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Rietveld定量方法在蒸发岩矿物组分分析中的精确度评价和误差来源 被引量:3
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作者 陈爱清 薛雍 +1 位作者 徐洪柳 李国武 《岩矿测试》 CSCD 北大核心 2017年第4期374-381,共8页
Rietveld物相定量分析(RQPA)方法在地质学中已有大量应用,在蒸发岩定量分析中,对精确度的评价和误差控制是提高分析质量的重要因素。本文对人工配制和野外采集的样品(石膏和钾盐)进行RQPA分析,并与化学分析结果对比,评价其精确度并分析... Rietveld物相定量分析(RQPA)方法在地质学中已有大量应用,在蒸发岩定量分析中,对精确度的评价和误差控制是提高分析质量的重要因素。本文对人工配制和野外采集的样品(石膏和钾盐)进行RQPA分析,并与化学分析结果对比,评价其精确度并分析其主要的误差来源。结果表明:人工配制的氯化钠-氯化钾二元物相的绝对误差为0.4%~0.9%;氯化钠-氯化钾-碳酸钙三元物相的绝对误差为0.1%~1.2%;二元物相样品10次分析的标准偏差为0.702%,相对标准偏差为1.74%(氯化钾)和1.17%(氯化钠);野外采集的石膏和钾盐样品的RQPA分析结果与化学分析结果具有很好的一致性。表明RQPA方法在蒸发岩矿物组分定量分析中具有较高的精确度,其误差主要来源于样品性质、样品制备、测试条件和精修过程等。RQPA方法具有减弱择优取向效应、无需纯样以及提高数据利用率等优点,与化学分析技术联用在蒸发岩矿产勘探、储量评价以及工业应用中具有广泛的前景。 展开更多
关键词 蒸发岩 rietveld物相定量分析 结构精修 钾盐
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利用Rietveld方法的多相粉末定量分析 被引量:3
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作者 王佩玲 屠恒勇 +1 位作者 贾迎新 陈建新 《无机材料学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第4期467-472,共6页
利用X射线步长扫描衍射数据和全图谱(Whole-pattern)拟合技术(Rietveld方法),通过相含量和Rietveld修正中标度因子之间存在的简单关系,对包含不同重量的水晶和刚玉粉末的混合物样品进行了相含量的... 利用X射线步长扫描衍射数据和全图谱(Whole-pattern)拟合技术(Rietveld方法),通过相含量和Rietveld修正中标度因子之间存在的简单关系,对包含不同重量的水晶和刚玉粉末的混合物样品进行了相含量的定量分析.求得的结果与原始配比一致,说明这一技术可以有效地用于多相粉末,尤其是衍射图谱严重重叠样品的定量分析研究. 展开更多
关键词 rietveld方法 定量分析 多相粉末
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XRD-Rietveld全谱拟合法应用于土壤样品物相定量的准确性检验:模拟实验与方法对比 被引量:8
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作者 付伟 彭召 +2 位作者 罗鹏 覃建勋 冯洋洋 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期950-955,共6页
XRD-Rietveld全谱拟合法(简称Rietveld法)是一种在材料学领域被广泛应用于解决复杂多相混合物体系物相定量问题的先进技术方法。将该物相定量方法跨学科引入地学,理论上有助于提高地学样品矿物物相分析的精确度。然而,在该技术方法的实... XRD-Rietveld全谱拟合法(简称Rietveld法)是一种在材料学领域被广泛应用于解决复杂多相混合物体系物相定量问题的先进技术方法。将该物相定量方法跨学科引入地学,理论上有助于提高地学样品矿物物相分析的精确度。然而,在该技术方法的实际应用中,当前有两个基础问题需要解决,一是Rietveld技术方法对地学样品的适用性有待检验,二是分析结果的可靠性还缺乏实验评价依据。针对这两个问题,本研究基于自然界土壤中常见的矿物组合特征,配置了三组已知矿物成分含量的土壤模拟样品(石英+赤铁矿1∶1二相混合土壤模拟样;石英+高岭石1∶1二相混合土壤模拟样;石英+高岭石+蒙脱石1∶1∶1三相混合土壤模拟样),并以这些样品为例,开展了Rietveld法物相定量分析与计算。分析表明,利用Rietveld法,能获得土壤模拟样品良好的XRD拟合谱线,拟合谱(ycalc)与测试谱(yobs)匹配度高,拟合值(Rwp<15%)、拟合期望(Rexp<15%)和拟合优度(gof<5)等参数指标均符合矿物物相定量计算要求。三组土壤模拟样品的Rietveld矿物物相计算值与真实值的误差仅为0.63%, 1.46%和1.03%,指示该方法对土壤模拟样品的矿物物相定量结果能有效逼近真实成分比例,且显著优于传统的内标法分析结果。 展开更多
关键词 rietveld全谱拟合 矿物定量 土壤矿物分析
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利用Rietveld方法Y_2O_3稳定ZrO_2的定量相分析 被引量:4
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作者 王佩玲 戴健 《无机材料学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第1期86-92,共7页
利用多相混合物中某相的重量与它在Rietveld结构修正中求得的标度因子之间的关系,可以进行多相混合物的定量分析[1].本工作利用Rietveld修正和X射线步长扫描衍射数据对不同浓度Y2O3掺杂的ZrO2试样进行了相含量的定量分析,给出了各相... 利用多相混合物中某相的重量与它在Rietveld结构修正中求得的标度因子之间的关系,可以进行多相混合物的定量分析[1].本工作利用Rietveld修正和X射线步长扫描衍射数据对不同浓度Y2O3掺杂的ZrO2试样进行了相含量的定量分析,给出了各相含量的定量数据,同时还证实了由研磨引起四方相向单斜相转变的规律. 展开更多
关键词 rietveld方法 定量分析 二氧化锆陶瓷 相分析
