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C12ORF66对MYCN扩增的高危神经母细胞瘤细胞的活性调控
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作者 贾安娜 战世佳 +4 位作者 张璇 郭金鑫 于永波 郭永丽 常艳 《基础医学与临床》 2024年第3期288-294,共7页
目的探究12号染色体开放阅读框66(C12ORF66)对MYCN扩增神经母细胞瘤(NB)细胞系活性的调控效应。方法通过R2数据库GSE16476和GSE49710数据集,分析MYCN扩增和MYCN非扩增NB细胞中C12ORF66表达量,以及C12ORF66表达量与患儿预后的相关性。RT-... 目的探究12号染色体开放阅读框66(C12ORF66)对MYCN扩增神经母细胞瘤(NB)细胞系活性的调控效应。方法通过R2数据库GSE16476和GSE49710数据集,分析MYCN扩增和MYCN非扩增NB细胞中C12ORF66表达量,以及C12ORF66表达量与患儿预后的相关性。RT-qRCR检测正常组织永生化细胞系、MYCN扩增及MYCN非扩增细胞系中C12ORF66 mRNA表达差异。构建瞬时敲低和稳定敲低C12ORF66的MYCN扩增细胞株,对照组和敲低组细胞进行实时无标记动态细胞分析(RTCA)、集落形成能力检测及Ki67免疫荧光染色。结果R2数据库分析显示MYCN扩增NB患儿样本中C12ORF66表达显著高于MYCN非扩增NB患儿样本,并且C12ORF66表达与患儿预后负相关(P<0.05)。细胞实验表明,与MYCN非扩增细胞系CHLA-255和SH-SY5Y相比,C12ORF66在MYCN扩增细胞系BE(2)-C和SK-N-BE(2)中表达显著升高(P<0.001)。瞬时或稳定敲低C12ORF66,MYCN扩增NB细胞增殖显著减缓(P<0.001),集落形成能力显著降低(P<0.001),Ki67阳性细胞比例显著减少(P<0.05)。结论C12ORF66在MYCN扩增NB患儿样本和细胞系中高表达,且与患儿预后负相关,敲低C12ORF66显著抑制NB细胞活性。 展开更多
关键词 12号染色体开放阅读框66 SK-N-BE(2)细胞 MYCN扩增 细胞增殖
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脑胶质瘤组织中miR⁃4744、RIOK2表达及其对患者预后的预测价值 被引量:2
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作者 段升强 乔建新 +2 位作者 徐新文 刘熙鹏 张秀峰 《疑难病杂志》 CAS 2023年第6期613-619,共7页
目的分析脑胶质瘤组织中微小RNA⁃4744(miR⁃4744)、右开放阅读框激酶2(RIOK2)表达情况及对患者预后的预测价值。方法纳入2014年12月—2017年11月河北北方学院附属第一医院神经外科收治脑胶质瘤患者102例,术中收集脑胶质瘤组织及相对应的... 目的分析脑胶质瘤组织中微小RNA⁃4744(miR⁃4744)、右开放阅读框激酶2(RIOK2)表达情况及对患者预后的预测价值。方法纳入2014年12月—2017年11月河北北方学院附属第一医院神经外科收治脑胶质瘤患者102例,术中收集脑胶质瘤组织及相对应的癌旁正常组织,实时荧光定量PCR法检测miR⁃4744、RIOK2信使RNA(mRNA)表达水平,免疫组化检测RIOK2蛋白表达。分析脑胶质瘤组织miR⁃4744、RIOK2 mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系,miR⁃4744与RIOK2 mRNA表达水平的相关性,miR⁃4744、RIOK2 mRNA表达水平与预后的关系,脑胶质瘤患者预后的影响因素,miR⁃4744、RIOK2 mRNA表达水平对患者术后5年内死亡的预测价值。结果与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR⁃4744表达水平明显降低,RIOK2 mRNA和蛋白阳性率均明显升高[t(χ^(2))P=44.282/<0.001、15.538/<0.001、101.868/<0.001];脑胶质瘤组织miR⁃4744、RIOK2 mRNA表达水平与肿瘤分级、远处转移、卡氏功能状态(KPS)评分有关(miR⁃4744:χ^(2)/P=33.443/<0.001、45.773/<0.001、37.920/<0.001,RIOK2:χ^(2)/P=11.453/0.001、16.650/<0.001、16.592/<0.001);脑胶质瘤组织miR⁃4744与RIOK2 mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.636/<0.001);miR⁃4744低表达组患者5年生存率低于miR⁃4744高表达组,RIOK2 mRNA高表达组患者5年生存率低于RIOK2 mRNA低表达组(χ^(2)/P=20.874/<0.001、10.437/0.001);肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、有远处转移、KPS评分<80分、miR⁃4744低表达、RIOK2 mRNA高表达是脑胶质瘤患者5年内死亡的独立危险因素[HR(95%CI)=2.224(1.297~3.813)、2.442(1.408~4.237)、2.815(1.506~5.261)、2.140(1.173~3.907)、2.114(1.129~3.958)];与存活组比较,死亡组脑胶质瘤组织miR⁃4744表达水平明显降低,RIOK2 mRNA表达水平明显升高(t/P=8.146/<0.001、3.324/0.001);miR⁃4744、RIOK2 mRNA、两者联合预测患者5年内死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.752、0.711、0.885,两者联合预测患者5年内死亡的AUC高于单独预测的AUC(Z/P=3.147/0.002、3.531/0.004)。结论脑胶质瘤组织中miR⁃4744呈低表达,RIOK2 mRNA呈高表达,二者呈负相关,共同调控脑胶质瘤患者的病情进展,对患者预后预测具有较高价值。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 微小RNA⁃4744 右开放阅读框激酶2 预后
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单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量:4
