Huoxue Rongluo Tablet reduces matrix metalloproteinase-9 expression in infarcted brain tissue

Huoxue Rongluo Tablet was made of tall gastrodis tuber, dahurian angelica root, honeysuckle stem, grassleaf sweetflag rhizome, common flowering quince fruit, figwort root, red peony root and peach seed at a ratio of 3：2：6：2：3：3：3：3. Huoxue Rongluo Tablet is a well-established and common pre- scription for the treatment of cerebral infarction. In this study, a rat model of cerebral ischemia was established and the animals were intragastrically administered Huoxue Rongluo Tablet. This treat- ment reduced infarct volume, decreased matrix metalloproteinase-9 expression, and improved neurological function. Moreover, the effects of Huoxue Rongluo Tablet were better than those of buflomedil pyridoxal phosphate. These results indicate that Huoxue Rongluo Tablet is effective in treating cerebral infarction by regulating matrix metalloproteinase-9 protein expression.

基于JAK2/STAT3通路探讨活血荣络方对OGD/R后BMEC的干预作用及机制

目的探讨活血荣络方激活Janus酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活剂3(Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)通路对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)的干预作用和机制。方法培养大鼠BMEC(bEnd.3细胞),建立OGD/R模型;将细胞随机分为正常组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清)、活血荣络方组(10%活血荣络方含药血清)、丁苯酞组(10%丁苯酞含药血清)、Stattic组(10%空白血清+10μmol/mL Stattic)、联用组(10%活血荣络方含药血清+10μmol/mL Stattic),并分别给予相应的药物干预24 h。采用CCK-8法检测活血荣络方对OGD/R后bEnd.3细胞活性的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验分别检测活血荣络方对OGD/R后bEnd.3细胞划痕愈合和细胞迁移的影响;采用Western blot法检测bEnd.3细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、血管内皮细胞生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组bEnd.3细胞存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著降低(P<0.01),JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,活血荣络方组bEnd.3细胞的存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著升高(P<0.01),JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05或P<0.01);与Stattic组比较,联用组bEnd.3细胞的存活率、细胞划痕愈合率、细胞迁移数显著升高(P<0.05或P<0.01),STAT3、VEGFA的表达量升高(P<0.05)。结论活血荣络方可能激活JAK2/STAT3信号通路并诱导内皮细胞的增殖、迁移和存活,激活VEGFA表达并减轻脑缺血再灌注损伤,具有神经保护作用。

基于网络药理学的活血荣络方对脑梗死血管新生作用机制研究

目的采用网络药理学方法研究活血荣络方在脑梗死血管新生中的作用及其机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集活血荣络方的主要活性成分并进行初步筛选,采用Swiss Target Prediction数据库预测主要活性成分靶点,通过GeneCards数据库预测脑梗死血管新生作用靶点,二者取交集得出共同靶点。采用String数据库及Cytoscape软件Network analyzer功能构建共同靶点蛋白相互作用网络。采用DAVID数据库结合Cytoscape软件对共同靶点进行GO及KEGG富集分析。结果收集并筛选出活血荣络方422个活性成分、1028个靶点,脑梗死血管新生169个靶点,共同靶点42个,其中IL6、TNF、AKT1、CASP3相互作用最明显,主要调控氧化应激、细胞凋亡、蛋白磷酸化、内皮细胞及平滑肌细胞增殖等生物过程及HIF-1信号通路、癌症途径、TNF信号通路、能量代谢途径、PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等。结论活血荣络方在脑梗死血管新生中体现了多成分、多靶点、多途径的作用特点,有助于进一步诠释活血荣络方的药理学作用机制。