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基于Rietveld方法的硫铝酸盐水泥熟料及其水化产物定量相分析 被引量:9
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作者 常钧 崔凯 《建筑材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期438-446,共9页
以硫铝酸盐水泥熟料及其水化产物为研究对象,在确定Rietveld定量方法系统误差的前提下,进行了定量相分析,同时将定量结果与X射线荧光光谱分析(XRF)、水化热和热重(TG-DTG)试验结果进行了比对.结果表明:Rietveld定量相分析在晶相成分的... 以硫铝酸盐水泥熟料及其水化产物为研究对象,在确定Rietveld定量方法系统误差的前提下,进行了定量相分析,同时将定量结果与X射线荧光光谱分析(XRF)、水化热和热重(TG-DTG)试验结果进行了比对.结果表明:Rietveld定量相分析在晶相成分的分析中系统误差约为1%,无定型物的计算误差范围随着内标物掺量的增多而下降;在硫铝酸盐水泥熟料的Rietveld定量相分析中,组合使用正交晶系与立方晶系C4A3$结构文件可得到最优定量结果,且基于此结果反推计算的主要元素组成与XRF结果最为相近;在水化产物的定量相分析方面,基于Rietveld定量相分析结果计算得到的主要矿物反应程度和AFt含量分别与累计水化热数据及热重试验数据有很好的相关性. 展开更多
关键词 rietveld方法 硫铝酸盐水泥 水化产物 定量分析
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牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 蒲鹏 李晨露 +2 位作者 张琪 吴发兴 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期7-10,共4页
为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan... 为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,建立的牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性、敏感性和重复性均良好。该方法BCoV重组质粒标准品在5.75×10^(7)~5.75×10^(3)copies/μL时与Ct值呈现良好线性关系,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型均无交叉反应,特异性良好;该方法对BCoV重组质粒标准品最低检测限为5.75×10^(1)copies/μL;批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于2%。利用所建立的TaqMan荧光定量PCR方法对收集的132份样品进行检测,与常规PCR相比,两者符合率为96.21%,可为BCoV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测方法
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水禽细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 汪宏才 商雨 +7 位作者 马瑶 曾哲 张蓉蓉 姚伦 罗玲 李丽 温国元 罗青平 《湖北农业科学》 2024年第6期218-222,共5页
为了建立水禽细小病毒(WPV)快速检测方法,根据序列比对结果在水禽细小病毒NS基因SF3保守区域内设计特异性引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率(E)为90.0%,相关系数(R~2)=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.... 为了建立水禽细小病毒(WPV)快速检测方法,根据序列比对结果在水禽细小病毒NS基因SF3保守区域内设计特异性引物,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR通用检测方法。该方法的扩增效率(E)为90.0%,相关系数(R~2)=0.99,标准曲线方程为y=-3.607x+38.77;除WPV出现S形扩增曲线外,新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肝炎病毒(DHAV)、鸭肠炎病毒(DEV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)样品均未出现S形阳性扩增曲线;批内变异系数(CV)为0.15%~0.23%,批间变异系数为0.09%~0.28%。结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法重复性好、灵敏度高和特异性强。临床样品检测结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR与普通PCR的符合率达98.4%,灵敏度是普通PCR的1 000倍。SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法不仅能定性检测WPV,还可以进行定量检测,可用于种鸭场、种鹅场的WPV净化检测,也可用于WPV临床大量样品的快速检测。 展开更多
关键词 水禽细小病毒 检测方法 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR
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Rietveld全谱拟合方法定量测定GCr15粉末冶金试样中的残余奥氏体含量 被引量:2
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作者 艾艳玲 杨延清 《理化检验(物理分册)》 CAS 2011年第2期90-93,共4页
