云南岩陀及其近缘种质资源群体表型多样性

为有效保护和持续利用药用植物云南岩陀及其近缘种质资源提供基础数据,采用巢式方差分析和聚类分析等方法对岩陀及其近缘种质资源共4个种(包括变种)的15个居群150个单株16种表型性状进行表型多样性分析。结果表明:不同种间表型性状变异均超过20%,变异由大到小依次为光腹鬼灯檠、岩陀、羽叶鬼灯檠、七叶鬼灯檠;居群间表型性状变异较高,其地上部分干重、单株根状茎数变异较大,变异系数均超过50%;小叶表面毛被状态变异系数为100%、小叶背沿脉柔毛色变异系数为0,因此这些性状为种和变种分类的重要依据;4个种的居群内变异系数均大于居群间,变异主要来源于居群内。种的表型多样性指数相对较高,其中根粗最高,叶表面毛被状态和叶背面沿脉柔毛色最低,总体平均多样性指数为1.39;不同种间表型多样性指数变化在1.23—1.44,岩陀最高,七叶鬼灯檠最低;通过聚类分析可将15个居群分为4类。结果暗示:岩陀及其近缘种质资源的遗传改良应适当地减少抽样居群数,增加居群内的家系数,重视居群内优良单株的选择;种质资源的保护应尽量保护一个居群的完整性。

云南鬼灯檠属植物中岩白菜素含量比较

[目的]比较云南鬼灯檠属植物不同种及产地样本的岩白菜素含量。[方法]采用HPLC测定云南鬼灯檠属植物不同种及产地样本的岩白菜素含量。色谱柱为AgilentZorbaxXDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～10 min,0%～20%A,100%～80%B),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,检测波长275 nm。[结果]岩白菜素在3～48μg/ml之间与吸光度值呈良好的线性关系,相关系数为0.999 6。4个种及变种的鬼灯檠属植物样本岩白菜素含量以西南鬼灯檠平均含量最高为5.59%,七叶鬼灯檠平均含量最低为3.45%。[结论]鬼灯檠属植物不同种之间岩白菜素含量不同,同种不同居群之间的岩白菜素含量变化也明显。

HPLC测定民族药岩陀药材中岩白菜素的含量

目的建立测定民族药岩陀药材中岩白菜素含量的方法。方法采用HPLC法,Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(25:75);检测波长275 nm。结果线性范围为0.2556-1.2780μg(r=0.9999),平均回收率为99.59%,RSD=1.85%。结论所建立的方法简便准确、灵敏度高,可用于岩陀药材及其制剂的质量控制。

云南岩陀及其近缘种质资源的地理分布与生境

岩陀是岩白菜素的主要原料植物,主要分布在云南、四川、贵州等地区。本文对云南省5个州(市)的14个县(区)岩陀种质资源的蕴藏量、分布地区、生境状况等方面进行了调查。云南地区主要有岩陀、羽叶鬼灯檠、七叶鬼灯檠、光腹鬼灯檠等4个种和变种,分布在云南北纬25°附近及其以北,年平均气温2.1℃-16.1℃,集中分布在海拔1100-3800 m的迪庆、怒江、大理、丽江、昭通、曲靖、昆明等地,楚雄、临沧、普洱等地零星分布;岩陀及其鬼灯檠属植物喜阴性或半阴性环境,适于郁闭度高、空气相对湿度大的林下、石隙、灌丛、潮湿的岩壁上或山谷溪沟两旁;在寒冷气候下的干旱和瘠薄土壤,甚至石隙中均能较好生长;林下腐质层较厚土壤条件下,岩陀生长良好,但地下部分膨大受限。岩陀野生资源蕴藏量较为丰富,每年采挖量超过3000吨,但部分地区资源破坏严重,野生资源急剧减少,对岩陀及其近缘种质资源及生境进行调查,为岩陀种质资源的保护和可持续利用奠定基础。

西南鬼灯檠的化学成分研究

目的:对西南鬼灯檠化学成分进行初步研究。方法:采用溶剂法提取西南鬼灯檠的化学成分,常规硅胶柱层析、凝胶过滤层析和薄层色谱分离纯化,根据化合物的物理、化学性质和波谱解析鉴定了4个化合物。结果:4个化合物分别被鉴定为儿茶素(catechin,Ⅰ)、儿茶素-3-O-没食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate,Ⅱ)、岩白菜素(bergenin,Ⅲ)和齐墩果酸(oleanolic acid,Ⅳ)。结论:这4个化合物均是首次从西南鬼灯檠中分离得到。