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作者 杨慧兰 赵举峰 +3 位作者 樊建勇 周翠 黄小晏 齐维 《医学研究生学报》 CAS 2008年第9期899-903,I0001,共6页
目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATO... 目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2 潜伏相关转录子 开放读码框 重组载体
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RIOK2与食管鳞状细胞癌根治术后患者预后的关系 被引量:1
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作者 王雯 蒲育 赵东利 《国际消化病杂志》 CAS 2021年第5期365-369,共5页
目的探究右开放阅读框激酶2(RIOK2)与食管鳞状细胞癌(ESCC)根治术后患者预后的关系。方法选择2012年4月至2015年6月在西安交通大学第一附属医院就诊的218例ESCC患者作为研究对象。采用蛋白质印迹法检测ESCC组织中RIOK2的表达水平,并分... 目的探究右开放阅读框激酶2(RIOK2)与食管鳞状细胞癌(ESCC)根治术后患者预后的关系。方法选择2012年4月至2015年6月在西安交通大学第一附属医院就诊的218例ESCC患者作为研究对象。采用蛋白质印迹法检测ESCC组织中RIOK2的表达水平,并分析其与患者预后的关系。结果218例ESCC患者的1年、3年和5年生存率分别为77.06%、46.33%和38.53%。生存组RIOK2的表达水平低于死亡组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。与低表达RIOK2组比较,高表达RIOK2组的中位生存时间较短,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素回归分析结果显示,T分期、N分期、G分期和RIOK2均是ESCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论ESCC组织中RIOK2的表达水平与患者的预后有关,其表达水平越高提示患者5年生存率越低。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 预后 右开放阅读框激酶2
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上海及新疆地区猪戊型肝炎病毒开放阅读码框架2序列的克隆与分析
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作者 张维谊 鞠厚斌 +2 位作者 刘健 刘佩红 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期26-31,共6页
通过已建立的动物戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RT-nPCR方法,检测上海地区和新疆地区猪群样品。扩增HEV开放读码框架2(open reading frame 2,ORF2)保守区,产物为507 bp。经克隆、测序,获得20株上海株、3株新疆株序列,采用分... 通过已建立的动物戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)RT-nPCR方法,检测上海地区和新疆地区猪群样品。扩增HEV开放读码框架2(open reading frame 2,ORF2)保守区,产物为507 bp。经克隆、测序,获得20株上海株、3株新疆株序列,采用分子生物学软件与47株已知HEV进行同源性、进化关系分析。结果23株序列从同源性比对和进化关系分析均属HEVⅣ型,上海株间507 bp的核苷酸同源性为94.1%~100.0%,与上海猪源(DQ450072)、日本人源Japan1(AB369690)亲缘关系近;3株新疆株507 bp间的核苷酸同源性为86.1%~98.2%,与新疆猪源China SW1(AY594199)、中国人源T1株(AJ272108)亲缘关系近;上海株与新疆株间的核苷酸同源性为82.6%~100.0%,提示上海株与新疆株间存在差异。23株HEV在时间和地域关系分析,提示不同年份的新疆株存在差异,同年份不同猪场的新疆株进化关系存在差异,不同年份、不同区县的上海株进化关系也存在差异。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 开放读码框架2 序列分析
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人肿瘤关联钙信号转导因子2的生物信息学分析 被引量:1
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作者 张玉洁 孙怡琳 +1 位作者 朱苹 马晓丽 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第6期570-576,共7页
目的人肿瘤关联钙信号转导因子2(TACSTD2)在肿瘤形成过程中的促癌作用越来越受到重视。文中旨在采用生物信息学方法预测TACSTD2的分子结构和生物学功能,为进一步研究TACSTD2的功能提供借鉴。方法获取人源性TACSTD2基因mRNA和蛋白氨基酸... 目的人肿瘤关联钙信号转导因子2(TACSTD2)在肿瘤形成过程中的促癌作用越来越受到重视。文中旨在采用生物信息学方法预测TACSTD2的分子结构和生物学功能,为进一步研究TACSTD2的功能提供借鉴。方法获取人源性TACSTD2基因mRNA和蛋白氨基酸序列,利用生物信息学方法分析TACSTD2蛋白开放阅读框(ORF)、理化性质、信号肽、亚细胞定位,预测TACSTD2蛋白的跨膜结构、二级结构、三级结构、结构域、蛋白修饰位点,最后预测TACSTD2蛋白的互作蛋白并进行相关的通路分析,及TACSTD2在人不同正常组织和肿瘤组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果TACSTD2的mR⁃NA序列得到的ORF有12个,最长的ORF是ORF1,共972bp,可编码323个氨基酸。TACSTD2蛋白亲水性的氨基酸要多于疏水性的氨基酸,表明TACSTD2蛋白属于亲水性蛋白。TACSTD2是一种高度保守的碱性分泌蛋白,在胞质内外均有跨膜区。TACSTD2氨基酸序列存在核定位信号(nuclear localization signal,NLS),提示TACSTD2可定位于细胞核。TACSTD2蛋白主要分布在细胞质膜、细胞外、细胞核以及细胞质。二级结构预测结果表明,TACSTD2蛋白主要为环状结构,其次为螺旋结构。TACSTD2蛋白有15个丝氨酸修饰位点,17个苏氨酸修饰位点,8个酪氨酸修饰位点。TACSTD2与Claudin(CLDN)家族蛋白存在蛋白互作。TACSTD2参与以下信号通路:细胞表面受体信号通路、视觉感知细胞增殖、上皮细胞迁移的负调控、上皮细胞增殖的调节、对刺激的反应等。与正常组织比较,TACSTD2的mRNA在宫颈癌、肺癌、甲状腺癌、子宫癌、肝癌、结直肠癌中等肿瘤组织高表达。结论TACSTD2在多种恶性肿瘤中高表达,可通过细胞表面受体信号参与恶性肿瘤细胞的增殖、迁移、粘附等过程,为进一步研究TACSTD2的功能提供借鉴。 展开更多