分别采用YB/T 5338-2006规定的方法和Rietveld全谱拟合方法对常规GCr15钢中的残余奥氏体含量进行了定量分析,发现两种方法所得结果十分相近,Rietveld全谱拟合方法具有准确、方便和快捷等优点,可作为用X射线衍射仪进行残余奥氏体定量测... 分别采用YB/T 5338-2006规定的方法和Rietveld全谱拟合方法对常规GCr15钢中的残余奥氏体含量进行了定量分析,发现两种方法所得结果十分相近,Rietveld全谱拟合方法具有准确、方便和快捷等优点,可作为用X射线衍射仪进行残余奥氏体定量测定的有益补充。进而对于X射线衍射峰强度比值不符合YB/T 5338-2006要求的某GCr15粉末冶金失效零件试样,采用Rietveld全谱拟合方法进行了残余奥氏体含量的定量测定,得到其残余奥氏体含量高达19.09%(质量分数),远远超过了正常值,这可能是导致该零件失效的原因之一。 展开更多
关键词 GCR15 粉末冶金 残余奥氏体 rietveld全谱拟合方法
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“资源定量预测理论与方法”课程教学改革与实践
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作者 赵江南 左仁广 王子烨 《中国地质教育》 2024年第3期25-29,共5页
围绕矿产资源定量预测中的地质大数据挖掘、找矿信息融合和预测评价等关键科学与技术问题,面向中国地质大学(武汉)迈向2030建设战略规划提出的“资源+”与“智能+”等学科群建设要求,推动人工智能与地球科学深度融合,学校开设了“资源... 围绕矿产资源定量预测中的地质大数据挖掘、找矿信息融合和预测评价等关键科学与技术问题,面向中国地质大学(武汉)迈向2030建设战略规划提出的“资源+”与“智能+”等学科群建设要求,推动人工智能与地球科学深度融合,学校开设了“资源定量预测理论与方法”课程。针对课程教学在课程思政元素挖掘、教学内容更新、多学科知识融合、创新能力培养等方面存在的“痛点”问题,教学团队秉持“以学生为主体,教师为指引,产出为导向”的教学理念,践行“知识传授、能力培养、价值塑造”三位一体的人才培养模式,基于科教融合推动课程内容重构与教学方式创新,以“教材建设+案例构建+实习实训”推动多学科知识交叉融合与资源能源预测核心能力培养,突出课程思政教育的育人功能,着眼“知识-能力-素质”一体化育人,实现了教师执教能力提升、高质量课程建设以及创新人才培养的目标。 展开更多
关键词 课程思政 资源定量预测理论与方法 教学改革
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美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 孔文迪 陈曦 +1 位作者 杨金先 葛均青 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期358-365,共8页
为建立美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)的检测方法,根据AEAdoV福建株(AEAdoVFJ)的superfamily 3 helicases(S3H)序列,设计引物,建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法;进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性,利用2种方法对美洲鳗鲡“出... 为建立美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)的检测方法,根据AEAdoV福建株(AEAdoVFJ)的superfamily 3 helicases(S3H)序列,设计引物,建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法;进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性,利用2种方法对美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料进行了检测,并对美洲鳗鲡体内不同组织的病毒含量进行分析。结果显示,普通PCR扩增的目的片段长度约300 bp,利用其构建的qPCR质粒标准品,其拷贝数与qPCR阈值循环数(C_(t))线性关系良好,线性范围广,标准曲线相关系数(R2)达到0.999,扩增效率为105.067%。建立的普通PCR法和qPCR的最低检测AEAdoV拷贝数分别为100个和10个。2种方法均可特异性检测AEAdoV,而对蛙虹彩病毒(RGV)、鳗鲡疱疹病毒(AngHV)、鲤疱疹病毒(KHV)、对虾白斑综合征病毒(WSSV)、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(MEAdoV)均无扩增反应。qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%,表明其重复性良好。临床应用结果显示,35份美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料,采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%,而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡不同组织的病毒含量分析结果显示,心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高,而黏液、皮肤和脾脏的病毒含量相对较低。研究表明,建立的AEAdoV的灵敏度高、特异性强的普通PCR和qPCR检测方法,证实AEAdoV与美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病密切相关,且在感染鳗鲡主要组织中都存在。实验结果对于研究AEAdoV的致病性,开展其流行情况和病原学情况分析具有重要意义。 展开更多
关键词 美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV) 普通PCR 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ 检测方法
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2021年中国基层卫生和全科医学方法学质量评价报告:定量研究、系统综述和指南/共识部分 被引量:1
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作者 叶志康 +3 位作者 汪洋 林恺 赵洋 徐志杰 《中国全科医学》 北大核心 2024年第7期773-783,共11页
