短链氯化石蜡通过ROS/NF-κB通路诱导PC12细胞神经毒性

目的:研究短链氯化石蜡(SCCPs)神经毒性机制。方法:显微镜下观察和CCK-8检测SCCPs不同浓度(0、50、100、200、300μg/L)暴露24 h的PC12细胞的生长密度和细胞活力;活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)检测细胞氧化损伤情况;Western blot检测iNOS、COX-2、p65、p-p65蛋白表达;qRT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子转录水平。结果:显微镜观察和CCK-8结果显示PC12细胞的密度和细胞活力在200μg/L SCCPs暴露时降低(P<0.01),细胞内ROS和MDA相对水平在200μg/L SCCPs暴露时升高(P<0.001)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预下,NF-κB通路相关蛋白和mRNA表达被抑制(P<0.05)。结论:SCCPs可通过ROS/NF-κB通路诱导PC12细胞神经毒性。

ROS-NF-κB-p38MAPK通路探索榄香烯联合硼替佐米抗多发性骨髓瘤的机制研究

目的:基于ROS-NF-κB-p38MAPK信号通路探讨榄香烯(ELE)联合硼替佐米(BTZ)抗多发性骨髓瘤的作用机制。方法:CCK-8法检测细胞活性。SPF级裸鼠构建人源性骨髓瘤移植瘤模型,设立对照组(NC组)、BTZ组、ELE组及联合处理组。Tunel染色观察肿瘤组织凋亡,Western Blot检测Caspase-3、Bcl-2、NF-κB及p38 MAPK表达,流式细胞术检测人源性骨髓瘤U266细胞周期、凋亡及活性氧(ROS)表达。结果:当4.0μmol/L ELE联合50 nmol/L BTZ处理U266时,细胞活性均显著低于其他组。BTZ组、ELE组及联合组裸鼠肿瘤体积明显小于NC组(P<0.05),联合组体积最小;Tunel染色显示NC组凋亡水平低于BTZ组、ELE组及联合组(P<0.05),联合组最低;Western Blot结果显示BTZ组、ELE组及联合组Caspase-3及p38 MAPK表达显著高于NC组,Bcl-2及NF-κB表达显著低于NC组。BTZ组、ELE组及联合组细胞凋亡水平及细胞内ROS表达显著高于NC组(P<0.05)。结论:ELE可能通过调控ROS/NF-κB/p38 MAPK信号通路增强BTZ促骨髓瘤细胞凋亡,从而实现其抗肿瘤作用。

豨莶草提取物对膝骨关节炎大鼠软骨组织损伤及NOX2/ROS/NF-κB通路的影响

目的观察豨莶草提取物对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织病理损伤的影响,并探讨其与NOX2/ROS/NF-κB通路的关系。方法将75只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和豨莶草低、中、高剂量组各15只。模型组和豨莶草不同剂量组向大鼠后肢双侧膝关节腔注射碘乙酸钠构建KOA模型;假手术组注射生理盐水。造模后,豨莶草低、中、高剂量组分别给予75、150、300 mg/kg豨莶草提取物经口灌服,假手术组和模型组给予生理盐水经口灌服。处死大鼠,取后肢双侧膝关节,用番红固绿法染色,采用Mankin评分评价关节软骨损伤情况;取后肢双侧膝关节软组织,采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,氮蓝四唑法检测SOD含量;RT-PCR法检测膝关节组织NOX2、NF-κB mRNA表达,Western blotting法检测膝关节组织NOX2、NF-κB蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组Mankin评分升高,MDA含量升高,SOD含量降低,NOX2、NF-κB mRNA及蛋白表达均升高(P均<0.05);与模型组相比,豨莶草低、中、高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2和NF-κB mRNA及蛋白表达均降低,中、高剂量组SOD含量升高(P均<0.05);与低剂量组相比,中、高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2 mRNA和蛋白、NF-κB蛋白表达量及高剂量组NF-κB mRNA降低,高剂量组SOD含量升高(P均<0.05);与中剂量组相比,高剂量组Mankin评分、MDA含量、NOX2 mRNA和蛋白、NF-κB蛋白表达量降低,SOD含量升高(P均<0.05)。结论豨莶草提取物能够减轻KOA大鼠关节软骨组织的病理性损伤,其机制可能与调节NOX2/ROS/NF-κB通路有关。