关键词 人肿瘤关联钙信号转导因子2 开放阅读框 蛋白结构 细胞增殖 生物信息学
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猪圆环病毒2型Cap蛋白在烟草叶绿体中的表达
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作者 林优红 程霞英 +6 位作者 杨东风 姜永厚 邢少辰 韦正乙 韩蕊莲 梁宗锁 杨宗岐 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期350-356,共7页
猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)可读框2(open reading frame 2,ORF2)基因编码具有多个抗原表位的病毒衣壳(Cap)蛋白,能在机体内有效引发免疫反应并产生中和抗体,是预防和治疗猪圆环病毒病(porcine circovirus-associate... 猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)可读框2(open reading frame 2,ORF2)基因编码具有多个抗原表位的病毒衣壳(Cap)蛋白,能在机体内有效引发免疫反应并产生中和抗体,是预防和治疗猪圆环病毒病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的主要抗原。但Cap蛋白高昂的生产成本限制了它的广泛应用。为了探索Cap蛋白新的生产途径,本研究选择烟草叶绿体为表达平台,构建了ORF2抗原基因烟草叶绿体表达载体pNK-a03,并通过基因枪法(gene biolistics)将表达载体导入烟草叶绿体中。转化植株经PCR和RT-PCR检测,证实ORF2抗原基因已整合进烟草叶绿体基因组中且正常转录。蛋白质印迹检测和ELISA分析表明,Cap蛋白在烟草叶绿体内获得有效表达,具有免疫活性。此外,种子萌发研究结果显示,转基因烟草植株F1代具有aadA抗性,目的基因可正常进行遗传。这些研究结果为探索Cap蛋白的新型表达途径提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 可读框2(ORF2)基因 衣壳(Cap)蛋白 烟草叶绿体 基因枪转化
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猪圆环病毒2型基因组DNA的结构与功能研究进展 被引量:7
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作者 赵燕 喻正军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第5期1176-1181,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒病相关疾病的主要致病原,可损伤宿主的免疫系统,加剧一些细菌病和病毒病感染的临床症状,在全球养猪业中造成巨大损失。PCV2的基因组DNA含有11个开放阅读框(ORFs),其中至少有7个ORFs编码的蛋白质分... 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒病相关疾病的主要致病原,可损伤宿主的免疫系统,加剧一些细菌病和病毒病感染的临床症状,在全球养猪业中造成巨大损失。PCV2的基因组DNA含有11个开放阅读框(ORFs),其中至少有7个ORFs编码的蛋白质分子质量大于5ku,但目前只有5种编码的蛋白(Rep、Rep′、Cap、ORF3和ORF4)发现于PCV2复制过程中。作者概述了当前PCV2基因组DNA的结构与功能,阐明PCV2的病原学,为防控PCV2感染提供科学依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 基因组DNA 开放阅读框 病毒编码蛋白
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Higher Concentrations of Glucose or Insulin Increase the Risk of Various Types of Cancer in Obesity or Type 2 Diabetes by Decreasing the Expression of p27Kip1, a Cell Cycle Repressor Protein 被引量:1
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作者 Isao Eto 《American Journal of Molecular Biology》 2020年第1期1-11,共11页
Research Aims: Obesity and type 2 diabetes are known to be associated with increased risk of various types of cancer. However, the molecular biological mechanism of how the risk of cancer is increased in obesity or ty... Research Aims: Obesity and type 2 diabetes are known to be associated with increased risk of various types of cancer. However, the molecular biological mechanism of how the risk of cancer is increased in obesity or type 2 diabetes is not known. The aim this research is to investigate if the decreased expression of p27Kip1, a cell cycle repressor protein, plays a central role