PCR荧光探针技术对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药性检测性能的评价

目的:评价PCR荧光探针技术检测痰液样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和利福平耐药性效果,为进一步开展“结核分枝杆菌复合群及利福平耐药核酸检测试剂盒”多中心临床试验提供可行性研究数据。方法:采用前瞻性研究方法,参照入组标准收集2021年12月至2022年8月上海市3家结核病定点医院肺科门诊就诊的205例初诊疑似肺结核患者的3份痰液样本(即时痰、夜间痰、晨痰),分别进行痰涂片、BACTEC MGIT 960(MGIT 960)、GeneXpert MTB/RIF(Xpert)和PCR荧光探针法检测,评价PCR荧光探针法对痰液样本中MTBC及利福平耐药性的检测效能。另对随机选取同期上海市疾病预防控制中心结核病实验室菌株库中保存的96株MTBC临床菌株(包括利福平表型耐药菌株47株和利福平表型敏感菌株49株)分别进行PCR荧光探针法和Xpert检测利福平耐药性,分析两种检测方法对利福平耐药相关基因突变的检出情况。结果:205例疑似肺结核患者中,PCR荧光探针法对MTBC的检出率为22.44%(46/205),与MGIT 960[21.95%(45/205)]、Xpert[20.98%(43/205)]和痰涂片[16.10%(33/205)]的差异均无统计学意义(χ^(2)=0.014,P=0.904;χ^(2)=0.129,P=0.719;χ^(2)=2.650,P=0.104)。以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法、Xpert、MGIT 960和痰涂片检测MTBC的敏感度(95%CI)分别为48.10%(36.93%~59.56%)、48.10%(36.93%~59.56%)、50.63%(39.23%~61.97%)和40.51%(29.79%~52.15%),特异度(95%CI)分别为93.65%(87.47%~97.12%)、96.03%(90.52%~98.53%)、96.03%(90.52%~98.53%)和99.21%(95.01%~99.96%),一致率分别为76.10%(156/205)、77.56%(159/205)、78.54%(161/205)和76.59%(157/205),Kappa值分别为0.453、0.482、0.507和0.446。PCR荧光探针法检测痰液样本中MTBC的涂阴和极低级别阳性样本的检出率[10.73%(19/177)]与Xpert检测结果[8.47%(15/177)]的差异无统计学意义(χ^(2)=0.793,P=0.373)。PCR荧光探针法在检出MTBC的46份样本中同时检出6份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为13.04%(6/46);而Xpert在检出MTBC的43份样本中仅同时检出1份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为2.33%(1/43)。在96株临床菌株中,两种分子检测方法均检测到56株菌株发生利福平耐药基因突变,除2株探针突变类型不一致外,其他探针突变类型均一致,且多发生在probe E(529~533)和FAM通道(531/533突变)。结论:以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法检测MTBC的效能与MGIT 960、Xpert和痰涂片基本相当,且与Xpert检测MTBC临床菌株的利福平耐药性效果一致,认为PCR荧光探针法不仅是一种等同于Xpert检测功能的新技术,还具有操作简单、价格低于Xpert、真正实现一体化和全封闭等优势。建议在临床推广过程中进一步优化PCR荧光探针法以提高MTBC检出率,并开展多中心临床试验验证研究。