银杏内酯B对小鼠腹膜巨噬细胞体外增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响

目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本研究中GB对小鼠腹膜巨噬细胞的增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法:分离纯化小鼠腹膜巨噬细胞(PM),以不同浓度的GB(1.25～20μmol/L)预孵后加以脂多糖(LPS)刺激并继续培养至相应时间点;以MTT法检测GB对PM活力及LPS诱导的增殖的影响;以荧光微球的摄入结合流式细胞术评价PM的吞噬作用;以Griess法检测GB对LPS诱导的NO释放的影响;以H2DCFDA标记结合流式细胞术检测PM的ROS水平。结果:LPS刺激后24 h时PM吞噬能力增强,ROS水平显著上升,并释放大量NO,至48 h时PM增殖明显,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在LPS刺激前对PM进行4 h预孵处理可以大幅下调PM对荧光微球的吞噬作用,显著降低PM的ROS水平及NO释放量,并能有效抑制PM的增殖。结论:GB能有效抑制LPS诱导的细胞增殖、吞噬作用、产生NO和ROS的水平,凭借GB对巨噬细胞的体外行为和功能的出色调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。

补充维生素C对剧烈运动后人体血清炎症因子水平的影响及ROS/NF-κB信号通路在其中的作用

目的:探讨补充维生素C对剧烈运动后人体血清炎症因子水平的影响及ROS/NF-κB信号通路在其中的作用。方法:随机选取20名健康男性在校大学生,分为实验组和对照组。运动开始前分别给予两组大学生维生素C片3.0 g和安慰剂口服。两组大学生分别按照75%VO2max进行跑台运动,持续时间为1 h,并于运动干预开始前10 min、结束后0 h和2 h分别采集静脉血,分离血清和血细胞,并利用ELISA法检测外周血IL-1、IL-6、IL-8含量;由血细胞中分离白细胞后,分别测定白细胞中活性氧(ROS)水平和IKKα激酶活性。结果:剧烈运动后,两组大学生外周血白细胞均明显升高,组间无明显差异;对照组外周血IL-1、IL-6、IL-8含量均表现出逐渐升高的趋势,而实验组未表现出此趋势,其中IL-1水平运动前后无明显变化。此外,两组大学生外周血白细胞中IKKα活性均表现出先升后降的变化趋势,其中实验组升高趋势明显低于对照组。而白细胞中ROS水平却表现出逐渐升高的趋势,其中以对照组升高趋势更明显,组间差异有统计学意义。结论:剧烈运动可以引起白细胞中ROS/NF-κB信号通路活化和血清炎症因子水平升高,而运动前补充维生素C可以有效抑制白细胞中ROS/NF-κB信号通路活化介导的血清炎症因子水平升高。

艾灸对实验性类风湿性关节炎家兔滑膜组织NLRP3炎性小体激活因素Cathepsin-B、ROS水平的影响

目的观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)的抗炎消肿作用,研究艾灸对实验性RA家兔滑膜NLRP3 mRNA、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)mRNA的表达和活性氧(ROS)含量的影响,探索艾灸对RA中NLRP3炎性小体激活状态的影响。方法日本大耳白兔24只,按体质量、性别分层,随机分为空白对照组(简称空白组)、RA模型组(简称模型组)、艾灸治疗组(简称艾灸组),每组8只。将弗氏完全佐剂(FCA)按0.5 mL/kg体质量剂量注入模型组、艾灸组动物双膝关节腔内。同法将等量的无菌生理盐水注入空白组动物作为对照。艾灸治疗艾灸组动物双侧“肾俞”“足三里”,每穴各5壮,每日1次。6 d为1个疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1 d。治疗后观测各家兔左、右膝关节周长,治疗后第21天进行膝关节滑膜组织取材,采用RT-PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织中NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达;采用ROS检测试剂盒检测各组家兔膝关节滑膜组织中ROS的含量。结果造模后白兔双膝关节周长较空白组明显增高(P<0.01);艾灸治疗后白兔双膝关节周长较模型组显著下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组的NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达和ROS荧光强度均显著升高(P<0.01);而与模型组比较,艾灸组的NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达和ROS荧光强度均降低明显(P<0.05)。结论艾灸对实验性RA家兔膝关节滑膜炎症过程具有明显的抑制作用;艾灸“肾俞”“足三里”穴通过下调Cathepsin-B的表达和抑制ROS的生成从而抑制NLRP3的激活可能是艾灸治疗RA改善其病理过程的机制之一。

