阳性病原的主要结构蛋白基因进行测序分析,确定病鹅感染的病毒性病原及其分子流行病学情况。【结果】细菌学试验结果显示,分离菌株在血平板上呈半透明圆形突起、边缘整齐、表面光滑菌落,形态学观察显示,该菌为单个和成对的革兰阴性短杆菌,符合鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的特性。16S rRNA基因扩增测序与BLAST分析进一步证实该菌为RA。药敏试验结果显示,该菌株对头孢曲松和头孢噻肟敏感,对阿莫西林、四环素和多黏菌素B耐药。常见雏鹅病毒性传染病病原核酸PCR/RT-PCR检测发现,该鹅场样品小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)和鹅星状病毒Ⅰ型(genotypeⅠGoose astrovirus,GAstV-1)核酸呈阳性,GAstV-2、禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)和鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)核酸阴性,将致病毒株分别命名为GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023。进一步对GPV/HN-2023和GAstV-1/HN-2023的主要结构蛋白基因分析发现,GPV/HN-2023与DY-16株的亲缘关系较近,属于DY-16-like毒株,且VP3蛋白存在2个特有的氨基酸位点突变D248E和V314L;GAstV-1/HN-2023与GAstV-1毒株亲缘关系较近,属于GAstV-1分支,ORF2蛋白存在3个特有的氨基酸位点突变G47R、S207G和A628T。【结论】本研究通过综合诊断方法明确了GPV、GAstV-1与RA混合感染是引起该鹅场雏鹅发病的病因,分析了致病菌RA的耐药性和病毒性致病原GPV和GAstV-1的遗传演化及变异特点,为河南地区雏鹅疫病的科学防控提供理论参考。

2017—2023年安徽砀山鸭疫里氏杆菌的血清型与耐药性分析

从2017—2023年安徽砀山不同鸭场的病鸭样本中,共鉴定出120株鸭疫里氏杆菌。血清型鉴定结果显示其最主要的流行血清型为2型,其次分别是11型、1型。120株鸭疫里氏杆菌分离株呈现多重耐药性,对多黏菌素B耐药率为100%,对四环素的耐药率较高(82.7%),对头孢噻肟耐药率较低(8.5%),对亚胺培南不耐药(0);对甲氧苄啶、卡那霉素、四环素、氨苄西林、恩诺沙星、氟苯尼考和环丙沙星的耐药率逐年上升。对多重耐药菌株2020118-AF27进行全基因组测序以及耐药基因分析,检测到该分离菌有10种不同的耐药基因,其中9种耐药基因和药敏表型符合。将测序菌株基因组序列经多位点序列分型(MLST)数据库分析,得到序列型(ST)为ST222。本研究结果为安徽砀山地区鸭疫里氏杆菌病的防控提供了依据。

一株肉种鸡源鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究

为探究鸭疫里默氏杆菌对鸡的致病力,试验采集疑似感染鸭疫里默氏杆菌的病死肉种鸡肝脏进行病原的分离培养与纯化、革兰氏染色、生化试验、血清型鉴定、16S rRNA基因测序分析及药敏试验,并将分离菌株在SPF鸡、樱桃谷鸭上进行致病性试验。结果显示:分离到1株血清1型鸭疫里默氏杆菌,该菌株与鸭源、鸡源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的相似性分别为99.24%~99.47%、99.16%~99.31%、99.04%~99.20%;该分离株对恩诺沙星、卡那霉素、头孢噻肟、多黏菌素B和多西环素较为敏感,对SPF鸡致病性较弱,可引起一过性精神沉郁和泡沫粪,对樱桃谷鸭有较强的致病性,可引起死亡和严重的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎。研究表明分离的肉种鸡源RA对鸡致病力相对较弱,结果为临床鸡群感染RA的诊断与防控提供参考。