InnowaveDX MTB/RIF对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药检测性能的评估

目的:评估InnowaveDX MTB/RIF(简称“InnowaveDX”)检测结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)及MTB利福平耐药性的性能。方法:采用前瞻性研究方法,连续纳入2023年3月1日至6月30日遵义医科大学附属医院具有结核病相关体征/症状,或胸部X线检查结果提示疑似结核病的患者作为研究对象,共纳入104例。其中,93例诊断为结核病(包括68例经病原学阳性确诊,25例病原学阴性经临床诊断确诊),11例临床诊断为非结核病。收集研究对象的痰液、支气管肺泡灌洗液、尿液、淋巴结穿刺液、脑脊液、脓液及胸腔积液,行涂片抗酸杆菌染色镜检、培养、InnowaveDX和GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测,评价InnowaveDX对结核病和MTB利福平耐药性的检测效能。结果:以病原学及临床诊断结果为参照,InnowaveDX检测结核病的敏感度、特异度、一致率、Kappa值分别为92.5%(86/93)、100.0%(11/11)、93.3%(97/104)、0.72;Xpert检测结核病的敏感度、特异度、一致率、Kappa值分别为93.6%(87/93)、100.0%(11/11)、94.2%(98/104)、0.75。InnowaveDX和Xpert检测痰标本阳性率均为91.5%(65/71),差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000);检测其他类型标本(支气管肺泡灌洗液、尿液、淋巴结穿刺液、脑脊液、脓液及胸腔积液)阳性率分别为95.5%(21/22)和100.0%(22/22),差异无统计学意义(Fisher精确概率法,P=1.000)。以Xpert检测MTB利福平耐药性结果为参照,InnowaveDX检测MTB利福平耐药的敏感度为97.0%(32/33),特异度为92.2%(47/51),Kappa值为0.88。结论:InnowaveDX对于MTBC具有较好的检测效能,且适用于不同类型的标本,检测MTB利福平耐药性结果与Xpert一致性好。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能。方法选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和XpertMtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本中Mtb及其耐药性的敏感度和特异度。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度为95.0%(345/363)和89.6%(147/164),以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.1%(41/46)和96.3%(289/300)。结论Xpert Mtb/RIF检测敏感度和特异度较高,在Mtb及其利福平耐药快速检测方面具有比较好的应用前景。

Xpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价

目的 评估Xpert Mtb/RIF检测技术快速诊断肺结核及利福平耐药的可靠性.方法 在4个县（区）级结核病防治机构（湘潭县、岳阳县、绥化市北林区和兰西县）,门诊医生连续纳入2142例初诊肺结核可疑患者,每例患者留取3份痰标本,实验室工作人员对每份标本同时进行涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF（利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术）检测,临床医生2个月末对患者完成随访.省级参比实验室对555例培养阳性患者完成比例法利福平药敏试验,国家参比实验室对传统药敏试验和Xpert Mtb/RIF检测结果不一致菌株进行rpoB耐药基因核心区间测序.以随访后临床诊断结果为金标准,比较涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度.以传统药敏试验结果为金标准,分析Xpert Mtb/RIF检测利福平耐药的效能.结果 以临床诊断结果为金标准,涂片镜检、固体培养和Xpert Mtb/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度分别为25.68％（284/1106）、51.44％（555/1079）和58.82％（650/1105）,Xpert Mtb/RIF检测敏感度高于涂片镜检（x2=360.10,P＜0.05）和固体培养试验（x2=50.13,P＜0.05）.以传统药敏试验结果为金标准,XpertMtb/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为87.10％（27/31）和97.95％（477/487）.结论 Xpert Mtb/RIF检测操作简单,检测敏感度高于涂片镜检和固体培养,同时可以诊断患者是否对利福平耐药,在我国县（区）级实验室具有非常好的应用前景.

MTBDR plus方法快速检测北京地区临床结核分枝杆菌分离株利福平和异烟肼耐药性效果评价

目的评估MTBDR plus试剂盒在北京地区快速检测利福平和异烟肼的耐药性的效果。方法筛选169例临床结核分枝杆菌分离株,以国际标准的比例法作为对照,探讨该试剂盒在临床上应用的敏感性和特异性以及突变分布频率。结果在北京地区使用MTBDR plus检测利福平和异烟肼的敏感性和特异性分别为96.9%、85.3%和93.2%、98.1%。rpoB基因频率最高的突变位点是S531L(55.2%),其次是D516V(8.3%)、H526Y(7.3%)和H526D(3.1%)。katG基因频率最高的突变位点是S315T1(62.9%),而inhA是C15T位点(21.6%)。结论 MTBDR plus是一个敏感、特异和快速的诊断利福平、异烟肼耐药性和MDR的有效方法。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术的诊断效果对比研究

