敲低Ro60/SSA表达对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响

目的:探讨下调Ro60/SSA的表达对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法:将人肝癌细胞HAK-1A和HepG2分别分3组处理:空白对照组常规培养(DMEM培养基+体积分数10%胎牛血清);另两组脂质体法分别转染siRNA-NC和siRNA-Ro60/SSA,每组设置3个复孔。转染48 h后应用Western blot法检测细胞中Ro60/SSA蛋白的表达,应用克隆形成实验和球形形成实验检测细胞的自我更新和增殖能力;应用Transwell小室法检测3组HAK-1A细胞的迁移和侵袭能力。将雌性BALB/c裸鼠随机分为siRNA-NC组和siRNA-Ro60/SSA组,每组5只。将转染siRNA-NC或siRNA-Ro60/SSA的HAK-1A细胞以1×10^(4)个/μL尾静脉注射入裸鼠体内(200μL/只),4周后,计数肺部肿瘤灶数量。结果:与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-Ro60/SSA组HAK-1A和HepG2细胞Ro60/SSA蛋白表达下调,克隆形成数、成球率均降低(P<0.05)。siRNA-Ro60/SSA组HAK-1A细胞Transwell实验中的迁移细胞数和侵袭细胞数低于空白对照组和siRNA-NC组(P<0.05)。siRNA-Ro60/SSA组裸鼠肺部移植瘤数量低于siRNA-NC组(P<0.05)。结论:敲低Ro60/SSA可明显抑制肝癌细胞的侵袭和转移能力。

Ro60/SSA基因转染HEp-2细胞作为间接免疫荧光检测底物及其应用

本研究拟改造间接免疫荧光技术(IIF)抗核抗体(ANA)检测法的底物HEp-2细胞,建立抗60kDRo60/SSA抗体免疫荧光检测法。采用PCR扩增人源Ro60 cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞。通过荧光显微镜、免疫印迹法(IBT)及IIF鉴定转染细胞(HEp-Ro60)中Ro60-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性。分别以HEp-Ro60以及HEp-2为底物的IIF检测10份抗Ro/SSA对流免疫电泳(CIE)检测阳性、其他抗体阴性血清以及对照血清。获得的转染细胞传十几代后仍具有较强的Ro60-GFP表达,融合蛋白保持Ro60的抗原性。IIF检测中HEp-Ro60的滴度比HEp-2增加了6.7倍(P<0.01),而且2例HEp-2细胞上IIF检测为阴性的血清在HEp-Ro60上为阳性。10例阳性血清中有8例出现了特征性荧光模式。结论是HEp-Ro60可用于IIF检测抗Ro抗体,并增加了ANA检出的敏感性。

人自身抗原SSA/Ro60的基因克隆和原核表达

目的:克隆并表达人自身抗原SSA/Ro60。方法:应用RT-PCR技术,从HL-60细胞株中克隆人自身抗原SSA/Ro60全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行SDS-PAGE和Western blot。结果:PCR产物约为1.6 kb,与预期1614 bp接近,测序结果与Genebank报道的完全一致。pGEX-5T-SSA/Ro60重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为86 KD,具有天然人自身抗原SSA/Ro60的免疫原性。结论:成功克隆表达人自身抗原SSA/Ro60,为下一步工作奠定了基础。

抗Ro52抗体和抗Ro60抗体的临床应用价值探讨

目的探讨抗SSa抗体(包括抗Ro52抗体和抗Ro60抗体)在临床疾病诊断中的价值。方法回顾性总结2009年1月-2013年12月23 145例抗核抗体结果阳性并同时进行抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱(包括抗Sm、抗Ro52、抗Ro60、抗SSb、抗RNP、抗Scl-70、抗Jo-1及抗Rib-P抗体)的患者,分析抗Ro52、抗Ro60分别与其他检测结果及临床信息的关系。结果 23 145例患者中抗Ro60抗体阳性率为35.19%(8 145/23 145),抗Ro52抗体阳性率为13.16%(3 046/23 145)。且抗Ro60抗体在抗SSb、抗RNP、抗Sm及抗Rib-P阳性患者中的阳性率较抗Ro52高(P<0.05);抗Ro52抗体阴性而抗Ro60抗体阳性(Ro52-Ro60+)结果在自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病及症状患者组中所占比例较抗Ro52抗体阳性而抗Ro60抗体阴性(Ro52+Ro60-)结果均较高(P<0.05)。结论抗Ro60抗体在自身免疫性疾病及非自身免疫性疾病的阳性率较抗Ro52抗体高,抗Ro60抗体的检测敏感度及自身免疫性疾病预示价值较抗Ro52抗体高,但两者的诊断特异性均较差,临床疾病诊断价值有限。