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Studies on Prunus Necrotic Ringspot Virus (PNRSV) Occurring on Lily 被引量:3
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作者 HAN Li-juan LIU Wen-hong 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第10期1201-1208,共8页
This study was to molecular identify Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) occurring on lily. Lily corms were randomly selected and grown in the greenhouse. The total RNAs were extracted from younger leaves, and pa... This study was to molecular identify Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) occurring on lily. Lily corms were randomly selected and grown in the greenhouse. The total RNAs were extracted from younger leaves, and partial amplification of the CP gene was performed by RT-PCR with primer pairs specific for PNRSV. An expected cDNA fragment of about 450 bp was amplified from lily, cloned into pGEM-T-easy vector, sequenced, and shared 84.5-99.1% homology with the 27 PNRSV isolates reported previously at the nucleotide level, indicating that lily is a new natural host of PNRSV. 展开更多
关键词 LILY Prunus necrotic ringspot virus RT-PCR IDENTIFICATION
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Proteomics-Based Analysis of <i>Phalaenopsis amabilis</i>in Response toward <i>Cymbidium</i>Mosaic Virus and/or <i>Odontoglossum</i>Ringspot Virus Infection
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作者 Tongfei Lai Yanfu Deng +5 位作者 Pengchen Zhang Zhijuan Chen Feng Hu Qi Zhang Yihua Hu Nongnong Shi 《American Journal of Plant Sciences》 2013年第9期1853-1862,共10页
Stress response at the protein level to viral infection in orchid plants has not been extensively investigated to date. To understand the proteomic basis of Phalaenopsis amabilis’s responses to Cymbidium Mosaic virus... Stress response at the protein level to viral infection in orchid plants has not been extensively investigated to date. To understand the proteomic basis of Phalaenopsis amabilis’s responses to Cymbidium Mosaic virus (CymMV), and/or Odontoglossum ring spot virus (ORSV), the total proteins were extracted from Phalaenopsis amabilis leaves infected with CymMV, ORSV, or both respectively. Differentially expressed proteins were identified by two-dimensional electrophoresis, and 27 of these proteins that had significant changes were further examined by mass spectrometry. Comparing CymMV-infected leaves with mock-inoculated ones, 2 proteins were significantly up-regulated, 9 were significantly down-regulated and 1 previously undetected protein was identified. 10 proteins were significantly up-regulated, 3 significantly down-regulated and 1 previously undetected protein was identified in ORSV-infected leaves. 