目的 评价利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（GeneXpert Mtb/RIF）检测临床标本诊断结核病和耐利福平结核病的效能.方法 2011年1-5月从解放军第三○九医院、广州市胸科医院和河南省疾病预防控制中心3家单位,连续收集门诊就诊的1971例疑似结核病患者的痰标本,进行涂片、金标准培养和金标准比例法传统药敏试验和GeneXpert Mtb/RIF检测.应用SPSS 11.5统计软件对GeneXpert Mtb/RIF与不同检测方法进行敏感度和特异度分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与涂片及培养比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1968例（1971例中有3例污染排除）痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为93.27％（748/802）、91.93％（797/867）和91.60％（1068/1166）、95.55％（1052/1101）;与临床诊断比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1945例（1971例中有26例无法定诊）痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为78.66％（822/1045）、98.67％（888/900）;与金标准传统药敏试验比较,GeneXpert Mtb/RIF检测797例标本诊断耐利福平结核病的敏感度和特异度分别为97.92％（188/192）、100.00％（595/595）.结论 GeneXpert Mtb/RIF是一种检测痰标本诊断结核病及耐利福平结核病的快速简便、自动化、敏感度和特异度较高的分子生物学方法,适用于结核病和耐利福平结核病的临床诊断.

结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增检测成本分析

目的比较固体培养、比例法药敏和结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增（XpertMtb／RIF）（简称“Xpert”）检测在中国基层实验室应用的检测成本。方法选取4个县（区）级结核病防治机构收集3次固体培养和Xpert检测成本数据，2个省参比实验室收集3次对硝基苯甲酸（PNB）菌群鉴定和比例法利福平药敏试验成本数据。采用要素法计算每种方法单位检测成本，计算每例患者不同检测方法的检测成本。在不同结核病患病率人群中，以固体培养试验为金标准，比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例结核病患者的成本。在不同利福平耐药率的可疑人群中，以传统药敏试验为金标准，比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例利福平耐药结核病患者的成本。调整Xpert检测设备和试剂价格后，分析Xpert检测的单位成本。结果固体培养、菌群鉴定、利福平药敏试验和Xpert检测的单位检测成本分别为47．87、46．73、82．86和118．62元。传统方法检测每例结核病患者所需成本（2份培养，1份传代，1份PNB鉴定试验）为172．57元。传统方法检测每例耐药结核病患者的平均成本（2份固体培养，1份传代，1份PNB鉴定及药敏试验）为208．84元。当Xpert检测结核病或利福平耐药特异度为85％时，如果检测敏感度大于70％，在结核病患病率或利福平耐药结核病患病率1％～70％的任何人群中，Xpert检出1例结核病或利福平耐药结核病患者的成本均低于传统方法。试剂价格变化对于检测成本的影响远远大于设备价格变化的影响。结论Xpert检测是一种比传统方法更经济并快速的检测方法，适合在中国基层实验室推广。

XpertMtb／RIF对儿童结核病诊断价值的Meta分析

目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（XpertMtb／RIF）对儿童结核病的诊断价值。方法在数据库中检索建库至2015年3月正式发表的文献，在英文数据库（PuhMed、Cochrane、webofscien-ee）中检索词为“Xpert”、“tuberculosis”、“child”或“children”或“pediatric”；在中文数据库（中国期刊全文数据库、中国科技期刊全文数据库、万方数据库）中检索词为“Xpert”、“结核”、“儿童”。纳入标准：公开发表的针对XpertMtb／RIF的诊断试验研究；研究对象包含疑似结核病患儿；金标准为固体或液体细菌培养；能获得完整的四格表数据。排除标准：非诊断试验研究；研究对象不包含疑似结核病患儿；金标准非细菌培养；无法提取儿童的数据。2名研究者独立进行资料提取。分别采用Revman5．3和Meta-Disc1．4统计软件进行文献质量评价和Meta分析。结果初次检索得到209篇文献。根据纳入排除标准最后共纳入来自7个国家的13篇文献，文献中共有4661例临床样本。数据分析表明，XpertMtb／RIF用于诊断儿童结核病的汇总敏感度为75％（95％CI：72％～79％）；汇总特异度为97％（95％CI：96％～97％），SROC曲线下面积为88％。对于采用痰、胃液和鼻咽抽提物三种样本的研究进行Meta分析，结果表明XpertMtb／RIF试验检测痰的敏感度最优（76％），鼻咽抽取物最差（50％）；痰和鼻咽抽取物的特异度（99％）优于胃液（93％）。对采用了二次取样方法的三项研究进行了Meta分析，结果表明二次取样可显著提高试验的敏感度（由54％提高至71％），且不明显影响试验的特异度（均为99％）。结论XpertMtb／RIF对儿童结核病具有较高的诊断应用价值。