背景在新时期医疗卫生改革正在实施的当下,我国全科医学和基层卫生领域的科研产出近年来增长迅速,但文献的方法学质量尚不清楚。目的对我国学者2021年发表的全科医学和基层卫生领域具有代表性的定量研究、系统综述和指南类文献进行方法... 背景在新时期医疗卫生改革正在实施的当下,我国全科医学和基层卫生领域的科研产出近年来增长迅速,但文献的方法学质量尚不清楚。目的对我国学者2021年发表的全科医学和基层卫生领域具有代表性的定量研究、系统综述和指南类文献进行方法学质量评价,以呈现该领域科研论文总体的方法学质量特征。方法自《2021年中国基本保健和全科医学科研论文生产力研究》中收集的3122篇论文中选取449篇论文,组织由22位来自不同机构的公共卫生和全科医学领域研究人员组成方法学质量评价小组,以2人1组的形式,在1位循证医学方法学专家的培训和指导下,使用6种适用于不同研究设计(横断面研究、队列研究、干预前后研究、随机对照试验、系统综述、临床指南/共识)的质量评价工具,对其中的320篇论文(71.3%)进行质量评价,并运用描述性统计方法,报告质量评价结果。结果114篇横断面研究论文质量问题主要为研究人群是否代表目标人群(41.2%)、调查工具的可靠性和有效性是否可以确证(32.5%)、该调查是否具有临床意义(26.3%)3个条目;25篇队列研究论文质量问题在是否对队列进行了充分随访(44.0%)和各组之间的共同干预是否相似(56.0%)两个条目较为集中;34篇干预前后研究质量问题主要存在于是否在干预前后多次测量目标结局(97.1%),样本量是否足够大、足以对研究结果产生信心(82.4%)以及研究参与者能否代表符合条件的人群(61.8%)3个条目;122篇随机对照试验质量问题多集中于对不同的利益相关者实施盲法(25.4%~61.5%),对随机分配的充分隐藏(41.8%)及其他偏倚风险(72.1%)3个条目;19篇系统综述质量问题主要存在于是否报告了纳入研究的资助来源(100.0%)、综述方法是否在综述开始前制定(94.7%)、是否合理的讨论和解释了异质性(84.2%)和是否考虑了个别研究的偏倚风险(84.2%)4个条目;6篇临床指南/共识的质量均评价较低。结论我国基本保健和全科医学领域近年的科研成果在总体上方法学质量仍有限,在横断面研究、干预前后研究、随机对照试验、临床指南/共识等类别的研究中表现得尤为严重。这凸显了在我国这一研究领域加强系统性的基础科研培训、增强对科研和循证报告规范的重视,以及开发务实的制订指南的方法学规范的迫切性和重要性。 展开更多
关键词 全科医学 定量研究 系统评价 方法学质量 研究设计 指南
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量RT-PCR 检测方法
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鸽微RNA病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 张靖鹏 陈翠腾 +5 位作者 林琳 付环茹 李兆龙 江斌 黄瑜 万春和 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期860-866,共7页
旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进... 旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其基因特征后,设计特异性实时荧光定量RT-PCR检测(RT-qPCR)引物组,建立检测PiMeV的RT-qPCR方法。结果显示:PiMeV-CHN001株3 C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸,和其他2株野鸽源PiMeV(MeV-B1株和MeV-B2株)核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的RT-qPCR方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强,仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为(81.69±0.22)℃],对鸽源禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸽源禽I型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1)、鸽输血传播病毒(pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAd)及鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)检测均未见特异性扩增信号;敏感性优,最低检测限为54.0拷贝·μL^(-1);重复性好,批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测,发现2份阳性样品(阳性率为4.76%)。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息;建立的RT-qPCR方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。 展开更多
关键词 信鸽 鸽微RNA病毒 3 C基因 序列分析 实时荧光定量RT-PCR方法
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多子小瓜虫PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 曹泽艺 周庆杰 +4 位作者 陈凯 习丙文 谢骏 潘良坤 毛颖 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期161-168,共8页
为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性... 为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法。其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μL,荧光定量PCR在掠食体0.02个/μL时依然能有效检出,荧光定量PCR检测灵敏度高于普通PCR。研究表明,在临床样本和养殖水环境样本检测应用中,基于该引物的两种PCR方法表现出很高的一致性,能有效检出潜伏感染鱼体和养殖水环境中的多子小瓜虫。本研究所建立的多子小瓜虫的检测方法特异性强、灵敏度高,适用于淡水养殖中小瓜虫病的早期诊断和病原体的检测。 展开更多