6 proteins were significantly up-regulated and 9 significantly down-regulated proteins were found in co-infected leaves. These identified proteins are involved in disease resistance, stress response, transcriptional regulation, energy metabolism, protein modification and the previously unknown proteins were not involved with known protein pathways. Proteins significantly up-regulated were ATP sulfurylase, down-regulated proteins included glutamate decarboxylase isozyme 2, RNA polymerase alpha subunit and chloroplastic peptide deformylase 1A were proteins with similar alteration trend after all infection treatments. Significantly up-regulated were Thioredoxin H-type and down-regulated Cytosolic phosphoglycerate kinase I which were proteins that have been shown to be specifically regulated by the infection with CymMV. Significantly up-regulated were proteins like Rubisco large subunit, Triosephosphate isomerase, NADP-specific isocitrate dehydrogenase and Cinnamoyl CoA reductase CCR2 by the infection of ORSV. Protein regulation in coinfected leaves followed a pattern similar to that of any of the single virus infection results. 展开更多
关键词 PHALAENOPSIS amabilis Two-Dimensional Electrophoresis Mass Spectrometry CYMBIDIUM Mosaic VIRUS Odontoglossum ringspot VIRUS
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番木瓜环斑病毒甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆
3
作者 刘莉铭 彭斌 +3 位作者 康保珊 吴会杰 刘茜 古勤生 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第2期8-14,共7页
番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序... 番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为74.60%~97.80%和85.30%~98.50%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,HaNHK10与来自中国的所有分离物均聚集于II组中,并与中国山东的西葫芦分离物PRSV-SD亲缘关系最近。接种试验显示,HaNHK10分离物的全长cDNA克隆具有侵染性,它能系统侵染甜瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦和瓠瓜6种作物,经接种产生的病毒后代也能够通过摩擦接种侵染植株。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 甜瓜分离物 基因组 侵染性克隆
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TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒
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作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 许凤 苏艳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-227,239,共10页
为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标... 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 TAQMAN探针 RT-QPCR 兰花
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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
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作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 RNA介导的病毒抗性
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Variation in the Coat Protein Gene of Papaya ringspot Virus Isolates from Multiple Locations of China 被引量:1
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作者 Jun-Ya Wei De-Bing Liu +1 位作者 Xiao-Ying Li Peng Zhou 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2007年第7期1062-1069,共8页
The potyvirus Papaya ringspot virus (PRSV) is an important pathogen of papaya that causes severe losses in economic crops for papaya production globally. The coat protein (CP) genes of five PRSV isolates originati... The potyvirus Papaya ringspot virus (PRSV) is an important pathogen of papaya that causes severe losses in economic crops for papaya production globally. The coat protein (CP) genes of five PRSV isolates originating from different locations in China were cloned and sequenced. The CP-coding region varied in size from 864-873 nucleotides, encoding proteins of 288-291 amino acids. The five Chinese isolates of PRSV have been characterized as papaya-infecting (PRSV-P). The CP