抑制Rho/ROCK通路对气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及相关机制

目的研究抑制Ras同源基因(Ras homolog gene,Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rhoassociated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)通路对心肌素(myocardin,MYOCD)参与的气道平滑肌细胞增殖与迁移的影响及分子机制。方法体外构建腺病毒载体Ad-ZsGreen-shRNA-hROCK1感染人气道平滑肌细胞,将细胞随机分为4组:ROCK1基因沉默对照(shNC)组、shNC+花生四烯酸(arachidonic acid,AA;Rho/ROCK通路激活剂)组、ROCK1基因沉默(shROCK1)组、shROCK1+AA组(各组n=3)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法、Western blot法检测ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平,ELISA法检测球状肌动蛋白和丝状肌动蛋白水平,免疫荧光染色法及细胞划痕实验检测细胞增殖及迁移情况。结果与shNC+AA组相比,shROCK1+AA组ROCK1、MYOCD mRNA和蛋白表达水平降低,球状肌动蛋白、丝状肌动蛋白表达降低,细胞增殖、细胞迁移能力降低(P<0.05)。结论抑制Rho/ROCK通路致气道平滑肌细胞增殖及迁移能力受抑,其机制可能与MYOCD的下调有关.

咖啡因通过FAK/AKT/ROCK通路调控人脑胶质瘤U-373MG细胞的恶性生物学行为

目的:探讨咖啡因通过调节FAK/AKT/ROCK信号通路来影响人脑胶质瘤U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。方法:常规培养U-373MG细胞,将其分为对照组、咖啡因低剂量(1 mmol/L)组、咖啡因高剂量(2 mmol/L)组、PF573228组(FAK抑制剂,1μmol/L)、咖啡因高剂量+SC79组(AKT激活剂,8mg/L)。用CCK-8法、Transwell小室实验、流式细胞术和WB法分别检测各组U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡,以及U-373MG细胞中p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白表达水平。建立U-373MG细胞裸鼠移植瘤模型,观察咖啡因对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中相关蛋白的表达。结果:咖啡因、PF573228可显著抑制U-373MG细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进U-373MG细胞凋亡,抑制p-FAK、p-AKT、p-ROCK、Ki67、MMP-9蛋白的表达(均P<0.05),SC79则可部分逆转咖啡因对U-373MG细胞的作用(均P<0.05)。咖啡因可显著抑制移植瘤的生长及移植瘤组织中上述相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:咖啡因可通过抑制FAK/AKT/ROCK信号通路抑制U-373MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。

基于Rho/Rock通路研究麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的机制研究

目的观察麝香心痛宁抗大鼠血管损伤后内膜增生的作用及可能的作用机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和麝香心痛宁组。采用球囊损伤法制备大鼠腹主动脉血管损伤模型,造模后灌胃给予大鼠麝香心痛宁片(200 mg·kg^(-1)),14 d后将大鼠处死,取其血清及腹主动脉,主动脉血管进行HE染色,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,ELISA法检测大鼠血管组织一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量PCR和Western blotting检测Rho、Rock1和Rock2 mRNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠腹主动脉血管组织内膜增生,腹主动脉血管部位弹力变弱且管壁增厚。麝香心痛宁治疗后血管内膜损伤程度减轻。与模型对照组相比,麝香心痛宁组大鼠血清SOD、GSH-Px活性升高,MCP-1、MDA活性降低(P<0.05);血管组织NO含量升高,ET-1、VEGF和IL-1β含量降低(P<0.05);Rho/Rock通路相关因子Rock1、Rock2、Rho的表达降低(P<0.05)。结论麝香心痛宁可抑制血管损伤后内膜增生,其作用机制可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。