耐利福平肺结核病人的治疗观察

目的探讨含二线药物治疗方案的有效性和安全性。方法采用多中心、随机分组方法,将耐药结核病监测中发现的耐药肺结核(至少耐利福平)患者154例,随机分入观察组和对照组,采取不同化疗方案治疗。观察组以二线抗结核药物为主;对照组则为国家结核病控制规划制订的复治方案,均为一线抗结核药物。以细菌学和影像学改变作为疗效评价标准。结果(1)114例完成全程治疗,40例患者退出研究,其中对照组26例,观察组14例(P>0.05);(2)细菌学改变:观察组痰菌转阴率为81.7%,对照组为70.0%(P>0.05)。在病变范围较小者中,观察组和对照组痰菌转阴率分别为90.3%、90.0%(P>0.05),在病变范围较大者中,观察组和对照组痰菌转阴率分别为77.5%、52.2%(P<0.05)。(3)影像学改变:2组X线胸片病灶吸收差异无统计学意义。(4)安全性:观察组和对照组中发生不良反应的分别有17例、8例(P>0.05)。结论对于初治的耐药肺结核患者,以及病变较广泛的耐药肺结核患者,采用含二线药物的治疗方案同样安全,但疗效可能更好。

《利福平耐药肺结核诊断流程》解读

《利福平耐药肺结核诊断流程》是中国防痨协会于2021年5月12日发布的团体标准,于当日起实施。该标准规定了不同技术条件下利福平耐药肺结核患者的诊断流程,即传统药敏检测技术耐药诊断流程、分子生物学耐药检测技术和传统药敏检测技术结合的耐药诊断流程、多色巢式实时荧光定量PCR技术和分子生物学耐药检测技术及传统药敏检测技术结合的耐药诊断流程。笔者对该标准的主要内容和适用条件进行了解读。

不同方法检测利福平耐药结核病及MTB rpoB基因突变的对比分析

目的探讨不同方法检测利福平耐药结核病的效能,并分析利福平耐药MTB菌株ropB基因突变情况.方法搜集2017年福建省泉州市下属10个县(市、区)结核病定点医院登记的同时经固体比例法药物敏感性试验(简称“比例法药敏试验”)、核酸反向线性探针杂交技术(属于GenoType MTBDRplus方法,简称“MTBDRplus")与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpertMTB/RIF,简称“Xpert技术”)等3种方法检测的511例确诊肺结核患者对利福平的耐药情况,并对3种方法检测结果不相同但至少1种结果为利福平耐药的66株MTB菌株行ropB基因测序,分析55株获得rpoB基因序列菌株的ropB基因突变情况.结果511例检测患者中,比例法药敏试验、MTBDRplus和Xpert检测到利福平的耐药率分别为38.16%(195/511)、40.51%(207/511)和45.99%(235/511),MTBDRplus技术检测的利福平耐药率与比例法差异无统计学意义(X^2=0.590,P=0.442),而Xpert技术检测利福平耐药率明显高于比例法(X^2=6.424,P=0.011).以比例法药敏试验检测结果为标准,Xpert技术和MTBDRplus检测MTB菌株对利福平耐药的敏感度、特异度、一致率分别为93.85%(183/195)和95.38%(186/195)、83.54%(264/316)和93.35%(295/316)、87.48%(447/511)和94.13%(481/511).获得rpoB基因序列的55株菌株中,47株(85.46%)ropB基因在371~566位点间的17个位置发生了36种类型的突变;其中13株(23.64%)发生碱基缺失或插入,7株(12.73%)发生点突变,27株(49.09%)发生联合突变.45株(81.82%,45/55)为比例法检测利福平敏感而分子药敏试验检测耐药[包括14株(25.45%,14/55)MTBDRplus与Xpert检测对利福平均耐药的菌株、30株(54.55%,30/55)MTBDRplus检测对利福平敏感而Xpert检测为耐药、1株(1.82%,1/55)MTBDRplus检测对利福平耐药而Xpert检测为敏感的菌株],8株(14.55%,8/55)比例法药敏试验对利福平耐药而MTBDRplus与Xpert检测均敏感的菌株.MTBDRplus与Xpert检测对利福平耐药结果相同的菌株有22株,两者检测结果均耐药的14株菌株均发生ropB基因突变;而两者检测结果均敏感的8株菌株中,有6株菌株ropB基因发生突变.MTBDRplus与Xpert检测对利福平耐药结果不同的菌株有33株,其中31株为MTBDRplus检测敏感而Xpert检测为耐药.结论分子药敏试验检测MTB利福平耐药性的敏感度较比例法药敏试验高.对利福平耐药菌株的ropB基因突变率较高,无论哪一种技术检测结果为利福平耐药,均应考虑该MTB对利福平耐药,应尽快应用其他检测方法进行验证.