sequences of the Chinese isolates were compared with those of previously published PRSV isolates originating from different countries at amino acid levels. A number of KE repeat boxes in the N terminus of the PRSV-CP were found in all Chinese isolates. The phylogenetic branching pattern revealed that there was certain extended grouping between geographic locations, and the Asian type probably represents the oldest population of PRSV. The information of CP genes will be useful in designing and developing durable virus resistant-PRSV transgenic papaya in China. Meanwhile broad-spectrum-virus resistant, strongly resistant-PRSV and good safe papaya lines are required. 展开更多
关键词 coat protein gene Papaya ringspot virus isolates sequence analysis variation.
原文传递
博落回生物碱与茶皂素对2种茶叶病原菌的联合毒力测定 被引量:1
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作者 梁浩 杜晓静 +2 位作者 钱玺丞 贾长青 郁建生 《天津农业科学》 CAS 2023年第4期47-51,共5页
为探明博落回生物碱与茶皂素混配对茶树轮斑病(Pseudopestalotiopsis camellia-sinensis)和茶树炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)的联合毒力,通过生长速率法测定了博落回生物碱和茶皂素对2种茶叶病原菌EC_(50)、毒性比率,以及最... 为探明博落回生物碱与茶皂素混配对茶树轮斑病(Pseudopestalotiopsis camellia-sinensis)和茶树炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)的联合毒力,通过生长速率法测定了博落回生物碱和茶皂素对2种茶叶病原菌EC_(50)、毒性比率,以及最佳配比的联合毒力。结果表明:博落回生物碱对茶树轮斑病和茶树炭疽病的EC_(50)分别为6.219、51.674μg·mL^(-1);茶皂素对茶树轮斑病和茶树炭疽病的EC_(50)分别为416.435、453.925μg·mL^(-1);通过毒性比率筛选和联合毒力测定,博落回生物碱与茶皂素质量比为1∶28.7的混剂对茶树轮斑病菌表现为增效作用,增效系数为1.545;博落回生物碱与茶皂素质量比为1∶3.8、1∶5.9、1∶8.8、1∶13.2的混剂对茶树炭疽病菌表现出较好的增效作用,增效系数分别为2.698、2.345、2.974、1.533。综上可知,博落回生物碱与茶皂素复配对茶树轮斑病和茶树炭疽病具有明显的协同增效作用,本研究可为博落回生物碱与茶皂素复配型植物源农药对茶叶病害防控提供依据。 展开更多
关键词 博落回生物碱 茶皂素 茶树轮斑病菌 茶树炭疽病菌 联合毒力测定
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上海辰山植物园兰花病毒病调查
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作者 李丽 于翠 +1 位作者 黄卫昌 倪子轶 《绿色科技》 2023年第23期114-118,共5页
采用DAS-ELISA、免疫层析胶体金试纸条、RT-PCR和小RNA深度测序检测方法,对上海辰山植物园53属124份兰花样品的病毒种类、被侵染兰花种类、症状进行了全面调查。结果表明:所测样品中仅含建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV),CymMV... 采用DAS-ELISA、免疫层析胶体金试纸条、RT-PCR和小RNA深度测序检测方法,对上海辰山植物园53属124份兰花样品的病毒种类、被侵染兰花种类、症状进行了全面调查。结果表明:所测样品中仅含建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV),CymMV、ORSV和复合侵染的感染率分别46%、31%和23%,症状主要为黄绿斑驳嵌纹、黑色凹陷坏疽、叶肉皱缩变色、白拉丝等,感染CymMV、ORSV病毒的兰花分别有29、19个属,其中石斛、卡特兰、树兰、文心兰等属兰花病毒病的感染率较高,并据此提出了相应的防控建议。 展开更多
关键词 上海辰山植物园 剑兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 感染率 感染症状
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李属坏死环斑病毒扬州分离物CP基因的原核表达及抗血清制备
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作者 王智磊 纪开燕 +5 位作者 赵景奎 丁诗文 徐小伟 秦朗 张坤 贺振 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期140-146,共7页
李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a... 李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-CP^(PNRSV),转化大肠埃希菌Rosetta菌株,IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳检测显示,在分子量约25 ku处有蛋白质条带,符合预期大小。镍柱亲和纯化PNRSV CP蛋白,以其纯化蛋白质免疫健康新西兰白兔,制备多克隆抗血清。Western blot、ELISA、Dot blot检测结果显示,制备的抗血清能检测到PNRSV CP基因在感病植物叶片中表达,而在健康植株中未检测到;制备的抗血清滴度稀释至1∶64000时,仍能与纯化蛋白质发生特异性反应。综上,制备的PNRSV抗血清特异性强、效价高,可用于PNRSV的快速检测。 展开更多
关键词 李属坏死环斑病毒 CP蛋白 原核表达 抗血清
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朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP快速检测体系的建立