PDGF-BB对UVB诱导的光老化成纤维细胞中ROS的影响

目的:探讨PDGF-BB对紫外线诱导的光老化成纤维细胞中ROS的影响及抑制氧化应激的作用特点。方法:利用CCK-8法检查不同浓度PDGF-BB对成纤维细胞增殖活性的影响,筛选治疗最佳浓度;PDGF-BB预处理成纤维细胞48h后,利用UVB体外重复照射构建成纤维细胞光老化模型;利用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度;装载活性氧(ROS)检测探针,利用荧光显微镜、流式细胞技术观察和检测各组ROS的表达。结果:PDGF-BB预处理辐照组(UVB+PDGF-BB组)中β-半乳糖苷酶染色细胞的着色比率低于UVB组,差异有统计学意义(P<0.05)。在UVB诱导的应激性老化中,UVB组ROS表达显著高于正常组(P<0.05);PDGF-BB预处理辐照组(UVB+PDGF-BB组)ROS表达显著低于UVB组(P<0.05)。结论:PDGF-BB可降低UVB介导的光老化成纤维细胞中ROS的表达,减少氧化应激反应,可在一定程度上缓解光老化进程。

过氧化物还原酶2通过ROS-NF-κB-miR-33a-ABCA1途径抑制巨噬细胞脂质蓄积

已有研究证实,过氧化物还原酶2(peroxiredoxin 2,Prdx2)可抑制小鼠动脉粥样硬化发展,但其在巨噬细胞脂质蓄积中的作用及机制未知。本文在体外培养THP-1源性泡沫细胞,转染Prdx2质粒过表达载体(pcDNA3.1-Prdx2)或Prdx2 siRNA,通过qRT-PCR、Western印迹、油红O和高效液相色谱等手段,检测ABCA1、NF-κB p65和miR-33a表达,胆固醇流出水平,胞内脂滴数目,胆固醇含量及ROS水平。此外,用NF-κB抑制剂PDTC和/或miR-33a抑制剂作预处理,观察上述指标有何变化。结果表明,Prdx2过表达组细胞ABCA1表达水平显著提高(P<0.05),而NF-κB和miR-33a水平明显下调(P<0.05),胞内[3H]-胆固醇流出增加(P<0.05),脂质蓄积减轻;而预处理PDTC和miR-33a抑制剂后,上述效应则更加明显。相反,Prdx2沉默组ABCA1水平下降(P<0.05),NF-κB和miR-33a表达上调(P<0.05)。我们发现,Prdx2过表达能有效降低泡沫细胞内ROS水平。综上所述,Prdx2可通过ROS-NF-κB-miR-33a-ABCA1途径促进巨噬细胞胆固醇流出,抑制脂质蓄积。

黄芩苷对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株焦亡的影响及其机制研究

目的:探讨黄芩苷(Baicalin)对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株DB增殖、焦亡的影响及其作用机制。方法:用不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)的黄芩苷处理DB细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)值;倒置显微镜下观察焦亡形态,LDH含量释放检测验证细胞膜完整性,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞焦亡相关mRNA及蛋白(NLRP3、GSDMD、GSDME、N-GSDMD、N-GSDME)表达。为进一步阐明黄芩苷诱导DB细胞焦亡与ROS生成之间的关联,将细胞分为对照组、黄芩苷组、NAC组及NAC联合黄芩苷组,NAC组用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)2 mmol/L预处理DB细胞2 h;联用组经预处理后加入黄芩苷,培养48 h,用DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)含量的变化。结果:黄芩苷剂量依赖性抑制DB细胞的增殖活性(r=-0.99),作用48 h的IC50为20.56μmol/L,倒置显微镜观察到药物组DB细胞焦亡形态学改变。与对照组相比,黄芩苷组细胞释放LDH明显升高(P<0.01),表明细胞膜完整性丧失;实时荧光定量PCR以及Western blot检测结果表明,黄芩苷剂量依赖的增加焦亡通路中NLRP3、N-GSDMD和N-GSDME基因和蛋白的表达水平(P<0.05)。ROS检测显示,与对照组相比,黄芩苷组细胞内ROS水平显著升高(P<0.05),NAC组ROS含量显著降低(P<0.05);与NAC组比较,NAC联合黄芩苷组ROS含量增加,提示黄芩苷显著减弱了NAC对ROS生成的抑制作用(P<0.05)。同样地,Western blot检测结果显示,与对照组比较,黄芩苷组焦亡相关蛋白表达量增加(P<0.05)。NAC组抑制NLRP3表达并减少了N-GSDMD和N-GSDME的切割(P<0.05);与NAC组比较,NAC联合黄芩苷组焦亡相关蛋白表达升高。表明,黄芩苷能有效诱导DB细胞焦亡,并逆转NAC对ROS生成的抑制作用。结论:黄芩苷能抑制DLBCL细胞株DB增殖,其机制可能通过调控ROS生成来影响焦亡通路实现的。