活血荣络颗粒联合针刺八脉交会穴治疗脑梗死痉挛性瘫痪临床研究

目的观察活血荣络颗粒联合针刺八脉交会穴对脑梗死痉挛性瘫痪的临床疗效及对血清谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)的影响。方法将60例脑梗死痉挛性瘫痪患者随机分为试验组和对照组各30例。2组均予西医基础治疗,试验组加活血荣络颗粒,每日1剂,分2次口服;针刺八脉交会穴,2日1次。15 d为1个疗程,共6个疗程。观察治疗前及治疗半个月、1个月、3个月临床痉挛指数(CSI)评分、中医症状评分,测定血清Glu、Asp水平,观察中医临床疗效。结果治疗半个月、1个月、3个月2组CSI评分、血清Glu、Asp水平、中医症状评分均较治疗前降低(P<0.05,P<0.01)。治疗半个月2组CSI评分比较差异无统计学意义(t=0.329,P=0.743)。治疗1个月、3个月,试验组CSI评分低于对照组(t=-2.636,P=0.024;t=-4.213,P=0.021)。治疗半个月、1个月,血清Glu、Asp水平2组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。治疗3个月,Glu、Asp水平2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗半个月、1个月、3个月,中医症状评分试验组低于对照组(P<0.05)。试验组中医疗效总有效率为86.67%(26/30),对照组为80.00%(24/30),试验组优于对照组(P<0.05)。结论活血荣络颗粒联合针刺八脉交会穴治疗脑梗死痉挛性瘫痪能缓解痉挛程度、改善中医临床症状,其作用机制可能与降低血清兴奋性神经递质有关。

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠SIRT1/PGC-1α信号通路的影响,初步探讨其对CIRI的保护机制。方法60只大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组、EX-527组、EX-527+活血荣络方组和艾地苯醌组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。给药组于造模前36 h首次予相应药物灌胃(10 mL/kg),之后每24 h给药1次,共3次,EX-527组和活血荣络方+EX-527组于再灌注前20 min腹腔注射EX-527(5 mL/kg),其余各组在相同时间灌胃蒸馏水或腹腔注射生理盐水。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,HE染色观察缺血皮质区损伤情况,试剂盒检测皮质区三磷酸腺苷(ATP)含量,免疫组化检测缺血皮质区沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达,RT-qPCR检测缺血皮质区SIRT1、PGC-1αmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元损伤严重,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,活血荣络方组和艾地苯醌组大鼠神经功能缺损评分降低,缺血皮质区神经元损伤改善,ATP含量增加,SIRT1、PGC1-α蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);EX-527组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元损伤加重,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。与活血荣络方组比较,活血荣络方+EX-527组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元坏死和凋亡增多,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论活血荣络方可促进CIRI大鼠ATP生成,改善神经功能缺损症状,其机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

活血荣络方对Aβ25-35诱导的星形胶质细胞阿尔兹海默病损伤的抑制作用及其机制研究

目的:本研究旨通过生物信息学和细胞实验研究,揭示活血荣络方治疗阿尔兹海默病的分子机制。方法:通过GeneCards、String、DAVID数据库预测AD疾病潜在靶点,并对潜在靶点进行"蛋白-蛋白"互作网络(PPI)、GO分析,绘制"靶点-GO"热图。同时采用体外Aβ25-35损伤星形胶质细胞诱导AD细胞模型,并随机分为6组,分别为空白组、多奈哌齐组、sFRP、0.5倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、2倍活血荣络方组组,加相应刺激分别处理12 h、24 h、48 h、72 h。采用MTT法检测细胞活性、免疫组化法检测APP、Aβ蛋白定位、定量表达,以初步验证生物信息学预测结果。结果:收集筛选出AD共35个靶点,其中APP、APOE、PSEN1、PSEN2、SNCA相互作用明显,且APP、APOE在GO中显著富集。MTT结果显示各组OD值随着时间的延长而增高,各药物组细胞活性均高于空白组,其中2倍组细胞活性最高;sFRP组低于空白组。免疫组化结果显示药物组Aβ及APP的表达均低于空白组,2倍活血荣络方组均低于其它给药组,并且各组Aβ及APP表达随时间延长有逐渐减少趋势,但2倍活血荣络方组减少最明显。结论:基于"阴虚血瘀-荣气虚滞"理论立方的活血荣络方可能通过多靶点、多成分、多通路发挥治疗AD疾病的作用,并进一步实验验证其治疗作用可能与抑制APP、Aβ蛋白的表达,降低AChE活性,从而改善神经突触炎症毒性有关。