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作者 赵正婷 盖晓彤 +3 位作者 张俊蕾 夏振远 姜宁 刘雅婷 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2023年第3期39-46,共8页
为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、... 为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、内外引物浓度比等进行逐一优化,建立了HCRV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为P1,最适反应温度为64℃,Betaine、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为0.8、0.2、6 mmol/L,最佳内外引物浓度比为5∶1,最佳反应时间50 min。检测结果显示优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的100倍。本研究为HCRV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。 展开更多
关键词 朱顶红褪绿环斑病毒 RT-LAMP 特异性 灵敏度
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齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 徐匆 黄皓 +3 位作者 黄晓彦 陈彦 李昀哲 郑芝波 《贵州农业科学》 CAS 2023年第4期86-92,共7页
【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序... 【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序列保守区,使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针,建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒,并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定;以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测;以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测;用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板,其余模板检测结果为阴性,说明检测方法具有特异性;该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数为130;大田兰花样品感染齿兰环斑病毒的检出率为100%。【结论】一步法RT-qPCR是一种特异性强、灵敏度高,且适合监测实际生产过程中兰花感染齿兰环斑病毒情况的检测方法。 展开更多
关键词 兰花 齿兰环斑病毒(ORSV) 反转录-荧光定量PCR(RT-qPCR) 外壳蛋白(cp)基因
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香石竹斑驳病毒属简并引物RT-PCR检测方法的建立
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作者 廖富荣 陈红运 +5 位作者 沈建国 方志鹏 黄蓬英 陈青 林玲玲 洪钧 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2288-2301,共14页
【目的】使用简并引物RT-PCR方法并结合序列测定与分析,为甲型香石竹斑驳病毒属(Alphacarmovirus)、乙型香石竹斑驳病毒属(Betacarmovirus)和丙型香石竹斑驳病毒属(Gammacarmovirus)病毒建立一种快速、灵敏、广谱的检测鉴定方法。【方... 【目的】使用简并引物RT-PCR方法并结合序列测定与分析,为甲型香石竹斑驳病毒属(Alphacarmovirus)、乙型香石竹斑驳病毒属(Betacarmovirus)和丙型香石竹斑驳病毒属(Gammacarmovirus)病毒建立一种快速、灵敏、广谱的检测鉴定方法。【方法】通过基因组序列的多重比对分析,在依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)基因的保守区域设计1对简并引物Carmo-F2/Carmo-R2,在引物5′端分别加入非互补的富含AT序列(AATAAATCATAA)形成引物Carmo-F2a/Carmo-R2a,测试简并引物RT-PCR方法的广谱性、特异性和灵敏度,并对PCR产物进行测序、序列分析和系统发育分析。利用该方法对来自厦门的扶桑(Hibiscusrosa-sinensis)样品进行病毒检测。【结果】利用Carmo-F2/Carmo-R2和Carmo-F2a/Carmo-R2a两对引物建立的RT-PCR方法,扩增甲型、乙型和丙型香石竹斑驳病毒属病毒的部分RdRp基因,扩增片段分别约为500和550 bp。该方法成功用于检测甲型香石竹斑驳病毒属的香彩雀花碎色病毒(angelonia flower break virus,AnFBV)、小花矮牵牛斑驳病毒(calibrachoa mottle virus,CbMV)、香石竹斑驳病毒(carnation mottle virus,CarMV)、天竺葵花碎色病毒(pelargonium flower break virus,PFBV),乙型香石竹斑驳病毒属的木槿褪绿环斑病毒(hibiscus chlorotic ringspot virus,HCRSV),丙型香石竹斑驳病毒属的甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV),显示出良好的广谱性。特异性检测表明,简并引物Carmo-F2/Carmo-R2和Carmo-F2a/Carmo-R2a在玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV;Machlomovirus)、天竺葵线纹病毒(pelargonium line pattern virus,PLPV;Pelarspovirus)、香石竹环斑病毒(carnation ringspot virus,CRSV;Dianthovirus),健康的西瓜、甜瓜、南瓜、大豆、豌豆植物未扩增到预期大小的条带。灵敏度检测表明,简并引物Carmo-F2/Carmo-R2最低可检测到10-2稀释液,简并引物Carmo-F2a/Carmo-R2a可检测到10-3稀释液,在5′端加入非互补的富含AT序列可以提高简并引物RT-PCR检测方法的灵敏度。BLAST分析表明,测定的序列均与相应病毒种类具有最高序列一致性。部分RdRp基因氨基酸序列的系统发育分析结果符合目前通读病毒亚科(Procedovirinae)病毒的分类情况,且可以把病毒鉴定到种的水平。采集13份疑似病毒症状的扶桑样品,均检出木槿褪绿环斑病毒。【结论】基于简并引物Carmo-F2/Carmo-R2和Carmo-F2a/Carmo-R2a的RT-PCR方法,可用于甲型、乙型和丙型香石竹斑驳病毒属病毒的筛查检测,结合序列分析及系统发育分析可进行病毒种类的快速鉴定,并有助于发现新的病毒种类。厦门扶桑植物受到木槿褪绿环斑病毒的侵染。 展开更多