银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及ROS/XIAP信号通路的影响

目的探讨银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及活性氧(ROS)/X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)信号通路的影响。方法实验分为模型组(培养基+SW480细胞)、紫杉醇组(5 mg/L+培养基+SW480细胞),以及银杏内酯B低、高剂量组(50,100μmol/L+培养基+SW480细胞)。采用四唑盐(MTT)法测定细胞增殖水平并计算存活率,流式细胞术测定细胞凋亡情况并计算凋亡率,Transwell法测定细胞迁移侵袭水平,荧光探针法检测活性氧(ROS)水平,反转录聚合酶链反应法及Westernblot法测定细胞XIAPmRNA及蛋白表达水平。结果与模型组比较,紫杉醇组及银杏内酯B低、高剂量组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭水平显著降低,细胞ROS水平及XIAPmRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论银杏内酯B可有效抑制SW480细胞的迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制ROS/XIAP信号通路的激活有关。

青蒿琥酯诱导ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤ROS促进细胞凋亡

目的探讨青蒿琥酯诱导ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞凋亡的机制。方法人ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LY3加入不同浓度青蒿琥酯处理,用CCK-8法测定细胞增殖活性,荧光探针DCFH-DA染色检测ROS含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot检测Bcl-2和Caspase-3表达。结果青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制OCI-LY3细胞增殖(P<0.01或0.05),促进ROS产生(P<0.01),诱导凋亡(P<0.01),上调促凋亡基因caspase-3表达,下调抑凋亡基因Bcl-2表达(P<0.01)。结论青蒿琥酯可能通过促进ROS产生,上调Caspase-3和下调Bcl-2表达,从而诱导ABC型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞凋亡。

α-倒捻子素通过激活ROS/p38 MAPK/Bax级联反应诱导B淋巴瘤Ramos细胞凋亡的机制研究

本文以B淋巴瘤Ramos细胞为研究对象,探讨α-倒捻子素(α-mangostin,α-Ma)对B淋巴瘤的增殖抑制作用并初步阐释其分子机制。首先通过CCK-8法探究α-Ma对Ramos细胞的增殖抑制作用;再利用倒置显微镜成像法观察α-Ma对Ramos细胞形态的影响;随后利用DCFH-DA、JC-1、Annexin V-FITC/PI荧光染色和流式细胞术检测α-Ma对Ramos细胞活性氧水平、线粒体膜电位、凋亡的影响;并通过蛋白免疫印迹技术测定α-Ma作用Ramos后细胞凋亡相关蛋白及信号通路蛋白的表达情况。CCK-8分析结果显示,α-Ma以药物浓度依赖和时间依赖的方式抑制Ramos细胞增殖,其24 h和48 h的IC值分别为14.84μmol/L和8.087μmol/L;倒置显微镜成像法发现α-Ma能减少Ramos细胞数量并诱导细胞形态发生凋亡样改变;流式细胞术检测发现,α-Ma能增加Ramos细胞内活性氧水平、降低细胞线粒体膜电位,同时诱导细胞凋亡;蛋白免疫印迹结果显示,α-Ma下调caspase-3/9的表达,上调cleaved caspase-3/9、cleaved PARP、Bax、Bim和p-p38 MAPK的表达。综上所述,α-Ma对B淋巴瘤Ramos细胞具有增殖抑制作用,其可能机制是α-Ma活化ROS/p38 MAPK/Bax级联反应诱导B淋巴瘤细胞凋亡。