in this mechanism. Research Methods, Previous Studies and Theoretical Backgrounds: It is well known that the expression of p27Kip1 is increased by numerous nutritional or chemopreventive anti-cancer agents. But it has never been known that the expression of p27Kip1 could be decreased, rather than increased, and the risk of cancer could be increased, rather than decreased. This problem was solved recently and this new analytical method was used in this study. Results: 1) The expression of p27Kip1 was indeed significantly decreased in human obese type 2 diabetic individuals relative to the lean normal controls. 2) The expression of p27Kip1 was also significantly decreased in genetically obese rodents relative to the lean normal controls. Additionally, in obese rodents, the concentrations of glucose or insulin were significantly increased relative to the lean normal controls. 3) Using human cells cultured in vitro it was found that the increased concentrations of glucose or insulin decrease the expression of p27Kip1. Conclusions: These results suggest that higher concentrations of glucose or insulin increase the risk of various types of cancer in obesity or type 2 diabetes by decreasing the expression of p27Kip1. 展开更多
关键词 OBESITY Type 2 Diabetes CANCER P27KIP1 MRNA Translation Initiation 5’-Untranslated Region (5’UTR) 5’-End Cap of P27KIP1 MRNA Upstream open reading frame (uORF) Internal RIBOSOME Entry Site (IRES)
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Analysis of molecular variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus in China between 2007 and 2012 被引量:2
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作者 Yuhang Cao Hongsheng Ouyang +4 位作者 Mingjun Zhang Fuwang Chen Xin Yang Daxing Pang Linzhu Ren 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期183-188,共6页
In the present study, 89 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates in China during 2007 to 2012 were randomly selected from the GenBank genetic sequence database. Evolutionary characteristics... In the present study, 89 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates in China during 2007 to 2012 were randomly selected from the GenBank genetic sequence database. Evolutionary characteristics of these isolates were analyzed based on the sequences of non-struc-tural protein 2(Nsp2) and glycoprotein 5(GP5). The genetic variations of the isolates were also compared with six representative strains. The results showed that a high degree of genetic diversity exists among the PRRSV population in China. Highly pathogenic PRRSV isolates, with a discon-tinuous deletion of a 30 amino acid residue in the Nsp2 region, remained the most dominant virus throughout 2007–2012 in China. Owing to the extensive use of representative vaccine strains, natu-ral recombination events occurred between strains. Three isolates – HH08, DY, and YN-2011 – were more closely related to vaccine strains than the other isolates. Both YN-2011 and DY were the evolu-tionary products of recombination events between strains SP and CH-1R. The results of the present study provide useful information for the epidemiology of PRRSV as well as for vaccine development. 展开更多