对利福平耐药结核病诊治的思考

利福平耐药结核病是当前结核病控制的难点，笔者对其定义、流行情况、诊断和治疗策略进行了阐述和分析。

结核分枝杆菌耐利福平药物机理的初步研究

目的通过诱导试验观察结核菌产生耐利福平药物的全过程,初步分析结核菌耐该药的机理。方法采用诱导试验、聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)和序列分析,对经不同药物浓度传代培养后的结核菌强毒株(H_(37)Rv)和36株临床耐药分离株进行分析。结果在诱导到第7代时,H_(37)Rv的PCR-SSCP电泳出现异常,经测序证实在513位点发生基因突变。36株临床耐药分离株中有23株发生突变,为63.9%(23/36);其中有5株与诱导株基因突变位点相同。结论用药物不间断的刺激结核菌,是产生结核菌耐利福平药物的重要原因。

利福布汀抗结核分枝杆菌活性及其耐药性与rpoB基因突变关系的探讨

目的比较利福平和利福布汀的体外抗MTB活性，分析其交叉耐药性，评价利福平和利福布汀耐药性与rpoB突变的关系。方法采用微量平板AlamarBlue检测（MABA）法，检测利福平和利福布汀对MTB临床分离菌株168株的抗菌活性，并对其rpoB基因核心区进行DNA序列测定。两组间基因突变率的比较采用x2检验。结果66株利福平敏感菌株均对利福布汀敏感（MIC≤0．125mg／L），未检测到rpoB基因耐药决定区存在突变；102株利福平耐药菌株中有76株同时对利福布汀耐药（MIC〉0．5mg／L），交叉耐药率为74．5％（76／102）；26株MIC≤4mgfL的利福平耐药菌株仍对利福布汀敏感（MIC≤0．5mg／L）；516、526和531位点的氨基酸改变与利福平和利福布汀耐药均有关，而511和533位点的氨基酸改变可能仅与利福平耐药有关，利福布汀耐药菌株的rpoB基因突变率（92．1％，70／76）显著高于利福布汀敏感菌株（23．9％，22／92），差异有统计学意义（x2=78．12，P〈0．05）。结论对利福平低度耐药（MIC≤4mg／L）的MTB仍对利福布汀敏感。MTB的rpoB基因突变可用于利福平耐药性检测，且对检测利福布汀的耐药性也有参考意义。