活性氧在UV-B诱导的玉米幼苗叶片乙烯产生中的作用

研究了活性氧在UV-B（280～320nm）诱导的玉米（Zea mays）幼苗叶片乙烯合成中的作用。结果表明，UV-B促进了玉米幼苗活性氧和乙烯的产生；乙烯合成抑制剂氨氧乙烯基甘氨酸（AVG）和氨氧乙酸（AOA）能明显减弱UV—B对玉米幼苗乙烯产生的诱导作用，但对活性氧（ROS）的产生没有明显影响；ROS的清除剂不但能抑制UV-B诱导的ROS的产生，而且还可以抑制UV—B诱导的乙烯的产生，但这种抑制作用可以被外源O2^-的供体所逆转。这说明，乙烯的积累不能作为UV-B胁迫下ROS的诱导的因素，相反，ROS的积累则导致了乙烯的积累；因此，ROS可能参与了UV—B胁迫诱导的乙烯的产生。质膜NADPH氧化酶的抑制剂二苯碘销（DPI）和H2O2的特异性清除剂过氧化氢酶（CAT）对UV—B胁迫诱导的乙烯积累几乎没有影响，这说明H2O2可能与UV—B诱导的玉米幼苗叶片乙烯的产生无关，在UV—B诱导的玉米幼苗叶片乙烯的生物合成过程中O2^-起着很重要的作用，相关的O2^-不是由NADPH氧化酶催化产生的。

嵌合抗CD20抗体Fab′片段诱导Raji细胞凋亡过程中活性氧自由基的变化

目的 研究嵌合抗CD2 0抗体Fab′片段对B淋巴细胞株Raji细胞活性氧自由基 (ROS)的影响。 方法 利用MTT法测定Fab′片段抑制细胞生长 ,形态学方法和DNA琼脂糖凝胶电泳法观察Fab′片段对细胞凋亡的影响 ,用DCFH DA和双氢罗丹明 1 2 3(DHR )标记细胞内活性氧(ROS)变化 ,并用流式细胞仪检测。结果 MTT法测定抗CD2 0抗体Fab′片段对Raji细胞的生长具有抑制作用 ,其抑制作用呈明显的剂量依赖性 ,电镜观察 ,可见“凋亡小体”出现 ,DNA电泳可见典型的“梯形”条带 ,抗CD2 0抗体Fab′片段能增加Raji细胞内ROS水平 ,且随浓度增加而增加。 结论 ROS水平升高在抗CD2

UV-B辐射对雨生红球藻光合特性和虾青素含量的影响及其响应

实验研究了不同强度的UV-B(280—320 nm)辐射对雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)的光合活性、生物量、色素含量、活性氧(ROS)含量和抗氧化酶活性等的影响,以探讨利用UV-B辐射诱导虾青素生物合成增强的可能性。结果发现,经UV-B辐射处理后,雨生红球藻的光合活性降低、生物量增长被抑制。UV-B辐射对叶绿素影响不大,但会改变细胞的类胡萝卜素和虾青素含量:0.1和0.3 W/m2强度的UV-B辐射使细胞中的这两种色素含量升高,0.5 W/m2组的色素含量短暂升高后恢复到对照水平。中低强度的UV-B可以促进雨生红球藻单细胞虾青素含量的增加,但由于其对细胞生长的抑制作用,并不能使虾青素大量积累。随辐射时间延长,细胞内ROS含量未明显增加,但抗氧化酶(过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)活性下降,雨生红球藻可能主要依靠虾青素来淬灭ROS。以上结果表明,UV-B辐射对雨生红球藻的主要生理生化过程有抑制作用,UV-B辐射既可以诱导虾青素的合成又会消耗一部分虾青素,对虾青素含量的影响与其强度有关,而利用虾青素来清除细胞内的ROS可能是雨生红球藻抵御这种不利环境条件的最重要的途径。

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞凋亡及机制研究

目的探讨银杏内酯B对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及相关的分子机制。方法使用脐静脉血管内皮细胞作为细胞模型,分为对照组、高糖组、银杏内酯B处理组。用Transwell实验检测内皮细胞迁移,AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,荧光试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测Bax,Bcl-2,caspase-3的表达以及p53的磷酸化。结果高糖(30 mmol·L^(-1))处理组内皮细胞迁移数量明显降低,迁移率为(66.6±15.6)%,而银杏内酯B(0.6 g·L^(-1))处理增加了内皮细胞的迁移数量,迁移率为(94.8±11.4)%。高糖处理导致内皮细胞ROS水平增高2.75倍,与高糖处理组比较,0.6 g·L^(-1)银杏内酯B完全抑制了高糖诱导的ROS产生。流式细胞仪分析表明,高糖刺激内皮细胞凋亡率为(53.8±2.6)%,银杏内酯B处理组内皮细胞凋亡率为(44.0±3.1)%。对凋亡相关蛋白的分析表明,高糖组Bax、caspase-3表达增加,Bcl-2表达降低,银杏内酯B处理抑制了Bax、caspase-3表达,并增加了Bcl-2表达。此外,高糖处理增加了内皮细胞p53表达及磷酸化,而银杏内酯B抑制高糖刺激的p53活化。结论银杏内酯B能抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,改善内皮细胞迁移功能,对高糖引起的内皮细胞损伤具有保护作用。