Rho/ROCK通路与心律失常的研究进展

越来越多的证据表明,Rho/ROCK通路在不同程度上调控着细胞的生长、发育、迁移、增殖和死亡,并在各种疾病中发挥重要作用。此外,Rho/ROCK通路与成纤维细胞、Ca^( 2+)和炎症因子等的相互作用对肺动脉高压和心血管疾病的发生与发展产生了重要的影响。近年来Rho/ROCK通路在心律失常中发挥的作用备受关注,现通过总结相关研究,为抗心律失常药的研究提供进一步参考。

束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

目的探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型,将大鼠分为4组:Control组(n=15,每日禁食水6 h);Stress组(n=15,每日束缚6 h);Stress+Fasudil组(n=15,每日束缚6 h,束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液);Fasudil组(n=15,每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液)。用高架十字迷宫实验(EPM)检测各组大鼠行为学变化,ELISA检测血清CORT和S100B水平,检测脑组织伊文思蓝(EB)的渗漏情况以评估渗透性的改变,免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化,Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况,透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果与Control组相比,Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为;Stress组和Stress+Fasudil组血清CORT含量均显著高于Control组(P<0.001);与Control组和Stress+Fasudil组相比,Stress组EB渗漏含量和S100B含量均显著升高(P<0.05);Stress组紧密连接蛋白的表达显著低于Control组和Stress+Fasudil组(P<0.05);Pull-down实验和Western blot分析证实,Stress组RhoA-GTP(P<0.001)、ROCK2(P<0.001)、p-MLC2(P<0.05)的表达显著高于Control组和Stress+Fasudil组;脑微血管内皮细胞超微结构显示,Stress组呈现显著的形态学改变。结论束缚应激能够通过激活Rho/ROCK信号通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤。

miR-200c通过抑制RhoA/ROCK通路延缓皮肤创伤愈合进程

目的探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型,将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达,Western blot检测创面组织中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin和RhoA蛋白表达。创伤后第1,7,14天计算大鼠创面愈合率。采用双荧光素酶报告实验分析miR-200c和RhoA靶向关系。将人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞分为inhibitor-NC组、miR-200c inhibitor组、miR-200c inhibitor+sh-NC组和miR-200c inhibitor+sh-RhoA组。采用EdU法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,qRT-PCR检测HaCaT细胞中miR-200c表达,Western blot检测HaCaT细胞中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达。结果与正常皮肤比较,创面组织中miR-200c表达降低(P<0.01),RhoA表达升高(P<0.01)。miR-200c与RhoA 3′UTR存在靶向结合关系。与agomir-NC组比较,miR-200c agomir组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-RhoA组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-200c inhibitor组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-200c inhibitor+sh-NC组比较,miR-200c inhibitor+sh-RhoA组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论miR-200c靶向RhoA,过表达miR-200c可以通过调控RhoA/ROCK通路抑制皮肤创伤愈合的再上皮化过程,进而延缓皮肤创伤愈合进程。

黄芩苷通过ROS依赖性调节RhoA/ROCK通路保护氯化钴诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的:本研究旨在探讨黄芩苷(Baicalin)对氯化钴(CoCl_(2))诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的作用机制。方法:采用CoCl_(2)建立心肌细胞缺氧损伤模型,并分别加入不同浓度的黄芩苷培养。将正常氧培养设置为对照组,CoCl_(2)培养H9c2心肌细胞设置为CoCl_(2)组;Baicalin、Y27632(Rho激酶抑制剂)预处理的H9c2缺氧心肌细胞设置为CoCl_(2)+Baicalin组、CoCl_(2)+Y27632组、CoCl_(2)+Baicalin+Y27632组。通过细胞毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞活性;荧光探针测定细胞中活性氧(ROS)的表达;WST-8检测心肌细胞超氧化歧化酶(SOD)活力;TBA法测定丙二醇(MDA)浓度;同时采用WesternBlot方法分析RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达情况。结果:处理H9c2细胞24 h后,1 000μmol/L的CoCl_(2)和75μmol/L黄芩苷对治疗心肌细胞缺氧损伤具有较好的细胞活力。CoCl_(2)组细胞活性明显低于对照组,加入黄芩苷后可显著提高细胞活性(P<0.05);与对照组相比,CoCl_(2)组心肌细胞可上调ROS、MDA表达,下调SOD活力,升高RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,加入Baicalin后可逆转上诉蛋白的表达水平;与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Baicalin可抑制ROS、MDA的表达,上调SOD含量,下调RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,而加入Y27632(Rho激酶抑制剂)后则可显著增强Baicalin带来的保护作用。结论:Baicalin可减轻CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性RhoA/ROCK通路有关。