山东省临沭县鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及生物特性分析

为了解山东省临沭县鸭疫里默氏杆菌(RA)血清型、耐药性和致病性,2023年5—6月在8家养殖场无菌采集疑似感染RA的病死鸭鹅心血、脑和肝脏组织病料,利用细菌分离培养、生化试验和PCR方法对分离菌进行鉴定,用玻片凝集试验鉴定分离菌血清型,并对分离菌进行药敏性和致病性分析。结果显示:共有12株分离菌的菌落特性、镜检、生化特点和16S rRNA基因序列符合RA特征;有7株RA为血清1型,2株为血清2型,3株为血清11型;所有菌株均对丁胺卡那、庆大霉素、新霉素和阿莫西林耐药,对头孢他啶、头孢曲松、头孢氨苄敏感;用3种血清型RA攻毒均可导致雏鸭发病死亡,且临床症状、病理变化与RA感染典型特点相同。结果表明:临沭县RA感染比较普遍,主要流行3种血清型,其中血清1型为优势血清型;RA对多种抗菌药表现出耐药性,致病性较强。建议加强定期病原学监测和耐药性分析,结合本地菌株生物学特性选择疫苗和抗菌药防治,以提高RA感染防控效果。

宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体筛选及生物学特性研究

【目的】筛选宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体,作为治疗用噬菌体组合的候选毒株。【方法】以不同含量的噬菌体进行噬斑分析测定35株噬菌体的噬菌谱;利用透射电镜观察、热与酸碱稳定性评估、最佳感染复数(MOI)测定、一步生长试验、杀菌试验分析噬菌体的形态结构和部分生物学特性。【结果】35株噬菌体中vB_RanS_202的裂解谱最宽,能裂解42%(42/100)的鸭疫里默氏菌,包括血清1、2、6、10、11和13型共6种血清型菌株。该噬菌体由直径约60 nm的截面为六边形的头部和长约220 nm的尾部组成,不耐热,效价为1.0×10^(7)PFU/mL的噬菌体,经50℃水浴80 min或60℃水浴20 min,即降为1.8×10^(7)~2.6×10^(7)PFU/mL。在pH 5.0~9.0的环境中能维持活性。以RAf488为宿主菌测得其最佳MOI为0.01。一步生长曲线显示,其潜伏期和暴发期分别为60和75 min,平均裂解量约为150 PFU/cell。在宿主菌RAf488中的杀菌试验结果显示,MOI在0.004~0.016时,vB_RanS_202均具有杀菌作用。【结论】噬菌体vB_RanS_202具有宽裂解谱的特点,具备在液体培养基中的杀菌能力。本研究结果为后续噬菌体治疗用毒株的筛选提供参考。

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为确定江苏徐州地区某肉鸭养殖场发病原因,试验采集该鸭场病死鸭内脏器官进行常见病毒病的核酸检测、细菌的分离鉴定、血清型鉴定、半数致死量测定和药物敏感性试验,分析其致病力和耐药性。结果显示:鸭坦布苏病毒(DTMUV)等常见8种病毒检测核酸阴性;经过形态学观察、生化试验和PCR鉴定确定为鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA),将其命名为FX04株;凝集试验显示为血清3型;FX04株对多黏菌素B和氟苯尼考敏感;FX04株半数致死量(LD50)为6.2×10^(6)cfu。结果表明,该鸭场发生了血清3型鸭疫里默氏杆菌感染,且对多种抗生素耐药且致病性较强,建议选用高敏药物进行治疗,并加强对血清3型RA的监测和防控。

金定鸭神经症状相关致病菌分离和鉴定

【目的】探究导致金定鸭神经症状的病原菌。【方法】从辽宁金定鸭主产区4个24~48日龄的发病群中选择有神经症状以及纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎病变的病例共22例,用胰酶大豆琼脂(tryptic soy agar,TSA)和麦康凯琼脂(MacConkey’s agar,MCA)从脑组织分离细菌,通过革兰染色和瑞氏染色、生化试验和16S rDNA基因序列分析法对细菌分离株进行鉴定。【结果】从金定鸭脑组织中分离出的19株细菌均为革兰阴性杆菌,其中17株细菌(命名为H1株~H17株)在MCA培养基不生长,在生化试验中呈阴性结果,另外2株细菌(命名为H18株和H19株)在MCA形成红色菌落,能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖,甲基红与吲哚试验均为阳性。以H1株为代表的17株分离株与血清1~19型的鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)参考菌株之间16S rDNA基因序列相似性为99.1%~100%。分离株H18株和H19株与所选8株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)参考菌株之间16S rDNA基因序列相似性为99.2%~99.9%。用16S rDNA扩增产物序列进行遗传演化分析的结果显示,以H1株为代表的17株分离株属于RA,分离株H18株和H19株属于大肠杆菌。【结论】在观察的病例中,RA是导致金定鸭表现神经症状的主要致病菌,大肠杆菌亦可导致金定鸭出现神经症状。