岩陀黄酮与黄芩多糖复合物安全性评价

为探讨岩陀黄酮与黄芩多糖复合物的药用安全性,为其开发利用提供科学依据。开展了大鼠经口急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、小鼠精子畸形试验和骨髓细胞微核试验,对其进行安全性评价。结果显示,岩陀黄酮与黄芩多糖复合物对大鼠经口染毒半致死量(LD50)>5 g/kg·BW,为无毒级别,大鼠无临床症状和明显可见的病理变化;两次鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验表明无致突变性;小鼠精子畸形率为1.99%~2.06%,高中低3个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05);骨髓细胞微核率高、中、低3个剂量组与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05)。在本试验条件下,岩陀黄酮与黄芩多糖复合物属实际无毒物质,在2 500 mg/kg·BW内对试验动物未见急性毒性和遗传毒性。

高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量

目的采用高效液相色谱法测定岩陀中岩白菜素的含量。方法色谱柱为Hypersil C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(10∶90),检测波长为274 nm,柱温25℃。结果岩白菜素的线性范围为0.049 21～3.396 8μg,r=0.999 8,加样回收率为99.8%,RSD为1.18%(n=9)。结论本文所建立的方法简单、准确、可靠、重复性好,可用于岩陀中岩白菜素的含量测定。

西南鬼灯檠UPLC-ECD指纹图谱建立及聚类分析、主成分分析

目的建立西南鬼灯檠中药材的UPLC-ECD指纹图谱,并进行聚类分析和主成分分析,为其质量控制和药物评价提供科学依据。方法采用WATERS ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),以乙腈(A)-50 mmol·L-1柠檬酸缓冲盐溶液(pH 2.8,B)为流动相梯度洗脱,体积流量为0.4 mL·min-1,检测电压为650 mV,柱温为 40℃,进样量为1 μL。以14批西南鬼灯檠中药材样品绘制UPLC-ECD指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)进行相似度评价,确定样品之间的共有峰,并采用SPSS 24.0和SIMCA 14.1软件对样品数据进行聚类分析和主成分分析。结果 14批西南鬼灯檠中药材的UPLC-ECD图谱有8个共有峰,共指认出3个成分,分别为没食子酸、岩白菜素、表儿茶素没食子酸酯。各样品间相似度在0.922~0.998,表明14批药材样品之间有一定的相似性。聚类分析与主成分分析均将14批样品分为两大类。经主成分分析,特征固有值>1且P<0.05的主要成分有3个,其累积方差贡献率为71.80%。结论该方法可为西南鬼灯檠药材的质量评价提供参考。

西南鬼灯檠的研究进展

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.以干燥根茎入药,又称岩陀、毛青冈等,具有清热解毒、祛风除湿、收敛的功效,常用于治疗感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血,具有较好的临床应用价值。目前关于西南鬼灯檠的研究已经有一定的积累。通过对相关文献进行归纳总结,综述了西南鬼灯檠在生药学研究、化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面的研究现状,以期为西南鬼灯檠的进一步开发利用提供数据参考。

岩陀黄酮、黄柏黄酮和当归多糖复合物对免疫抑制大鼠的免疫调节作用研究

研究岩陀黄酮、黄柏黄酮和当归多糖复合物对淋巴细胞转化和环磷酰胺免疫抑制大鼠免疫功能的影响。用醇提法提取岩陀黄酮、黄柏黄酮,水提法提取当归多糖,按2∶1∶1比例制备复合物。采用MTT比色分析法检测不同浓度复合物对猪外周血淋巴细胞增殖的影响。将21只昆明大鼠随机分为环磷酰胺免疫抑制模型组(模型组)、空白组、复合物组,复合物灌胃剂量200 mg/kg;于0 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d分别检测血清中IgG含量和血常规。结果显示,复合物在2 mg/mL质量浓度下对猪外周血淋巴细胞刺激指数最高(1.608);试验第7天,复合物组与模型组IgG含量、白细胞数及淋巴细胞数均显著低于空白对照组(P<0.01);试验第21天,与模型组相比,复合物组淋巴细胞数(P<0.05)、白细胞数(P<0.01)均显著升高。提示岩陀黄酮、黄柏黄酮和当归多糖复合物能够有效提升猪外周血淋巴细胞的转化,显著提升环磷酰胺所致免疫抑制模型大鼠淋巴细胞、白细胞数量,提高靶动物的免疫功能。