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤小鼠RhoA/ROCK通路的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤小鼠小胶质细胞P2Y12受体介导的RhoA/ROCK炎症信号通路的影响。方法将C57BL/6J小鼠随机分为Sham组、MCAO组、BYHW-L(低剂量,6.5 g·kg-1)组、BYHW-H(高剂量,26 g·kg-1)组、BYHW-H+MRS2395组,构建大脑中动脉闭塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),通过Longa生物学评分、TTC染色评估小鼠神经功能损伤情况;通过免疫荧光双标染色法、qPCR方法检测小胶质细胞M1、M2表型极化情况;通过Western blot法检测P2Y12受体介导的RhoA/ROCK通路蛋白的表达情况。结果与MCAO组相比,补阳还五汤能改善脑缺血再灌注损伤小鼠的神经功能损伤(P<0.05)和减小梗死体积(P<0.05,P<0.01),增加小胶质细胞从M1型向M2型极化(P<0.05,P<0.01),抑制P2Y12受体蛋白表达(P<0.05,P<0.01),阻断P2Y12介导的RhoA/ROCK通路及通路下游的p38 MAPK磷酸化(P<0.05,P<0.01),抑制炎症损伤(P<0.05,P<0.01)。加入P2Y12受体抑制剂MRS2395未阻断补阳还五汤改善神经功能损伤及抗炎作用。结论补阳还五汤可通过P2Y12受体介导的RhoA/ROCK炎症信号通路改善小鼠脑缺血再灌注后的脑损伤,还可通过其他途径及通路发挥抗炎作用,但具体机制有待进一步探索。

抑制Rho/ROCK通路促进酒精干预星形胶质细胞内吞功能及相关基因Vps37c表达

目的分析酒精及Rho/ROCK路抑制对星形胶质细胞转录组的影响。方法本研究以CTX TNA2大鼠星形胶质细胞为研究对象,选用酒精及Rho/ROCK通路抑制剂法舒地尔进行干预,实验分为对照组、酒精组及法舒地尔组;各组样本干预后Trizol法提取样本总RNA,基于HiSeq平台进行Illumina转录组测序;利用KEGG数据库进行注释及富集分析;qRT-PCR对关键差异基因进行验证。结果酒精组与对照组相比较,获得差异基因14个,KEGG富集分析结果显示,氨基糖和核苷酸糖代谢通路及细胞内吞通路富集程度最高;法舒地尔组与酒精组相比较,获得差异基因149个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路排第6位;对照组与酒精组差异基因和酒精组与法舒地尔组差异基因进行差异分析,共获得共有差异基因5个,KEGG富集分析结果显示,细胞内吞通路通路富集程度最高;该通路涉及基因为Vps37c,对该基因进行qRT-PCR验证,结果显示,与对照组相比较,酒精干预后星形胶质细胞Vps37c mRNA表达降低;与酒精组相比较,法舒地尔干预后Vps37c mRNA表达升高。此结果与测序结果一致。结论酒精干预能够抑制星形胶质细胞内吞功能,抑制细胞内吞功能基因Vps37c表达;Rho/ROCK通路抑制能够促进星形胶质细胞内吞功能,促进细胞内吞功能基因Vps37c表达。