关键词 甲型香石竹斑驳病毒属 乙型香石竹斑驳病毒属 丙型香石竹斑驳病毒属 简并引物 RT-PCR 扶桑 木槿褪绿环斑病毒
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转基因番木瓜抗病性测定和纯合系的获得 被引量:9
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作者 冯黎霞 阮小蕾 +2 位作者 周国辉 张曙光 李华平 《仲恺农业技术学院学报》 CAS 2005年第4期12-15,20,共5页
分别对转番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)复制酶基因(Trp)的T3、T4代番木瓜(Carica pa-payaL.)品系在苗期进行攻毒试验和PCR分子生物学分析.结果表明,在苗期T3、T4代分子检测阳性株均高抗PRSV的Ys株系,证实Trp基因能够在后... 分别对转番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)复制酶基因(Trp)的T3、T4代番木瓜(Carica pa-payaL.)品系在苗期进行攻毒试验和PCR分子生物学分析.结果表明,在苗期T3、T4代分子检测阳性株均高抗PRSV的Ys株系,证实Trp基因能够在后代中稳定遗传.除品系Trp-6-2外,其它所有T3、T4代自交植株仍有基因分离.Trp-6-2的自交株和其T4杂交后代,苗期攻毒试验均表现抗病,PCR检测复制酶基因均为阳性,所转基因没有发生分离,可以初步推定Trp-6-2为转基因的纯合系.大田病情调查结果表明,T3代在定植田间的前5个月内,转基因植株均高抗PRSV.但在定植5个月后发现一个转基因品系38株中有3株表现发病. 展开更多
关键词 番木瓜(Carica PAPAYA L.) 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus PRSV) 转基因 抗病性测定
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百合珠芽组培及脱毒研究 被引量:97
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作者 赵祥云 程廉 +2 位作者 邢尤美 谢丽萍 贾学文 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期284-288,共5页
对带有烟草环斑病毒(TRSV)的淡黄花白合(Lilium sulphureum Baker)珠芽生长点进行组培脱毒。经试验得出,珠芽生长点诱导成愈伤组织的最适培养基为MS+BA0.5+2,4-D0.25mg/l,诱导率为92.8%。适合幼芽分化的培养基为MS+BA1.5+NAA0.1+KT0.1m... 对带有烟草环斑病毒(TRSV)的淡黄花白合(Lilium sulphureum Baker)珠芽生长点进行组培脱毒。经试验得出,珠芽生长点诱导成愈伤组织的最适培养基为MS+BA0.5+2,4-D0.25mg/l,诱导率为92.8%。适合幼芽分化的培养基为MS+BA1.5+NAA0.1+KT0.1mg/l,分化率为71.4%。适合生根的培养基为1/2MS+IBA0.25mg/l,生根率为100%。从外植体到发育成幼苗约需120~150天。将培养出的幼苗在6种指示植物上进行脱毒鉴定,结果表明,0.3~0.8mm长的珠芽生长点其诱导的幼苗成功地脱去了百合的烟草环斑病毒。 展开更多
关键词 百合 珠芽 脱毒 组织培养
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RT-PCR方法检测烟草环斑病毒的研究 被引量:21
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作者 孔宝华 蔡红 +3 位作者 陈海如 唐慧 沐咏民 刘进元 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2001年第1期13-15,共3页
根据烟草环斑病毒 (TRSV)外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2 ,用感病及健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR试验 ,感病组织中扩增出了 6 0 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件 ,建立了RT -PCR检测烟草环... 根据烟草环斑病毒 (TRSV)外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2 ,用感病及健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR试验 ,感病组织中扩增出了 6 0 0bp的目的片段 ,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件 ,建立了RT -PCR检测烟草环斑病毒 (TRSV)的方法。 展开更多
关键词 烟草 环斑病毒 RT-PCR 检测方法 外壳蛋白基因非编序列设计
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番木瓜抗环斑病毒突变体抗性遗传及RAPD标记 被引量:12
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作者 周国辉 李华平 +3 位作者 张曙光 饶雪琴 王振中 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期157-163,共7页
:60 Coγ-射线处理番木瓜种子 ,从诱变一代中筛选到 1株耐环斑病毒 ( PRSV)的变异植株 ( M1) ,其侧芽组培后代 ( VM1)部分植株也表现出了耐病性 ,以 VM1为母本进行回交 ,人工接种病毒鉴定回交后代 ( BM2 )的抗病性 ,结果为 :在出自部分... :60 Coγ-射线处理番木瓜种子 ,从诱变一代中筛选到 1株耐环斑病毒 ( PRSV)的变异植株 ( M1) ,其侧芽组培后代 ( VM1)部分植株也表现出了耐病性 ,以 VM1为母本进行回交 ,人工接种病毒鉴定回交后代 ( BM2 )的抗病性 ,结果为 :在出自部分回交果实的 BM2 群体中 ,包含有对 PRSV Ys和 Vb株系具抗性的植株 ,抗感分离比为 1∶ 1,但未发现抗 Sm株系的植株 ;BM2 抗病两性株自交或以其为母本进行回交 ,分别获得诱变第三代 ( M3)及回交诱变第三代 ( BM3) ,人工接种 PRSV Ys株系 ,结果表明 ,BM3抗感分离比也为 1∶ 1,因而认为辐射处理突变产生了具 PRSV株系专化性的显性抗病基因 ,命名为 Rys;但 M3抗感分离比不符合显性单基因 3∶ 1理论值 ,认为是单倍体选择的结果。运用 BSA法 ,在 BM2 中寻找到一个与抗病性密切相关的 RAPD标记 ,经在 BM2 、M3及 BM3抗感群体中检验 ,可作为抗病育种的辅助选择标记。Rys是番木瓜栽培种中发现的第一个抗 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 抗病突变体 RAPD分子标记 抗性遗传