131株耐多药结核分枝杆菌对利福布丁与利福平交叉耐药的研究

目的 观察利福布丁对MDR-TB菌株的抑菌效力及其与利福平的交叉耐药性，了解对利福布丁与利福平交叉耐药菌株rpoB基因突变特征。 方法 采用间隔抽样法，从2007—2008年全国结核病耐药基线调查的401株MDR-TB菌株中抽样，传代后获得131株MDR-TB菌株。用微孔板Alamar blue法测定利福平和利福布丁对MDR-TB菌株的最低抑菌浓度（MIC），采用直接测序法检测MDR-TB菌株rpoB基因突变，分析rpoB基因突变对两者交叉耐药性的影响。采用SPSS 11.0软件进行统计分析，交叉耐药率比较采用χ2检验，P〈0.05为差异有统计学意义。 结果 在131株MDR-TB菌株中，利福平MIC中位数值为256 μg/ml，利福布丁MIC中位数值为2 μg/ml。通过测定MIC的方法，利福平与利福布丁交叉耐药率为76.47%（91/119）。在MDR-TB菌株中，发生rpoB基因突变113株（86.26%，113/131），包括531、526、516、513、511、522、533等7种单位点突变，其中以密码子531（56.50%，74/131）、526（16.03%，21/131）突变最为常见。不同rpoB基因突变的MDR-TB菌株，526、531位点突变出现利福平与利福布丁交叉耐药的比例最高，分别占90.48%（19/21）、78.38%（58/74），与无突变组（44.44%，8/18）比较，差异均有统计学意义（χ^2值分别为9.641、8.223，P值均＜0.05）。 结论 利福布丁与利福平存在交叉耐药性，但利福布丁有更强的抑菌能力。MDR-TB菌株不同rpoB突变类型，利福平与利福布丁交叉耐药性不同。

应用线性探针技术快速诊断耐多药肺结核效果分析

目的为验证线性探针技术快速检测耐多药肺结核在基层结核病防治工作中可行性。方法对459例涂阳肺结核患者痰标本应用线性探针技术快速检测耐利福平、耐异烟肼菌株,同时进行传统罗氏培养和药敏试验结果相比较。结果线形探针技术与传统药敏试验检测RFP耐药率分别为5.9%(27/459)和6.3%(29/459),差异无统计学意义(χ2=0.038,P>0.05);INH耐药率分别为8.7%(40/459)和10.0%(46/459),差异无统计学意义(χ2=0.231,P>0.05)。两种方法检测对RFP均敏感者427例,均耐药者24例,二者结果一致率98.3%(451/459);对INH均敏感者410例,均耐药者37例,二者结果一致率97.4%(447/459)。两种方法检测耐利福平的灵敏度为82.8%(24/29),耐异烟肼的灵敏度为80.4%(37/46),耐利福平、异烟肼特异度均为99.3%(427/430)。结论应用线性探针技术检测耐多药肺结核与传统药敏试验相比,利福平、异烟肼耐药检出率差异无统计学意义。其特异度高,是快速检测耐多药肺结核的诊断方法。

Xpert Mtb／RIF检测技术诊断肺结核和肺外结核的价值

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert Mtb／RIF）在结核病诊断中的临床应用价值。方法对200例初治结核病患者标本，包括痰液、肺泡灌洗液、胸腹腔积液和脑脊液各50例，分别进行抗酸染色法、固体培养法、药物敏感性试验（简称“药敏试验”）及XpertMtb／RIF检测，分别以固体培养结果和药敏试验结果为金标准，分析Xpert Mtb／RIF检测标本中结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值。Xpert Mtb／RIF检测和金标准检测进行一致性检验（Kappa检验），K〉0．8认为两者一致性极好。结果以固体培养法检测结果为准，XpertMtb／RIF检测技术，以及抗酸染色法总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为94．52％（69／73）、90．55％（115／127）、85．19％（69／81）、96．64％（115／119）和0．83，以及65．75％（48／73）、96．06％（122／127）、90．57％（48／53）、82．99％（122／147）和0．66；以比例法药敏试验结果为准，XpertMtb／RIF检测技术检测利福平耐药性的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为93．75％（15／16）、100．00％（53／53）、100．00％（15／15）、98．15％（53／54）和0．96。结论XpertMtb／RIF法可快速检测肺内、外结核分枝杆菌及其耐药性，具有良好的应用前景。