关键词 porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) open reading frame(ORF) non-structural protein 2(Nsp2 glycoprotein 5(GP5) recombination
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乙醛脱氢酶2基因的可变剪接分析
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作者 夏万松 夏英 +5 位作者 韦四喜 周春欢 杜洪 袁婷 金泳 黄海 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第1期22-26,31,共6页
目的 探讨胃癌细胞中的乙醛脱氢酶2(ALDH2) m RNA发生可变剪接。方法 设计ALDH2基因特异性引物,用胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN45)、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和人外周全血白细胞提取RNA,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,然后对ALDH... 目的 探讨胃癌细胞中的乙醛脱氢酶2(ALDH2) m RNA发生可变剪接。方法 设计ALDH2基因特异性引物,用胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN45)、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和人外周全血白细胞提取RNA,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,然后对ALDH2扩增产物进行测序分析;使用DNAStar软件分析ALDH2变异体(V)的开放阅读框(ORF)。结果 ALDH2变异体1(V1)外显子2和外显子4发生可变剪接,V1外显子1的3’端和外显子3的5’端3个不同的位点发生可变剪接,V1存在8个长度超过100氨基酸的ORF。结论 ALDH2 m RNA存在多种可变剪接形式,提示其存在复杂的蛋白表达功能。 展开更多
关键词 胃肿瘤 胃肿瘤细胞 乙醛脱氢酶2 可变剪接 变异体 开放阅读框
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单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF真核表达载体的构建及表达 被引量:1
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作者 杨慧兰 齐维 +1 位作者 樊建勇 赵举峰 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第11期721-723,共3页
目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF片段真核表达载体,并在Vero细胞中进行表达。方法用PCR方法从已成功构建的pVAX-LAT重组质粒中扩增潜伏相关转录体基因ORF片段,克隆到pcDNA6/myc-his B质粒中,构建pcDNA-ORF重组质粒,双酶... 目的构建单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF片段真核表达载体,并在Vero细胞中进行表达。方法用PCR方法从已成功构建的pVAX-LAT重组质粒中扩增潜伏相关转录体基因ORF片段,克隆到pcDNA6/myc-his B质粒中,构建pcDNA-ORF重组质粒,双酶切及测序鉴定其正确性。以脂质体法瞬时转染Vero细胞,并用RT-PCR和Western blot检测其表达。结果双酶切及测序表明ORF片段大小及序列均正确,RT-PCR及Western blot显示重组质粒在Vero细胞中得到了表达。结论成功构建了pcDNA-ORF重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒Ⅱ型 潜伏相关转录体 蛋白读码框 真核表达
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靶向性抗肿瘤融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶磷酸化的影响 被引量:1
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作者 王存琳 陈虹 +2 位作者 马晓骊 王欣 黄秉仁 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期674-678,797-798,共7页
目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-M... 目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-MB-231和BGC823细胞中的转运和代谢特点,Western blot检测融合蛋白引起的细胞内ERK磷酸化水平的改变。结果融合蛋白可在细胞内累积,向细胞核周围聚集,并与细胞早期内体和晚期溶酶体共定位;融合蛋白能快速触发细胞内ERK发生磷酸化,磷酸化水平在10 min时最强,之后逐渐回落至刺激前水平,活化ERK的能力较表皮生长因子弱。结论融合蛋白EGF-E4orf4在细胞内经内体-溶酶体途径发生缓慢降解;在MDA-MB-231和BGC823细胞中,融合蛋白的作用特点存在明显差异,可能是导致融合蛋白对二者抑瘤率不同的原因之一。 展开更多
关键词 融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白 内体-溶酶体途径 胞外信号调节激酶
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Identification and characterization of a novel isoform of hepatopoietin 被引量:8