1株鸭疫里默氏杆菌的全基因组测序及耐药性与遗传进化分析

【目的】了解鸭疫里默氏杆菌的耐药性、基因组结构与遗传变异程度,为鸭疫里默氏杆菌耐药性与基因组研究提供参考。【方法】本研究对1株从病死鸭脑组织分离的鸭疫里默氏杆菌疑似菌株进行了PCR鉴定、耐药性检测及全基因组框架图测序,并基于16S rDNA与管家基因对其进行了遗传进化分析。【结果】测序数据经过质控与过滤后成功组装为1个包含38个contigs的基因组框架,使用Abricate软件、CARD在线数据库共检测出6种不同的耐药基因,其中4种与耐药表型符合;将基因序列提交至MLST数据库,发现了一种新ST型,定为ST93。构建的16S rDNA和管家基因进化树结果表明,分离菌株与2株鸭疫里默氏杆菌具有较近的亲缘关系。【结论】分离鉴定得到1株鸭疫里默氏杆菌,该菌株为多药耐药菌株,其基因组中携带多个耐药基因;鸭疫里默氏杆菌的基因变异程度较大,且存在跨区域流行传播风险。在临床用药时应注意合理用药,及时监控抗性基因的水平转移,防止鸭疫里默氏杆菌跨区域流行。

3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

【目的】了解湖北地区鸭疫里氏杆菌病的分布流行与耐药情况,为该地区肉鸭养殖场鸭疫里氏杆菌病的临床用药提供参考。【方法】对武汉周边区县(江夏区、黄陂区、黄梅县)肉鸭养殖场的鸭疫里氏杆菌疑似病例进行采样并分离病原菌,对分离菌的形态学、染色特性、生化特性、16S rRNA进行鉴定,并对鉴定为鸭疫里氏杆菌的分离株进行血清型和耐药性分析。利用标志基因整合酶的特异性引物PCR鉴定分离菌基因组,判断是否整合有50K基因岛。【结果】分离鉴定了3株鸭疫里氏杆菌,3株分离菌均能在TSA平皿培养基中生长为光滑的半透明状菌落,革兰氏染色为阴性、瑞氏染色可观察到两极浓染;生化试验结果显示,3株鸭疫里氏杆菌均不发酵多种糖类,过氧化氢酶阳性,不产硫化氢,不能液化明胶。16S rRNA鉴定结果显示,获得大小为1480 bp的目的条带,血清型均为1型;50K基因岛标志基因PCR扩增结果显示,仅黄梅分离株(HM株)含有该基因岛。最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)试验与纸片扩散(Kirby-Bauer,K-B)试验测定耐药性结果显示,3株分离菌株均对青霉素、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟、氟苯尼考及庆大霉素敏感,对萘啶酮酸、壮观霉素、恩诺沙星、多黏菌素B表现出不同程度的耐药性。【结论】分离鉴定了3株血清1型鸭疫里氏杆菌,药敏试验结果对本地区鸭疫里氏杆菌病的防治及流行病学研究提供一定的理论指导。