关键词 多子小瓜虫 PCR 荧光定量PCR 小瓜虫病 检测方法
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针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 乔思娜 李丽薇 +8 位作者 赵款 高飞 周艳君 姜一峰 童武 赵冉 童光志 李国新 董世山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期67-72,共6页
为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异... 为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示,本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10^(11)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-2.797,检测下限为10^(2)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.53774%,重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) K205R基因 荧光定量PCR 检测方法
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犬瘟热病毒和犬腺病毒2型双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 扈富哥 宫英杰 +5 位作者 王蕾 莫菲 毕振威 钱晶 孙斌 谭业平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期91-95,共5页
旨在建立犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒2型(CAdV-2)双重TaqMan荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。本试验针对CDV的N基因和CAdV-2的E3基因设计两对特异性引物与两条标记不同荧光基团的TaqMan-MGB探针,对引物、探针的浓度、反应体系和反应条件... 旨在建立犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒2型(CAdV-2)双重TaqMan荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。本试验针对CDV的N基因和CAdV-2的E3基因设计两对特异性引物与两条标记不同荧光基团的TaqMan-MGB探针,对引物、探针的浓度、反应体系和反应条件进行优化后检测该方法的灵敏度,特异性及重复性。结果:该方法在CDV和CAdV-2阳性参考质粒浓度1×10^(1)~1×10^(7) copies/μL的范围中,R2值为0.997和0.993,表明所建的标准曲线具有良好线性关系,能检测到最低浓度为5 copies/μL,并对其他病原无扩增现象,特异性良好;重复性试验中组内和组间变异系数小于1.54%。综上,建立的双重TaqMan RT-qPCR检测方法具有灵敏度高且特异性好等优点,可用于CDV和CAdV-2临床快速检测和鉴别诊断及流行病学调查等领域。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 犬腺病毒2型 荧光定量PCR 检测方法
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水貂圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 盛陈艳 麻宝艺 +7 位作者 李健明 宫庆龙 刘菲 时坤 孙志博 刘艺 冷雪 杜锐 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期131-138,共8页
为快速检测水貂圆环病毒(MiCV),本试验根据MiCV Cap基因序列设计合成特异性引物,建立了水貂圆环病毒SYBR Green II实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在模板浓度为1.0×10^(6)~1.0×10^(1) copies/μL范围内呈良好线性关... 为快速检测水貂圆环病毒(MiCV),本试验根据MiCV Cap基因序列设计合成特异性引物,建立了水貂圆环病毒SYBR Green II实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法在模板浓度为1.0×10^(6)~1.0×10^(1) copies/μL范围内呈良好线性关系,相关系数为0.9983。本试验建立的检测方法对水貂阿留申病毒、猪圆环病毒2型、水貂肠炎病毒、犬瘟热病毒和猪伪狂犬病毒进行检测均无特异性扩增,批内和批间CV均小于2%,对重组阳性质粒的检测下限为1.0×10^(1) copies/μL,比普通PCR的敏感度高100倍,对阳性样品DNA的检测下限为2.38×10^(-2) pg/μL,比普通PCR的敏感度高1000倍。应用该方法对吉林省部分毛皮动物养殖场的水貂、狐狸、貉和环境样品进行检测,结果其阳性率分别为57.23%、48.42%、39.71%和68.48%。上述结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,为MiCV的诊断及流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 水貂圆环病毒 Cap基因 SYBR Green II实时荧光定量PCR方法
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羊贝氏柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 张锐铮 于皓同 +3 位作者 王凯茸 张琪 张淑霞 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期6-10,共5页