基于“TF-miRNA”反馈环探讨活血荣络方对脑梗死大鼠的保护作用及机制

目的基于活血荣络方对"转录因子(TF)-微小RNA(miRNA)"反馈环的影响,研究其对脑梗死大鼠的保护作用。方法通过GEO、TargetScans、starBase、TransmiR v2.0数据库,采用R语言构建"TF-miRNA"反馈环。将大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组及丁苯酞组,建立MCAO/R模型,灌胃给药7 d;采用mNSS(改良神经功能缺损评分)、HE(苏木素-伊红染色)、Nissl(尼氏染色)分别评价各组大鼠神经功能、病理及尼氏小体情况;RT-PCR法检测"TF-miRNA"反馈环中KLF4、KLF5、miR-206、miR-429及反馈环反向VEGF mRNA表达。结果生物信息学构建出"KLF4-miR-206""KLF4-miR-544""KLF4-miR-429""KLF5-miR-429""EBF1-miR-429"5个"TF-miRNA"反馈环。与假手术组比较,模型组mNSS,KLF4、KLF5、VEGF mRNA与miR-206、miR-429表达升高(P<0.01);与模型组比较,活血荣络方组与丁苯酞组mNSS 1 d无明显变化(P>0.05),3、7 d mNSS降低(P<0.01),KLF4表达升高,miR-206、miR-429表达降低(P<0.01);活血荣络方组KLF5、VEGF表达升高(P<0.05);丁苯酞组KLF5、VEGF表达升高(P<0.01);且药物均能改善脑梗死大鼠的病理损伤。结论活血荣络方能上调TFs(KLF4、KLF5)、下调miRNAs(miR-206、miR-429)的表达,打破脑梗死大鼠中存在的"TF-miRNA"反馈环,可能通过介导VEGF的表达促脑梗死后血管新生,起到神经保护作用。

活血荣络片对APP/PS1双转基因小鼠认知能力及Aβ沉积的影响

目的:探讨活血荣络片治疗阿尔茨海默病的机制,指导临床治疗。方法:APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、模型+复方丹参片组(低、中、高剂量)、模型+多奈哌齐组,同月龄KM小鼠作为正常组。给予相应药物治疗2月后,行Morris水迷宫实验评估小鼠学习及记忆能力,Western Blot检测脑组织Aβ的含量。结果:1Morris水迷宫:模型组小鼠逃避潜伏期、首次进入区域时间与其他各组相比明显延长,穿越区域次数最少,与正常组及其他给药组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01);APP/PS1双转基因小鼠中,高剂量活血荣络片组小鼠综合表现最优。2Western Blot检测:模型组小鼠脑组织中Aβ表达最高,与正常组及其他各组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其含量随活血荣络片剂量增加而减少。结论:活血荣络片可通过减少APP/PS1小鼠脑内Aβ的沉积,改善小鼠的空间学习及记忆能力,并减轻小鼠海马组织神经元的损伤。

活血荣络片对大鼠MCAO模型脑组织MVD表达的影响

目的:观察活血荣络片对大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型脑组织MVD表达的影响。方法:采用线栓法制作SD大鼠MCAO模型,随机分为假手术组、模型组、实验组,对照组,分别在缺血后24 h、3 d、5 d、7 d四个时间点经TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法测定MVD表达。结果:TTC染色测定脑梗死体积显示,对照组、实验组与模型组相比在各时间点梗死体积均有所缩小,差异有统计学意义(P<0.05);实验组与对照组相比,3 d时脑梗死体积缩小明显,有显著统计学意义(P<0.01),余时间点稍缩小,有统计学意义(P<0.05)。MVD表达测定,实验组、对照组MVD单位面积内计数在各时间点均较模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组相比,实验组在24 h、3 d时表达增高,有统计学意义(P<0.05);在5 d、7 d时明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:活血荣络片可缩小梗死体积,促进脑缺血区MVD增加,其作用机制可能与促脑血管新生有关。