GeneXpert MTB/RIF在新发活动性肺结核诊断及对利福平耐药快速检测中的应用价值

目的探讨GeneXpertMTB／RIF（简称“Xpert”）法在新发活动性肺结核诊断及对利福平是否耐药的快速检测中的应用价值。方法选取2015年6月-11月大连市结核病医院临床确诊肺结核268例、排除肺结核诊断患者102例。对其痰标本分别进行涂片、固体培养和Xpert法检测，并对3种方法的检测结果进行比较。另外，以临床诊断为标准，对固体培养与Xpert法的敏感度、特异度进行比较；将Xpert与比例法进行药物敏感性试验（简称“药敏试验”）检测对利福平是否耐药的结果比较。采用SPSS21．0软件进行数据的统计学处理，计数资料采用χ2检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果痰涂片、固体培养及Xpert法的阳性检出率分别为29．5％（79／268）、43．7％（117／268）、55．6％（149／268），三种方法比较差异有统计学意义（χ2=37．42，P=0．000）。189例涂阴肺结核患者中，涂阴培阳率为20．1％（38／189）；涂阴肺结核患者Xpert检测的阳性率为37．0％（70／189），二者比较差异有统计学意义（χ2=13．27，P=0．000）。以临床诊断为标准，固体培养检测结核病的敏感度为43．7％（117／268）、特异度为99．0％（101／102）；Xpert检测结核病的敏感度为55．6％（149／268）、特异度为98．0％（100／102）。固体培养与Xpert法的敏感度比较，差异有统计学意义（χ2=7．64，P=0．006）；特异度比较，差异无统计学意义（χ2=0．00，P=1．000）。在固体培养和Xpert检测均阳性的113例肺结核患者中，其中比例法检测结果为耐药的11例中，Xpert检测结果为耐药的有10例、敏感的有1例；比例法检测结果为敏感的102例中，Xpert检测结果为敏感的有101例、耐药的有1例。Xpert与比例法药敏试验对利福平耐药检测结果一致性比较，Kappa值为0．899。结论Xpert法简便、快速、安全，能够快速诊断新发活动性肺结核及检测对利福平是否耐药，特别是对快速诊断涂阴肺结核有较大价值。

耐多药结核分枝杆菌对利福布汀和利福平的交叉耐药性分析

目的对耐多药MTB临床分离株进行利福布汀和利福平交叉耐药性研究分析，为利福布汀治疗耐多药MTB提供依据。方法在96孔板上检测利福布汀和利福平对99株耐多药MTB菌株的90％最低抑菌浓度（MIC90），交叉耐药率数据分析采用x。检验，两组间MIC比较经对数转化后采用独立样本t检验。结果利福布汀和利福平的交叉耐药率为85．9％（85／99）。利福布汀的MIC90值为≤16mg／L，中位数为2mg／L；利福平的MIC90值为≥2mg／L，中位数〉32mg／L，利福布汀MIC90值仅为利福平的1／8～1／32。利福布汀和利福平交叉耐药率随利福平的耐药程度加大而上升，低耐利福平组和中耐利福平组的交叉耐药例数分别为0／9和5／9，而高耐利福平组几乎全部交叉耐药（98．8％，80／81）。结论利福布汀对利福平耐药MTB菌株有一定的抗菌活性，可作为利福类药物耐药结核病的可选择药物。

利福布汀抗结核分枝杆菌活性及其耐药性与rpoB基因突变关系的探讨

目的比较利福平和利福布汀的体外抗MTB活性，分析其交叉耐药性，评价利福平和利福布汀耐药性与rpoB突变的关系。方法采用微量平板Alamar Blue检测（MABA）法，检测利福平和利福布汀对MTB临床分离菌株168株的抗菌活性，并对其rpoB基因核心区进行DNA序列测定。两组间基因突变率的比较采用Х^2检验。结果66株利福平敏感菌株均对利福布汀敏感（MIC≤0．125mg／L），未检测到rpoB基因耐药决定区存在突变；102株利福平耐药菌株中有76株同时对利福布汀耐药（MIC〉0．5mg／L），交叉耐药率为74．5％（76／102）；26株MIC≤4mg／L的利福平耐药菌株仍对利福布汀敏感（MIC≤0．5mg／L）；516、526和531位点的氨基酸改变与利福平和利福布汀耐药均有关，而511和533位点的氨基酸改变可能仅与利福平耐药有关，利福布汀耐药菌株的rpoB基因突变率（92．1％，70／76）显著高于利福布汀敏感菌株（23．9％，22／92），差异有统计学意义（Х^2=78．12，P〈0．05）。结论对利福平低度耐药（MIC≤4mg／L）的MTB仍对利福布汀敏感。MTB的rpoB基因突变可用于利福平耐药性检测，且对检测利福布汀的耐药性也有参考意义。