为建立检测贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)实时荧光定量PCR方法,根据GenBank上收录的C.burnetii RSA439株com1基因序列(CP040059.1)保守区设计特异性引物和探针,并构建重组质粒及优化反应条件,以期建立一种检测贝氏柯克斯体的Taq Man... 为建立检测贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)实时荧光定量PCR方法,根据GenBank上收录的C.burnetii RSA439株com1基因序列(CP040059.1)保守区设计特异性引物和探针,并构建重组质粒及优化反应条件,以期建立一种检测贝氏柯克斯体的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,该方法所建立标准曲线线性关系良好;敏感性试验结果显示,最低检出限为2.45×10^(2) copies/μL,与PCR最低检出限为2.45×10^(4) copies/μL相比较,灵敏度提高了100倍;对羊支原体、羊流产衣原体、羊布鲁氏菌等均无交叉反应,批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于3%,说明特异性、重复性好;利用该方法对收集的126份样品进行检测,结果显示样品阳性率为9.52%,常规PCR检测阳性率为7.14%,符合率为90.47%。该方法可为贝氏柯克斯体临床上快速检测及防控提供技术支持。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯 Taq Man荧光定量PCR 检测方法
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赤羽病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 李超 王素春 +5 位作者 隋金钰 潘俊慧 魏世萌 祁倩 周凯钰太 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期111-117,共7页
为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并... 为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并利用该方法与AKAV检疫行业标准推荐方法同时对临床采集的80份牛羊血液样品进行检测,以检验方法的临床应用效果。结果显示:本研究建立的检测方法敏感性较高,最低检测限为13.4 copies/μL;特异性良好,与口蹄疫病毒、牛冠状病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒、牛白血病病毒等均无交叉反应;组内试验变异系数为0.93%~2.47%,组间试验为1.25%~2.76%,重复性良好;利用建立的方法从80份临床样品中检出AKAV阳性样品21份,该检测结果与AKAV检疫行业标准推荐方法的符合率为98.75%。结果表明,本研究建立的AKAV荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高,特异性及重复性好,适用于赤羽病临床检测,为赤羽病病原学监测和诊断技术标准开发提供了技术支撑。 展开更多
关键词 赤羽病病毒 实时荧光定量RT-PCR 方法建立 初步应用
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鹅源class I类NDV生物学特性的研究及荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 李长宇 孙军峰 +3 位作者 赵冉 王芳芳 韩宗玺 刘胜旺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期923-930,共8页
为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;... 为了解鹅源class I类新城疫病毒(NDV)的生物学特性,本研究以2022年在安徽活禽市场的鹅中分离到的AH713/22株为研究对象,测定其全基因组序列,分析其基因组分子特征和遗传进化特性;将AH713/22株感染鸡胚,接种1日龄雏鸡脑内,分析其致病性;利用制备的单因子血清进行交叉血凝抑制试验,分析其抗原性;将AH713/22株56℃水浴不同时间后检测HA效价,分析其耐热特性。结果显示,AH713/22株基因组长15198 bp,具有典型的class I类NDV的基因组结构和分子特征,属于基因1.1.2亚型。F蛋白裂解位点为ERQERL,HN蛋白长度不同于已往报道的病毒株,含有618个氨基酸;鸡胚平均死亡时间(MDT)为134 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为0.32,表明AH713/22属于弱毒株;抗原性检测结果显示AH713/22株与class II类基因II型NDV以及class I类代表性NDV之间存在不同程度的抗原性差异;耐热性试验显示AH713/22株在56℃热处理60 min后HA效价仍无显著变化,表明AH713/22株具有优良的热稳定性。进一步基于class I类基因1.1.2亚型NDV F基因的序列比对分析,针对其保守区域设计引物和探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法,结果显示该方法对质粒标准品的检测限为10^(2)拷贝数/μL,且能够特异性的检测class I类1.1.2亚型NDV,与其他常见的禽呼吸道病原核酸均无交叉反应。该方法用于临床样品检测结果与常规PCR检测结果一致。本研究系统鉴定了一株鹅源class I类NDV的遗传和分子生物学特性,加深了对我国class I类NDV遗传演化的认知,并建立了适用于我国优势基因型(1.1.2亚型)NDV的检测方法,为class I类NDV的监测和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 新城疫病毒 分子特征 抗原性 热稳定性 荧光定量RT-PCR方法
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