α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的:探讨17β-雌二醇(17β-estraial,E2)对大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)RhoA/ROCK通路的影响。方法:体外分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体(ER)α与α肌动蛋白(α-SMA)共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT-PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2(BSA-E2)、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果:细胞免疫荧光示结肠SMC上ROCK1与α-SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达(P<0.05)。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白pMYPT1、p-CPI17、p-MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组(P<0.05)。ERαsiRNA组可上调RhoA、ROCK1表达(P<0.05)。结论:大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoA/ROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导。

桃红四物汤对产后血瘀证大鼠Rho/ROCK通路RhoA、p-RhoA及PAI-1蛋白表达的影响

目的探讨桃红四物汤治疗产后血瘀证的作用机制。方法采用米非司酮(8.3mg/kg)和米索前列醇(0.1mg/kg)灌胃早孕鼠,复制血瘀证产后大鼠模型,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组(法舒地尔,10mg/kg)及桃红四物汤组(9.0g/kg),并设立正常对照组;通过观察大鼠子宫形态及血液流变学指标变化评价桃红四物汤治疗产后血瘀证的疗效,采用免疫印迹法测定ras同源基因A(ras homolog gene,member A,RhoA)、磷酸化RhoA(phospho-RhoA,p-RhoA)蛋白及纤溶酶原激活剂抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的表达水平。结果桃红四物汤能够明显减轻模型大鼠子宫的炎性反应及红细胞的渗出和聚集,降低全血黏度和血浆黏度(P<0.05,或P<0.01),下调p-RhoA及PAI-1蛋白的表达水平(P<0.01)。结论桃红四物汤治疗产后血瘀证的机制与下调Rho/ROCK通路相关蛋白的表达水平有关。

lncRNA HOTAIR靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT

目的:探讨长链非编码RNA-Hox转录反义RNA(long non-coding RNA Hox antisense intergenic RNA,lncRNA HOTAIR)对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及其上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织和Hep-2细胞中lncRNA HOTAIR、微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)的表达量;下调lncRNA HOTAIR表达,分别通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞侵袭实验和蛋白质印迹法(Western blot)检测Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT能力。利用miRcode分析HOTAIR的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTAIR和miR-126之间的关系。同时上调lncRNA HOTAIR和miR-126的表达,检测lncRNA HOTAIR通过miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调miR-126表达后,Western blot检测RhoA、ROCK蛋白的表达量。Y-27632作用细胞后,检测下调miR-126对Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT的影响。结果:在Hep-2细胞和喉癌组织中lncRNA HOTAIR的表达明显上调(P<0.01),miR-126表达明显下调(P<0.01)。下调lncRNA HOTAIR表达后,抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT;lncRNA HOTAIR与miR-126具有靶向和负调控关系;下调miR-126表达后,激活了Hep-2细胞内RhoA/ROCK通路,并且促进了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。结论:上调lncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活RhoA/ROCK通路促进喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT。

RhoA/ROCK通路在2型糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用及法舒地尔的干预效果

目的研究RhoA/ROCK通路在2型糖尿病(T2MD)大鼠心肌纤维化形成中的作用及法舒地尔的干预效果。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、法舒地尔干预组,每组10只,除正常组外,其他组均给予高糖高脂饲料,并腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,造模完成24 h后,法舒地尔干预组给予盐酸法舒地尔注射液10 mg/kg注射,1次/d,模型组和正常组大鼠给予等量生理盐水注射,持续4周,4周后处死大鼠,取心脏进行称量并计算心脏肥厚指数(HWI),用10%甲醛固定后,光镜及电镜下观察心肌纤维化情况;检测心肌中胶原含量及胶原面积;利用qRT-PCR检测心肌组织中I型前胶原、Rho激酶1(ROCK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的相对表达水平;利用Western blot检测心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p-MYPT1)、细胞自噬相关蛋白(LC3-I、LC3-II、p62)表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠光、电镜可见心肌组织病理纤维化严重,同时HWI、胶原含量、胶原面积均升高,I型前胶原、ROCK1、TGF-β1的mRNA相对表达水平升高,LC3-II/LC3-I比例降低,p62蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,法舒地尔干预组大鼠光、电镜下心肌组织病理纤维化减轻,同时HWI、胶原含量、胶原面积均降低,I型前胶原、ROCK1、TGF-β1的mRNA相对表达水平降低,LC3-II/LC3-I比例升高,p62蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论T2MD通过激活RhoA/ROCK通路上调心肌细胞中促纤维化细胞因子表达及抑制心肌细胞自噬促进心肌纤维化,法舒地尔可以通过抑制RhoA/ROCK通路干预T2MD引起的心肌纤维化。

RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用研究

目的探讨Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法选取清洁级雌性SD大鼠30只建立糖尿病大鼠模型,按随机数字表法分为法舒地尔组和模型组,分别给予盐酸法舒尔地尔注射液(10 mg/kg/d)和等体积生理盐水腹腔注射,再选择10只大鼠作为对照组予普通饲料喂养。24周末测量各组大鼠心脏重量、体重、心脏组织形态和心肌胶原沉积程度,测定各组心肌匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),采用Western blot法检测心肌磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p MYPT1)。结果模型组体重低于对照组,而心脏重量和心脏重量/体重比明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组体重较模型组有所上升,而心脏体重和心脏重量/体重比下降(P<0.05);模型组大鼠心肌细胞排列混乱,结构不清晰,间质中成纤维细胞增多,法舒地尔组大鼠心肌间质中成纤维细胞较模型组减少;模型组心肌间质及血管周围胶原面积为(11.34±0.74)%,心肌胶原含量为3.55±0.13 g/mg,明显较对照组增高(P<0.05);法舒地尔组胶原面积和胶原含量分别为(3.32±0.32)%和(2.35±0.18)g/mg,均较模型组降低(P<0.05);模型组心肌MDA和p-MYPT1为(2.60±0.34)nmol/mgprot和0.933±0.021,明显高于对照组(P<0.05);法舒地尔组MDA和p-MYPT1分别为(1.30±0.41)nmol/mgprot和0.501±0.017,均较模型组降低(P<0.05);模型组SOD为(174.01±17.35)U/mgprot,明显低于对照组(P<0.05),而法舒地尔组SOD为(195.23±11.28)U/mgprot,较模型组有所升高(P<0.05)。结论 Rho A/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化中起了重要作用,ROCK抑制剂法舒地尔能有效抑制糖尿病心肌纤维化。

肝硬化门静脉高压症患者肠系膜微动脉收缩反应变化及RhoA/ROCK通路的研究

目的研究肝硬化门静脉高压症(PHT)患者肠系膜微动脉对去甲肾上腺素收缩反应性的变化,探讨PHT内脏血管低反应的机制,以及RhoA/ROCK通路改变所产生的作用机制。方法取2010年1月至2011年6月在我院普外科或肝移植科手术治疗的患者,PHT组7例,非PHT组8例。术中测门静脉压力,取空肠旁第三级肠系膜血管,利用血管灌流系统测定肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应,运用Western blotting法测定RhoA/ROCK通路中相关蛋白量的表达以及活性的改变。结果 PHT患者的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线右移,EC50高于非PHT患者(P<0.01);与非PHT患者相比较,肝硬化PHT患者的肠系膜动脉RhoA蛋白量无明显变化(P>0.05),但是ROCK-1蛋白量和活性却明显降低(P<0.01)。结论肝硬化PHT患者肠系膜动脉对缩血管物质的反应性降低,RhoA/ROCK信号通路受损参与了该反应。