活血荣络片对AD模型小鼠AchE和ChAT表达的影响

目的观察活血荣络片对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织乙酰胆碱酯酶(Ach E)和乙酰胆碱转移酶(Ch AT)表达的影响。方法将50只APP/PS1双转基因AD模型小鼠随机分为模型组、低剂量活血荣络片组、中剂量活血荣络片组、高剂量活血荣络片组、多奈哌齐组,每组10只。同期将同月龄的10只KM小鼠作为正常组。每天灌胃1次,连续治疗2个月。治疗结束后,取各组小鼠脑组织,采用Western Blot检测Ach E和Ch AT蛋白含量。结果与正常组相比,AD模型组小鼠脑组织Ach E蛋白表达提高、Ch AT蛋白表达降低(P<0.01);与模型组相比,低中高剂量活血荣络片组、多奈哌齐组脑组织Ach E蛋白表达降低、Ch AT蛋白表达增高(P<0.01);与多奈哌齐组比较,中、高剂量活血荣络片组降低Ach E蛋白表达的变化无统计学意义(P>0.05),而高剂量活血荣络片组提高Ch AT蛋白的表达(P<0.05)。结论活血荣络片可一定程度上抑制AD模型小鼠脑组织Ach E蛋白的表达并促进Ch AT蛋白的表达。

活血荣络片治疗阴虚血瘀型阿尔兹海默病的临床观察

目的:观察活血荣络片治疗阿尔兹海默病的临床疗效。方法:采用随机对照法,将60例阿尔兹海默病患者分为治疗组、对照组,对照组予盐酸多奈哌齐片口服,治疗组在对照组治疗的基础上加服活血荣络片,两组均进行8周的治疗,通过观察治疗前后中医症候积分及痴呆相关指标变化来评价疗效。结果:两组治疗后痴呆均较前改善,治疗组总有效率为83.3%,对照组为60.0%,治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组MMSE积分、Barthel指数积分的改善均较对照组明显(P<0.05)。结论:活血荣络片治疗阴虚血瘀型阿尔兹海默病有较好的临床疗效。

活血荣络片治疗血管性痴呆36例

目的研究活血荣络片对血管性痴呆患者的临床疗效。方法将72例血管性痴呆患者随机分为治疗组和对照组,对照组在常规治疗基础上加用洛斯宝治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用活血荣络片,通过治疗前后中医症候及痴呆相关指标的变化评价疗效。结果两组患者治疗后,痴呆程度均有不同程度改善,治疗组优于对照组。活血荣络片治疗血管性痴呆总有效率为94.4%。

活血荣络方含药血清对氧糖剥夺/复氧糖损伤PC12细胞线粒体自噬的影响及机制研究

目的基于氧糖剥夺/复氧糖(OGD/R)损伤的PC12细胞模型观察活血荣络方含药血清对线粒体自噬的影响及作用机制。方法采用OGD/R损伤PC12细胞模拟体外脑缺血再灌注损伤模型,将细胞分为正常对照组、模型组、空白血清组、活血荣络方含药血清组和雷帕霉素组,采用相应血清进行干预,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),免疫荧光染色检测线粒体-LC3B共定位、线粒体-PINK1-Parkin共定位,Western blot检测微管蛋白1轻链3B(LC3B)、p62、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组细胞MMP明显降低(P<0.01),线粒体-LC3B共定位无明显变化,线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高,p62、TOMM20蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,活血荣络方含药血清组细胞MMP明显升高(P<0.01),线粒体-LC3B共定位和线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p62、TOMM20蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论活血荣络方含药血清可减轻OGD/R诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与调控PINK1/Parkin通路,增加Parkin蛋白的线粒体转位,上调LC3B,下调p62、TOMM20蛋白表达,激活线粒体自噬相关。