徐州地区28株鸭疫里默氏杆菌分离株生物学特性分析

鸭疫里默氏杆菌感染是危害水禽业最为严重的细菌传染性病之一,为了解徐州地区鸭疫里默氏杆菌病的流行病学现状,本研究对该市的病死鸭进行了鸭疫里默氏杆菌的分离和多重PCR方法鉴定,并对分离获得的28株鸭疫里默氏杆菌进行了血清型鉴定、药敏试验以及致病性的动物回归试验。结果显示:本研究从徐州地区分离的28株鸭疫里默氏杆菌血清2型所占比例最高;药敏试验结果显示分离菌株对常用的27种抗生素具有不同的耐药性和敏感性,其中对卡那霉素和庆大霉素耐药性最强,且多重耐药性严重。动物回归试验表明经1×10^(7)CFU/羽攻毒后,14株鸭疫里默氏杆菌分离株均引起了雏鸭不同程度致死,并且其中11株鸭疫里默氏杆菌分离株引起雏鸭致死率大于或等于50%。总之,徐州地区分离到的鸭疫里默氏杆菌分离株以血清2型和多重耐药性为主,且有不同程度的致病性。

湖北省鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌(RA)感染引起的一种雏鸭高度接触性传染病。为了解该病在鸭群中的发病情况、细菌耐药性变化,本研究从湖北省不同地区鸭场采集鸭传染性浆膜炎疑似病例肝脏,分离到34株细菌,对分离细菌进行培养、形态观察、生化鉴定、耐药性检测和氟苯尼考耐药基因测定。药敏试验显示34株分离株对头孢噻肟、大观霉素和阿米卡星敏感性比较高,对新霉素和诺氟沙星耐药性最强。PCR扩增RA氟苯尼考flor基因,16株分离株可以扩增出该基因,所得序列与Flor蛋白全基因序列比对,相似性高达100%。

23株鸭疫里默氏杆菌贵州株的耐药及耐消毒剂基因分析

为指导鸭场防控鸭疫里默氏杆菌(RA)的感染,本研究对23株RA贵州株进行药敏试验,并经PCR对其耐药基因及耐消毒剂基因的携带情况进行检测。结果显示23株RA对氨基糖苷类(链霉素、卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那)、大环内酯类(阿奇霉素、红霉素、新霉素)等抗生素均有较强耐药性,菌株耐药率达78.26%以上。对头孢类(头孢氨苄)、氯霉素类(氟苯尼考)等抗生素较敏感,菌株敏感率达69.56%以上。耐药基因检测结果显示,23株RA中,四环素类[tet(X)]、喹诺酮类(oqxA、oqxB)、大环内酯类(ermF)耐药基因检出率达100%(23/23);氟苯尼考类(floR)、氨基糖苷类[aph(3')-Iia、rmtC、cc(6')-Ib]、β-内酰胺类(blaSHV、blaDHA)、喹诺酮类(qnrA、qnrB)耐药基因检出率分别为82.61%(19/23)、95.65%(22/23)、82.61%(19/23)、73.91%(17/23)、4.35%(1/23)、4.35%(1/23)、17.39%(4/23)、78.26%(18/23)。经分析,23株RA耐药性较强,且最少耐8种抗生素,最多耐15种抗生素,存在严重的多重耐药性。耐消毒剂基因检测结果显示,仅检出16株RA携带耐季铵盐类(qacE、qacE△1)基因。上述结果表明,23株RA耐药性较强,且存在严重的多重耐药性,携带多种耐药基因和耐季铵盐类消毒剂基因。本实验为鸭疫里默氏杆菌病的有效防治提供了实验数据和参考依据。

鸭疫里默氏杆菌KYF39_09285基因缺失株的构建及生物学特性研究

为研究KYF39_09285基因对鸭疫里默氏杆菌生物学特性及其对雏鸭致病力的影响,试验利用基因同源重组的原理构建KYF39_09285的基因缺失株RA-YMΔKYF39_09285,并使用穿梭质粒构建其基因回补菌株,评价其对鸭疫里默氏杆菌生物学特性以及雏鸭致病力的影响。结果显示:与亲本株相比,KYF39_09285基因缺失株的生长速度、生化特性、对Vero细胞的黏附入侵能力均未发生改变,但缺失株中dnaK表达量降低,对高渗、青霉素、氨苄西林、庆大霉素和链霉素的敏感性增强,对雏鸭的致病力(LD_(50))降低1.84倍,45℃胁迫下的KYF39_09285表达量显著降低。研究表明KYF39_09285与鸭疫里默氏杆菌对高温、高渗和抗生素的耐受性以及致病力有关,结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的致病机制奠定基础。