过度激活的Rho/ROCK通路介导的心肌缺血再灌注损伤及贝那普利的改善作用

目的该研究探索过度激活的Rho/ROCK信号通路在缺血再灌注损伤中的参与机制及贝那普利的改善作用。方法 SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、Y27632组和贝那普利组。采用大鼠冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血再灌注模型,Y27632组和贝那普利组分别给予对应药物灌胃治疗。分析各组血清中MDA、SOD、GSHpx、Rho/ROCK、MMP2/9及Bax/Bcl2和Caspase3/9的表达。结果模型组血清MDA水平明显增高(15.6→24.1μg/mL)而SOD(83.1→34.6 U/mL)水平明显降低,Rho/ROCK(0.18→0.64;0.19→0.69;0.16→0.65)、MMP2/9(0.28→0.60;0.27→0.63)、Caspase9表达明显增强(0.25→0.68)。Y27632和贝那普利组大鼠的上述异常得到显著的改善。结论贝那普利通过抑制过度激活的Rho/ROCK、激活的细胞凋亡信号通路、改善细胞外基质降解与重构发挥保护缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用。

原发性高血压合并乙型肝炎病毒感染患者Rho/ROCK通路研究

目的:探讨原发性高血压患者中乙型肝炎感染患者比例及血管内皮生长因子(VEGF)通过ROCK信号通路升高血压的效应。方法:选取2020年1月-2022年1月南昌医学院第一附属医院收治的原发性高血压患者和同期健康人群各200例为观察对象。检测HBsAg、抗HBc、抗HBs、抗HCV,测定乙型肝炎患者乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)和外周血VEGF水平。建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)高血压损伤模型,将细胞分为对照组、AngⅡ模型空白组、AngⅡ+VEGF组。结果:高血压组患乙型肝炎比例高于非高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);8例乙型肝炎患者的HBV-DNA拷贝数与VEGF水平呈正相关(r=0.949);在AngⅡ+VEGF组中,ROCK1、ROCK2表达水平明显上调。结论:乙型肝炎病毒感染在高血压患者中比例较高,VEGF水平随乙型肝炎患者体内HBV-DNA的拷贝数增高而增高。

基于Rho/Rock通路当归红芪多糖对H9C2细胞放射性心肌损伤的影响

目的基于Rho/Rock通路观察当归红芪多糖对H9C2细胞放射性损伤的影响,探讨其干预放射性心肌损伤作用机制。方法将细胞随机分为空白组(不干预)、模型组(2GyX线照射并予生理盐水干预)、阳性对照组(2 Gy X线照射并予阳性药干预)和中药低、中、高剂量组(2 Gy X线照射并予当归红芪多糖干预),ELISA检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的表达,RT-PCR检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、Rhoa、Rock mRNA的表达,Western blot检测细胞诱导型iNOS、eNOS、Rhoa、Rock蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与空白组比较,模型组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达下调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达上调,细胞发生凋亡;与模型组比较,药物干预组细胞SOD、GSH、eNOS蛋白及eNOS mRNA表达上调,MDA、iNOS、RhoA、Rock蛋白及iNOS、RhoA、Rock mRNA表达下调,细胞凋亡减少。结论当归红芪多糖可通过抑制氧化应激、Rho/Rock通路活化、细胞凋亡等干预放射性心肌损伤。

基于Rho/Rock通路探讨当归红芪多糖对辐射诱导大鼠H9C2心肌细胞的作用机制

目的基于Ras同源基因(Rho)/Rho激酶信号通路对放射性心肌纤维化发病机制及当归红芪多糖的干预作用进行探索。方法首先建立放射剂量梯度,通过筛选放射性心肌损伤的最佳浓度,建立放射性心肌损伤模型。通过法舒地尔、不同浓度当归红芪多糖溶液进行干预,同时采用Western Blot、QT-PCR、流式细胞术3种实验手段检测Rho/Rock及其下游通路的活化、心肌细胞周期、心肌纤维化的改变。结果当归红芪多糖干预后Rho/Rock及其下游通路的活化明显抑制,细胞周期阻滞明减轻,心肌纤维化被逆转。结论当归红芪多糖可能通过抑制Rho/Rock及其下游通路的活化、减轻细胞周期阻滞等逆转放射性心肌纤维化。

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的:基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法:高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果:糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论:中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。