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作者 Jun Lu Wei-Min Cai,Institute of Infectious Disease,First Affiliated Hospital,Medical SchooI,Zhejiang University,Hangzhou 310003 China Wang-Xiang Xu Yi-Qun Zhan Xiao-Lin Cui Fu-Chu He Xiao-Ming Yang,Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期353-356,共4页
AIM: To isolate a novel isoform of human HPO (HPO-205) from human fetal liver Marathon-ready cDNA and characterize its primary biological function. METHODS: 5'-RACE (rapid amplification of cDNA 5' ends) was us... AIM: To isolate a novel isoform of human HPO (HPO-205) from human fetal liver Marathon-ready cDNA and characterize its primary biological function. METHODS: 5'-RACE (rapid amplification of cDNA 5' ends) was used to isolate a novel isoform of hHPO in this paper. The constructed pcDNA(HPO-205), pcDNA(HPO) and pcDNA eukaryotic expression vectors were respectively transfected by lipofectamine method and the stimulation of DNA synthesis was observed by (3)H-TdR incorporation assay. Proteins extracted from different cells were analyzed by Western blot. RESULTS: A novel isoform of hHPO (HPO-205) encoding a 205 amino acid ORF corresponding to a translated production of 23 kDa was isolated and distinguished from the previous HPO that lacked the N-terminal 80 amino acids. The dose-dependent stimulation of DNA synthesis of HepG2 hepatoma cells by HPO-205 demonstrated its similar biological activity with HPO in vitro. The level of MAPK (Mitogen-activated protein kinase) phosphorylation by Western blot analysis revealed that HPO-205 might have the stronger activity of stimulating hepatic cell proliferation than that of HPO. CONCLUSION: A novel isoform of hHPO (HPO-205) was isolated from hepatic-derived cells. The comparison of HPO-205 and HPO will lead to a new insight into the structure and function of hHPO, and provide the new way of thinking to deeply elucidate the biological roles of HPO/ALR. 展开更多
关键词 Amino Acid Sequence Cell Division Cell Fractionation Enzyme Activation Hepatocyte Growth Factor PURIFICATION Humans Liver Mitogen-Activated Protein kinases Molecular Sequence Data open reading frames Protein Isoforms Sequence Alignment Tumor Cells Cultured
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单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响 被引量:4
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作者 杨慧兰 薛礼长 +3 位作者 樊建勇 张发洲 龙朝钦 张玲 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期186-190,共5页
目的研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)凋亡的影响。方法构建重组质粒pEGPF—ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)验证目的基因的表达。... 目的研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)凋亡的影响。方法构建重组质粒pEGPF—ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察凋亡小体,Giemsa染色检测细胞核形态,噻唑蓝法(MTr法)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSSl3.0进行分析,各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。结果成功克隆HSV-2333株ORF3基因,构建pEGFP—ORF3真核表达载体,RT—PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP—ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色,显示胞核蓝染,胞质淡浅,细胞形态正常。