HPLC法测定不同产地岩陀中岩白菜素

目的建立高效液相色谱法测定滇川黔不同地区岩陀中岩白菜素的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB—C18色谱柱（5μm，4．6mm×250mm），流动相为甲醇-水（22：78），流速1．0mL·min^-1，柱温25±1℃，检测波长为275nm。结果岩白菜素在0．1～1．0μg呈良好的线性关系（1=0．9996），平均回收率为99．62％，RSD为0．28％（n=6），最低检测限为0．1ng。结论该方法准确、稳定、灵敏度高，岩白菜素含量与原料产地有一定关系。

岩陀治疗慢性支气管炎作用机制的网络药理学研究

目的:采用网络药理学的方法探讨岩陀治疗慢性支气管炎的分子作用机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)等数据库查找岩陀的有效成分;利用Swiss Target Prediction服务器反向药效团匹配等数据库预测有效成分的作用靶点;运用Gene Cards等数据库查找慢性支气管炎相关的靶点。采用cytoscape3.6.1软件构建“有效成分–潜在靶点–疾病”网络,并进行可视化分析;同时利用DAVID 6.7进行GO和KEGG富集分析。结果:得到9个岩陀的有效成分,27个潜在靶点,其中细胞肿瘤抗原p53、血管内皮生长因子A、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、IL10等靶点可能是岩陀治疗慢性支气管炎的潜在靶点。岩陀治疗慢性支气管炎主要涉及蛋白质磷酸化、细胞凋亡过程、细胞增殖、炎症反应、免疫反应等生物过程,通过调控前列腺癌、TNF、非小细胞肺、PI3K-Akt、HIF-1、T细胞受体等信号通路来治疗慢性支气管炎。结论:本研究初步揭示了岩陀治疗慢性支气管炎的分子作用机制,为进一步的药效物质基础及作用机制的实验研究奠定了基础。

岩陀质量标准研究

目的建立岩陀药材质量标准。方法采用化学法和TLC法对岩陀中岩白菜素进行鉴别;用HPLC法测定岩陀中的岩白菜素含量,平均回收率为99.62%,RSD为0.28%(n=6)。结果所建方法简便、准确、专属性强。结论本法可用于岩陀药材质量控制。

西南鬼灯檠的HPLC指纹图谱及模式识别研究

目的:研究西南鬼灯檠药材HPLC指纹图谱及模式识别方法。方法:采用HPLC,以贵州、云南两省不同产地、不同采收期的西南鬼灯檠药材为对象,对10批药材进行指纹图谱研究,运用聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行模式识别研究。结果:10批样品中有10个共有峰,10批药材相似度较高,色谱峰强度不同是药材的主要差别。通过聚类分析和主成分分析将10批样品按采收期不同分为2类。结论:该方法能很好分离西南鬼灯檠的各类成分,HPLC指纹图谱具有良好的稳定性、重复性,可用于西南鬼灯檠药材的质量控制。

羽叶鬼灯檠和西南鬼灯檠HPLC指纹图谱共有模式的建立与比较研究

目的建立羽叶鬼灯檠药材和西南鬼灯檠药材的HPLC指纹图谱,为两种药材的质量控制提供新手段。方法采用HPLC,分别建立主产于云南、贵州两地的羽叶鬼灯檠和西南鬼灯檠的指纹图谱共有模式,并对两图谱进行比较研究。结果与所建立的两个参照图谱相比,羽叶鬼灯檠样品和西南鬼灯檠样品(各10批)的相似度均大于0.95。与羽叶鬼灯檠指纹图谱共有模式相比,各批西南鬼灯檠样品的相似度均小于0.85。在羽叶鬼灯檠的图谱中观察到3个专有特征峰。结论建立的两种HPLC指纹图谱共有模式可用于两种鬼灯檠的种属鉴别、内在质量的综合评价。

岩陀黄酮化合物毒理性试验

为研究岩陀黄酮化合物的毒理性,通过对小鼠的急性经口试验和35d亚慢性毒理试验的方式进行安全计量范围的测定。饲喂小鼠的岩陀黄酮化合物含量为67.462%,小鼠急性经口试验无死亡情况,最大耐受量为3 000mg/kg体质量。连续灌胃小鼠35d后,低、中、高剂量组小鼠体质量、内脏系数和生化指标与对照组相比无显著性差异,组织切片无明显的病变损伤。结果表明,岩陀黄酮化合物在本试验计量范围内属于安全无毒。