鸭疫里默氏杆菌AS87_05150基因缺失株的构建及部分生物学特性分析

为探究鸭疫里默氏杆菌(RA)IX型分泌系统(T9SS)分泌的假定蛋白AS87_05150的功能,本研究采用自杀质粒同源重组的方法构建RA Yb2株AS87_05150基因缺失株Yb2Δ5150及其回补株cYb2Δ5150,经PCR及测序鉴定,结果显示AS87_05150基因缺失株Yb2Δ5150和回补株cYb2Δ5150均正确构建,缺失株的表型为16S r RNA^(+)AS87_05150 ORF^(-),回补株的表型为16S r RNA^(+)AS87_05150 ORF^(+)。采用荧光定量PCR(qPCR)检测Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株AS87_05150基因的转录水平;根据上述3株菌不同时间的OD_(600nm)值绘制各菌株的生长曲线;采用微量结晶紫法检测各菌株生物被膜(BF)的形成能力;将10^(7)cfu/孔的Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株分别感染Vero细胞,检测各菌株对Vero细胞的黏附和侵袭力。q PCR检测结果显示,cYb2Δ5150株中AS87_05150 m RNA相对转录水平比Yb2株高约19倍(P<0.0001),Yb2Δ5150株未扩增到AS87_05150基因;生长曲线结果显示,Yb2Δ5150与Yb2株的生长曲线基本一致,但cYb2Δ5150生长速度与Yb2Δ5150株相比极显著下降(P<0.01);BF测定结果显示,Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株BF的形成能力与Yb2株相比均极显著降低(P<0.0001);黏附和侵袭力结果显示,这3株菌对Vero细胞的黏附和侵袭力均无显著差异。将3株菌分别以10^(8)cfu/只~10^(4)cfu/只、10^(10)cfu/只~10^(6)cfu/只和10^(9)cfu/只~10^(5)cfu/只的剂量经肌肉注射接种雏鸭,感染后观察雏鸭的发病情况,并采用Reed-Muench法计算3株菌对雏鸭的半数致死量(LD_(50));将3株菌均以10^(7)cfu/只经肌肉注射感染雏鸭,24 h后剖杀,无菌采集各组鸭血液、肝脏和脑组织,作相应处理后涂板采用平板计数法测定载菌量。根据各组鸭的死亡情况,计算Yb2、Yb2Δ5150和cYb2Δ5150株的LD_(50)分别为6.85×10^(5)cfu、8.75×10^(7)cfu和4.681×10^(8)cfu,即缺失株LD_(50)比野生株高约127倍,但回补株的LD_(50)比缺失株高约5倍。载菌量测定结果显示,Yb2Δ5150株和cYb2Δ5150株感染鸭血液、肝脏、脑组织中的细菌载量比Yb2株感染鸭的载菌量均极显著降低(P<0.001),但前两者之间上述指标均无显著差异。本实验结果表明AS87_05150与RA Yb2株的BF形成和致病性相关,但回补株对雏鸭的毒力和致病性均未回复到野生株的水平。本研究为进一步解析RA AS87_05150的功能及分子致病机制等奠定了基础。

江苏地区水禽源主要细菌病流行情况调查分析

试验旨在了解江苏地区水禽细菌病的发生与流行情况,于2021—2022年从江苏省10个地级市的64个水禽养殖场采集768份样品,分别设计引物对大肠杆菌F1菌毛fimA基因、沙门氏菌stn基因、鸭疫里氏杆菌OmpA基因进行PCR检测,并进行细菌的分离鉴定。结果显示,大肠杆菌fimA检出率为74.21%(570/768),沙门氏菌stn检出率为5.60%(43/768),鸭疫里氏杆菌OmpA检出率为2.73%(21/768)。研究表明,江苏地区水禽细菌性疾病中大肠杆菌的发病率最高。该研究结果可为江苏地区水禽源细菌病的防控提供参考。