M.rr法分析显示,细胞增殖在转染pEGFP—ORF3组(2.56±0.21)与未经任何处理的正常对照组(2.66±0.13)比较,差异无统计学意义(P〉0.05),但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组(1.65±0.11)和pEGFP—C2组(1.56±0.18),差异均有统计学意义(P〈0.05);流式细胞仪分析细胞凋亡率,转染pEGFP—ORF3组(4.03%±1.04%)与正常对照组(2.13%±0.09%)比较,差异无统计学意义(P〉0.05),但低于空质粒pEGFP—C2组(19.45%±2.05%),且差异有统计学意义(P〈0.05)。结论HSV-2LATORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。 展开更多
关键词 疱疹病毒2 开放读码框架 潜伏相关转录体 Vero细胞 顺铂 细胞凋亡
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戊型肝炎病人和实验感染戊型肝炎病毒的猕猴血清抗-HEV ORF2和ORF3的动态变化 被引量:6
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作者 庄辉 李凡 +2 位作者 朱永红 朱万孚 郭晓霞 《中华实验和临床病毒学杂志》 CSCD 1995年第4期299-302,共4页
应用人工合成的戊型肝炎病毒(HEV)基因组开放读码框架2(ORF2)和3(ORF3)两段多肽,分别建立了酶联免疫试验(EIA),检测85份实验感染HEV的猕猴和143份戊型肝炎(简称戊肝)病人血清,结果两组抗-HEV... 应用人工合成的戊型肝炎病毒(HEV)基因组开放读码框架2(ORF2)和3(ORF3)两段多肽,分别建立了酶联免疫试验(EIA),检测85份实验感染HEV的猕猴和143份戊型肝炎(简称戊肝)病人血清,结果两组抗-HEVORF2阳性率分别为70.89%和68.53%,均显著高于抗-HEVORF3(分别为40.03%和57.34%),且前者阳转时间较早,持续阳性时间也较长。虽然多数(97.3%)抗-HEVORF3阳性血清,抗-HEVORF2也为阳性,但有少数血清(2.7%)抗-HEVORF2为阴性。上述结果提示,HEV基因组ORF2和ORF3编码的蛋白含有不同的抗原表位,可引起宿主不同的免疫反应。因此,在制备抗-HEVEIA试剂时,应联合应用ORF2和ORF3多肽,以提高其灵敏度和特异性。 展开更多
关键词 戊型肝炎 戊型肝炎病毒 ELISA 基因 抗体
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稳定表达绿色荧光蛋白标记的人单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体ORF2融合蛋白的Vero细胞株的建立 被引量:1
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作者 杨慧兰 白利利 +1 位作者 樊建勇 王颖 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期566-568,共3页
目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达... 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)融合蛋白的Vero细胞株。方法构建重组真核表达质粒pEGFP-ORF2,经酶切及测序鉴定正确后,体外转染Vero细胞,经G418筛选稳定表达融合蛋白的克隆,扩大培养后,荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR检测目的基因的转录。结果重组真核表达质粒pEGFP-ORF2经酶切及测序鉴定构建正确,经G418培养20d筛选出的Vero细胞株荧光显微镜下可见融合蛋白表达,RT-PCR检测显示,转染了重组表达质粒的Vero细胞内有目的基因的表达。结论已成功建立了稳定表达EGFP-ORF2的Vero细胞株,为进一步研究HSV-2LATORF2的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 疱疹病毒2 潜伏相关转录体 开放读码框2 绿色荧光蛋白质类 VERO细胞
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单纯疱疹病毒2型潜伏感染激活模型的建立及潜伏相关转录子开放读码框架抑制后对潜伏相关转录子基因表达的影响
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作者 孙朝晖 徐少珊 +1 位作者 危敏 杨慧兰 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2011年第4期319-324,共6页
目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏感染激活中潜伏相关转录子(LAT)开放读码框架(ORF)抑制后对LAT基因表达的影响。方法 建立HSV-2潜伏感染复发的神经细胞(SHSY5Y)模型。运用相差显微镜观察HSV-2潜伏及激活后SH-SY5Y细胞形态... 目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏感染激活中潜伏相关转录子(LAT)开放读码框架(ORF)抑制后对LAT基因表达的影响。方法 建立HSV-2潜伏感染复发的神经细胞(SHSY5Y)模型。运用相差显微镜观察HSV-2潜伏及激活后SH-SY5Y细胞形态的变化。对病毒在细胞中的潜伏及激发进行PCR验证并测序。设计3对siRNA,激活诱导后转染SH-SYSY细胞,相差显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR半定量检测转染前后LAT ORF表达的改变。结果在存在60 μmol/L阿昔洛韦(ACV)的环境,HSV-2在SH-SY5Y细胞中建立潜伏状态。病毒在SH-SY5Y细胞中最长可潜伏14d。43℃ 1.5 h诱导病毒潜伏激发,而相差显微镜观察发现,病毒激发后细胞病变从24h到72 h,细胞变性、坏死的程度、数量随感染时间延长而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G(gG)基因PCR扩增及电泳结果证实病毒在细胞中的潜伏及激活。LAT ORF-siRNA转染细胞后,LAT ORF mRNA的表达水平在转染后24、36和48 h分别减少了39%、51%和60%。结论 抑制LAT ORF后能够抑制HSV-2 LAT基因的表达,为进一步研究LAT ORF在病毒潜伏感染复发中的作用提供了依据。 展开更多