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响,从线粒体自噬角度探讨其干预CIRI的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方(HXRLF)组和自噬激活剂(RAP)组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。HXRLF组于造模前36 h开始灌胃活血通络方药液11.7 g/kg,每24 h灌胃1次,共3次;RAP组于再灌注同时腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/kg。再灌注24 h后,对大鼠神经功能进行评分,尼氏染色检测大鼠皮质区完整神经元数目,JC-1荧光探针检测皮质区线粒体膜电位(MMP),透射电镜观察大鼠皮质区超微结构,免疫组化和Western blot检测皮质区p62、LC3B、TOMM20蛋白表达,Western blot和RT-PCR分别检测皮质区PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)蛋白和mRNA水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高,神经功能缺损严重;皮质区完整神经元数量明显减少,自噬小体数目增多,MMP降低;皮质区p62、LC3B蛋白表达升高,TOMM20蛋白表达降低,PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,HXRLF组和RAP组大鼠神经功能评分明显降低,神经功能缺损改善;皮质区完整神经元数量明显增多,自噬小体数目增多,MMP升高;皮质区p62、TOMM20蛋白表达降低,LC3B蛋白表达升高,PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PINK1/Parkin信号通路上调线粒体自噬,减轻大鼠神经功能损害,从而发挥神经保护作用。

基于NLRP3炎症小体探讨活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制

目的观察活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,基于NLRP3炎症小体探讨其作用机制。方法72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组和活血荣络方低、中、高剂量组,采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,各组分别于造模前36、12 h及造模后12 h灌胃。对大鼠神经功能缺损进行评分,TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察海马及皮质区病理损伤,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,Western blot检测海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达,免疫组化检测海马及皮质区Caspase-1表达,免疫荧光染色检测细胞焦亡。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积百分比明显增加;海马及皮质区神经元胞体缩小变形,核固缩明显;血清IL-1β、IL-18含量明显增加,海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达明显升高,海马CA1区及皮质区Caspase-1表达明显升高,皮质区焦亡阳性细胞率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,活血荣络方中、高剂量组和尼莫地平组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积百分比明显减少;海马及皮质区神经元损伤明显好转;血清IL-1β、IL-18含量明显减少,海马组织NLRP3、pro-Caspase-1、Cleaved-Caspase-1蛋白表达明显降低,海马CA1区及皮质区Caspase-1表达明显降低,皮质区焦亡阳性细胞率明降低少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),以活血荣络方中剂量组作用最明显(P<0.05,P<0.01)。结论活血荣络方能通过抑制NLRP3炎症小体过度激活抑制细胞焦亡,从而改善大鼠脑缺血再灌注损伤。

基于miR-370-3p与JAK2/STAT3通路相关性探讨活血荣络方促缺血性脑卒中后血管新生的机制

目的基于miR-370-3p与JAK2/STAT3通路相关性探讨活血荣络方促缺血性脑卒中后血管新生的机制。方法将大鼠随机分为6组,MCAO/R法造模,灌胃给药7 d后免疫荧光染色观察脑组织CD31、vWF及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达;Western blot法检测脑组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达;Real-time PCR(RT-PCR)法检测脑组织JAK2、STAT3 mRNA及miR-370-3p的表达;Pearson相关性分析脑组织miR-370-3p与JAK2/STAT3通路的相关性;培养大鼠脑血管平滑肌细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA-H19和miR-370-3p表达;荧光素酶报告实验检测LncRNA-H19和miR-370-3p的靶向关系。结果活血荣络方能增加缺血区微血管密度及VEGF平均荧光强度,上调JAK2、STAT3 mRNA,下调miR-370-3p表达,促进JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达,且miR-370-3p分别与JAK2、STAT3 mRNA呈高度负相关,此过程能被STAT3 SH2结构域抑制剂Stattic逆转。结论活血荣络方可能通过下调miR-370-3p的表达、激活JAK2/STAT3通路、促进下游VEGF的表达而刺激缺血性脑卒中后血管新生,从而改善神经功能缺损症状。

活血荣络方调控PI3K/Akt通路减轻脑缺血再灌注损伤PC12细胞炎症反应

目的探讨活血荣络方对脑缺血再灌注损伤炎症反应的调控机制。方法通过体外实验,将PC12细胞分为空白组、模型组、活血荣络方组及阳性药物组(丁苯酞)。CCK8法检测细胞活力,探索最佳造模时间及含药血清浓度;Western blotting及RT-qPCR法检测PI3K/Akt通路相关蛋白及mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果体外实验表明,与对照组相比,OGD4h/R24h细胞活力下降超过50%(P<0.01);与模型组相比,10%活血荣络方血清组细胞活力恢复最佳(P<0.01);活血荣络方能上调PI3K/Akt通路相关蛋白及mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α炎症因子水平(P<0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PI3K/Akt通路抑制脑缺血再灌注损伤炎症反应。