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RT-PCR检测齿兰环斑病毒技术的建立 被引量:13
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作者 明艳林 李梅 +1 位作者 郑国华 吴祖建 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第3期345-347,共3页
根据已报道的齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白(CP)基因序列,进行同源性比较,设计了一对各为20bp的引物.通过优化试验条件,建立了稳定的RT-PCR检测ORSV体系,其检测灵敏度可达0.01ng·mL-1.将此方法与ELISA进行比较,结果表明,RT-PCR检测... 根据已报道的齿兰环斑病毒(ORSV)外壳蛋白(CP)基因序列,进行同源性比较,设计了一对各为20bp的引物.通过优化试验条件,建立了稳定的RT-PCR检测ORSV体系,其检测灵敏度可达0.01ng·mL-1.将此方法与ELISA进行比较,结果表明,RT-PCR检测灵敏度比ELISA高1000倍.应用这两种方法同时检测了138瓶兰花组培苗样品,其中RT-PCR检测出32瓶兰花组培苗感染病毒,而ELISA只能检测其中的18瓶. 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 检测 RT-PCR 外壳蛋白 序列分析 同源性 ELISA 兰科植物
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番木瓜环斑病毒复制酶基因的克隆和序列分析 被引量:8
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作者 叶长明 陈谷 +2 位作者 黄俊潮 于湄 李宝健 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第6期125-127,共3页
用RT-PCR技术从PRV-AL中分离到复制酶(RP)基因,将基因克隆进载体pUC18,用双脱氧链终止法测定了基因序列,表明其全长为1602bp,与国内外报道的HA5-1、YK和Sm的RP基因相比,同源性分别达82.... 用RT-PCR技术从PRV-AL中分离到复制酶(RP)基因,将基因克隆进载体pUC18,用双脱氧链终止法测定了基因序列,表明其全长为1602bp,与国内外报道的HA5-1、YK和Sm的RP基因相比,同源性分别达82.80%,95.07%和91.83%. 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 复制酶 基因 无性系 序列分析
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番茄环斑病毒HC-RT-PCR-ELISA检测 被引量:11
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作者 赵文军 安德荣 +2 位作者 朱水芳 黄文胜 陈红运 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期174-179,共6页
番茄环斑病毒 (ToRSV)是我国对外检疫一类有害生物 ,目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法 ,但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象 ,而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性 ,这两方面限制了PCR技术在... 番茄环斑病毒 (ToRSV)是我国对外检疫一类有害生物 ,目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法 ,但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象 ,而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性 ,这两方面限制了PCR技术在对外检疫中的应用。利用共价结合在PCR管壁上的引物特异性杂交诱捕核酸粗提液中的靶标核酸 ,洗掉杂质及抑制物质 ,在同一管内作RT PCR ,凝胶电泳检测液相产物的同时对固相产物进行杂交检测 ,提高了结果的可靠性及灵敏度。利用所建立的HC RT PCR ELISA成功地从法国进口葡萄苗中检出ToRSV。 展开更多
关键词 HC-RT-PCR-ELISA检测 番茄环斑病毒 植物检疫 杂交诱捕PCR
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番木瓜环斑病毒畸叶株系的CP基因克隆和序列分析 被引量:6
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作者 贺国安 肖火根 +2 位作者 张曙光 李华平 范怀忠 《中国病毒学》 CAS CSCD 2001年第4期369-372,共4页
采用RT PCR方法合成了本研究室保存的番木瓜畸叶病毒 (PMaLV)的外壳蛋白 (CP)基因 ,将其CP基因克隆进Promega公司的pGEM -TandpGEM -TEasyVectorSystem(简称T -载体 ) ,并进行了序列分析。结果表明 ,PMaLVCP基因核苷酸序列全长为 86 1nt... 采用RT PCR方法合成了本研究室保存的番木瓜畸叶病毒 (PMaLV)的外壳蛋白 (CP)基因 ,将其CP基因克隆进Promega公司的pGEM -TandpGEM -TEasyVectorSystem(简称T -载体 ) ,并进行了序列分析。结果表明 ,PMaLVCP基因核苷酸序列全长为 86 1nt,推导其编码 2 87个氨基酸。与番木瓜环斑病毒 (PRSV)美国夏威夷HA株系和澳大利亚W株系的CP基因相比 ,在第 6 6nt处开始连续缺失 3个核苷酸。与PRSV的华南Ys、Sm和G株系以及夏威夷的HA和澳大利亚的W株系相比 ,其CP基因序列同源率分别为 96 %、98%、95 %、89%和 89%。其推导的氨基酸序列同源率分别为 98%、97%、97%、96 %和 95 %。此结果表明 ,PMaLV属于PRSV的一个株系 ,不是一种新病毒。因此 ,我们称其为番木瓜环斑病毒畸叶株系 (ML株系 )。 展开更多
关键词 番木瓜畸叶病毒 番木瓜环斑病毒 番木瓜环斑病毒畸叶株系 CP基因克隆 序列分析
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