关键词 开放读码框架 疱疹病毒2 RNA干扰 潜伏相关转录子 SH-SY5Y细胞
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Development of two TaqMan real-time reverse transcription-PCR assays for the detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 被引量:4
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作者 Yiwei Liu Yingying Wang +6 位作者 Xinming Wang Yan Xiao Lan Chen Li Guo Jianguo Li Lili Ren Jianwei Wang 《Biosafety and Health》 2020年第4期232-237,共6页
The outbreak of coronavirus disease 2019(COVID-19)in Wuhan,China,was caused by a novel coronavirus(CoV),named severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2).The rapid detection of viral nucleic acids is c... The outbreak of coronavirus disease 2019(COVID-19)in Wuhan,China,was caused by a novel coronavirus(CoV),named severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2).The rapid detection of viral nucleic acids is critical for the early identification of infected cases.We have developed two TaqMan real-time reverse transcription-PCR assays to detect SARS-CoV-2.The designed primers target the nucleocapsid(N)and open reading frame(ORF)1b gene regions,where the probes discriminate SARS-CoV-2 from other human and animal CoVs.The sensitivities are one genomic copy per reaction for theN gene assay and ten copies for the ORF 1b gene assay.The overall linear detection ranges are 1–10^(6)and 10–10^(6)copies per reaction for the N gene assay and the ORF 1b gene assay,respectively.Surveillance of 23 suspected COVID-19 patients demonstrated that SARS-CoV-2 could be detected from 100%(23/23)and 62.5%(16/23)of clinical specimens by the N gene assay and the ORF 1b gene assay,respectively.All of the samples not detected by the ORF 1b gene assay were throat swabs,indicating a lower viral load in the upper respiratory tract and the relatively lower sensitivity of the ORF 1b gene assay.The assays developed in the present study offer alternative diagnostic tests for COVID-19. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 Real-time RT-PCR NUCLEOCAPSID open reading frame 1b
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2株新型冠状病毒全基因测序及插入和终止突变分析
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作者 韩淑琪 《预防医学论坛》 2022年第5期330-334,共5页
目的 分析2株新型冠状病毒基因进化变异情况及分子特征。方法 利用二代测序技术,对2份新型冠状病毒核酸检测阳性样本进行全基因组测序。利用生物信息学软件对基因序列进行分析。结果 获得长度分别为29 826 bp和29 837 bp的两条新型冠状... 目的 分析2株新型冠状病毒基因进化变异情况及分子特征。方法 利用二代测序技术,对2份新型冠状病毒核酸检测阳性样本进行全基因组测序。利用生物信息学软件对基因序列进行分析。结果 获得长度分别为29 826 bp和29 837 bp的两条新型冠状病毒全基因序列,与Wuhan-Hu-1株基因序列同源性分别为99.96%和99.97%。两条序列的N蛋白均发生S194L变异,N蛋白S194磷酸化位点和N192潜在糖基化位点消失。其中序列1的3 647~3 648 bp之间插入了CCCAC序列,导致非结构蛋白3(NSP3)发生移码突变,即编码一种新的无跨膜结构、含有完整泛素样结构域的NSP3Δ蛋白。序列2发生了C27978T突变,导致开放读码框8(ORF8)发生终止突变,即编码1个新的仅含28个氨基酸的截短型ORF8蛋白。结论 新型冠状病毒进化变异方式复杂多样,插入突变和终止突变可能改变相关蛋白的结构和性质,应加大新型冠状病毒的病原学监测力度。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 全基因组测序 突变 非结构蛋白3 开放读码框8
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