基于“STAT3/miR-17”反馈环探讨活血荣络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用机制

目的探讨活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及对线粒体自噬的影响。方法采用生物信息学方法挖掘脑梗死差异表达miRNAs,并预测活血荣络方可能通过调节"STAT3-miR-17"反馈环路发挥作用。将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组,运用线栓法建立脑缺血再灌注模型。造模前36、12 h及术后12 h给药。术后24 h行神经功能评分,并行TTC染色评估脑梗死体积;透射电镜观察自噬小体;Western blot检测线粒体及自噬相关蛋白,评估线粒体自噬情况;Real-time PCR检测"STAT3-miR-17"反馈环中miRNA、mRNA的表达。结果与模型组相比,活血荣络方可明显改善模型大鼠神经功能损伤,减少脑梗死体积(P<0.01),下调p62、TOMM20的表达(P<0.05),上调LC3B的表达(P<0.01),增加损伤侧脑组织自噬小体;下调miR-17 miRNA的表达(P<0.01),上调STAT3 mRNA的表达(P<0.01)。结论活血荣络方可通过上调线粒体自噬发挥神经保护作用,其机制可能与调控"STAT3-miR-17"反馈环路相关。

活血荣络方对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的探讨活血荣络方在脑缺血再灌注损伤中对细胞凋亡的作用。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和活血荣络组。模型组和活血荣络组采用线栓法制备局灶性大脑中动脉阻塞模型,颈内动脉插线18~20 mm;假手术组颈内动脉插线深度8~10 mm,2 h后拔出。模型组给予1 mL/100 g蒸馏水灌胃,活血荣络组给予1 mL/100 g活血荣络方浸膏灌胃,假手术组给予1 mL/100 g蒸馏水灌胃。分别在术后2 h及再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h时对神经功能缺损进行评分,同时在再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h采用免疫组化测定患侧脑组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果模型组神经功能缺损评分在再灌注后24 h达高峰,72 h下降(P<0.05或P<0.01);活血荣络组神经功能缺损评分在再灌注后12 h达峰值,24 h下降(P<0.05或P<0.01);活血荣络组神经功能缺损评分在再灌注后24 h、72 h低于模型组(P<0.05或P<0.01)。假手术组不同时间Bax、Bcl-2蛋白表达无明显改变(P>0.05);模型组Bax、Bcl-2蛋白表达在再灌注后24 h达峰值、72 h下降,除再灌注后12 h与72 h组内比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时间组内比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);活血荣络组Bax蛋白表达在再灌注后72 h内呈下降趋势(P<0.05或P<0.01);Bcl-2蛋白表达在再灌注后24 h内呈上升趋势、72 h时降低,除再灌注后12 h与72 h组内比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时间组内比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。模型组、活血荣络组Bax、Bcl-2蛋白表达在各个时间点均高于假手术组(P<0.01)。活血荣络组Bax蛋白表达在再灌注后12 h、24 h、72 h时低于模型组(P<0.01);而Bcl-2蛋白表达在各个时间点均高于模型组(P<0.01)。结论大鼠脑缺血再灌注后脑神经功能损伤严重,Bax、Bcl-2蛋白表达增加,活血荣络方能抑制Bax蛋白表达、促进Bcl-2蛋白表达,促进缺损神经功能恢复。

周德生教授基于荣气虚滞辨治脑小血管性认知障碍

脑小血管性认知障碍临床症状繁多且病因复杂,常合并他症,因此辨证需抓主要病机。周德生教授从荣气虚滞病机阐释,认为脑小血管性认知障碍主要病机特征为位责络脉,玄府失司;正虚邪滞,痰瘀交阻;形神俱病,神机失用。并提出治法:行气活血、通络畅府;滋阴填精、益髓增智;祛瘀化痰、醒脑开窍。强调形神兼顾、杂合以治是治疗该病之核心。并以此为基础创制活血荣络汤,临床应用广泛。