白果内酯和银杏内酯B对过氧化氢诱导人角质形成细胞氧化损伤的保护作用

通过CCK-8法测定细胞存活率,WST染色方法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,DTNB测定谷胱甘肽(GSH)活性,脂质氧化试剂盒检测丙二醛(MDA)含量,DCFH-DA法测定活性氧(ROS)含量,ELISA法测定炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量水平,研究了白果内酯和银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导人角质形成细胞(HaCaT细胞)的抗氧化损伤和抑制炎症因子的影响,同时利用药物数据库预测目标靶点,研究白果内酯和银杏内酯B发挥功效的机制。结果表明,白果内酯与银杏内酯B能减少H2O2诱导的SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低,抑制MDA释放增加,减少ROS的产量,减少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的生成;综合网络分析结果显示白果内酯和银杏内酯B抗炎活性呈现多分子、多靶点和多通路特点。

右归饮对痛风性肾病大鼠活性氧/核因子-κB信号通路的调节及肾脏保护作用研究

目的:研究右归饮对痛风性肾病大鼠活性氧(ROS)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节及肾脏保护作用。方法:90只大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、右归饮低、中、高剂量组及别嘌呤醇组,除对照组外,其余大鼠采用干酵母饲料喂养联合腺嘌呤灌胃的方法建立痛风性肾病大鼠模型,右归饮低、中、高剂量组灌胃给予大鼠不同剂量的右归饮,别嘌呤醇组灌胃给予大鼠别嘌呤醇,对照组及模型组给予大鼠等量生理盐水,1次/d,连续给药28 d,测定大鼠24 h尿量及尿蛋白量、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)及尿酸(UA)水平、肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及ROS水平,苏木精-伊红染色法检查大鼠肾组织病理学变化,Western blot检测大鼠肾组织烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX4)、p-NF-κB/P65及NF-κB/P65水平。结果:与模型组相比,右归饮各剂量组及别嘌呤醇组大鼠24 h尿蛋白量、血清TNF-α、IL-6、IL-1β、BUN、Scr及UA水平、肾组织MDA及ROS水平、肾组织NOX4、p-NF-κB/P65及NF-κB/P65水平均显著降低(P<0.05),大鼠24 h尿量及肾组织SOD活性显著升高(P<0.05),同时右归饮各剂量组及别嘌呤醇组大鼠肾组织病理学明显改善,且各项指标变化与右归饮剂量表现出依赖性。结论:右归饮能够通过降低痛风性肾病大鼠24 h尿蛋白量、血清TNF-α、IL-6、IL-1β、BUN、Scr及UA水平、肾组织MDA及ROS水平,升高大鼠24 h尿量及肾组织SOD活性而发挥其肾脏保护作用,其机制可能与抑制ROS/NF-κB信号通路有关。

丹参酮ⅡA和丹酚酸B对大鼠血管外膜成纤维细胞转化的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TA)和丹酚酸(SA)B联合用药对成纤维细胞转化的影响。方法Transwell小室法检测TA和SAB对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的细胞迁移的影响;Western印迹检测成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平的变化。结果TA和SAB组合(T8S5)对成纤维细胞的迁移能力有显著性抑制作用(P<0.01);T8S5对AngⅡ诱导的α-SMA的表达有显著抑制作用(P<0.01);T8S5能减少成纤维细胞内ROS的表达(P<0.01)。结论SAB和TA配伍组合能抑制AngⅡ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞的迁移和转化。

土槿皮乙酸B增加活性氧水平诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老的研究

本研究旨在研究土槿皮乙酸B(PAB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和衰老与活性氧的关系。在相差显微镜下观察4μmol/L PAB在36 h诱导细胞凋亡小体的出现;LDH方法显示PAB时间依赖性的增加凋亡比率;SA-β-半乳糖苷酶显示4μmol/L PAB作用3 d后,去药再作用5 d,96%的细胞蓝染,细胞变大且扁平;流式细胞仪检测用DCFH-DA染色后4μmol/L PAB时间依赖性增加细胞内活性氧水平。所以4μmol/L PAB通过增加细胞内活性氧水平促进细胞凋亡和衰老。